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Un continuum du lycée à l’université Présentation des projets de recherche
Vendredi 24 mai 2013
2012>2020
1er COLLOQUE EDIFICE
24 – 05 – 2013
Anne Canovi ; Clément Deschamps ; Guillaume Pelissier ; Théo Verger; Laure Guillotin
Encadrants : Prof. Richard Daniellou; Dr. Pierre Lafite; Mme Alonso
GLYCOPEPS : SYNTHESE CHIMIO-ENZYMATIQUE DE GLYCOPROTEINES
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LES ENZYMES Catalyseurs de réactions (bio)chimiques, présents chez tous les organismes
vivants
Alimentaire Fromagerie, biscuiterie,
vinification,…
Cosmétique shampoing
Textile Délavage des jeans,…
Détergence Lessive, …
Biologie médicale
Aide au diagnostic
Chimie Oxydases, estérases,
glycosidases, …
Découverte et études d’ outils
biotechnologiques
OBJECTIF EDIFICE ANNEE 1 Etude d’une enzyme polyvalente : le lysozyme
Qu’est-ce que c’est ? Une protéine globulaire comportant 129 acides aminés
Quel est son rôle ? Détruire les parois bactériennes en cassant les liaisons entre les sucres présents à leur surface
Où peut-on en trouver ? Liquides biologiques (blanc d’œuf), mucus nasal, les larmes, …
Utilisations ? Industrie agroalimentaire (E1105), œnologie, industrie pharmaceutique, …
Expérience retenue : Extraire et purifier le lysozyme du blanc d’œuf de poule
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Problématique : Quelle est la composition du blanc d’œuf de poule ?
Technique employée : Gel d’électrophorèse SDS-PAGE
PRINCIPE
- +
Sens de migration -
protéine
protéine dénaturée
- - - - - -
Séparation des protéines d’un mélange en fonction de leur taille sous l’action d’un champ électrique
REVELATION DU GEL
Observations : Le blanc d’œuf est composé de 3 protéines majoritaires dont le lysozyme
Conclusion : Le lysozyme n’est pas pur après extraction, une étape de purification est nécessaire
Mélange référence contenant des
protéines de tailles connues
Lysozyme ( 14700 Da)
118 kDa
34 kDa
26 kDa
90 kDa
50 kDa
19 kDa
Matériel utilisé : Résine échangeuse de cations
Cations échangeables
-
- -
- +
+
+ +
-
- -
-
L+
L+
L+ P-
P-
P-
+ P-
L+
L+ P-
-
- -
-
L+ L+
Cl-
Na+
Na+
Na+
Na+
Cl-
Cl- Cl-
Na+
PRINCIPE
Dans le blanc d’œuf : seul le lysozyme reste chargé à pH basique (pH =10) + L+
L+ L+
L+ P-
P-
P- P- P-
P-
P- Solution de
blanc d’œuf de pH =10
Gel d’électrophorèse SDS-PAGE des fractions recueillies :
Observation : seule la fraction E2 contient du lysozyme pur Dosage de la fraction E2 (5ml) : concentration protéines = 0,50 mg/ml
lysozyme
Conclusion : 2,5 mg de lysozyme pur ont pu être obtenus après purification sur résine échangeuse de cations
CONCLUSION
Découverte et prise en main de diverses techniques de laboratoire
2,5 mg de lysozyme ont été obtenus après extraction et purification
Perspectives : Tests d’activité et cristallisation du lysozyme
Bilan global : 1ère expérience très positive pour le laboratoire et les lycéens
Micrococcus lysodeikticus Cristaux de lysozyme
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Le sujet de thèse
Molécule d’intérêt
Modifications de structure
Tests biologiques
Activité biologique
Projet EDIFICE
Extraction de l’eugénol par hydrodistillation.
Broyage du clou de girofle pour augmenter la surface
de contact entre l’eau et celui-ci .
Récupération du mélange contenant l’huile essentielle et l’eau.
Extraction liquide - liquide.
Eugénol.
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Projet EDIFICE
Techniques d’analyses utilisées :
Chromatographie Purification de composés.
InfraRouge diffraction des rayons IR par la molécule
RMN informations structurales (~IRM pour molécule).
MS Mesure de la masse de la molécule.
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Projet EDIFICE
Conclusion: Découvrir le milieu de la recherche
Apprentissage de nouvelles bases et de nouvelles techniques d’analyse
Conforter l’orientation des études futures
Envie de poursuivre…
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