Seminario biomol

MARÍA CAMILA OSPINA JIMÉNEZSARA TORO CORREA

INTRODUCTION

VARICELLA ZOSTERGROUP: Group I (dsDNA)ORDER: HerpesviralesFAMILY: HerpesviridaeSUBFAMILY: AlphaherpesvirinaeGENUS: Varicellovirus.SPECIES: Human herpesvirus 3 (HHV-3)

VARICELLA ZOSTER

Is a human alpha herpes virus witch causes varicella and herpes zoster (HZ) upon infeccion.

Primary infection with VZV causes varicella, while reaction latent virus results in HZ.

VARICELLA ZOSTER

Varicella can be complicated by skin, pneumonia,

encephalomyelitis and myelitis.

VARICELLA ZOSTERCatching chickenpox. It's also called the varicella

vaccine, because chickenpox is caused by

the varicella-zoster virus. The vaccine is made from a

live but weakened, or attenuated, virus.

VARICELLA ZOSTER

IMMUNITY

ELISA

VARICELA ZOSTER VIRUS

VIRUS ENTERS INTO THE CELL

PRESENCE OF CYTOKINES

ATTRACTION OF NEUTROPHILS AND

MACROPHAGESPHAGOCYTOSIS

ANTIGENS PRESENTATION TO A

T HELPER LYMPHOCYTES

T CYTOTOXIC LYMPHOCYTES AND B

LYMPHOCYTES RECOGNIZE THE

ANTIGEN

STIMULATION OF CELLULAR AND

HUMORAL IMMUNITY

T LYMPHCYTES HELPS B LYMPHOCYTES TO

PRODUCE ANTIBODYES

OVERALL OBJECTIVE

EVALUATE THE EFFECTIVENESS OF THE USE OF ELISA SANDWICH TESTS IN THE DETECTION OF IMMUNITY POSITIVE OR

NEGATIVE AGAINST THE VARICELLA ZOTER VIRUS

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES Y METODOS: CELULAS, VIRUS, SUERO Y GLICOSIDASAS

Células de Spodoptera frugiperda Medio CCM3 con 2% de suero bovino fetal

Células epiteliales de pigmento retiniano humano Medio de Eagle modificado con 10% de FBS

Cepa vacuna oka ARPE 19

Vaculovirus Clontech

125 sueros humanos Beijing Wantai Biological Pharmacy Enterprise

240 sueros humanos Instituto Nacional de Diagnóstico y Desarrollo de Vacunas en Enfermedades infecciosas

Suero VZV positive calibrado Glicosidasa y Rnasa B = New Engkand Biolabs

MATERIALES Y METODOS: EXPRESION Y PURIFICACION DE LA IgE

Fragmento gE marcado con His se expreso usando el vacuovirus

rgE agregado al sobrenadante del cultivo

Dos bandas se purificaron con una columna de Ni – NTA

Separacion de bandas por columna de flujo rápido de DEAE

MATERIALES Y METODOS: ANALISIS DE GLICOSILACION

Proteina igE purificada y

Rnasa B

• Digestion con péptido N glicosidasa F (PNGasa F), endoglicosidasa H (Endo H) u O glicosidasa y neuroaminidasa.

Analisis • SDS- PAGE y coloración azul brillante de Coomasie.

MATERIALES Y METODOS: ELISA INDIRECTO BASADO EN GPS VZV (GP

ELISA) Y gE (gE ELISA)Fijación de

antígenos al soporte

insoluble. Lavado

Adición del suero

problema con anticuerpos.

Lavado

Adición de anti-

anticuerpos conjugados

con una enzima

Adición de substrato sobre el cual pueda actuar la enzima marcadora

Lectura visual o colorimétrica

MATERIALES Y METODOS: ELISA INDIRECTO BASADO EN GPS VZV (GP

ELISA) Y gE (gE ELISA)Se emplea en ensayos de competición de antígeno

ELISA DOBLE DE ANTIGENO gE

Fijación de soporte

insoluble de anticuerpos

específicos del agente

patógeno a detectar

Adición de la muestra

problema que contiene el

agente patógeno

diagnostico.

Adicion de anticuerpos

específicos del antígeno a detectar (epitopo

diferente).

Adicion de anti cuerpos

conjugados con una enzima

anti-anticuerpos .

Adicion del substrato y lectura de resultados.

ELISA DOBLE DE ANTIGENO gE

Detección de infecciones. Ayuda diagnostica.

PRUEBA FAMA

Validada inicialmente como un indicador especifico de VZV.

Células infectadas con V-OKA fueron recolectadas cuando el efecto citopatico estaba presente en aproximadamente 70-80% de las células.

Después de varios procesos se colocaron en un portaobjetos y se incubaron con dos sueros humanos diluidos.

Isotiocianato de fluoresceína (FITC) conjugado de cabra anti IgG humano pre-mezclado se incubo con las células junto con Azul de Evans y se observo al microscopio.

RESULTADOS

EXPRESSION, PURIFICATION AND ANALYSIS OF RECOMBINANT gE PROTEIN

PERFORMANCE OF gpELISA, gE ELISA, AND DOUBLE gE ANTIGEN SANDWICH ELISA IN THE DETECTION OF HUMAN VZV POSITIVE AND VZV NEGATIVE SERUM

CHARACTERISTICS OF THE DOUBLE gE ANTIGEN SANDWICH ELISA IN HUMAN SERUM DETECTION

EVALUATION OF HUMAN SERUM USING DE DOUBLE gE ANTIGEN SANDWICH ELISA COMPARED TO THE FAMA TEST AND A COMMERCIAL ELISA KIT

QUANTITATIVE EVALUATION OF

POPULATION INMUNITY TO VZV

USING THE ESTABLISHED DOUBLE gE ANTIGEN

SÁNDWICH ELISA

DISCUSSION

Author Yes or not

Guris et al. 2008

“Immunization with varicellavaccine has dramatically reduced

the incidence of varicella”.

Keller et al. 1986

“VZV-positive sera have been shown to contain a high

titre of gE-specific antibodies”

Sauerbrei et al.2012

" Commercial tests adopt a similar indirect ELISA format but use

different coating antigens"

Wasmuth and Miller 1990

"The effective antigen in VZV gps varies from batches and should be

standardized with an in-house panel serum"

CONCLUSION

The vaccine for chickenpox has decreased the incidence

of varicella in many countries. However, in many others it is

not included within the vaccination scheme and it is

necessary to change this aspect to decrease the

number of patients affected and the complications that

the virus generates.

The varicella virus has the ability to trigger processes of

cellular and humoral immunity in the body and its

main marker is the IgE antibody used for testing.

FAMA test continues being the main for to evaluate the immunity that the body has against the varicella zoster

virus

The double gE antigen sandwich ELISA can be used

to evaluate who has immunity to vzv, because this test was demonstrated to be highly specific to detect negative

sera.

MAPA CONCEPTUAL DE SARA TORO

MAPA CONCEPTUAL DE MARÍA CAMILA OSPINA

GRACIAS POR SU ATENCIÓN