View
253
Download
3
Category
Preview:
Citation preview
Familia Enterobacteriaceae
Caractere generale:
• enterobacterium = bacterie intestinală
• habitat: tractul intestinal om/animale
Caractere morfo-tinctoriale:
• Bacili Gram-negativ
• Mobili/imobili
• Unii au capsulă: Klebsiella
pneumoniae
• Nu formează endospori
Caractere de cultură:• Facultativ anaerobe • Tulbură uniform mediul de cultură lichid• Au necesităţi nutriţionale reduse → se
dezvoltă şi pe geloză nutritivă • Colonii tip S• Uneori colonii mucoase: Klebsiella
pneumoniae • Medii selective, majoritatea au lactoză:
• Drigalski, Levin, Leifson, Istrate-Meitert, MacConkey
Mediul Levine
• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial
• Componente: geloză simplă + eozină + lactoză + albastru de metilen
• Utilizare: cultivarea enterobacteriilor (E.coli)
ADCL (Leifson)
• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial
• Componente: geloză simplă + săruri biliare + lactoză + roşu neutru
• Utilizare: cultivarea shigelelor şi salmonelelor
Caractere biochimice:~ Încadrarea în familie pe baza a trei
teste biochimice:• Fermenteză glucoza cu producere de acid
şi gaz • Testul oxidazei negativ• Reduc nitraţii la nitriţi
~Pe baza testelor biochimice şi a caracterelor antigenice → genuri → specii → variante serologice
OXIDAZA• Scop: evidentierea citocromoxidazei• Substrat: benzi indicatoare (alfanaftol- clorhidrat
de dimetilparafenilendiamina)• Tehnica:
- se umecteaza banda indicatoare cu apa distilata - se descaraca o colonie bacteriana cu ajutorul ansei pe banda indicatoare
• Interpretare: test+ coloratie albastra
Testul oxidazei
REDUCEREA NITRATILOR LA NITRITI
• Substrat: apa peptonata + KNO3
• Incubare: 24h la 37 C
• Substanta indicatoare: ac sulfanilic/acid acetic, alfanaftilamina/ac acetic
• Interpretare: test + viraj spre rosu al indicatorului (Enterobacteriaceae)
CoproculturaIzolarea- Medii de cultură pentru enterobacterii - Medii selective şi de diferenţiere
*Drigalski*Levin*Leifson*Istrate-Meitert*MacConkey
Caractere morfo-tinctoriale
Bacili Gram-negativ
Proprietăţi de cultură
•Colonii S •Lactozo-negative
Proprietati biochimice
TSI
UTILIZAREA CITRATULUI SIMMONS
• Substrat: mediu minimal cu citrat de sodiu solidificat in eprubeta in pozitia inclinata
• Tehnica: inocularea bacteriei de testat pe panta agarului. Incubare 18h la 37 C
• Interpretare: test +dezvoltarea coloniilor bacteriene si viraj verdealbastru al culorii mediului
testul citrat – mediul Simmons
UTILIZAREA CITRATULUI SIMMON’S
Structura antigenică
- Aglutinări pe lamă cu seruri anti-O
Teste de patogenitate
Testul Sérèny
Caractere morfo-tinctoriale
Bacili Gram-negativMobili (preparat nativ)
Proprietăţi de cultură
Colonii S Geloză nutritivă
Proprietăţi de cultură
Mediul DrigalskiColonii lactozo-negative
Proprietăţi de cultură
- lactozo-negativ- Agar EMB (Levin)
Proprietăţi de cultură
- Agar McConkey
Proprietati de cultura
Geloza HektoenH2S
GENUL SALMONELLAAGAR AGAR CROMOGENICCROMOGENICADCLADCL--HH22SS
Genul Salmonellapeste 2200 serotipuri
Infecţii (salmoneloze): ~ Febra tifoidă – S.typhi~ Febra paratifoidă – S.paratyphi A, B~ Toxiinfecţii alimentare şi enterite (copii)
S.typhymuriumS.enteritidisS.paratyphi BS.panama
~ Stări septico-piemiceS.paratyphi CS.choleraesuis
Clasificarea serotipurilor de Salmonella
1. Adaptate la om
• S.schottmuelleri– S.typi– S.paratypi A,B
• S.hirschfeldii– S.paratypi C
2. Adaptate la gazde altele decât omul
• exc. tulpini → boli om– S.dublin– S.choleraesuis
3. Fără adaptate la o gazdă specifică
• S.enteritidis → >2000 serotipuri → gastroenterite
Caractere generale:
~ bacili Gram-negativ~ mobili (flageli peritrichi)~ lactozo-negativi~ identificarea antigenelor O, H, Vi →
reacţii de aglutinare
Recoltarea produselor patologice:
1) Febre tifo-paratifoide:
– S1 hemocultură
– S2 urocultură, coprocultură
2) Gastroenterite– coprocultură– lichid de
vărsătură– alimente
Teste biochimice
H2S
Teste biochimice
Creste pe mediul Simmons, cu citrat
Proprietăţi antigenice
- Schema de identificare antigenică Kauffmann-White
Ag “O” – caracteristică de GRUP Ag “H” - caracteristică de TIP (variaţie de
fază)Ag Vi <=> Ag K – de suprafaţă Serotip = enumerarea completă a Ag O, Vi
şi H1,2
Reacţia Widal
- r. aglutinare în tuburi
- Febre tifo-paratifoide - Creşterea titrului de anticorpilor
aglutinanţi anti-O şi anti-H
Enterobacterii oportuniste
Escherichia
Klebsiella – Enterobacter – Hafnia –Serratia
Proteus – Providencia – Morganella
Arizona – Edwarsiella – Citrobacter
Enterobacterii oportuniste
Escherichia coli~ 80% flora normală a colonului~ bacili Gram-negativi~ lactozo-pozitivi ~ luciu metalic – mediul Levin
Escherichia coli
~ Tipuri de îmbolnăviri:
~ boli diareice
~ infecţii urinare
~ infecţii ale plăgilor
~ septicemii
Escherichia coli
Tulpini care produc boli diareice:
~ ETEC (E.coli enterotoxigen)
~ EIEC (E.coli enteroinvaziv)
~ EPEC (E.coli enteropatogen)
~ EHEC (E.coli enterohemoragic)
~ VTEC (E.coli produce toxină Shiga-like) → O157:H7
GENUL ESCHERICHIA
E. coli – non pathogenE. coli - EPEC
- EHEC- EIEC- ETEC
pathogenpathogen
GENUL ESCHERICHIAE. coliE. coli
Cultura puraCultura pura
E. coli E. coli --ADCLADCL
E. coliE. coli
LEVINELEVINEDRIGALSCHIDRIGALSCHI
Fermentarea lactozei pe geloză lactozată
E. coliE. coli
MEDIU CROMOGENMEDIU CROMOGEN
COLONII ROZCOLONII ROZ
Escherichia coliIdentificare biochimică
IMViC~ Testul indol~ Testul roşu metil~ Reacţia Voges-Proskauer~ Testul citrat
OXIDATIE-FERMENTATIE
DEGRADARE MIXTADEGRADARE MIXTA
MEDIU NEDAGRADATMEDIU NEDAGRADAT
TESTE REZULTATE DIN TIPURILE DE FERMENTATIE
• TESTUL ROSU-METIL
• TESTUL VOGES-PROSKAUER
TESTUL ROSU-METIL
• Scop: fermentarea substratului si scaderea pH-ului sub 5• Tehnica:
– tulpina bacteriana testata se insamanteaza in apa peptonata glucozata. – Incubare 18h la 37 C. – Developare cu solutie rosu fenol
• Interpretare: – Test + culoare rosie (pH<5): E. coli– Test - culoare galbena (pH>5): Klebsiella
TESTUL VOGES-PROSKAUER
• Scop: evidentierea fermentatiei acetoinice
• Tehnica: – tulpina bacteriana se insamanteaza in apa peptonata glucozata. – incubare 18h la 37 C. – Se alcalinizeaza. – Developare cu alfanaftol.
• Interpretare:– test + inel rosu-violaceu la interfata de contact: Klebsiella– Test - : E.coli
TESTUL VOGES-PROSKAUER
TESTUL INDOL• Scop: evidentiaza prezenta triptofanazei• Tehnica:
– cultura bacteriana de 24h in apa peptonata – benzi indicatoare cu reactiv indol.
• Interpretare: – test + culoare rosu-violaceu (E.coli)
TESTUL INDOL
Grupul Klebsiella – Enterobacter – Hafnia – Serratia
Klebsiella pneumoniaeKlebsiella rhinoscleromatisEnterobacter cloacaeEnterobacter aerogenesHafnia alveiSerratia marcescens
Grupul KEHSTipuri de îmbolnăviri:
~ Dobândite în spital~ Infecţii cu localizări <=> E.coli~ Cauze imp. de bacteriemii~ Klebsiella pneumoniae – inf. pulmonară~ Majoritatea → tulpini cu rezistenţă multiplă
la antibiotice
Klebsiella pneumoniae
~ cantităţi moderate în intestinul omului /animalelor
~ infecţii respiratorii, urinare, otite~ bacili Gram-negativi~ capsulă polizaharidică ~ colonii mari mucoase , fenomen de
cameleonaj
KLEBSIELLAKLEBSIELLA
Frotiu coloratia tuş de China
Klebsiella pneumoniae
KLEBSIELLAKLEBSIELLAColonii mucoaseColonii mucoase
KLEBSIELLA
Proprietati biochimiceProprietati biochimice
Proteus vulgaris, P.mirabilis
~ saprofiţi (materie organică în descompunere)
~ flora intestinală normală~ infecţii urinare, alte tipuri de infecţii~ bacili Gram-negativi, mobili~ lactozo-negativi~ invadează suprafaţa mediilor gelozate
GENUL PROTEUS
Proteus Proteus vulgarisvulgaris
FlageliFlageli
GENUL PROTEUS GENUL PROTEUS -- migrare
PROTEUS
Proteus spp.
PRODUCEREA DE H2S
TESTUL UREAZEI
• Scop : evidentierea ureazei, enzima ce scindeaza ureea cu formare de amoniac
• Substrat: mediu de cultura ce contine uree si indicator colorimetric (de Ph).
• Tehnica:– tulpina bacteriana testata se inoculeaza in mediu. – Se incubeaza 18h la 37 C.
• Interpretare:– test+ viraj corespunzator al zonei bazice: Proteus
Proteus spp.Ureaza +
H2S
TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI
• Scop: evidentierea prezentei FAD
• Substrat: agar inclinat ce contine fenil-alanina
• Tehnica:– tulpina bacteriana se insamanteaza pe panta agarului. – Developarea reactiei cu FeCl3
• Interpretare: test+ aparitia culorii verzi (Proteus)
TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI
Yersinia pestis
~ ciuma (pesta)
~ bacili Gram-negativ
~ capsulă proteică
Yersinia enterocolitica
~ Sdr. Diareic febril
Yersiniapseudotuberculosis~ Inf. la păsări,
rozătore, rar om~ Lez. tipică: noduli
asemănători celor tbc în intestin, org. parenchimatoese
Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi
Pseudomonade
- bacili Gram negativi
- strict aerobe, metabolism oxidativ
- catalazo-pozitivi si oxidazo-pozitivi
Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi
Pseudomonadespecii fluorescente, care produc pigmenti difuzibili fluorescenti:
P. aeruginosa (bacilul piocianic)P. putida, P. fluorescens;
specii non-fluorescente: P. alcaligenes, P. pseudoalcaligenes.
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)
• patogen nosocomial (10% din totalul infectiilor nosocomiale)
• Bacterie oportunistă• Habitat:
– sol, apă – Poate coloniza tubul digestiv şi pielea
persoanelor sănătoase
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)
• ITU• infectii de tract respirator• infectii ale plagilor, suprainfectii ale
arsurilor• bacteriemie, septicemie, infectii sistemice,
mai ales la pacientii imunocompromisi• otite externe la inotatori ; • infectii oculare dupa interventii chirurgicale
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)
Proprietati microscopice:
• bacili Gram negativi
• mobili
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)
Proprietati de cultura:
• pigment difuzibil fluorescent de mai multe tipuri:* piocianina, albastra, cu proprietati antibacteriene fata de alte specii bacteriene* pioverdina, galben-verde culoarea verde, stralucitoare* piorubina, rosie, ocazional*piomelanina, bruna, ocazional
• cultura degaja o aroma caracteristica, aromata, asemanatoare cu florile de tei, iasomie, mere verzi
• strict aeroba
Pseudomonas spp.► Bacil Gram-negativ,
mobil► Nefermentativ
► Se dezvoltă pe medii simple, geloză nutritivă → producere de pigment difuzibil
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)
Antibiograma – obligatorie • foarte rezistenta la antibiotice;• are rezistente naturale multiple, datorate structurii
peretelui celular.• Carbapenemi• Penemi • Unele Cefalosporine gen. III; gen. IV• Quinolone• Aminoglicozide • Polimixine.• In caz de monoterapie dezvolta rapid rezistenta.
Genul Vibriobacterii Gram-negative
foarte mobile (cil polar)
formă de bastonaş încurbat
facultativ anaerob
majoritatea speciilor saprofite, unele produc îmbolnăviri uşoare
Specia tip: Vibrio cholerae
două biotipuri holerigene: ►cholerae clasic► El Tor
V. cholerae O139 "Bengal" (1992, Bangladesh → derivate din biotipul El Tor
mai multe biotipuri neholerigene (sindroame diareice benigne)
Habitat: apa de mare, apa de suprafaţă
Contaminare:► apă, alimente
contaminate ► fecal-orală
Infecţie:Holera = infecţie
acută, intestinală
► diaree► deshidratare
masivă► stare generală
alterată► evoluţie severă
Structuta antigenică
variaţia antigenică → rol în epidemiologia
holerie şi virulenţa vibrionilor holerici
Ag H (flagelar) → specificitate largă
Ag O (somatic) → strict specific
Şase serogrupuri O1 → O6 Vibrionii holerigeni = serogrup O1 conţin trei factori antigenici: A, B, C
► 3 serotipuri: → Ogawa (AB)→ Inaba (AC)→ Hikojima (ABC)
► Fiecare serotip poata exprima fenotip „clasic” sau El Tor
► V. cholerae O139 "Bengal" este singurul serotip non-O1
Recoltarea produselor patologice
► Materii fecale → mediu de transport Cary-Blair
► Lichid de vărsătură
►Apă potabilă, alimente
Izolare
► apă peptonată alcalină (mediu de îmbogăţire)
► mediu cu săruri biliare (BSA)
a) Caractere morfo-tinctoriale:bacili Gram-negativiîncurbaţi
b) Caractere de cultură:► Mediul BSA: Colonii tip S, transparente
c) Caractere antigenice:► vibrionii holerigeni aglutinează cu ser
anti-O1► vibrionii neholerigeni nu aglutinează cu
ser anti-O1 (neaglutinabili – NAG)
d) Caractere de patogenitate:testul ansei ligaturate
Tratament
reechilibrare hidro-elecrolitică
antibiotice: ex. Tetraciclină
Genul Helicobacter
• bacili Gram negativi, incurbati pana la spiralati
• mobili prin unul/mai multi flageli• microaerofili• speciile gastrice se caracterizeaza prin
producerea de ureaza in cantitati mari.
Helicobacter pylori
Recoltarea produselor patologice: biopsie din mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea fundica.
• Important: cel putin o luna fara tratament inainte de recoltarea probei.
un fragment plasat direct in mediu cu uree si indicator de pH (rosu fenol)+ureaza preformata a HP =>virarea indicatorului de pH in galben;
examen histopatologic
Helicobacter pylori
Recoltarea produselor patologice: biopsiedin mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea fundica. frotiu: bacili Gram negativi, incurbati; IF
pentru diagnostic diferential cu Campylobactercultura: colonii mici, transparente, apar in
3-7 zile; permite testarea sensibilitatii la antibiotice.
Helicobacter pylori
Metode neinvazive:• testul respirator cu uree marcata :
– ingerare uree marcata cu C13 (neradioactiv) sau C14 (radioactiv) => intensa activitate a ureazei, daca exista HP in stomac => eliberare de CO2 marcat, absorbit in circulatia sanguina si eliminat prin respiratie => detectat si cuantificat in aerul expirat (spectroscopie de masa);
– dezavantaj: este foarte costisitor.
Helicobacter pylori
• detectarea anticorpilor specifici, in special de tip IgG;
• ELISA; • cost relativ scazut, • indicat preferential in studii epidemiologice.
Helicobacter pylori - Tratament
• Macrolide (Claritromicina), • Amoxicilina,• Metronidazol, • Quinolone.
Recommended