Extracció d’ADN

1

Extracció d’ADN

2

PRÀCTICA DE L’EXTRACCIÓ D’ADN

3

OBJECTIU Mitjançant una tècnica molt senzilla

podem extraure ADN de teixit animal i comprovar la seva estructura filamentosa.

L’extracció es basa en el fet que els ions salins són atrets cap a les càrregues negatives de l’ADN permetent la seva dissolució i posterior extracció.

4

MATERIAL

Tisores Homogeneïtzador (batedora o morter) Tela per filtrar (Gasa espessa) Vareta de vidre Vas de precipitats Pipeta Tub d’assaig

5

PRODUCTES QUÍMICS

Detergent líquid comercial NaCl 2M Alcohol etílic de 96º Aigua destil·lada

6

PRODUCTE NATURAL

20g de timus de vedella

7

PROTOCOL

Passos 1r

2n

3r

4t

Triturar els 20g de timus amb 100mld’aigua a la batedora fins obtenir unamassa homogènia i semilíquida.Deixar reposar, que sedimentin les partícules més grans.Amb les gases o tela filtrar repetides vegades el sobrenadant que no quedinpartícules sòlides.

Afegir un volum igual de NaCl 2M per tal de produir un mitjà hipertònic. Afegir sabó líquid diluït 6ml i barrejar amb la vareta de vidre.

Amb la pipeta afegir lliscant per la paret del tub d’assaig 60ml d’alcohol.

8

LA POSADA EN MARXA DE LA CLASSE PRÀCTICA

VEGEM-HO EN IMATGES

9

VEGEM-HO EN IMATGES

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

1

En la tasca de filtratge del sobrenadant el que estem fent és retirar les partícules sòlides: fibres conjuntives, cèl·lules musculars, vasos sanguinis, etc...

QUÈ HA SUCCEÏT A CADASCUN DELS PASSOS?

20

2 Amb la solució de NaCl 1M el que aconseguim és crear un medi hipertònic on farà que s’hi produeixi la ruptura dels embolcalls nuclears.

QUÈ HA SUCCEÏT A CADASCUN DELS PASSOS?

21

3Amb el sabó líquid diluït alliberem el DNA de les proteïnes ja que el detergent forma un complex amb aquestes.

QUÈ HA SUCCEÏT A CADASCUN DELS PASSOS?

22

Quan per les parets afegim l’alcohol fred creem dues capes i a la interfase, l’ADN es desenrotlla i precipita distingint-se un embull de fibres blanques gelatinoses.

QUÈ HA SUCCEÏT A CADASCUN DELS PASSOS?

4

23

Amb la vareta dipositem alguns d’aquests filaments sobre un portaobjectes i afegim unes gotes d’orceïna acètica i es deixa 8 minuts que es tenyeixin, rentem amb aigua destil·lada, muntem amb gota de glicerina i cubre i ho portem a observar al microscòpi.

COMPLETEM LA PRÀCTICA AMB UNA PREPARACIÓ

24

REALITZACIÓ:

DEPARTAMENT DE CIÈNCIES EXPERIMENTALS

Han participat en la realització de la pràctica:

Professors: Ignacio Pujals Gemma Balasch

Alumnes: Javier Bermudez Laia Forner Saman Iqbal