Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO ... · genetika GMO szimpózium 2008,...

Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO

Dr. Dallmann Klára

analitikában és az élelmiszerbiztonság területén

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

A molekuláris biológia célja

az élőlények és sejtek működésének

molekuláris szintű tanulmányozása.

Ezt segíti a

genetika

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

genetika

biokémia

sejtbiológia

módszerei és eredményei.

• a fehérjék kimutatására és mérésére szolgáló

ELISA

Számos módszert fejlesztettek ki, ezek közé

tartozik:

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

ELISA technika

• sejt örökítő anyagának, a DNS-nek a vizsgálatára

alkalmas PCR technika

ELISA teszt

Molekuláris biológiai eljárás a fehérjék kimutatására

DNS

Kimutatás alapja: a sejtekben lévő DNS által kódolt genetikai információ alapján képződött fehérje és specifikus antitest reakciója (ELISA teszt)

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

sejt

fehérje

másodlagos antitest+enzim

+ szubsztrát

Enzim-immun analitikai eljárásELISA ( Enzyme- Linked ImmunoSorbent Assay ) teszt

+ szubsztrát

szinreakció(látható, vagy

műszeresen mérhető)minta

Izolált fehérje

Antitest

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Előny: gyors egyszerű, nem igényel komoly laboratóriumi hátteret

DE

ELISA teszt

Hátrány!A fehérje hőérzékeny, ez befolyásoljakimutatás érzékenységét és megbízhatóságát

(Reveal)

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

DE

PCR reakció

Molekuláris biológiai eljárás specifikus DNS szekvenciák kimutatására

DNS

fehérje

Lehetővé teszi a DNS különböző

szakaszainak felsokszorozását

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

sejt

PCR reakció

ciklikusan ismételt enzimreakció, specifikus primerek jelenlétében

Molekuláris biológiai eljárás a DNS kimutatására

Fluoreszcens próba

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Real-Time PCR

PCR reakció termékének kimutatása

Agaróz gélen Fluoreszcens jel megjelenése alapján

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Real Time PCR

• rendkívül érzékeny

•DNS stabil, a fehérjénél kevésbé hőérzékeny

•alkalmas mennyiségi meghatározásra is

PCR reakció előnye

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Mikor szükséges molekuláris módszerek alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén?

• Törvényi szabályozás - jelölési kötelezettség

A fogyasztó alapvető joga, hogy tudja a megvásárolt termék miből készült, illetve milyen tulajdonságokkal rendelkezik.

Választás lehetősége.

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

• Törvényi szabályozás - jelölési kötelezettség

• Más ( vizuális, fizikai, kémiai, biológiai) vizsgálati

módszerek nem alkalmasak

EU és hazai törvényhozás szabályozta a GMO- k kereskedelmi forgalomba kerülését és jelölését

Magyarország

§ GMO – törvényi szabályozás

EU rendelet

1829/2003

1830/2003

Magyarország

XXVII.1998. Géntechnológiai tevékenységet szabályozó törvény

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Genetikailag módosított szervezet (GMO): olyan szervezet, amelyben a génállományt molekuláris genetikai eszközökkel változtatták meg

pl. idegen DNS-t építettek be a növény

Növényi DNS

pl. idegen DNS-t építettek be a növény eredeti DNS-ébe

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

GM növény felépítésének vázlata

Beépített DNS

Növényi DNS

növényi DNSpromóter terminátor

Növényvédőszer /rovarrezisztencia

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Laboratóriumi minta

GMO tartalom laboratóriumi vizsgálatának általános menete

DNS izolálás Fehérje izolálás

ELISA testKvalitativ PCR ELISA testKvalitativ PCR

Real-time PCR

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

negatív pozitív

GM növény azonosítása

GMO vizsgálat menete

•Minta homogenizálása

•Kvalitatív GMO teszt

nem engedélyezett engedélyezett

mennyiségi meghatározás

>0.9% <0.9%GMO szimpózium 2008, Gödöllő

A fogyasztót segíti a jelölés, amely tájékoztat az élelmiszer

Élelmiszerek jelölése - Törvényi szabályozás§

fajtájáról,azonosságáról,

Törvények az élelmiszerlánc szabályozásában

azonosságáról,jellemzőiről,

összetételéről,mennyiségéről,

eltarthatóságáról,származásáról vagy eredetéről

előállítási vagy termelési módjáról

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Amennyiben nem azok az összetevők szerepelnek atermékben, melyeket a vásárló a feltüntetett adatok

alapján elvár, ekkor beszélhetünk élelmiszerhamisításról.

Élelmiszerhamisítás

?Élelmiszerhamisítás kimutatása ?Élelmiszerhamisítás kimutatása

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Élelmiszerek összetételének kimutatása

PCR módszerrel különböző állat és növényfajok azonosítása

lehetséges specifikus DNS szekvencia alapján, feldolgozott

élelmiszerekből is.

Pl.szarvasmarha, sertés, strucc, birkaPl. kukorica, szója, burgonya, cukorrépa,

sárgabarack

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Jövő molekuláris biológiai eljárása: chip technológia

•chip technológia- technikai miniatürizálás eredménye,

Előny:egyszerre több DNS szekvencia azonosítása lehetséges egyetlen mintából

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Összefoglalás

A molekuláris biológiai eljárások felhasználhatók:

•Beszállítók ellenőrzésében

•Keresztszennyeződések kimutatására•Keresztszennyeződések kimutatására

•Etikus piaci magatartás betartására

GMO szimpózium 2008, Gödöllő

Köszönöm a megtisztelő Köszönöm a megtisztelő figyelmet