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Leishmanews: noticias en leishmaniosis. Edición española
Lluis Ferrer. Hospital clínico de la UAB
El diagnóstico de la leishmaniosis
Leishmanews: noticias en leishmaniosis. Edición española
La respuesta inmune en la leishmaniosis
• Si el sistema inmune responde como Th1 • Protección: formación células que protegen contra el
desarrollo de la enfermedad • Si el sistema inmune responde como Th2
• Enfermedad: formación de anticuerpos • La respuesta Th2 no solo no protege sino que además
es la responsable de la sintomatología: – Inmunocomplejos: glomerulonefritis, artritis, vasculitis,
uveitis, anemia, leucopenia, trombocitopenia – Procesos autoinmunes: anemia, miositis... – Inmunodepresión
Por tanto, el diagnóstico de la leishmaniosis debe tener siempre en cuenta la serología
Leishmanews: noticias en leishmaniosis. Edición española
Perro infectado: presencia del parásito (L.infantum)
Perro enfermo: su sistema inmune ha respondido inadecuadamente (Th2 y formación de AC) • Presenta síntomas, incluyendo anomalías hematológicas o bioquímicas • AC ++++
Infección vs Enfermedad
Leishmanews: noticias en leishmaniosis. Edición española
Prevalencia en perros en áreas endémicas
10% enfermos: han desarrollado la enfermedad y tienen síntomas
20% seropositivos: con anticuerpos, unos sintomáticos y otros no
60%-70% infectados: contacto con el parásito pero no necesariamente enfermos
Leishmanews: noticias en leishmaniosis. Edición española
Puntos clave en el diagnóstico de la leishmaniosis
Diferenciar enfermedad de infección Valorar el animal en su conjunto
• Historia clínica, la sintomatología, las pruebas hematológicas y clínicas, la epidemiología, etc…
Confirmar con técnicas • SEROLÓGICAS • ESPECÍFICAS • y CUANTITATIVAS
Realizar un buen DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL
Hospital clínico de la UAB
Leishmanews: noticias en leishmaniosis. Edición española
Técnicas de diagnóstico: PCR
Detecta infección, no enfermedad. Interés para estudios epidemiológicos. Poco interés clínico
• PCR cualitativa • Alta sensibilidad pero riesgo de falsos negativos
según la calidad de la muestra • Muestra: linfonodo o médula ósea
• RT-QPCR • Poco estandarizada: discrepancia de resultados • Carga parasitaria no directamente relacionada con
la gravedad de la enfermedad: poco interés clínico • Interés para evaluar respuesta al tratamiento
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Técnicas de diagnóstico: serología
• Test rápidos (ELISA o inmunocromatografía):
• Muy sensibles. Detectan cantidades muy bajas de AC • Solo para screening y primer abordaje diagnóstico
• Serología cuantitativa: IFI y ELISA cuantitativo
• IFI: Considerada “goldstandard” por Leishvet • Referencia para valorar otros métodos
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• < 4 X el corte • En zonas endémicas es habitual encontrar títulos bajos en
perros sanos • En ausencia de síntomas → Repetir a los 3-4 m • En presencia de síntomas → diagnóstico diferencial y pruebas
complementarias: (citología, biopsia lesiones, etc.) • > 4 X el corte
• Con o sin síntomas: alta probabilidad de leishmaniosis. Pruebas complementarias para confirmar el diagnóstico y evaluar el estado del animal (proteinograma, función renal, etc.)
• Una variación en un título no es clínicamente significativa
IFI: interpretación
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¿Qué significa “4 veces el corte”?
1 1 1 1 80 160 320 640
1 1 1 1 160 320 640 1280
1er p
ositi
vo
1er p
ositi
vo
LABORATORIO A
LABORATORIO B
4 x
4 x
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Otras técnicas de diagnóstico
• Proteinograma • Prueba no especifica
• Cultivo • Citología
• Poco sensible pero muy específica de enfermedad
• Útil para confirmar y para formas localizadas
• Pruebas complementarias • Bioquímica, hematología,
función renal y hepática…
Carlos Vich. Dermovet
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Seguimiento del tratamiento
• Test rápidos • Sin utilidad
• Serología cuantitativa: • Valorar evolución solo a largo plazo • No usar como criterio para mantener o
repetir el tratamiento • A medio-largo plazo un elevación brusca
indica recaída
• Proteinograma. Cociente alb/glob • Puede tardar en normalizarse
• PCR cuantitativa • EVOLUCIÓN CLÍNICA
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Diagnóstico pre-vacunación
Speed Leish-K
Negativo Vacunar
Positivo IFI
ELISA (Cuantitativo)
Negativo Vacunar
Positivo
Repetir IFI a los 3 meses
Positivo bajo
NO vacunar Investigar
más
Antes de la primovacunación
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Solano-Gallego, Villanueva-Saz, Carbonell, Furlanello, Natale y Trotta (2013)
Sensibilidad Speed Leish K respecto ELISA in house UAB y rt-PCR 63,6% Especificidad Speed Leish K respecto ELISA in house UAB y rt-PCR 100%
• Se compara Speed Leish K con tres metodos ELISA (ID Screen, Leiscan y Leishmania 96) y con la IFI
• En el estudio no se utiliza como método de referencia la IFI sino una combinación de ELISA in house UAB y rt-PCR
• Según este estudio, la sensibilidad de la IFI es del 86%
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Publicaciones SLK
Sensibilidad 98 % Especificidad 100% Sensibilidad 96,3%
Especificidad 100%
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¿Por qué esas discrepancias?
• Los estudios de SLK se han realizado utilizando como técnica de referencia la IFI
• ¿Tipo IgG detectadas? . TNF-α >>IgG2
>IgG1, IgE e IgAIL-13
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Diagnóstico pre-vacunación
¿Antes de cada booster anual? • Imprescindible en caso de sospecha • No es necesario en cada revacunación anual:
• La vacuna es segura en perros + • La vacuna no evita la infección ni la aparición de un + transitorio. Un
test rápido no es un buen método para detectar un fallo vacunal • Dificultades de manejo con el propietario • En caso de positivo asintomático vacunamos o no?
• Los controles periódicos rutinarios por motivos epidemiológicos se pueden seguir realizando
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Diagnóstico en caso de sospecha
Hasta los 4-6 meses post-vacunación: • Es normal encontrar títulos elevados de anticuerpos
• Algunos tests como Speed Leish K permiten discriminar si son AC vacunales o por infección
A partir de los 6 meses: • Los AC vacunales desaparecen • Los criterios diagnósticos son los mismos que para un perro no
vacunado
DIFERENCIAR SIEMPRE INFECCIÓN DE ENFERMEDAD
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• PCR: • No indica enfermedad, indica infección
• Test rápido: • Siempre se debe cuantificar
• IFI: • Un resultado positivo no significa necesariamente
que haya habido un fallo vacunal • Valorar titulación y sintomatología • < 4x hacer diagnóstico diferencial
Diagnóstico en perros vacunados
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¿Qué hacer en caso de fallo?
1. Confirmar el diagnóstico • Una PCR+ o un test rápido+ no son suficiente
• Tener en cuenta los AC vacunales
• La vacuna no evita la infección sino el desarrollo de la enfermedad: un positivo bajo en una zona endémica puede ser normal y transitorio
2. Reportar el caso • A través de Virbac
• Directamente a la Agencia
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