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知识 4 、分光光度计

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仪器

可见分光光度计

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仪器 紫外 -可见分光光度计

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（一）、基本组成

光源 色散系统 吸收池 检测器 显示

1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。

可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在 400 ～ 800 nm 。

紫外区：氢、氘灯。发射 185 ～ 400 nm的连续光谱。

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2. 色散系统

将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任

波长单色光的光学系统。由单色器和准光器组成。

① 入射狭缝：光源的光由此进入单色器；

出射狭缝。

② 色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅

紫外用石英棱镜，可见光区用玻璃棱镜

③ 准光器：透镜或凹面反光镜使入射光成为平行光束；

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3. 吸光池 又称为比色皿。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。

4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有硒光电池、光电管或光电倍增管。

5. 结果显示记录系统 电子放大线路或读数系统

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• 第一，拿取吸收池时，只能用手指接触两侧的毛玻璃，不可接触光学面。

• 第二，不能将光学面与硬物或脏物接触，只能用擦镜纸或丝绸擦拭光学面。

• 第三，凡含有腐蚀玻璃的物质 ( 如 F- 、 SnCl2

、 H3PO4 等 ) 的溶液，不得长时间盛放在吸收池中。

• 第四，吸收池使用后应立即用水冲洗干净。有色物污染可以用 3 mol/L HCl 和等体积乙醇的混合液浸泡洗涤。生物样品、胶体或其他在吸收池光学面上形成薄膜的物质要用适当的溶剂洗涤。

• 第五，不得在火焰或电炉上进行加热或烘烤吸收池。

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分光光度计的类型1. 单波长单光束 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。

2. 单波长双光束 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。

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3. 双波长双光束分光光度计

将不同波长的两束单色光 (λ1 、 λ2) 快速交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 分光光度计的品种和型号繁多 可见分光光度计

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 分光光度计的品种和型号繁多 紫外 -可见分光光度计

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 采用钨丝灯 (12v 、 25w)

光源，玻璃棱镜单色器，

4 只光学玻璃吸收池，GD-7 型光电管检测器，指针式微安表指示吸光度 A 和透光度 T，适用波长范围： 360 ～ 800 nm

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ①波长调节器 (λ)… …和波长读数盘

调节选择单色光波长 (λ) 并在读数盘指示出来

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ②调节 0T 电位器 (O )

接通电源后，打开吸收池暗箱盖，调节该旋钮使指示电表指针指向T =0(A =∞) 处，以定位和校准 0T 点

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ③调节 100%T 电位器 ——(10O ) 该旋钮用于调节光源的亮度，控制入射光通量 ( 强度 ) ；当用空白溶液测定时，调节该旋钮使指示电表指针指向T =100(A =0) 处，以定位和校准 100%T 点

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ④吸收池架拉杆钮

该钮以拉杆与吸收池架相连，拉动拉杆可以将置于吸收池架上的吸收池依次送入光路中

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ⑤吸收池暗箱 即样品室，暗箱盖通过机械装置与光电管前后的光路闸门联动，关闭暗箱盖则开启光路闸门，所以只应在调节 100%T 和测量操作时才关闭暗箱盖 (开启光路闸门 )

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ⑥吸收池 又称为比色皿，侧面制成毛面，配有多种规格，通常为 3 、 2 、 1 、 0.5 cm 四种规格，使

用前与滴定管、移液管类似，需用盛装液冲洗干净，池外壁擦拭要使用擦镜纸，手持时应握持毛面，注液量以 4/5 池高为宜

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ⑦灵敏度选择钮 即换档旋钮，用于选择灵敏度档次，分 5档， 1 档灵敏度最低，档位选择原则是：在空白溶液能调节 T =100 时，尽可能采用低档次；改

变档次后，应重新校正 0T 和 100%T

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ⑧电源开关 外接 220v 交流电源，接通后，由机内的变压器和稳压器转变为 12v 电源给光源供电，故也称为光源开关

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 1 、面板和控制钮 ⑨显示电表

微安表，灵敏，标示透光度 T 和吸光度 A两种刻度值，通常读取吸光度 A 的数值

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 2 、使用方法与步骤 ①开机和预热 首先外观检查，正常后开启电源开关，打开暗箱盖使光路闸门关闭，预热 20 分钟，将盛有空白溶液和被测溶液的吸收池依次放入吸收池架中 ( 空白溶液在前 )

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 2 、使用方法与步骤 ②调整和校正 0T

保持暗箱开盖 ( 光路闸门关闭 ) 状态，调节波长选择旋钮选定所需单色光波长，及灵敏度旋钮选择合适的灵敏度档，然后调节 0T 旋钮使显示电表指针指在 T =0(A =∞) 处

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 2 、使用方法与步骤 ③调整和校正 100%T

盖上暗箱盖 ( 光路闸门开启，空白溶液在光路中 ) ，调节 100%T 旋钮使显示电表指针指

在T =100(A =0) 处

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 2 、使用方法与步骤 ④重复如下操作

……打开暗箱盖→调 0T →盖上暗箱盖→调 100%T →…… 直至仪器稳定不变

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 2 、使用方法与步骤 ⑤测量样品 A 值

盖上暗箱盖 ( 光路闸门开启 ) ，拉动吸收池拉杆，使被测溶液依次置于光通路上，并在显示电表读取相应的吸光度值 A( 指针所指值 )

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第四节 分 光 光 度 计二、分光光度计的使用 721 型分光光度计 2 、使用方法与步骤 ⑥ 结束和复位 测量完毕，关闭电源开关，拔下电源插头，

取出吸收池，暗箱中放入干燥剂袋盖好，各个旋钮恢复原位，吸收池洗净后倒置于滤纸上晾干，再放回存放盒

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