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MEIOS DE CULTURA
Como preparar
• Meios comerciais devem ser hidratados
• Primeiramente devem ser pesados
• Tansferir para um frasco
• Hidratar em pequena quantidade e misturar
• Depois deve-se acrescentar o restante da água
• Levar o meio para fundir aquecer
• Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos não precisam estar esterilizados previamente
• Esterelizar em autoclave por 15 minutos e à temperatura de 121ºC
• Distribuir o meio após a autoclavação - tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias estéreis
• Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas - tampas fechadas não permitem a entrada do vapor
Classificação dos meios
• Meios para transporte e conservação
• Meios para cultivo e isolamento
• Meios comerciais para provas de identificação
Transporte e conservação
• Cary Blair
• Salina Tamponada
• Meio Stuart
• Agar nutriente
Cary Blair
• Microrganismos intestinais patogênicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio.
• ƒA carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação dos microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.
• Utilizado para transporte de material fecal e consequente conservação dos microrganismos.
Salina Tamponada
• Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável.
• Usado como meio de transporte de amostras biológicas.
• Contém NaCl, fosfato dipotássico anidro, Glicerina
bidestilada e água destilada.
Meio Stuart
• A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.
• Usado para transporte de diversos materiais e consequente conservação dos microrganismos.
• ƒConservação de microorganismos patogênicos como: Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp., Shigella spp. entre outros.
Agar Nutriente
• É um meio relativamente simples, de fácil preparação e barato, muito usado nos procedimentos do laboratório de Microbiologia.
• Usos:
• ƒAnálise de água, alimentos e leite
• Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a exames bacteriológicos
• Isolamento de organismos para culturas puras.
• Observar esporulação de espécies de bacilos Gram positivos.
• O uso mais frequente - conservação de culturas em temperatura ambiente, para os laboratórios que não dispõem de crioconservação (freezer à - 70ºC).
Cultivo e Isolamento
• Ágar TSA
• Ágar Chocolate
• Ágar MacConkey
• Ágar Sangue
• Ágar CLED
• Ágar Salmonella-Shigella
• Ágar Manitol (MSA)
• Ágar EMB
• Ágar Mycosel
• Ágar Sabouraud
• Ágar Verde Brilhante (BGA)
• Caldo Tioglicolato com indicador
• Caldo Tioglicolato sem indicador
• Caldo BHI
• Caldo Selenito
• Caldo Tetrationato
• Löwenstein Jensen
• Meio bifásico: Löwenstein e Middlebrook,
Tryptic Soy Agar (TSA)
• Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar
• Também chamado de CASO Agar (Casein-peptone
soymeal-peptone agar)
• É recomendado para o cultivo de bactérias não
fastidiosas – uso geral.
Pseudomonas
aeruginosa
Staphylococcus
aureus Escherichia coli
Caldo BHI • Brain Heart Infusion – meio enriquecido
• É um meio derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e dextrose.
• Fornece fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas.
• Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos.
• Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos
• Realização de teste de coagulase em tubo
• Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44°C
• Teste de motilidade em lâmina.
Agar Sangue
• Meio enriquecido e diferencial
• Compra-se a base comercial, depois de autoclavada e resfriada, adiciona-se sangue.
• A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos.
• Diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.
Bacillus
cereus
-hemolítico
Estreptococcus
-hemolítico
Enterococcus
faecalis
Não hemolítico ()
Agar Chocolate
• Meio de cultura enriquecido
• À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes.
• Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.: Neisseria, Haemophilus)
• Alguns organismos que não crescem em meios comuns são capazes de crescer neste meio
Neisseria
gonorrhoeae
Staphylococcus
aureus Escherichia coli
Agar Thayer-Martin
• Thayer-Martin Chocolate é um meio rico seletivo
• É superior a outros meios de cultivo destinados para o
isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria
meningitidis
• Contém em sua fórmula antibióticos que inibem o
crescimento de Neisserias saprófitas e outras bactérias,
evitando contaminações.
Neisseria gonorrhoeae
Agar Salmonella-Shigella (SS)
• Seletivo e diferencial
• Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem microrganismos Gram positivos.
• O meio possui lactose, que permite diferenciar bactérias lactose positivas e negativas
– Lactose positivas- produzem ácido que na presença do indicador vermelho - formação de colônias de cor rosa
– Lactose negativas- formam colônias transparentes.
• ƒPermite a detecção de H2S - formação de colônias de cor negra no centro.
Agar MacConkey
• Seletivo e diferencial
• O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos.
• ƒ A concentração de sais de bile é relativamente baixa, por isso não é tão seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o ágar SS.
• Usado para isolar bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores) e verificar a fermentação ou não da lactose.
Pseudomonas
aeruginosa
Escherichia
coli Salmonella sp.
Meio Hektoen
• É um meio seletivo e diferencial
• Utilizado para detectar a fermentação de lactose e produção de H2S
• Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactérias não-entéricas
• Fermentados de lactose - amarelo ou salmão
• Não fermentadores - sem cor
• Produção de H2S - precipitado preto
Escherichia coli
Salmonella enteridis
Agar Sal Manitol
• Meio seletivo e diferencial
• Utilizado para selecionar Staphylococci, que crescem em altas concentrações de sal
• Diferencia Staphylococcus aureus de outros Staphylococci
• Após o crescimento, Staphylococcus aureus é amarelo (fermenta o manitol), outros Staphylococci são brancos
Staphylococcus
epidermidis
Staphylococcus
aureus Escherichia coli
Agar CLED
• Cystine Lactose Eletrolyte Deficient – Seletivo e
diferencial
• A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de
Proteus.
• Usado para isolamento e quantificação de
microrganismos presentes em amostras urina.
• Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Gram
positivos, Gram negativos e leveduras.
• ƒColônias lactose positivas: cor amarela/ negativas: cor
azul.
Staphylococcus
aureus
Proteus
mirabilis Escherichia coli
Agar verde brilhante (BGA)
• É um meio altamente seletivo, usado para o isolamento de outras salmonelas que não a S. Typhi, existentes nas fezes e em outros materiais.
• A presença de extrato de levedura e duas peptonas fornecem os nutrientes
• A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de fenol, fornecem um sistema de diferenciação de fermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).
• Salmonelas não produzem ácido a partir destes açúcares.
• O verde brilhante é o agente seletivo que inibe a flora de acompanhamento.
Escherichia
coli
Salmonella
sp.
Agar Eosina Azul de Metileno
• Agar EMB é um meio para diferenciação ligeiramente seletivo
• Utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outros bastonetes gram-negativos).
• Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactérias gram-positivas num determinado grau - diferenciar os fermentadores
• Coliformes produzem colónias pretas-azuladas
• Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente, não fermentam lactose
• Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico, devido à rápida fermentação da lactose
Escherichia
coli
Klebsiella
pneumoniae
Salmonella
enteridis
Meio Löwenstein Jensen
• A base do meio é constituída por ovos integrais, o que
permite amplo crescimento das micobactérias
• O crescimento é satisfatório para o teste de niacina (que
é positivo para Mycobacterium tuberculosis)
• Utilizado para isolamento primário das micobactérias
• Crescimento bom a excelente (colônias amarelas) -
Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium
• Incubação por 60 dias
Mycobacterium
tuberculosis
Agar Mycosel
• A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve para selecionar dermatófitos.
• O cloranfenicol inibe o crescimento de bactérias e alguns fungos filamentosos.
• Usado para isolamento de fungos patogênicos, principalmente dermatófitos, a partir de material de investigação contaminado.
• Crescimento bom a excelente: Trichophyton verrucosum, Candida albicans
• Crescimento inibido: Aspergillus niger , Candida tropicalis, Penicillium spp.
Candida albicans
Agar Sabouraud
• Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leveduriformes e filamentosos.
• Cultivo e crescimento de espécies de Candidas e fungos filamentosos, particularmente associados a infecções superficiais.
• Caracterização macroscópica do fungo filamentoso (colônia gigante).
Candida albicans
Sporothrix
schenckii
Microsporum
canis
Meios para identificação
• Ágar TSI
• CaldoTSB
• Meio SIM
• Ágar Citrato Simmons
• Ágar Fenilalanina
• Ágar base uréia
• Caldo Triptona
• Caldo Nitrato
• Caldo Malonato
• Ágar Bílis-Esculina
• Ágar Sangue
• Caldo base de Moeller
• Ágar Dnase
• Ágar Esculina
• CTA – Cystine Tryticase Agar
• Meio base para oxidação e fermentação - OF
• Base de nitrogênio para leveduras
Veremos os meios para identificação na
nossa próxima aula!
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