View
504
Download
0
Category
Preview:
DESCRIPTION
propriété des AcAwww.inessm.org
Citation preview
MASSE MOLCULAIRE:
La MM dun AA varie entre 75 Da pour la glycine et 204 Da pour le tryptophane. La MM moyenne
dun rsidu dAA est de 115 Daltons (Da).
Une protine forme de 50 AA on dit quelle est compose de 50 rsidus dAA car il ya eu formation de 49 liaisons peptidiques et
dpart de 49 molcules deau il ne reste que des AA dshydrats : des rsidus.
Une protine de 50 rsidus aura une MM de 50
115 = 5750 Da ou 5,75 kDa.
La MM de la protine sera 5750g/mole
SOLUBILIT ET POINT DE FUSION:
La plupart de AA subissent facilement la solvatation par les solvants polaires tels que leau
Solubles dans les solvants polaires et insolubles dans les solvants apolaire ( Benzne, ther).
La solubilit est dpendante des proprits de la chaine latrale : la solubilit diminue avec le nombre datomes de carbone du radical mais inversement augmente si ce radical R est porteur de fonctions polaires (NH2, COOH) ou hydrophiles (OH).
Le point de fusion est lev > 200c
PROPRITS CHIMIQUES LIES AU
GROUPEMENT CARBOXYLIQUE ( COOH ):
- 1 - ESTRIFICATION:
Par un alcool en prsence dun acide fort:
R-CH-COOH + R-OH H+ R-CH-COOR + H2O
NH2 NH2
Acide amin Alcool Esther
- 2 - AMIDIFICATION:
Formation d'amide: elle rsulte avec une amine.
Cette raction est importante si lamine provient dun autre AA elle conduit la liaison peptidique.
R-CH-COOH + NH2-R R-CH-CO-NH-R + H2O
NH2 NH2
Acide amin Amine Amide
- 3 DCARBOXYLATION:
Donne naissance une amine, possible par voie:
chimique: chauffage en prsence de Ba(OH)2.
enzymatique: par les dcarboxylases qui
fonctionnent avec le phosphate de pyridoxal.
Intrt: aboutit aux amines biologiques trs actives:
formation de corps proprits particulires:
exp: -histidine histamine (choc allergique)
-tryptophane 5hydroxy tryptophane srotonine
(action sur la tension artrielle).
dosage des AA par mesure du CO2 dgag.
R-CH-COOH R-CH2-NH2 + CO2
NH2
- 4 - FORMATION DE SEL:
Action dune base sur COOH:
R-CH-COOH + KOH R-CH-COOK + H2O
NH2 NH2
Acide amin Base Sel
PROPRITS CHIMIQUES LIES AU
GROUPEMENT AMINE ( NH2 ):
- 1 - DSAMINATION:
Par lacide nitreux ( HNO2 ): formation dacide alcool avecdgagement dazote
Le dosage des AA par la mthode de Van Slyke est fond sur
la mesure du N2 dgag.
R-CH-COOH + HNO2 R-CH-COOH + N2 + H2O
NH2 OH
Acide amin Acide nitreux Acide Alcool
- 2 - ACTION DE LA NINHYDRINE:
Sert pour la dtection des AA. Cest un oxydant puissant qui par une dsamination oxydative des
AA conduit laldhyde correspondant avec libration dammoniac, de CO2 et formation de Ninhydrine rduite ( HYDRINDANTINE).
O
O
OH
OH
H2N
HOOC
CH-R
O
O
H
OH
R-C
H
O
+ NH2 +CO2++
NINHYDRINEAA
HYDRINDANTINE
Aldhyde
OO
H
OH
H
HH
N
DANS UN SECOND TEMPS LAMMONIAC RAGIT AVEC LHYDINDANTINE ETUNE AUTRE MOLCULE DE NINHYDRINE POUR DONNER UN COMPOS BLEU
VIOLAC: POURPRE DE RUHEMANN QUI ABSORBE 570 NM (RACTION
COLORIMTRIQUE EXTRMEMENT SENSIBLE POUR LE DOSAGE DES AA
OH
OH
O
O
N + 3H2O
O
OH
O
O
+ +
hydrindantine
ammoniac
ninhydrine Pourpre de Ruhemann
Les imino acides donnent un compos jaune dont le maximum dabsorption de la solution se situe au voisinage de 440nm.
- 3 - RACTION DE SANGER:
Action du 1fluoro2,4dinitro benzne (FDNB) qui ragit
facilement avec une fonction amine pour former par
substitution nuclophile un driv N2,4Dinitro-phnyl:
compos jaune facile identifier par chromatographie et
doser par spectrophotomtrie 360nm.
H2N-R NH-R + HF
NO2
NO2
NO2
NO2
F +NaHCO3
FDNB Driv N 2,4dinitrophnil
Nb: le NaHCO3 permet de neutraliser lacid due au HF form
- 4 - RACTION DEDMAN:
Action du phenylisothiocyante (PITC): ragit avec la
fonction amine en milieu alcalin pour donner un driv N
phenlthiocarbamyl qui en milieu acide se cyclise en
donnant une phenylthiohydantoine facile identifier .
Cette raction fondamentale trouver son application dans
lanalyse par rcurrence des squences peptidiques .
R OH-
C6H5 N = C = S + H2N-CH-COOH R - CH - COOH
PITC HN NH C6H5
H C
R C ------ CO S
(H+)
HN N- C6H5
C
S
Driv N-Phnyl
Thiocarbamyl
Phenyl-thiohydantoine
-5- LA DANSYLATION :
Le Chlorure de Dancyl ragit trs facilement avec des
fonctions amines des AA pour donner des drivs
sulfonamides trs fluorescents donc facilement dlectables
mme dinfimes quantit AA.
Cette raction est 100 fois plus sensible que la raction de
Sanger .
CH3 CH3 CH3 CH3
N N
O S O
CL
H
N-H
H-C-R
COOH
+
O S 0
NH
R CHCOOH
- HCL
Chlorure de dansyl AA
Dansyl aminoacide
REMARQUE
Lintrt fondamental de ces quatre dernires ractions rside en leur trs large utilisation dans
la dtermination de la structure primaire des
protines.
-6 - ACTION DE LA FLUORESCAMINE :
Elle ragit rapidement avec les AA permettant
lobtention de drivs extrmement fluorescents qui permettent la dtection avec une grande sensibilit de
quantits de lordre de nanomole (n.mol).
Ces proprits chimiques sont trs utilises pour:
- les dosages des AA
- lanalyse squentielles des peptides
- la rvlation des AA en Chromatographie sur
couche mince .
OO
O
O
+ R NH2 O
OH
COOH
R - NH2O
PH= 8-9
fluorescamine Compos trs fluorescent
Dtermination de la structure primaire des
protines .
Recherche des acides amins dans les liquides
biologiques (urine, sang)
Les nombreuses mthodes sont essentiellement :
o Les mthodes Chromatographiques
o Les mthodes Electrophortiques
o Dosage spcifique
LES MTHODES CHROMATOGRAPHIQUES :
Chromatographie sur papier .
Chromatographe sur couche mince .
Chromatographie en phrase gazeuse .
Chromatographie sur Echangeur dions .
CHROMATOGRAPHE SUR ECHANGEUR DIONS :
Excellent procd , permet des valuations quantitatives avec
de lordre de + ou - 3 % derreur .
Dans cette Mthode une colonne de chromatographie est
remplie dune rsine synthtique contenant des groupements chargs .
Il existe deux classes de rsines changeuses dions:
- les changeuses de cations
- les changeuses danions .
Les acides amins sont habituellement spars sur une colonne
changeuse de cations .
PRINCIPE :
Premire tape :
filtration du mlange dAA analyser travers une rsine constitue par des groupements sulfoniques (SO3-)
changeuse de cations on lui ajoute une solution acide (PH
= 2 ou 3) tous les AA sont sous formes de cations(charge + )
et donc se fixent sur la rsine
Nb: les AA basiques sont solidement lis et les AA acides le
sont moins.
Par augmentation du PH des tampons filtrs travers la
colonne la charge + des AA est progressivement neutralise
quand PH > Phi et leurs liaisons avec les groupements SO3- sont
rompus donc on lue le mlange (cest le faire migrer le long de la
colonne en faisant varier le PH et ainsi faire varier les charges des
AA et donc leur vitesse de migration)
Deuxime tape:
Analyse quantitative:
aprs addition de ninhydrine lfluent le mlange circule travers un bain marie bouillant ou la raction
colore se dveloppe
La lecture se fait 570 nm et 440 nm pour les imino
acides
les mesures sont inscrites en continue sur enregistreur
( les AA sont identifis par la position de leur pic
dabsorption et leur quantit est donne par la surface de ce pic).
LES MTHODES LCTROPHORTIQUES:
Les AA en milieu aqueux sont sous formes dions. Dans un champs lectrique, ils subiront un dplacement qui dpendra de leur charge nette au PH considr.
On dpose un mlange dAA sur une feuille de papier pralablement imprgne dun tampon et lon tablisse un champ lectrique continu de haut voltage.
En raison de leur valeurs diffrentes de Phi, les AA migrent dans des directions des vitesse diffrentes
Les AA neutres ne migrent pas.
Recommended