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22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy. ANALYSE DE L’EXPRESSION DE PROTEINES D’ADHESION D’OSTEOBLASTES ET DE FIBROBLASTES CULTIVES SUR DU NITI DE 2 RUGOSITES DIFFERENTES. - PowerPoint PPT Presentation
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ANALYSE DE L’EXPRESSION ANALYSE DE L’EXPRESSION
DE PROTEINES D’ADHESION DE PROTEINES D’ADHESION
D’OSTEOBLASTES ET DE FIBROBLASTES D’OSTEOBLASTES ET DE FIBROBLASTES
CULTIVES SUR DU NITI DE 2 RUGOSITES CULTIVES SUR DU NITI DE 2 RUGOSITES
DIFFERENTESDIFFERENTES
http://leibo.univ-lyon1.fr
C. WIRTH, C. LAGNEAU, A.M. FREYRIA, D. DECORET, P. EXBRAYAT, M. LISSAC
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
Le contexte buccalLe contexte buccal
Matériaux
???
BiofilmTissus
Cellules épithéliales
Cellules fibroblastiques
Cellules ostéoblastiques
Matériaux métalliques
Céramiques
Polymères
S. mutans
Actinomyces
Lactobacillu
s
??? ???
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
NiTi poli-miroir(NiTi 2400)
NiTi rugueux(NiTi 400)
Matériaux implantaires :Matériaux implantaires :
Ticp, Ti6Al4V, NiTi ?
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
Ra ≈ 0.07, ≈ 0.15 µm
Dans notre étude, 2 états de surface :
C. WIRTH, V. COMTE, C. LAGNEAU, P. EXBRAYAT, M.LISSAC, N. JAFFREZIC, L. PONSONNET. Nitinol surface roughness modulates in vitro cell response: a comparison between fibroblasts and osteoblasts. Materials Science and Engineering C 2005, 25 : 51-60.
Types cellulaires Types cellulaires étudiés: étudiés: Cellules ostéoblastiques de calvaria de rat
obtenues par digestion enzymatique
Cellules fibroblastiques de gencives humaines par technique des explants
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
immunomarquage biochimie (SDS-PAGE, Western Blot) biologie moléculaire (extraction ARN, RT-PCR)
Techniques Techniques utilisées :utilisées :
• collagène de type I• fibronectine • ostéocalcine• ostéopontine • ostéonectine
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
noyau
substrat
membrane cellulaire
protéine adhésive de la MEC
intégrines
complexe d’adhérence
cytosquelette
Protéines étudiées :Protéines étudiées :
Protéines adhésives de la MEC
Protéines spécifiques des ostéoblastes
Réaction d’amplification en chaîne = Réaction d’amplification en chaîne = PCR PCR
5’
5’3’
3’
Séquence cible : ADN à amplifier
Amorces Taq Polymérase
Pol
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
Premier cycle
Étape 1 : DÉNATURATION
: 95°C
: 45 s
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
5’ 3’
5’3’
5’ 3’
5’3’
: Tm
: 1 min
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
Étape 2 : HYBRIDATION
5’ 3’
5’3’
Pol
Pol
: 72°C
: 1 min
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
Étape 3 : POLYMÉRISATION
5’3’
5’ 3’
: 72°C
: 1 min
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
Pol
Pol
Étape 3 : POLYMÉRISATION
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
1er cycle 2ème cycle 3ème cycle 4ème cycle
GAPDH(450pb)
Collagène de type I(352pb)
Fibronectine(442pb)
1000 pb
100
200
300400500ARN extraits de fibroblastes
humains cultivés sur du NiTi poli-miroir et rugueux
ARN extraits d’ostéoblastes de rat cultivés sur du
NiTi poli-miroir et rugueux
1000 pb
100
200300400500
GAPDH(393pb)
Collagène de type I(557pb)
Fibronectine
(351pb)
Résultats des électrophorèsesRésultats des électrophorèses22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
Pas d’influence de la rugosité de surface sur la synthèse du collagène de type I et de la fibronectine par les ostéoblastes et les fibroblastes
400 2400 400 2400 400 2400
400 2400 400 2400 400 2400
22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy
ARN extraits d’ostéoblastes de rat cultivés sur du
NiTi poli-miroir et rugueux
OP(688pb)
ON(650pb)
OC(760pb)
1000 pb
100
200
300
400500
OP : ostéopontine ON : ostéonectineOC : ostéocalcine
L’expression de l’ostéocalcine est favorisée par un état de surface poli-miroir
Résultats des électrophorèsesRésultats des électrophorèses
400 2400 400 2400 400 2400
Intensité de la bande plus importante sur le NiTi poli-miroir que le NiTi rugueux
Conclusion & PerspectivesConclusion & Perspectives
Étude de la synthèse d’autres protéines comme des intégrines, des cytoxines, des facteurs de croissance, des marqueurs d’apoptose par biologie moléculaire
NiTi avec Ra=0.07µm bon compromis pour obtenir un comportement optimum des ostéoblastes et des fibroblastes
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