Enfermedad por el Virus Ébola (EVE): Laboratorio · P.C.R. ANIDADA PARA DETECCIÓN DE ESPECIES DEL...

Enfermedad por el Virus Ébola (EVE): Laboratorio

Paola Pidal M Laboratorio Biomédico Nacional y de

Referencia

• Laboratorio: Diagnóstico y confirmación EVE

• Laboratorio: Manejo general

SOCHINF Dra. Mónica Lafourcade Dra. Patricia García Dr. Francisco Silva Dra. Marcela Cifuentes Dra. Marcela Ferrés Dra. Ana María Guzmán Dra. Beatrice Hervé T.M. Sr. Tomás Sanchez ISP Dra. Verónica Ramírez Dra. Judith Mora Dra. Paola Pidal

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO EVE

La confirmación de infección por virus Ébola solo puede ser realizada en pacientes que ya han desarrollado síntomas y no es posible realizarla durante el periodo de incubación. El virus es generalmente detectable por RT-PCR entre 3-10 días después de la aparición de los síntomas, especialmente fiebre.

DIAGNÓSTICO LABORATORIO EVE : Antecedentes Generales

La confirmación o descarte Centro Colaborador de la OMS establecido para la región.

El ISP PCR para Virus Ébola. Protocolo NML PCR Malaria PCR Dengue

DIAGNÓSTICO DE EVE Y DIFERENCIAL

P.C.R. PUNTO FINAL

DETECCIÓN DE ESPECIES DEL GÉNERO Plasmodium

Primera reacción de P.C.R.: Detección de género Plasmodium

Flujograma Diagnóstico Molecular de Malaria

muestra sangre EDTA- Inactivada Trizol ®

P.C.R. ANIDADA PARA DETECCIÓN DE ESPECIES DEL

GÉNERO Plasmodium

Segunda reacción de P.C.R.: Identificación de especies del género

Plasmodium (vivax, malariae, falciparum y ovale).

Electroforesis de productos de la segunda reacción P.C.R.

• Fotodocumentación de electroforesis

• Interpretación y validación de la corrida

CONTROLES POSITIVOS

Plasmodium malariae: Banda de 145 pb

Plasmodium falciparum: Banda de 206 pb

Plasmodium ovale: Banda de 226 pb

Plasmodium vivax: Banda de 121 pb

Informe de Resultado para Muestra

Tiempo de Respuesta 24 hrs.

Snounou y Singh (2002), Nested PCR analysis of Plasmodium parasites. Methods Mol Med 72: 189–203 Centers for Disease Control and Prevention Malaria Procedures 2013

• RT-PCR en Tiempo Real (qRT-PCR):

– Ébola Zaire (Implementado)

– Ébola Sudán (En Proceso)

• RT-PCR (Confirmatorio):

– Filovirus (Implementado)

• Secuenciamiento

Técnicas disponibles ISP para diagnóstico y confirmación EVE

Diagnóstico y Genotipificación de Ébola : Genes blanco

OH Leader

3’ 5’ NP vp30 vp40 GP vp24 L vp35

sGP

2295

66pb

2361

ZEBOV-NP-FW ZEBOV-NP-RV

17140 17204

ZEBOV-L-FW ZEBOV-L-RV

64pb

RT-PCR

qRT-PCR qRT-PCR

Mix FiloA-Dfw

5’ 3’

- 1

38

54

-

13

87

6

-- 1

32

43

- 1

32

66

RT-PCR

635pb

Mix FiloA-Drv

Frag Polimerasa

Diagnóstico en Centro Colaborador

• Antígenos • AC • RT-PCR • Secuenciamiento

National Microbiology Laboratory Public Health Agency of Canada

Adaptado de: J Infect Dis. (1999) 179 (Supplement 1): S28-S35. doi: 10.1086/514318

J Infect Dis. (2007) 196 (Supplement 2): S142-S147. doi: 10.1086/520545

DIAGNÓSTICO DE ÉBOLA

La confirmación y descarte tiene un componente de laboratorio, epidemiológico y clínico.

La confirmación : Secuenciamiento.

Paciente sospechoso

Muestra de sangre para PCR

Positivo

Secuenciamiento

Positivo

Confirma EVE

Negativo

24 horas

NML Canadá

Negativo

Paciente sospechoso

1

Muestra de sangre para PCR

NML Canadá

Negativo

2

muestra 3

CS 24 hrs

Si 1

muestra > 3 CS Si la primera muestra desde 0-2 CS

Negativo Negativo

3

muestra 4 día CS Negativo Descarta EVE

2 muestras de 5 ml de sangre cada una (2 tubo tapa lila). Para primer envío

DIAGNÓSTICO DE ÉBOLA

La muestra deberá ser tomada por personal de salud solo en los centros de Referencia Ébola definidos por Minsal.

Tomar de muestra el primer día de hospitalización

DONDE

QUE

CUANDO

Extraer las muestras de sangre con sistema al vacío con tubos de plástico . Enviar de inmediato al Instituto de Salud Pública de Chile, en triple embalaje, refrigeradas (en contenedor térmico con Ice Pack).

DIAGNÓSTICO DE ÉBOLA

COMO

Protocolo EPP definidos para la atención clínica

EXÁMENES PARA MANEJO GENERAL DEL PACIENTE NO DIAGNÓSTICO DE ÉBOLA

ASPECTOS GENERALES

Exámenes Bioquímicos: Utilizar point of care en sala de paciente Utilizar point of care o Laboratorio bajo GBS clase II con certificación vigente Utilizar autoanalizadores de química clínica: pretratar los sueros a ser usados con inactivación por calor. Los resultados de las pruebas bioquímicas después de la inactivación del plasma a 60ºC por 60 minutos son aceptables para los siguientes analitos: electrolitos (sodio, potasio y magnesio), función renal (urea, creatinina y urato), bilirrubina, glucosa y proteína C reactiva.

PRECAUCIONES ESPECÍFICAS.

Exámenes hematológicos: Recuento Hematológico y coagulación: Se pueden procesar en autoanalizador hematológico y coagulómetro automatizado respectivamente, siempre que no requiera el retiro de la tapa del tubo que contiene la muestra de sangre.

Exámenes disponibles.

Bacteriología Hemocultivos: Sistemas de hemocultivos automatizados cerrados. Si el hemocultivo es positivo, se debe derivar a Sección Bacteriología del ISP

Actualmente .

Actualmente .

Gracias