View
57
Download
8
Category
Preview:
Citation preview
İstanbul Üniversitesi Fetal Nükleik Asit Araştırma Grubu Sonuçları
Türkiye Maternal Fetal Tıp ve Perinatoloji Derneği VIII.Kongresi 11-14 Ekim 2012 , İstanbul
sFETAL DNA
Lo ve ark. 1997 yılında anne plazma ve serumunda erkek fetusa ait
DNA’yı saptadığını yayınladı.
Lo YM ve ark. Lancet 350 , 485 , 1997
GENOM DNA
TRANSKRİPTOM RNA (mRNA , rRNA , tRNA , miRNA , siRNA , snoRNA )
PROTEOM
GEN DNA molekülü üzerinde protein kodlayan özgül bir nukleotid dizisidir.
Hastalıklar genetik koddaki hata veya kodun proteine çevrilmesi sırasında oluşan düzensizlikler nedeniyle olabilir.
.Spektral analiz
. Elektroforetik analiz
. PCR
.Real-time PCR
. Dijital PCR
. Southern Blot Analiz
.Q-PCR
. Array-CGH
. Dizileme
. Kopya sayısı değişiklikleri
.Elektroforetik Analiz
. cDNA ile PCR
.cDNA ile Dijital PCR
.Northen Blot Analiz
.Dizileme
. Mikroarray ile gen anlatımı
.Western Blot Analiz
.Poliakrilamid jel elektroforezi
.Kromotografik yöntemler
Genomik DNA
Transkriptomik RNA
Proteomik Protein
Yöntemler Anlatım Miktar Dizi analizi esasına dayanmaktadır.
sFETAL DNA
RT-PCR Dijital PCR QF-PCR Karşılaştırmalı Genomik Hibridizasyon (Array CGH) Tüm genom mikrodizin (microarray) MPSS (Masif paralel rastgele dizileme)
Cinsiyet RhD Tek gen hastalıkları Kromozom sayısı Kromozom yapısı Preeklampsi IUGG Fetal Fizyoloji Fetal Gelişim
İstanbul Üniversitesi Fetal Nükleik Asit Araştırma Grubu
İstanbul Tıp Fakültesi Kadın Hastalıkları ve Doğum ABD Prof.Dr. Hayri Ermiş Dr. İbrahim Kalelioğlu
Cerrahpaşa Tıp Fakültesi Kadın Hastalıkları ve Doğum ABD Prof.Dr.Kılıç Aydınlı Prof.Dr.Semih Kaleli Doç.Dr.Ali Benian Dr. Görkem Yosun Zeybek Dr. Hayrettin Şahin
İÜ Fen Fakültesi Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü Y.Doç.Dr. Tuba Günel Mohammad Hosseini (Doktora öğr) Ece Gümüşoğlu Didem Altındirek
sFETAL DNA Cinsiyet Tayini
Kuşkulu Genitalia KAH X – Kromozomu geçişli hastalıklar
Maternal kanda cinsiyet tayini yapılan
5.-10. GH arasındaki 24 olgunun analiz sonuçları İ.Ü. Fetal Nükleik Asit Çalışma Grubu
Marker gen olarak Y kromozomu üzerinde bulunan DYS14 geni kullanıldı
5.GH 10 olgu
6.GH 7 olgu
7.GH 3 olgu
9.GH 3 olgu
10.GH 1 olgu
RT-PCR ile 15 erkek (pozitif ) 9 kız ( negatif ) sonuç elde edildi ve bütün sonuçlar doğumdan sonra doğrulandı ( % 100 )
sFETAL DNA RhD Tayini
Rh sisteminin antijenleri 1. kromozom’da taşınan bir çift paralog gen
(RHD-RHCE) tarafından kodlanır.
RHD RHCE
D+
RHD RHCE
veya
D-
Maternal kanda RHD geni açısından analiz edilen
11.-15. GH arasındaki immunize olmamış 60 olgunun analiz sonuçları
İ.Ü. Fetal Nükleik Asit Çalışma Grubu
Örnek Exon 7 CT Exon 10 CT Fetal RHD (34,11 – 37,21) (34,45 – 37,35)
_________________________________________________________________ 40 (%66.7) pozitif pozitif pozitif 17 (%28,3) negatif negatif negatif 2 (% 3.3) negatif pozitif RhDΨ
RHD variant psödogen
1 (% 1.6) pozitif negatif pozitif
Exon 7 daha güvenilir _________________________________________________________________
SERBEST FETAL DNA ile RHD TANISI
T. Gunel, I. Kalelioglu, A. Gedikbasi, H. Ermis
and K. Aydinli Genet. Mol. Res. 10 (4): 2653-2657 (2011)
Detection of fetal RHD pseudogene (RHDΨ) and hybrid RHD-CE-Ds from RHD-negative pregnant women with a free DNA fetal kit
Normal Preeklampsi
Desidua
1/3
miyometriyum
Spiral arter Spiral arter
Bazal arter Bazal arter
Radial arter
İntervillöz aralık
Daralmış
damar
Fizyolojik değişiklikler
çap 500 mm
Elastik müsküler duvar çap 150-200 mm Radial arter
Yetersiz trofoblastik invazyon
Oksidatif stres artışı
Sitokin salınımında bozukluk
Maternal dolaşıma trofoblast
salınımında artış
Apoptosis artışı
Endotel hasarı
Akut aterozis
Tromboz veya luminal obliterasyon
Trombofili
Antifosfolipid sendromu
İ.Ü. Fetal Nükleik Asit Çalışma Grubu
sFetal DNA Preeklampsi Sonuçları
REAL TIME PCR ARACILIĞI İLE ANNE KANINDA FETAL DNA MİKTARININ SAPTANMASI VE PREEKLAMPSİ GELİŞİMİ İLE
İLİŞKİSİNİN ORTAYA KOYULMASI
Zeybek YG1, Gunel T2, Kaleli S1 Benian A1,Aydınlı K1
1: İstanbul Üniversitesi, Cerrahpaşa Tıp Fakültesi, Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
2: İstanbul Üniversitesi, Fen Fakültesi, Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Zeybek YG ve ark : Clinical evaluations of cell-free fetal DNA quantities in pre-eclamptic pregnancies , J. Obstet. Gynaecol. Res (baskıda)
MATERYAL VE YÖNTEM
• 26-40 gebelik haftaları arasında klinik olarak tanı koyulmuş 30 preeklamptik hasta 18 kontrol hastası ile eşleştirildi.
• Anne kanındaki serbest fetal DNA düzeyi
SRY (Y kromozomu üzerinde cinsiyet belirleyici bölge) ve GAPDH (gliseraldehid fosfat dehidrogenaz) gen dizileri kullanılarak Real Time PCR yöntemi ile karşılaştırıldı.
Zeybek ve ark 2012
SONUÇLAR
Zeybek ve ark, 2012
SONUÇLAR
• 30 preeklamptik hastada aynı haftadaki kontrol hastalarına göre anne kanındaki serbest DNA düzeyinde 3,06 kat
• ikinci trimestrede 1,5
• üçüncü trimestrede 3,5
• Erken başlangıçlı preeklampside 4,6
• Geç başlangıçlı preeklampside 3,2 kat artış saptanmıştır.
Zeybek ve ark ,2012
Real Time PCR ile 12.-14. Gebelik Haftasında CD34 ve CD 133 Geninin Maternal Kanda Düzey Analizi ve Gebelik Prognozu ile İlişkisi
Dr. Hayrettin Şahin – Uzmanlık Tezi - 2012
• 12.-14. GH’ları arasında 65 gebe rastgele seçildi.
• 6 hastada preeklampsi gelişti.
• CD34+ ve CD133+ kodlayan serbest fetal DNA analiz edildi.
Fetal Anöploidilerin Noninvaziv Prenatal Tanısı
Maternal kanda çalışılan sFetal DNA ile trizomi 21 sonuçlarımız
İ.Ü. Fetal Nükleik Asit Çalışma Grubu
40 örnek çalışıldı. 20 tanesi Trizomi olgularına 20 tanesi normal gebelere ait DNA örnekleri incelendi.
Yukarıdada görülen grafik 2.trimestrede sitogenetik olarak trizomi saptanan 10 gebenin
tıbbi tahliye öncesi alınan maternal kan örneklerinde DSCR3 (Down Syndrome Critical
Region ) geninin anlatımına göre normal fetal DNA ile karşılaştırılmasından elde edilen
değerleri gösteriyor. Tüm örneklerde artan gen anlatım miktarları görülüyor.
Yukarıda ise 15 gebede çalışılan DSCR3 (Down Syndrome Critical Region ) genine ait
miktar belirleme grafiği. Yedinci ve 11. örnekler trizomi 21 olgularına diğerleri normal
olgulara ait. Alta doğru olan çizgi grafikleri trizomili örneklere göre genin miktarının az
olduğunu gösteriyor (normal olgular).
Preeklampsi IUGG Fetal Gelişim Fetal Fizyoloji
Maternal kanda çalışılan sFetal RNA / microRNA
İ.Ü. Fetal Nükleik Asit Çalışma Grubu RT-PCR Dijital PCR QF-PCR Karşılaştırmalı Genomik Hibridizasyon (Array CGH) Tüm genom mikrodizin (microarray) MPSS (Masif paralel rastgele dizileme)
PLASENTAL micro RNA • Maternal plazmadaki plasental microRNA’lar küçük (19-25 nt) ,
tek sıra , kodlamayan ve daha stabil RNA’lardır.
• Hedef mRNA’nın 3’ ucuna (kopyalama yapmayan ) bağlanır ve protein kopyalamasını baskılar. Bir veya birden fazla hedef genin anlatımını değiştirerek gelişim , farklılaşma , çoğalma , hücre ölümü gibi süreçlerde rol oynarlar.
• micro RNA’lar bir çok genin anlatımının anlaşılmasında etkili olabilir. Bu nedenle yeni bir belirteç bulmak için en uygun nükleik asittir.
• 20 normotensif
• 20 preklamptik hasta incelendi
• mir-152 ( HLA-G ‘yi suprese eder , NK-cell kökenli sitolizi indükler , immuniteyi
arttırır )
Çalışmada değişmediği bulundu.
• mir-210 ( sinsisyotrofoblastlardan eksprese edilir. İmmunite , apoptozis ve lipid
metabolizmasından sorumludur)
Çalışmada 2x arttığı saptandı
Maternal kanda çalışılan sFetal RNA / microRNA sonuçları
İ.Ü. Fetal Nükleik Asit Çalışma Grubu
Mir-152 ve mir-210 ‘u VEGF geninin düzenlenmesinde rol oynadıkları için araştırmayı tercih ettik.
Serum microRNA expression in pregnancies with preeclampsia
T. Gunel1, Y.G. Zeybek2, P. Akçakaya1, I. Kalelioğlu3, A. Benian4,H. Ermis3 and K. Aydınlı 5 1Department of Molecular Biology and Genetics, Faculty of Science, Istanbul University, Vezneciler, Istanbul, Turkey 2Siverek State Hospital, Sanlıurfa, Turkey 3Department of Obstetrics and Gynecology, Faculty of Medicine, Istanbul University, Istanbul, Turkey 4Department of Obstetrics and Gynecology, Cerrahpasa Medical Faculty, Istanbul University, Istanbul, Turkey 5Medicus Health Center, Istanbul, Turkey Corresponding author: T. Gunel E-mail: gunel@istanbul.edu.tr Genet. Mol. Res. (2011) Ahead of Print Received October 4, 2011 Accepted November 1, 2011 Published November 8, 2011 DOI http://dx.doi.org/10.4238/2011.November.8.5
Preeklampsi ile bağlantılı olarak farklı metabolik yollarda seçtiğimiz özel genler ile belirteç arayışlarımız sürmektedir.
sFETAL DNA , sFETAL RNA ,miRNA ve Fetal Tıp
Cinsiyet RhD Tek gen hastalıkları Kromozom sayısı Kromozom yapısı Preeklampsi IUGG Fetal Fizyoloji Fetal Gelişim
RT-PCR Dijital PCR QF-PCR Karşılaştırmalı Genomik Hibridizasyon (Array CGH) Tüm genom mikrodizin (microarray) MPSS (Masif paralel rastgele dizileme)
PRENATAL TANININ GELECEĞİ
• Serum tarama testleri ve/veya sFETAL DNA’nın / sFETAL RNA’nın analizi , bireysel fetal tıp , tedavi?
• İnvaziv girişim daha az yapılacak, sitogenetik analizde patolojik bulgu > % 99
• ULTRASONOGRAFİ
Teşekkür ederim ....
sFETAL microRNA
• Plasental microRNA transkriptleri maternal plazmada 4.GH’sından itibaren saptanabilir.
• Ortalama yarılanma yaşamı 14 dakikadır.
• Doğumdan sonra hızla anne kanından temizlenir.
Chiu RW ve ark. Clin Chem , 52 , 313 , 2006
sFETAL DNA RhD Tayini
• RT-PCR ile ilk trimestrede sensivite % 100.
• Yanlış pozitif olgular genellikle RhD psödogeninden (nonfonksiyonel) kaynaklanıyor.
• Özel primer’ler ile bu hata büyük oranda giderilebiliyor.
Finning KM ve ark. Transfusion, 42 , 1079 , 2002
Costa MJ ve ark. Br J Haematol , 119 , 255 , 2002
Günel T ve ark. Genet Mol Res , 10 , 2653 , 2011
Recommended