View
46
Download
0
Category
Preview:
DESCRIPTION
isolasi dan uji aktivitas
Citation preview
PENDAHULUAN
LATAR BELAKANG
Limbah industri perkebunan merupakan salah satu penyebab pencemaran Sungai Indragiri, yang juga bisa mengendap sebagai sedimen yang diduga sebagian besar terdiri atas polimer selulosa
Selulosa dimanfaatkan oleh bakteri selulolitik sebagai sumber karbon dengan bantuan enzim selulase
Selulase memiliki peran penting dalam industri dan pengolahan limbah.
Pada penelitian sebelumnya bakteri selulolitik telah berhasil diisolasi dari DAS Siak di Tandun Kabupaten Rokan Hulu
Produksi enzim dari mikroorganisme memiliki keuntungan.
PERUMUSAN MASALAH
Limbah industri perkebunan yang mencemari Sungai Indragiri mengandung polimer selulosa yang dimanfaatkan oleh bakteri selulolitik sebagai sumber karbon
dengan bantuan enzim selulase.
Sehingga perlu dilakukan isolasi dan uji aktivasi bakteri penghasil selulase dari air
serta sedimen Sungai Indragiri.
TUJUAN
1
•Mengisolasi bakteri selulolitik dari air dan sedimen Sungai Indragiri sebagai usaha ekstensifikasi mikroba galur lokal Riau
2
•Melakukan identifikasi Gram dan uji aktivitas isolat dari air serta sedimen Sungai Indragiri
TEMPAT DAN WAKTU PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biokimia, Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Riau
selama lebih kurang enam bulan.
METODOLOGI PENELITIAN
ALAT1. UV-VIS (Thermo Scientific Model Genesys 10S)2. Autoclave (All American Model No. 2X)3. Waterbath (Grant Instrument Type SUB 28)4. Vortex (H-VM-300)5. Incubator (Memmert)6. Oven (Fisher Scientific Model 655F)7. Shaking Incubator (LabTech Model LSI-3016R Seri No.
B110221102)8. Microcentrifuge (Heraeus Instrument. Biofuge Pico D-37520
Osterode)9. Mikroskop (Optic Ivymen System No. 05141) 10.peralatan gelas laboratorium lainnya sesuai dengan
prosedur
BAHAN1. sampel air dan sedimen2. CarboxyMethylCellulose (CMC)
(Brataco Chemika J1438/4)3. nutrient agar
(Merck, No.Kat.1.05450.0500)4. nutrient broth
(Merck, No.Kat.1.05443.0500)5. reagen Nelson-Somogyi6. reagen arsenomolibdat7. Bahan-bahan lain yang digunakan adalah bahan tingkat
analisis sesuai dengan metode kerja
RANCANGAN PENELITIAN
Sampel yang akan digunakan pada penelitian ini adalah air sungai yang diambil dari beberapa titik sampling seperti tertera pada Tabel 3.1 dan
tergambar pada peta di Gambar 3.1.
Tabel 3.1. Titik pengambilan sampel
Kode Sampel
Waktu Pengambilan
sampel
Jenis sampel
Koordinat Keterangan
910 05 April 2013 Air 0° 18' 59.0256" LS103° 15' 47.6855"
BT
Muara Sungai Indragiri, cerah,
berangin,warna air coklat muda
910 05 April 2013 Sedimen 0° 18' 59.0256" LS103° 15' 47.6855"
BT
Muara Sungai Indragiri, cerah,
berangin,warna air coklat muda
914 05 April 2013 Air 0° 8' 23.0135" LS103° 18' 31.0247"
BT
Sungai Indragiri,cerah,
warna air keruh914 05 April 2013 Sedimen 0° 8' 23.0135" LS
103° 18' 31.0247" BT
Sungai Indragiri,cerah,
warna air keruh
Gambar 3.1. Peta titik pengambilan sampel
SKEMA PENELITIAN
ISOLASI BAKTERI SELULOLITIK
(Diinkubasi pada T 37˚C, ± 24 jam)
Sampel 910-Air, 910-Sedimen, 914-Air, dan 914-Sedimen
Pembuatan suspensi sampel pada media nutrient broth
Isolasi bakteri pada media padat yang mengandung 1% CMC
Koloni tunggal
IDENTIFIKASI BAKTERIDAN PRODUKSI ENZIM
Isolat bakteri diremajakan pada media nutrient broth
Identifikasi bakteri dengan pewarnaan Gram
Produksi enzim selulase pada media produksi enzim selulase dalam bufer
fosfat (0,05 M, pH 7)
(Diinkubasi pada T 37˚C, ± 24 jam)
UJI AKTIVITAS
Larutan enzim
Penentuan aktivitas enzim selulase berdasarkan kadar
gula pereduksi dengan metode Nelson-Somogyi
Penentuan kadar protein enzim selulase dengan metode Lowry (Folin-
Ciocalteau)
Uji aktivitas spesifik
SKEMA PENELITIAN
17
Persiapan Media1. Komposisi Media Padat Selulase
Komposisi media Berat (gram)MgSO4. 7H2OKNO3
K2HPO4
CaCl2.2H2OEkstrak khamirAgar BatangCMC (1%)
0,0200,0750,0020,0040,2001,5001,000
18
semua bahan dilarutkan dalam 100 mL aquades
dipanaskan
Hingga homogen
didinginkan
Dituang kedalam cawan petri ± 20 ml
Lanjutan
Sterilisasi pada suhu 1210C,
15 lbs, 15 menit
19
2. Komposisi Media Cair Produksi Selulase
Komposisi media Berat (gram)MgSO4. 7H2OKNO3
K2HPO4
FeSO4.7H2OCaCl2.2H2OEkstrak khamirCMC
0,005000,018750,01250 0,000500,000100,050000,25000
20
Lanjutan
semua bahan dilarutkan dalam
25 mL buffer fosfat pH 7 (0,05 M)
Disterilkan pada suhu 121°C,15 lbs
selama 15 menit
Media siap diinokulasi apabila tidak kontaminasi setelah diinkubasi selama satu malm pada suhu kamar
21
Isolasi Bakteri Selulolitik1 ml
sampel air,
1 g sampel sedimen
9 ml media NB
InkubasiT 37ᵒC24 jam
Inokulasi pada media padat 1% CMC
Metode Cawan Gores(Streak Plate Method)
InkubasiT 37ᵒC24 jam
Inokulum
22
Identifikasi Isolat dengan Pewarnaan Gram
Diremajakan pada media NB
4 ml media NB
InkubasiT 37ᵒC24 jam
Inokulum
Isolat bakteri siap untuk diidentifikasi melalui uji pewarnaan Gram
23
24
Isolat bakteri pada CMC 1%
Diinokulasipada media
NB
Inkubasi ±24 jam,
370C
Diukur kekeruhan sel bakteri atau optical density (OD) pada
λ=660 nm
Inokulum dengan OD senilai 0,5
Media cair produksi
Dimasukkan
Produksi Enzim Selulase
25
Isolat pada NB
Dimasukkan
Media produksi
inkubasi dalam shaker incubator suhu 370C ,150 rpm selama 24 jam
Kultur isolat
Sentrifugasi dalam keadaan dingin
dengan kecepatan putaran 9500 rpm selama 10 menit
Supernatan
disaring
Ekstrak Kasar Enzimuji aktivitas Ekstrak Kasar
Enzim Selulase denganmetode Nelson-Somogyi
26
Penentuan Aktivitas Enzim Selulase
Blanko
Uji
Kontrol
1 mL lar CMC 1% dalam bufer
fosfat 0,05 M pH 7
Inkubasi selama 5 menit pada 40o C
tabung uji dan kontrol ditambahkan 1 mL lar
enzim, inkubasi 30 menit
Kerja enzim dihentikan dengan penambahan 1
mL Nelson-Somogyi
Pada kontrol ditambahkan1 mL lar CMC 1% dalam bufer
fosfat 0,05 M pH 7
Penangas air
20 menit
DinginkanTambahkan 1 mL
reagen arsenomolibdat dan 6 mL akuades ,Diamkan 30 menit
Ukur Absorbansi pada λ=540 nm
dan hitung Aktivitas Enzim
1 mL bufer fosfat 0,05 M pH 7
27
Penentuan Aktivitas Spesifik Enzim Selulase
1 mL Larutan sampel protein
5 mL Reagen C
homogenasi dan diamkan
selama 10 menit
0,5 mL reagen Folin-Ciocalteau
Ukur Absorbansi pada λ=700 nm dan
hitung Aktivitas spesifik Enzim
homogenasi dan diamkan selama
30 menit
28
09/12/2013
TERIMA KASIH
Recommended