Prueba PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)

PCR(Reacción en cadena de la polimerasa)

Universidad de la Salle ColombiaFacultad de ciencias agropecuarias

Medicina VeterinariaBogotá-Colombia

Luis G. PérezYeili Álvarez Niño

Andrés Ricardo Avellaneda

Conceptos Claves

Cebador, es una cadena de ácido nucleico o de una molécula relacionada que sirve como punto de partida para la replicación del ADN.

¿Qué es?Es una técnica que permite amplificar rápidamente muestras pequeñas de DNA, es decir, aumentar su cantidad de modo que sea suficiente para poder analizarlas.

Si se comienza con un fragmento de DNA del tamaño de un gen la PCR puede utilizarse para formar literalmente miles de millones de copias en solo unas horas.

https://www.google.com.co/search?q=PCR&biw=1440&bih=805&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=y55rVM

Tipos de PCR

PCR in situ: permite la detección de ADN en el mismo lugar de la muestra, sin tener que procesarla primero con técnicas de laboratorio. Se suele utilizar para biopsias o raspados de células.

• PCR múltiplex: Es un método alternativo de la PCR de amplio espectro para la detección de patógenos múltiples. En los ensayos simples o múltiples, hay grupos de cebadores múltiples que se utilizan en una PCR múltiple, cada uno de los cuales suele dirigirse a un patógeno particular.

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• PCR con transcriptasa inversa, Se unas un ARN como molde inicial en vez de un DNA, y emplea una transcriptasa para realizar la síntesis de un DNA complementario al ARN

• PCR en tiempo real, Permite cuantificar la cantidad de DNA o ARN presentes en la muestra original, o para identificar con una muy alta probabilidad, muestras de DNA especificas a partir de su temperatura de fusión.

• PCR anidada: consigue amplificar muestras mínimas de ADN a miles de millones de fragmentos. Es capaz por lo tanto de detectar trazos minúsculos.

Procedimiento

Como funciona

https://www.google.com.co/search?q=PCR&biw=1440&bih=805&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=y55rVM

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Resultados

• Como resultado, el proceso sigue una curva de crecimiento exponencial. Todos los reactivos necesarios se agregan a un tubo, que se coloca en un termociclador. Este aparato permite fijar las temperaturas, los tiempos y el número de ciclos deseados. El empleo de un termociclador automático es posible gracias al uso de DNA polimerasa obtenida de baterías termófilas como Thermus aquaticus; la enzima de estos microorganismos puede soportar la fase de calentamiento sin destruirse. Luego de treinta ciclos, completados en sólo unas horas, la cantidad de DNA diana aumentara más de diez mil millones de veces.

Utilidad

• Solo puede utilizarse para amplificar secuencias especificas de DNA relativamente pequeñas determinadas por la elección de los cebadores. No puede emplearse para amplificar un genoma completo

• Huella digital genética, permite identificar a una persona comparando su DNA con el de la muestra obtenida, la PCR permite aumentar la cantidad de DNA amplificando ciertos segmentos polimórficos.

• Detección de enfermedades hereditarias, los genes en estudio pueden ser fácilmente amplificados por PCR para determinar alguna mutación.

Identificación de Bordetella spp. Por PCR en tiempo real

• Introducción: México lanzo una alerta epidemiológica en 2009 por brotes de tos ferina en su región norte, el resurgimiento de la tos ferina y sus cambios en la epidemiologia son diversos. El objetivo del estudio fue identificar el agente causal de tos ferina en muestras de exudados faríngeos y nasofaríngeos por rPCR en pacientes de Oaxaca.

• Se extrajeron ácidos nucleicos totales y se sometieron al protocolo multiplex para la identificación de Bordetella spp por PCR.

Bibliografía

• Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. 2007. Introducción a la microbiología. México, Médica Panamericana.

• Noriega-Bautista m, Arellanes-Velasco MF, Urbieta-Mendez E, Vásquez-Gómez EM, Velasco-Aquino VM, Ramírez- Palacios LR. Identificacion molecular de Bordetella spp. Por PCR en tiempo real. Avan C Salud Med 2014; 2(1): 4-15.