View
54
Download
0
Category
Preview:
DESCRIPTION
Ε SKAPE Πολυανθεκτικά μικρόβια του 2014. Ε. Πετεινάκη Εργαστήριο Μικροβιολογίας Ιατρικού Τμήματος Πανεπιστημίου Θεσσαλίας 7έτος Φθινοπωρινές Ημέρες Παθολογίας ‘’Λοιμώξεις’’, 26&27 /9/2014, Λουτρά Αριδαίας. - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
ΕSKAPE
Πολυανθεκτικά μικρόβια του 2014
Ε. ΠετεινάκηΕργαστήριο Μικροβιολογίας
Ιατρικού Τμήματος Πανεπιστημίου Θεσσαλίας
7έτος Φθινοπωρινές Ημέρες Παθολογίας‘’Λοιμώξεις’’, 26&27 /9/2014, Λουτρά Αριδαίας
Ο ΡΟΛΟΣ ΤΟΥ ΣΥΓΧΡΟΝΟΥ ΚΛΙΝΙΚΟΥ
ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΚΟΥ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟΥ
γρήγορη και αξιόπιστη ανίχνευση του αιτιολογικού παράγοντα της λοίμωξης
με στόχο
α. εστιασμένη θεραπεία
β. πρόληψη της διασποράς πολύ-ανθεκτικών βακτηρίων και περιορισμό των ενδο-νοσοκομειακών λοιμώξεων
Ταξινόμηση Μεθόδων
• ανίχνευση-ταυτοποίηση-έλεγχος ευαισθησίας του μικροοργανισμού
• χαρακτηρισμός μηχανισμών αντοχής (φαινοτυπικές δοκιμασίες, μοριακές μέθοδοι)
• χαρακτηρισμός-τυποποίηση κλώνων (επιδημιολογική διερεύνηση)
• ανάλυση των δεδομένων-προτάσεις για λήψη μέτρων πρόληψης διασποράς
Τι είναι ο κλώνος;
Τα θυγατρικά κύτταρα είναι πιστά αντίγραφα (?) των μητρικών!
Ο γονότυπος πρέπει να συμβάλλει και στην κατανόηση της εξέλιξης των βακτηρίων και στην ταξινόμησή τους
CID 2009:48:1
ESKAPE pathogens
Enterococcus faecium vancomycin-resistant (VRE)
Staphylococcus aureus methicillin-resistant (ΜRSA)
Klebsiella pneumoniae carbapenemaseproducerAcinetobacter baumannii Pseudomonas aeruginosa carbapenemase-producerEnterobacter ESBLs producer Rice LB, Infect Control Hosp Epidemiol 2010;31 Suppl 1:S7-10.
Αντοχή σε καρβαπενέμες
Ενζυμικοί μηχανισμοί• Παραγωγή καρβαπενεμάσης (vim, KPC, NDM)• Yπερπαραγωγή AmpC
Μη ενζυμικοί μηχανισμοί• Απώλεια ή μειωμένη έκφραση πορίνης: OprD• Υπερέκφραση αντλίας: MexAB-OprM
ΚΑΡΒΑΠΕΝΕΜΑΣΕΣ Α, Β, D Oι κλάσεις A και D είναι ένζυμα που
στην ενεργό θέση τους έχουν σερίνη ενώ
η κλάση B περιλαμβάνει ένζυμα τα οποία στην ενεργό θέση περιέχουν δισθενή κατιόντα ψευδαργύρου (μεταλλο-β-λακταμάσες)
Καρβαπενεμάσες στην Ελλάδα
• Κλάση Α (ΚPC)(αναστολή από βορονικό)
• Κλάση B (VIM,NDM)(αναστολή από EDTA)
• Κλάση D (OXA-23, OXA-51, OXA-58, OXA-48)
Εξέλιξη Καρμπαπενεμασών στην Ελλάδα
PseudomοnasVIM KlebsiellaVIM KlebsiellaKPC
1996 2003 2007
Tsakris A et al. Outbreak of infections caused by Pseudomonas aeruginosa producing VIM-1 carbapenemase in Greece. J Clin Microbiol. 2000; 38: 1290Miriagou V et al. Escherichia coli with a self-transferable, multiresistant plasmid coding for metallo-beta-lactamase VIM-1. Antimicrob Agents Chemother. 2003;47:395Maltezou H et al. Outbreak of infection due to KPC-2-producing Klebsilla pneumoniae in a hospital in Crete (Greece).Journal of Infection 2009; 58: 213
Emergence of NDM-producing Klebsiella pneumoniae in Greece, 2013
Vatopoulos et al, DMID 1013,
• εισαγωγή στην Ελλάδα νέας καρβαπενεμάσης
• προσπάθεια μη διασποράς στα νοσηλευτικά ιδρύματα της χώρας
• κλώνος ST11 (Poirel 2011),
• αντοχή κινολόνες, αμινογλυκοσίδες
Συνεχής εξέλιξη
Petinaki et al, BMC Infect Dis 2013 Oct 29;13:505. Carbapenemase-producing Pseudomonas aeruginosa from Central Greece: molecular epidemiology and genetic analysis of class I integrons.
5’CS aacA4 blaVIM-1 *170bp 3’CS Accession no. AY152821 duplication
5’CS blaVIM-1 aacA27 3’CS Accession no. AY648125
5’CS blaVIM-1 aacA7 dfrA1 aadA1 3’CS Accession no. FR748152
5’CS blaVIM-1 aacA7 dfrA1 aadA15 3’CS Accession no. KF85016
5’CS aacA4 blaVIM-4 *170bp 3’CS Accession nos. AY702100, KF850517 duplication
a)
e)
b)
c)
d)
Identification and characterization of genetic structures coding for carbapenemases in enterobacteria
from Central Greece.
Petinaki et al, Diagn Microbiol Infect Dis, in press
Διασπορά KPC σε άλλα εντεροβακτηριακά:
εμπειρία στο ΠΝΛ
• Emergence of Escherichia coli sequence type 410 (ST410) with KPC-2 β-lactamase. Mavroidi A, Miriagou V, Malli E, Stefos A, Dalekos GN,
Tzouvelekis LS, Petinaki E. Int J Antimicrob Agents. 2012 Mar;39(3):247- 50
• Detection of Citrobacter koseri carrying beta-lactamase KPC-2 in a hospitalised patient, Greece, July 2011.
Mavroidi A, Neonakis I, Liakopoulos A, Papaioannou A, Ntala M, Tryposkiadis F, Miriagou V, Petinaki E. Euro Surveill. 2011 Oct 13;16(41)
ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΑΥΤΟΜΑΤΩΝ ΣΥΣΤΗΜΑΤΩΝ ΣΤΟΝ ΕΛΕΓΧΟ ΤΗΣ ΑΝΤΟΧΗΣ
• Αξιόπιστη ταυτοποίηση σε επίπεδο είδους
• Προσδιορισμό MIC (CLSI, EUCAST)
Φαινοτυπικές και μοριακές δοκιμασίες: επιδημιολογική διερεύνηση
Καρβαπενέμες (CLSI)
CLSI 2009/2011
mg/L
S≤ I ≥R
ERTAPENEM 2 /0.5 4/1 8/4
IMIPENEM 4/1 8/2 16/4
MEROPENEM 4/1 8/2 16/4
Μελέτη της επιδημιολογίας της αντοχής
• ασχολείται με την ταυτοποίηση των γονιδίων αντοχής
και τον τρόπο μεταφοράς τους από είδος σε είδος
• μελέτη της κλωνικής συγγένειας πολυανθεκτικών μικροβίων
MHT
Στέλεχος που παράγει καρβαπενεμάση τύπου A Με PCR ταυτοποιήθηκε το υπεύθυνο γονίδιο που κωδικοποιεί
ένζυμο KPC
Στέλεχος που παράγει καρβαπενεμάση Α+Β Με PCR ταυτοποήθηκαν τα υπεύθυνα γονίδια που
κωδικοποιούν ένζυμα VIM+KPC(+)
Τι καθορίζουν οι επιδημιολογικές μελέτες ;Τι καθορίζουν οι επιδημιολογικές μελέτες ;
• Αριθμό κλώνων που διασπείρονται στο νοσοκομείο
• Αριθμό κλώνων που ενέχονται σε λοιμώξεις• Πηγή διασποράς του κλώνου• Τρόπους διασποράς
• Αριθμό κλώνων που διασπείρονται στο νοσοκομείο
• Αριθμό κλώνων που ενέχονται σε λοιμώξεις• Πηγή διασποράς του κλώνου• Τρόπους διασποράς
MWM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 MWM
A A A A B B B B C C C C E E E E F F F F G G G G
145.5
194.0
242.5
291.0
388.0
485.0
97.0
Kb
Μοριακή τυποποίηση μετά από ηλεκτροφόρηση σε παλλόμενο ηλεκτρικό πεδίο
Ανάλυση νουκλεοτιδικής αλληλουχίας– MLST: multi locus sequence typing (7 house keeping
γονίδια) (mlst.net)
– Επιτήρηση της διασποράς των διαφόρων μικροργανισμών παγκόσμια
Έλεγχο για Αποικισμό
• ΜΕΘ Όλοι οι ασθενείς που εισάγονται στη ΜΕΘ• Κλινικό Τμήμα1. Ασθενείς με γνωστό αποικισμό ή λοίμωξη από
πολυανθεκτικό στέλεχος2. Ασθενείς με ιστορικό νοσηλείας κατά την οποία έλαβε
θεραπεία με καρβαπενέμες το τελευταίο 3μηνο3. Ασθενείς με ιστορικό νοσηλείας σε ΜΕΘ το τελευταίο 6μηνο4. Ασθενείς με ιστορικό νοσηλείας στην Ινδία ή το Πακιστάν
το τελευταίο 6μηνο
Νέες γρήγορες μέθοδοι για πολυανθεκτικόυς μικροοργανισμούς
• Eφαρμογή της MALDI TOF MS στον έλεγχο αποικισμού από πολυανθεκτικά μικρόβια
(ταυτοποίηση του μικροοργανισμού σε 1 λεπτό/ ανίχνευση αντοχής σε 2 ώρες)
• Εφαρμογή του blue-carba (ανίχνευση σε 2 ώρες αν το μικρόβιο παράγει καρβαπενεμάση,
πολύ οικονομική μέθοδος)
Η χρήση της MALDI TOF MS στον έλεγχο αποικισμού από πολυανθεκτικά μικρόβια
• Ταυτοποίηση μικροοργανισμού σε 1 λεπτό• Ανίχνευση καρβαπενεμάσης σε 2 ώρες
Πολύ οικονομική μέθοδος (ελάχιστο κόστος αντιδραστηρίων)Απαραίτητη η αγορά του μηχανήματος
Mass Spec αρχή λειτουργίας
Ionizer
Sample
+_
Mass Analyzer Detector
Πρωτείνες επιφανείας και ριβοσωμικές πρωτείνες
3000 5000 7000 9000 11000 13000
Mass (m/z)
1648.1
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% Inten
sity
< < C :\D o k u m e n te u n d E in s te llu n g e n \m .e rh a rd \E ig e n e D a te ie n \A n a g n o s T e c -d c \Z w is c h e n a b la g e \D o k u m e n t B a n n e r.tx t> > S p e c [B P = 3
3775
7075
8074
8744
10939
9453
9994
7980
10347
5015
7863
11572
7092
5931
9654
3581
6837
9330
7367
10226
8450
10608
11906
Το Εργαστήριο του μέλλοντος…
Σε 1h.30’: 96 δείγματα
Blue-Carba
Απλή βιοχημική δοκιμασία για την ανίχνευση διαφόρων καρβαμενεμασών απευθείας από αποικίες
Παρακολούθηση υδρόλυσης ιμιπενέμης μέσω απελευθέρωσης Η⁺
Ως δείκτης αλλαγής PH χρησιμοποιείται το μπλέ της βρωμοθυμόλης
Ερμηνεία των αποτελεσμάτων σε 30΄ εως 2 ώρες
Βασισμένη στο Carba NP ( Nordmann- Poirel)
Αξιολόγηση αποτελεσμάτων
Στελέχη Blue-Carba (+)
Στέλεχος Blue-Carba(-)
Recommended