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UNIVERSIDADE TIRADENTES UNIT
CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE
ATIVIDADES PRTICAS
BIOLOGIA CELULAR
Prof. Dra. Plcia Barreto Prata Gois
ALUNO:________________________
UNIVERSIDADE TIRADENTES
DISCIPLINA: BIOLOGIA CELULAR
PROFESSORA Dra. PLCIA BARRETO PRATA GOIS
PRTICA N 01: APRESENTAO DAS NORMAS DE CONDUTA NO
LABORATRIO
- Usar roupas protetoras
- Usar luvas para manipular material biolgico
- Lavar as mos antes de sair do laboratrio
- Proibido comer, fumar e beber no laboratrio
- Manter a rea de trabalho limpa e organizada
- Cuidados especiais com os equipamentos, principalmente o microscpio
- Cuidados especiais para evitar leses com objetos pontiagudos
- Prender os cabelos, no usar anis e pulseiras
- Preferncia de utilizao de material descartvel
- Eliminar os resduos e lixo biolgico em local adequado
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DISCIPLINA: BIOLOGIA CELULAR
PROF. Dra. PLCIA BARRETO PRATA GOIS
PRTICA N 02: INSTRUMENTOS BSICOS DE UM LABORATRIO
1. Introduo
Os laboratrios, tanto de Biologia quanto de Qumica e Fsica, fazem uso de
vrios instrumentos que so chamados de vidrarias e equipamentos. Estes
instrumentos so utilizados para realizar diversas anlises, reaes qumicas,
experincias, efetuar medies, entre outras.
2. Objetivo
Conhecer os instrumentos bsicos de um laboratrio
3. Atividade Prtica
Identifique e descreva a funo dos seguintes equipamentos:
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DISCIPLINA: BIOLOGIA CELULAR
PROF. Dra. PLCIA BARRETO PRATA GOIS
PRTICA N 03: MICROSCOPIA
1. Introduo
O microscpio um instrumento que permite observar os objetos no
perceptveis a olho nu, formado por um sistema de lentes que ampliam a
imagem do objeto.
Microscpio ptico se refere a qualquer microscpio que utiliza a luz para
observar amostras. Existem dois tipos de microscpio, o simples e o composto.
O microscpio simples possui somente uma lente e comumente chamado
de lupa.
O microscpio ptico composto possui dois sistemas de lentes: um prximo
ao olho do observador sistema ocular e outro prximo do objeto sistema de
objetivas.
O microscpio ptico composto constitudo por: parte mecnica, ptica e
sistema de iluminao. A parte mecnica formada pela base, platina e tubo. A
parte ptica composta pelo sistema de objetivas e oculares. O sistema de
iluminao tem a funo de iluminar o objeto a ser analisado.
2. Objetivo
Identificar as partes do microscpio e aprender suas respectivas funes.
3. Material a ser Utilizado
- Microscpio ptico
4. Atividade Prtica
A figura abaixo um desenho esquemtico de um microscpio ptico
mostrando seus diversos componentes. Escreva o nome e a funo de
cada componente.
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PRTICA N 04: MICROSCOPIA
1. Introduo
A ampliao da imagem do objeto analisado obtida quando os raios de luz
da fonte de luz passam pelo condensador que dirige os raios sob a lmina e
atravessa o objeto. A seguir, os raios de luz passam para as objetivas. A
imagem novamente ampliada pela lente ocular. A imagem final do objeto,
proporcionada pelo microscpio, ser virtual, ampliada e invertida em relao
ao mesmo. A ampliao total o resultado da multiplicao do aumento da
objetiva pela da ocular.
2. Objetivo
Aprender a manusear o microscpio.
3. Material a ser Utilizado
- Microscpio ptico
- Lminas de esfregao sanguneo
4. Atividade Prtica
Focalize a lmina no microscpio de luz, conforme o procedimento descrito
abaixo e faa desenhos do que foi observado nos crculos abaixo:
PROCEDIMENTO CORRETO PARA A FOCALIZAO
1- Observe se est na objetiva panormica (4X). Gire o revlver, olhando
lateralmente, para evitar que alguma objetiva toque a platina. Verifique se
cada objetiva est encaixada, pelo rudo caracterstico do encaixe.
2- Abaixe a platina at travar.
3- Pegue a lmina segurando-a apenas pelas bordas.
4- Abra a presilha e coloque a lmina sobre a platina, solte a presilha
lentamente e verifique se a lmina est bem encaixada. Centralize o
material no orifcio da platina.
5- Ligue o microscpio. Aumente a luz.
6- Levante a platina at o ponto mximo movimentando o parafuso
macromtrico.
7- Olhando atravs da ocular e utilizando o parafuso macromtrico, abaixe
lentamente a platina, at que o material a ser observado possa ser visto.
Assim que isto ocorrer, corrija a focalizao utilizando o parafuso
micromtrico.
8- Explore a lmina movimentando os parafusos do charriot com uma das
mos e o parafuso micromtrico com a outra. OBS: Procure observar no
microscpio sempre com os dois olhos abertos.
9- Encaixe a objetiva de pequeno aumento (10X) e faa o ajuste da
focalizao, utilizando apenas o parafuso micromtrico. Observe o campo
atentamente.
10- Selecione uma determinada rea do material, centralize-a e encaixe a
objetiva de mdio aumento (40X). Faa o ajuste da focalizao utilizando o
parafuso micromtrico.
11- Selecione uma determinada rea do material, centralize-a, coloque uma
gota do leo de imerso na lmina e encaixe a objetiva de grande aumento
(100X). Faa o ajuste da focalizao, utilizando apenas o parafuso
micromtrico.
12- Terminada a observao, abaixe a platina, gire o revlver para encaixar a
objetiva de menor aumento (4X), diminua a luz, desligue o microscpio,
retire a lmina e guarde-a. OBS: Se utilizar a objetiva de maior aumento
(100X) limpe-a com gaze embebida em lcool:ter (1:1)
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PRTICA N 05: PREPARAES CITOLGICAS
1. Introduo
Para obter uma boa visualizao no microscpio so necessrios alguns
cuidados durante o processamento da amostra a ser analisada. Esses
cuidados vo desde a escolha e coleta do material at a montagem das
lminas. Vrias tcnicas foram desenvolvidas para obteno de lminas para
anlise em microscpio ptico, essas tcnicas visam o estudo de aspectos
muito prximo de seu estado natural vivo e a diminuio de artefatos
(alteraes produzidas nas clulas pelas tcnicas utilizadas). As principais
tcnicas so: montagem total, esfregao, espalhamento, esmagamento e
decalque.
a. Montagem Total
Consiste em colocar o material a ser analisado, que dever ser fino
ou transparente, diretamente sobre uma lmina.
b. Esfregao
As clulas livres presentes nos lquidos corporais, como sangue,
smen, lquor, so dispostas sobre a lmina em uma fina camada, de forma
que ficam isoladas uma das outras, podendo ser observadas em microscpio
ptico.
c. Espalhamento
Erroneamente chamado de esfregao, consiste em deslizar o
raspado de mucosas sobre uma lmina.
d. Esmagamento
Consiste em esmagar, entre lmina e lamnula, o material a ser
analisado. til para estudos de divises celulares.
2. Objetivo
Aprender as diferentes tcnicas de preparao de lminas para observao
de clulas no microscpio
3. Material a ser Utilizado
- Tesoura
- Lmina
- Lamnula
- Abaixador de lngua
- Azul de metileno
- Pipeta de Pasteur
- Sangue com EDTA
- Cebola
- Lmina de Bisturi
4. Atividade Prtica
1- Montagem Total
- Cortar um pedao de fio de cabelo e colocar sobre a lmina
- Adicionar uma gota de gua destilada
- Cobrir com lamnula
2- Espalhamento
- Com um abaixador de lngua raspar a parte interna da bochecha
- Espalhar o material sobre a lmina em crculos
- Colocar uma gota de azul de metileno
- Cobrir com lamnula
3- Esfregao
- Colocar uma gota de sangue no canto da lmina
- Com outra lmina, em um ngulo de aproximadamente 40, arrastar o
sangue pela lmina
- Deixar secar em temperatura ambiente
4- Esmagamento
- Fazer um corte fino na cebola
- Colocar sobre a lmina
- Cobrir com lamnula
- Espremer o material entre lmina e lamnula utilizando os dedos polegares
e indicador.
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PRTICA N 06: CITOQUMICA
1. Introduo
A citoqumica a rea da biologia que estuda os mtodos de colorao dos
tecidos e constituintes celulares. So classificadas de acordo com a reao
qumica envolvida.
1.1. Reao Citoqumica mediada por Ligaes Eletrostticas
Um corante ionizado reage com um substrato de carga inica oposta.
Ento, existem dois fenmenos citoqumicos: acidofilia e basofilia.
Acidofilia, quando um substrato de carga positiva reage com um corante
de carga negativa. Ex: Eosina.
Basofilia, quando um substrato de carga negativa reage com um corante
de carga positiva. Ex: Azul de metileno.
1.2. Reao Citoqumica mediada por Ligaes Covalentes
A ligao covalente consiste no compartilhamento de eltrons entre dois
tomos. Muitas das reaes citoqumicas mediadas por ligaes covalentes
necessitam ser facilitadas por uma molcula de componente metlico, que
chamada de mordente. Ex: Coloraes Tricrmicas.
1.3. Reao Citoqumica mediada por Interaes Hidrofbicas
Essas reaes so especficas para lipdios apolares. Os corantes
utilizados (diludos base de lcool ou acetona) interagem com os lipdios
hidrofobicamente, ou seja, livres de gua. Ex: Sudan Black e Sudan III.
1.4. Imunocitoqumica
Utiliza a especificidade dos anticorpos para localizar molculas nas
clulas ou tecidos. A visualizao do anticorpo depende da sua ligao com
marcadores detectveis.
Quando o composto utilizado na marcao do anticorpo um
fluorocromo, a reao chamada de imunofluorescncia. Quando se utiliza
enzimas como marcadores, recebe a denominao de imunoperoxidase.
2. Objetivos
- Aprender uma tcnica de colorao de clulas
- Verificar a regio da clula que se cora pela eosina e pelo azul de metileno.
3. Material a ser Utilizado
- Lminas
- sangue com EDTA
- pipeta de Pasteur
- corante pantico
- microscpio
- leo de imerso
4. Atividade Prtica
- Fazer uma lmina de esfregao sanguneo
- Deixar secar a temperatura ambiente
- Realizar a colorao utilizando os corantes panticos
- Deixar secar a temperatura ambiente
- Focalize a lmina no microscpio de luz, identifique um leuccito e faa o
desenho no crculo abaixo, mostrando as diferentes partes da clula e sua
afinidade pelos corantes utilizados:
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PRTICA N 07: TIPOS CELULARES
1. Introduo
Existem dois tipos bsicos de clulas, as procariontes e eucariontes. As
clulas procariontes caracterizam-se pela pobreza de membranas, os
cromossomos no so separados do citoplasma por membrana, a nica
membrana existente a membrana plasmtica.
As clulas eucariontes apresentam duas partes distintas, o citoplasma e o
ncleo, o citoplasma envolvido pela membrana plasmtica e o ncleo, pelo
envoltrio nuclear, sua principal caracterstica a riqueza de membranas,
formando compartimentos que separam os processos metablicos.
As clulas vegetais so eucariontes e assemelham-se as clulas animais,
porm apresentam parede celular, cloroplastos e vacolos grandes.
2. Objetivo
- Diferenciar clulas procariontes e eucariontes animais e vegetais
3.Material a ser Utilizado
- Lminas de esfregao bacteriano corados pelo GRAM
- Abaixador de lngua
- Lminas
- Azul de metileno
- Pipeta de Pasteur
- Lamnula
- Cebola
- Lminas de Bisturi
- Microscpio
- leo de imerso
4. Atividade Prtica
- Observar no microscpio lminas de clulas procariontes (esfregao
bacteriano corado pelo Gram) e desenhar no crculo abaixo
- Preparar uma lmina de clulas eucariontes animais:
- Com um abaixador de lngua raspar a parte interna da bochecha
- Confeccionar a lmina pela tcnica de espalhamento (espalhar o material
sobre a lmina em crculos)
- Colocar uma gota de azul de metileno
- Cobrir com lamnula
- Observar no microscpio e desenhar no crculo abaixo
- Preparar uma lmina de clulas eucariontes vegetais:
- Fazer um corte fino na cebola
- Colocar sobre a lmina
- Colocar uma gota de azul de metileno
- Cobrir com lamnula
- Observar no microscpio e desenhar
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PRTICA N 08: DIFUSO
1. Introduo
A difuso consiste no transporte de substncias atravs da membrana. A
difuso ocorre a favor de um gradiente de concentrao, ou seja, de uma
regio com maior concentrao de partculas para uma regio com menor
concentrao, em funo do tempo, at alcanar o equilbrio e esse
transporte no envolve gasto de energia.
2. Objetivo
- Demonstrar o processo de difuso
3. Material a ser utilizado
- Saco de Dilise
- Cordo
- Soluo de azul de metileno
- Basto de vidro
- Becker de 500 mL
- 5 tubos de ensaio
- Pipeta de 5mL
- Pra
- Agitador magntico
- Estante para tubos de ensaio
- gua destilada
- Barra magntica
- Tesoura
4. Atividade Prtica
- Adicionar 400mL de gua destilada a um Becker de 500mL, colocando-o
sobre o agitador magntico.
- Abra a fita de celofane no Becker que contem gua destilada, de modo
que as suas paredes se separem formando um tubo.
- Amarre uma das extremidades com cordo
- Coloque 5mL da soluo de azul de metileno no saco de dilise. Amarre a
outra extremidade.
- Prepare uma estante com 5 tubos de ensaio, marque-os com 0,5,10,15 e
20 que correspondero aos tempos (em minutos) do experimento.
- Prenda o saco de dilise num basto de vidro, mergulhando-o no Becker,
de modo a no impedir a rotao da barra magntica.
- Ao mergulhar o saco no Becker, ligue a rotao do agitador e retire uma
amostra de 5mL da gua contida naquele recipiente colocando-o no tubo 0,
este ser o tempo zero do experimento.
- Passe a retirar amostras de 5mL, a cada 5 minutos (cronometrados), at
20 minutos, colocando cada amostra no respectivo tubo de ensaio.
- Observe a diferena de cor entre os tubos.
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PRTICA N 09: OSMOSE EM CLULAS ANIMAIS
1. Introduo
Osmose a passagem espontnea (sem gasto de energia) do solvente da
soluo menos concentrada para a mais concentrada atravs de uma
membrana semipermevel.
Se uma clula animal (por exemplo, uma hemcia) for colocada numa
soluo hipertnica em relao ao seu citoplasma, ela perder gua e
murchar, ficar com a superfcie enrugada, fenmeno chamado de crenao.
Se for colocada numa soluo hipotnica, ela ganhar gua e seu volume
aumentar, entretanto, se a soluo for muito hipotnica, a membrana no
resistir e sofrer ruptura, fenmeno chamado de plasmoptise, no caso da
hemcia, hemlise.
2. Objetivo
Observar o que ocorre com as hemcias em diferentes concentraes
inicas.
3. Material a ser utilizado
- Lmina
- Lamnula
- Pipeta de Pasteur
- Sangue com EDTA
- Soluo de NaCl a 0,9%
- Soluo de NaCl a 0,6%
- Soluo de NaCl a 2,0%
- Microscpio ptico
4. Atividade Prtica
- Colocar na lmina uma gota de sangue
- Colocar uma gota da soluo de NaCl a 0.9%
- Cobrir com lamnula
- Observar no microscpio e desenhar no crculo abaixo
- Colocar na lmina uma gota de sangue
- Colocar uma gota da soluo de NaCl a 0.6%
- Cobrir com lamnula
- Observar no microscpio e desenhar no crculo abaixo
- Colocar na lmina uma gota de sangue
- Colocar uma gota da soluo de NaCl a 2.0%
- Cobrir com lamnula
- Observar no microscpio e desenhar no crculo abaixo
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PRTICA N 10: OSMOSE EM CLULAS VEGETAIS
1. Introduo
Nas clulas vegetais os efeitos osmticos so diferentes das clulas
animais. A parede celular que reveste a membrana plasmtica muito
resistente as diferenas de presso osmtica, os fenmenos osmticos
ocorrem entre o meio e o vacolo, assim mesmo em solues extremamente
hipotnica a clula vegetal nunca sofre plasmoptise.
Quando a planta perde muita gua, o meio extracelular torna-se hipertnico
em relao ao vacolo, o qual perde muita gua. O citoplasma e a membrana
se retraem, mas a parede celular devido a sua resistncia, no acompanha
esta retrao, fenmeno chamado de plasmlise.
2. Objetivo
Observar o que ocorre com as clulas vegetais em diferentes
concentraes inicas
3. Material a ser utilizado
- Lmina
- Lamnula
- Pipeta de Pasteur
- Lmina de bisturi
- Folha de Setcreasia purprea
- Soluo de NaCl a 0,9%
- Soluo de NaCl a 0,6%
- Soluo de NaCl a 2,0%
- microscpio ptico
4. Atividade Prtica
- Fazer um corte bem fino do lado roxo da folha de Setcreasia purprea e
colocar na lmina
- Colocar uma gota da soluo de NaCl a 0.9%
- Cobrir com lamnula
- Observar no microscpio e desenhar no crculo abaixo
- Fazer um corte bem fino do lado roxo da folha de Setcreasia purprea e
colocar na lmina
- Colocar uma gota da soluo de NaCl a 0.6%
- Cobrir com lamnula
- Observar no microscpio e desenhar no crculo abaixo
- Fazer um corte bem fino do lado roxo da folha de Setcreasia purprea e
colocar na lmina
- Colocar uma gota da soluo de NaCl a 2.0%
- Cobrir com lamnula
- Observar no microscpio e desenhar no crculo abaixo
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PROF. Dra. PLCIA BARRETO PRATA GOIS
PRTICA N 11: OBSERVAO DE CLIOS E FLAGELOS
1. Introduo
Clios e flagelos so projees da membrana citoplasmtica que contm em
seu interior um feixe de microtbulos. Em clulas livres, essas estruturas so
responsveis pela movimentao e em clulas fixas, os clios tm como funo
movimentar fluido na superfcie celular.
2. Objetivo
Diferenciar clios e flagelos
3. Material a ser utilizado
- Lmina da traquia
- Lmina de esperma
- Microscpio ptico
4. Atividade Prtica
1- Utilizando o microscpio ptico, focalize a lmina da traquia na objetiva
de 40X, observe os clios na superfcie das clulas epiteliais e desenhe no
crculo abaixo.
2 - Utilizando o microscpio ptico focalize a lmina de esperma na objetiva de
100X, observe o flagelo presente nos espermatozides e desenhe no crculo
abaixo.
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PRTICA N 12: FORMAS NUCLEARES
1. Introduo
Os leuccitos ou glbulos brancos so clulas presentes no sangue
perifrico com funo de proteger o organismo contra agentes patolgicos
causadores de doenas. Os leuccitos apresentam ncleo de formas
caractersticas,.o neutrfilo possui o ncleo segmentado em lobos, em nmero
que varia de dois a cinco; o eosinfilo, com ncleo bilobado e com o citoplasma
preenchido por muitos grnulos rseos, os basfilos possuem um ncleo
irregular em forma de S, os linfcitos possuem um ncleo esfrico que ocupa
quase todo o volume da clula e os moncitos so clulas grandes com ncleo
na forma de rim ou ferradura.
2. Objetivos
- Identificar os diferentes tipos de leuccitos
- Verificar as diferentes formas nucleares
3. Material a ser utilizado
- Lminas de esfregao sanguneo
- Microscpio ptico
- leo de imerso
4. Atividade Prtica
- Focalize a lmina de esfregao sangneo no microscpio ptico, procure
e faa desenhos dos diferentes tipos nucleares presentes nas clulas
sangneas:
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PRTICA N 13: EXTRAO DE DNA
1. Introduo
Para visualizao do DNA necessrio separa-lo dos outros componentes
celulares. Os procedimentos utilizados para a extrao do DNA promovem
inicialmente a ruptura das membranas para liberao do material gentico e em
seguida, o DNA separado das protenas.
2. Objetivo
- Observar o DNA
3. Material a ser utilizado
- Banana
- Garfo
- Vidro relgio
- Bcker de 250 ml
- Proveta de 100ml
- 10ml de detergente comercial
- 3g de NaCl
- Banho-maria a 60C
- Gelo
- Tubo de ensaio
- Funil
- Gaze
- lcool
4. Atividade Prtica
- Amassar a banana e colocar em um becker de 250 mL
- Utilizando uma proveta, adicionar 10 mL de detergente comercial, 3g de
NaCl e completar com gua destilada at 100 mL, homogeneizar
- Adicionar a soluo preparada ao becker contendo a banana amassada
- Colocar o becker em banho-maria (60C) por 15 minutos, depois em um
recipiente com gelo
- Depois de resfriada, filtrar a soluo em um tubo de ensaio, o restante do
material dever ser descartado
- Adicionar lentamente lcool comercial gelado ao tubo de ensaio contendo
o filtrado
- Movimentar o tubo com cuidado de forma que o DNA apresente o aspecto
de um chumao de algodo
Questes:
1- Por que usado o detergente?
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2- Qual a funo do NaCl?
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3- Por que usado o lcool?
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PRTICA N 14: MITOSE
1. Introduo
A mitose uma das fases do Ciclo Celular, atravs da qual as clulas
eucariticas se dividem originando duas clulas-filhas com a mesma
composio gentica (mesmo nmero e tipo de cromossomos). Este processo
dura, em geral, 90 a 120 minutos e dividido em quatro etapas: prfase,
metfase, anfase e telfase. Prfase: a cromatina comea a se condensar, os
centrolos afastam-se para os plos opostos criando as fibras do fuso e a
membrana nuclear desaparece. Metfase: os cromossomos esto dispostos no
centro da clula, formando o que se chama de Placa Equatorial. Anfase: as
fibras do fuso se encurtam em direo aos plos levando consigo as
cromtides. Telfase: a cromatina comea a se descondensar, ressurgem a
membrana nuclear e a clula se divide.
2. Objetivo
- Identificar as fases da mitose
3. Material a ser utilizado
- Lminas de raiz de cebola
- Microscpio ptico
4. Atividade Prtica
- Focalize a lmina de raiz de cebola na objetiva de 40X no microscpio
ptico, procure e faa desenhos das diferentes fases da mitose:
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