45
Ταυτοποίηση Ταυτοποίηση βακτηρίων βακτηρίων : : συμβατικές συμβατικές και και αυτοματοποιημένες αυτοματοποιημένες μέθοδοι μέθοδοι Γεωργία Γεωργία Βρυώνη Βρυώνη Βιοπαθολόγος Βιοπαθολόγος , , Επίκουρη Επίκουρη Καθηγήτρια Καθηγήτρια Μικροβιολογίας Μικροβιολογίας , , Πανεπιστήμιο Πανεπιστήμιο Αθηνών Αθηνών Αναστασία Αναστασία Πάγκαλη Πάγκαλη Βιοπαθολόγος Βιοπαθολόγος Κλινικός Κλινικός Μικροβιολόγος Μικροβιολόγος Διευθύντρια Διευθύντρια Μικροβιολογικού Μικροβιολογικού Βιοχημικού Βιοχημικού Εργαστηρίου Εργαστηρίου Νοσοκομείο Νοσοκομείο Παίδων Παίδων « « Η Η Αγία Αγία Σοφία Σοφία » »

Ταυτοποίηση βακτηρίων

Embed Size (px)

DESCRIPTION

Ταυτοποίηση βακτηρίων

Citation preview

Page 1: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΤαυτοποίησηΤαυτοποίηση βακτηρίωνβακτηρίων: : συμβατικέςσυμβατικές καικαιαυτοματοποιημένεςαυτοματοποιημένες μέθοδοιμέθοδοι

ΓεωργίαΓεωργία ΒρυώνηΒρυώνηΒιοπαθολόγοςΒιοπαθολόγος, , ΕπίκουρηΕπίκουρη ΚαθηγήτριαΚαθηγήτρια ΜικροβιολογίαςΜικροβιολογίας, ,

ΠανεπιστήμιοΠανεπιστήμιο ΑθηνώνΑθηνών

ΑναστασίαΑναστασία ΠάγκαληΠάγκαληΒιοπαθολόγοςΒιοπαθολόγος –– ΚλινικόςΚλινικός ΜικροβιολόγοςΜικροβιολόγος

ΔιευθύντριαΔιευθύντρια ΜικροβιολογικούΜικροβιολογικού –– ΒιοχημικούΒιοχημικού ΕργαστηρίουΕργαστηρίουΝοσοκομείοΝοσοκομείο ΠαίδωνΠαίδων ««ΗΗ ΑγίαΑγία ΣοφίαΣοφία»»

wzwlab
JR-stamp
Page 2: Ταυτοποίηση βακτηρίων

1. Inoculation

2. Incubation

3. Isolation

4. Inspection

5. Identification

The Five I'sThe Five I's

Page 3: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΤαυτοποίησηΤαυτοποίηση βακτηρίωνβακτηρίων

‘Εχει σαν στόχο την κατάταξη ενόςμικροοργανισμού σε συγκεκριμένογένος, είδος, ορότυπο, βιότυπο, είδος αντοχής

Page 4: Ταυτοποίηση βακτηρίων

Ταυτοποίηση βακτηρίωνΟρισμός: κατάταξη ενός μικροοργανισμού σε συγκεκριμένογένος, είδος, ορότυπο, βιότυπο, είδος αντοχής με τηχρησιμοποίηση δοκιμασιών που στηρίζονται σε :

Μορφολογικά χαρακτηριστικά

Καλλιεργητικά χαρακτηριστικά (απαραίτητα θρεπτικά υλικά, συνθήκες επώασης, μορφολογία αποικιών)

Μεταβολικές ιδιότητες (=διάσπαση υποστρωμάτων, παραγωγήενζύμων κ.α) ‘Ελεγχος διαφόρων αντιγονικών παραγόντων των μικροοργανισμών, χαρακτηριστικών για κάθε είδος

Την ανίχνευση χαρακτηριστικών αλληλουχιών βάσεων στο γενετικόυλικό των μικροοργανισμών με τεχνικές DNA

Μορφολογία στη χρώση Gram

Βιοχημική ταυτοποίηση

Ορολογική ταυτοποίηση / τυποποίηση

Μοριακή ταυτοποίηση / τυποποίηση

Page 5: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίεςΔοκιμασίες χρήσιμεςχρήσιμες στηνστηνταυτοποίησηταυτοποίηση

Πρωταρχικό ρόλο στην ταυτοποίηση παίζει ηΒιοχημικήΒιοχημική ταυτοποίησηταυτοποίηση στην οποία εκμεταλευόμαστετις μεταβολικές ιδιότητες των μικροοργανισμών, όπως:

ηη διάσπασηδιάσπαση διαφόρωνδιαφόρων υποστρωμάτωνυποστρωμάτων( απαραίτητες θρεπτικές ουσίες),

παραγωγήπαραγωγή ενζύμωνενζύμων( απαραίτητα για τις μεταβολικές αντιδράσεις και τηλειτουργία της αναπνοής)

Page 6: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία καταλάσηςκαταλάσης

Ελέγχει την παρουσία τουενζύμου καταλάση, πουδιασπά το παραγόμενοκατά τη διάσπαση τωνυδατανθράκων Η2Ο2 σεΗ2Ο και Ο2.Χρησιμοποιούμε Η2Ο2 3%και μικροβιακόκαλλιέργημα σεαντικειμενοφόρο πλάκα(+): παραγωγή φυσαλίδων

Page 7: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία κοαγκουλάσηςκοαγκουλάσης((πηκτάσηςπηκτάσης))

Ελέγχει την ικανότητα των σταφυλοκόκκωννα προκαλούν πήξη του πλάσματος με τηβοήθεια του ενζύμου κοαγκουλάση πουπαράγουν σε δύο μορφές, τη συνδεδεμένηστο κυτταρικό τοίχωμα (clumbing factor)και την ελεύθερη που ελευθερώνεται απότο (ΜΚ)Χρησιμοποιούμε:

δοκιμάσια πλακός για τη συνδεδεμένη(εναιώρημα σταφυλοκόκκου + αναραίωτοπλάσμα ή αντιδραστήριο με σωματίδιαlatex)

(+):παραγωγή κροκίδων------------------------------------------------------

δοκιμασία σωληναρίων για την ελεύθερη(εναιώρημα σταφυλοκόκκου + αραιωμένοκατάλληλα πλάσμα ανθρώπου ή εμπορικούσκευάσματος → επώαση 4h)

(+): παραγωγή πήγματος

Page 8: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία οξειδάσηςοξειδάσηςΕλέγχει αν ο μικροοργανισμόςδιαθέτει το ένζυμο cytochromeoxidase, απαραίτητο στηνμετατροπήNADH NAD + H2O

Χρησιμοποιούμε tetramethyl-p-phenylenodiamine σε διάλυμα (1%), δισκία, ταινίες ή ραβδία και φρέσκεςαποικίες(+) : μπλε χρώμα σε 10’

•Ox(+): Pseudomonas•Ox(-): Salmonella, Shigella, Proteus, Acinetobacter

Page 9: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία οπτοχίνηςοπτοχίνης

Ελέγχει την ευαισθησία ενός (ΜΚ) στηνοπτοχίνη (ethyl hydrocupreinehydrochloride), που ενεργοποιείαυτολυτικά ένζυμα του (ΜΚ) καιπροκαλείται λύση του (ΜΚ)Χρησιμοποιούμε

αιματούχο αγαρ, δισκία οπτοχίνης, επώαση σε CO2 5% για 24 ώρες

(+): ζώνη αναστολής ≥ 10 mmΧρήσιμη στη αδρή διάκρισηπνευμονιοκόκκων - α αιμολυτικώνστρεπτοκόκκων.

Page 10: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία βακιτρακίνηςβακιτρακίνης 0.040.04UU

Ελέγχει την ευαισθησία ενός (ΜΚ) στο αντιβιοτικό βακιτράκινηΧρησιμοποιούμε

αιματούχο άγαρ,

δισκία βακιτρακίνης, επώαση για 24 ώρες.

(+): αναστολή ανάπτυξης.Χρήσιμη στη διάκριση βαιμολυτικού στρεπτοκόκκουομάδας Α (GAS) από άλλους β-αιμολυτικούς στρεπτοκόκκους.

Page 11: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία παραγόντωνπαραγόντωνανάπτυξηςανάπτυξης X / VX / V

Ελέγχουμε την εξάρτηση τωναιμοφίλων από τους παράγοντες Χ(protoporphyrin) και V (αιμίνη), πουβρίσκονται στο αίμα, για νααναπτυχθούν.Χρησιμοποιούμε:

υλικό χωρίς αίμα καιδισκία ποτισμένα με παράγοντεςX/V/XV σε απόσταση 3.5 mm,επώαση σε 5% CO2 18-24 h

Ελέγχουμε για ανάπτυξη γύρω απότους δίσκους (εξάρτηση από τοσυγκεκριμένο παράγοντα)

Page 12: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία θερμοευαίσθητηςθερμοευαίσθητηςνουκλεάσηςνουκλεάσης ((DNDNάσηςάσης))

Ελέγχει την παρουσία της εξωκυττάριαςDNασης που υδρολύει το αδιαλυτο σε ΗCL DNA σε διαλυτά ολιγονουκλεοτίδιαΧρησιμοποιούμε :

υλικό με DNAεπώαση 18-24 hμετά την επώαση πλημύρισμα τουκαλλιεργήματος με 1Μ (3.6%) ΗCL

Ελέγχομε για διαυγή άλω γύρω από τονθετικό μάρτυρα και το εξεταζόμενο (ΜΚ)(+): παρουσία διαυγούς άλω (S. aureus,Serratia κ.α.)(-): απουσία διαυγούς άλω ή άλως < τουμάρτυρα (CNS κ.α )

Page 13: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία ινδόληςινδόλης

Ελέγχει την ικανότητα του (ΜΚ) ναπαραγει το ένζυμο τρυπτοφανάσηπου υδρολύει το αμινοξύτρυπτοφάνη σε ινδόλη και αλδεύδηΧρησιμοποιούμε :

πεπτονούχο ζωμό με 1% τρυπτοφάνηεπώαση 18-24 hαντιδρστήριο Kovacs (p dimethylamino benzaldehyde, amyl alcohol, HCL)

(+): ροζ δακτύλιος στην επιφάνεια(πχ E. coli )

(-): άχρωμος δακτύλιος στηνεπιφάνεια (πχ Klebsiella spp)

Page 14: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία εσκουλίνηςεσκουλίνης

Ελέγχει την ικανότητα του (ΜΚ) ναυδρολύει, παρουσία χολής, τηνάχρωμη εσκουλίνη σε γλυκόζη καιεσκουλετίνη, η οποία παρουσία Fe++

παράγει μαύρο σύμπλεγμα.Χρησιμοποιούμε:

άγαρ εσκουλίνης σε τρυβλίο ήσωληνάρια ή ζωμό εσκουλίνηςεπώαση 4-24 h

(+): παραγωγή μαύρου χρώματος(πχ εντερόκοκκος, S. bovis )

Page 15: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία κινητικότηταςκινητικότηταςΕλέγχει την ικανότητα των (ΜΚ) ,κυρίως των βακτηριδίων καισπανίως των κόκκων, να κινούνταιλόγω ύπαρξης μαστιγίων.Χρησιμοποιούμε:

ημίρευστο άγαρ σε σωληνάριο,με ήχωρίς χρωστικήεμβολιασμό με βαθειά νύξηεπώαση 18-24 h σε 35-370C

(+):διάχυση και θόλωση του υλικού

--------------------------------------------------Το αποτέλεσμα εξαρτάται και από τιςσυνθήκες επώασης.Π.χ. Y. enterocolitica κινητή σε 20-250C και ακίνητη σε 300C

Page 16: Ταυτοποίηση βακτηρίων

Escherichia: mot +/-Shigella: mot –Edwardsiella:mot +Salmonella: mot +Arizona:mot + Citrobacter:mot +Klebsiella:mot –Hafnia:mot +Serratia: mot +Enterobacter:mot +Proteus: mot +Providencia: mot +Pseudomonas: mot +

ΈλεγχοςΈλεγχος κινητικότηταςκινητικότητας

Page 17: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία ουρεάσηςουρεάσηςΕλέγχει την ικανότητα των (ΜΚ) ναδιασπούν την ουρία σε δύο μόριααμμωνίας, με το ένζυμο ουρεάση πουδιαθέτουν, με αποτέλεσμα την αύξησητου pH του υλικούΧρησιμοποιούμε: Θρεπτικό ζωμό με ουρία και δείκτηερυθρό της φαινόλης, σε pH 6.8επώαση 18-24 h σε 35-370C

(+): ροζ χρώμα από την αλλαγή τουδείκτη με την αύξηση του pH σε 8.4

Πχ. Proteus spp,Helicobacter/campylobacters

Page 18: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔοκιμασίαΔοκιμασία OO--NPG NPG ((oo--nitrophenylnitrophenyl--bb--galactopyranosidegalactopyranoside))

Ελέγχει την παρουσία της b-galactosidaseστον (ΜΚ) η οποία μαζί με την περμεάσηπροκαλεί τη διάσπαση της λακτόζης σεγαλακτόζη και γλυκόζη.

-----------------------------------Περμεάση: εισάγει τη λακτόζη στο κύτταρο, ενώ η γαλακτοσιδάση τη διασπά. Μερικά(ΜΚ) έχουν μόνο γαλακτοσιδάση καιαδυνατούν να διασπάσουν τη λακτόζη(βραδέως ζυμούντα)

---------------------------------------------------Χρησιμοποιούμε :

διάλυμα O-NPG (έχει ίδια δομή με τηγαλακτόζη)επώαση 18-24 ω σε 35-370C

(+): κίτρινο χρώμα(Πχ βραδέως ζυμούντα την λακτόζηεντεροβακτηριακά ,ναϊσσέριες κ.α)

Page 19: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΆλλεςΆλλες δοκιμασίεςδοκιμασίες

Χρησιμοποίηση υδατανθράκωνΔοκιμασία οξείδωσης/ζύμωσης γλυκόζηςΔοκιμασία απαμίνωσης φαινυλαλανίνηςΔοκιμασία αποκαρβοξυλίωσης λυσίνηςΔοκιμασία χρησιμοποίησης τριώνσακχάρων κ.α.

Page 20: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΣκεπτικόΣκεπτικό ταυτοποίησηςταυτοποίησης

Συνδυάζουμε όλα τα χαρακτηριστικάπου διαθέτουμε για ένα συγκεκριμένο(ΜΚ) και σταδιακά καταλήγουμε στηνταυτοποίηση του εφαρμόζονταςγνωστούς αλγόριθμους

Page 21: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΒιοχημικήΒιοχημική ΤαυτοποίησηΤαυτοποίηση((χεριούχεριού) () (ΙΙ))

Μέθοδος διασταύρωσης αποτελεσμάτων ή σκακιέρα

Ελέγχεται μεγάλος αριθμός βιοχημικών δοκιμασιών (CDC), πχγια τα εντεροβακτηριακά 47, οι οποίες τα κατατάσσουν σε 28 γένη, 121 είδηκαι βιοτύπους και πολλά χωρίς όνομα.

Τα αποτελέσματα των ΒΔ, για τους ενδεικτικούς μικροοργανισμούς είναιαποτυπωμένα σε μεγάλους πίνακες.

Οριζόντια και κάτω από κάθε δοκιμή αναφέρεται το ποσοστό θετικούαποτελέσματος για κάθε μικροοργανισμό.

Ανατρέχοντας στους πίνακες αυτούς με τα αποτελέσματα των ΒΔ τουάγνωστου μικροοργανισμού τον ταυτοποιούμε.

Page 22: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΒιοχημικήΒιοχημική ΤαυτοποίησηΤαυτοποίηση((χεριούχεριού) () (ΙΙΙΙ))

Μέθοδος διακλαδιζόμενου ή διχοτόμουδιαγράμματος ροήςΜέθοδος απλούστερηΞεκινώντας από τη Gram χρώση(+/-), τη μορφολογία και μία ήδύο χαρακτηριστικές προκαταρκτικές ιδιότητες, πχ οξειδάση(+/-) και ζύμωση της γλυκόζης προχωράμε στην εφαρμογήδιαφόρων άλλων ΒΔ και με την αξιολόγηση πάντα του (+/-) αποτελέσματος καταλήγουμε στην τελική ταυτοποίηση τωνμικροοργανισμών

Page 23: Ταυτοποίηση βακτηρίων

Gram (-) βακτηρίδια

Κόκκοι/Κοκκοβακτηρίδια Βακτηρίδια

Αερόβια/Δυνητικά αναερόβια Αυστηρά αναερόβια

ΑερόβιαΔυνητικά αναερόβια Αυστηρά αναερόβια

AcinetobacterKingella

MoraxellaNeisseria

Veillonella Επόμενος πίνακας

BacteroidesFusobactrrium

Prevotella…………..

Page 24: Ταυτοποίηση βακτηρίων

Αερόβια / δυνητικάaναερόβια Gram(-)

βακτηρίδια

Μικρά /πολύμορφα Ανισομεγέθηαραιοχρωματικά Ευθείες πλευρές Καμπυλομορφα

Oxidase (+) Oxidase (-)Campylobacter

HelicobacterArcobacter

PseudomonasAeromonas

BurkholderiaFlavobacterium

Alcaligenes

EnterobacteriaceaeStenotrophomonas

Acinetobacter

ActinobacillusBordetella

BrucellaPasteurellaHaemophillusAcinetobacter

Bartonella

Legionella

Page 25: Ταυτοποίηση βακτηρίων
Page 26: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΕμπορικάΕμπορικά κωδικοποιημένακωδικοποιημένα ΣυστήματαΣυστήματαταυτοποίησηςταυτοποίησης ((ΙΙ))

Χαρακτηριστικά υποστρώματα σε αποξηραμένη μορφή βρίσκονται σεειδικούς υποδοχείς πάνω σε ταινίες ή πλάκες και προορίζονται γιαGram(+) και (-) αερόβια βακτήρια, Gram (-) αζυμωτικά βακτήρια, Αιμόφιλους / Ναϊσσέριες, Σταφυλόκοκκους και Στρεπτόκοκκους, Κορυνοβακτηρίδια, Βακίλους , Αναερόβια, Μύκητες κ.ά.Τα υποστρώματα ανασυστήνονται με την εφαρμογή του μικροβιακούεναιωρήματος, ορισμένης πυκνότητας της κλίμακας Mac Farmland καιεφαρμόζονται αναερόβιες συνθήκες ,όπου χρειάζονται.Γίνεται επώαση για 18-24 ώρεςΠροστίθενται ή όχι αντιδραστήρια, αξιολογείται η χρωματική μεταβολήκαι βαθμολογείται το αποτέλεσμαΑθροίζεται η βαθμολογία ανά τρείς αντιδράσεις και ο τελικός αριθμόςδιαβάζεται είτε σε βιβλία είτε σε πρόγραμμα υπολογιστή

Page 27: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΕμπορικάΕμπορικά κωδικοποιημένακωδικοποιημένα ΣυστήματαΣυστήματαταυτοποίησηςταυτοποίησης ((ΙΙΙΙ))

Η τελική ταυτοποίηση προκύπτει από τη σύγκριση του Χ αριθμού μετους αντίστοιχους της βάσης δεδομένων κάθε συστήματος και τηνεύρεση του ποσοστού ομοιότηταςΣτο αποτέλεσμα αναφέρονται:- ομοιότητα ≥ 90%: η ταυτοποίηση δεν έχει πρόβλημα- ομοιότητα περίπου 90%: η ταυτοποίηση μπορεί να ολοκληρωθείμε 1-2 συμπληρωματικές δοκιμασίες- ομοιότητα χαμηλή: η ταυτοποίηση απορρίπτεται

-excellent, very good, acceptable ID =/=90%

-questionable, doubtful ID: η ταυτοποίηση επαναλαμβάνεται

Page 28: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΚωδικοποίησηΚωδικοποίηση ΣυστήματοςΣυστήματοςΑνάγνωσηςΑνάγνωσης

Το αποτέλεσμα των ΒΔ είναι + ή –

Ο υπολογιστής στον προγραμματισμό του δέχεται μόνο θετικά ήαρνητικά στοιχεία στο δυαδικό σύστημα αριθμών ΄΄1΄΄ και ΄΄0΄΄

Τα αποτελεσματα των ΒΔ εισάγονται στον υπολογιστή σαν ΄΄1΄΄τα (+) και ¨0¨ τα (-).πχ 101 010 000 111 111 011 100

Οι δυαδικοί αριθμοί μετατρέπονται στο οκταδικό σύστημα αριθμώναπό 0-7. Έτσι έχουμε 5 2 0 7 7 6 1 στο προηγούμενο. Ο αριθμόςαυτός είναι ο βιότυπος

Η ταυτοποίηση με τον τρόπο αυτό εκατομμυρίων στελεχών έχειδημιουργήσει ισχυρές και αξιόπιστες βάσεις δεδομένων οι οποίεςεμπλουτίζονται συνεχώς.

Page 29: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΕμπορικάΕμπορικά ΣυστήματαΣυστήματα ταυτοποίησηςταυτοποίησης

API - bioMerieux [20 και 32 δοκιμασιών, διάφορα είδη]BBL Crystal – Becton DickinsonMicro ID – RemelEnterotube - Becton DickinsonMicroscan systems – Dade Behring (Siemens)Sensititre systems κ.α.

Έχουν ακρίβεια, μεγάλη διάρκεια ζωήςΕίναι εύκολα στη χρήσηΔίνουν ξεκάθαρα αποτελέσματα ΑΡΚΕΙ ΝΑ ΕΜΒΟΛΙΑΖΟΝΤΑΙ ΜΕΚΑΘΑΡΟ ΚΑΙ ΦΡΕΣΚΟ ΚΑΛΛΙΕΡΓΗΜΑΣε οποιαδήποτε αμφιβολία επανελέγχουμε τις εκτιμήσεις μας καιανατρέχουμε στις σημειώσεις των συστημάτων.

Page 30: Ταυτοποίηση βακτηρίων

Ταυτοποίηση Gram (+) και (-)βακτηρίων και μυκήτων

Βιοχημική ταυτοποίηση με έτοιμα συστήματα: συστήματα προπαρασκευασμένων αντιδραστηρίων-υλικώνσε ειδικές θέσεις

API (Analytical Profil Index) π.χ. ΑΡΙ 20ΕEnterotube II

Computer-assisted numerical codesAPI 20E: 7-ψήφιοι αριθμοίEnterotube II: 5-ψήφιοι αριθμοί

Page 31: Ταυτοποίηση βακτηρίων
Page 32: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΗμιαυτόματαΗμιαυτόματα καικαι ΑυτόματαΑυτόματα ταυτοποιητικάταυτοποιητικάΣυστήματαΣυστήματα

Αποτελούνται από το όργανο εμβολιασμού, το όργανο επώασης καιτον υπολογιστή για την εισαγωγή των δημογραφικών στοιχείων τουασθενούς και την ανάγνωση των αποτελεσμάτωνΧρησιμοποιούν μεγάλο αριθμό υποστρωμάτων, εως και 96, κλεισμένα σε κάρτες (Vitek) ή πλάκες (Phoenix, Microscan), τα οποίααποτελούν τα Panels των διαφόρων συστημάτωνO εμβολιασμός γίνεται εύκολα και προτυπωμένα, με μικρήανθρώπινη παρέμβασηΚατά την επώαση γίνεται συνεχής παρακολούθηση της αντίδρασης, η οποία είναι χρωματομετρική ή φθοριομετρικήΌπου χρειάζεται γίνεται αυτόματα προσθήκη αντιδραστηρίωνΤο τελικό αποτέλεσμα δίνεται σε 2-12 ώρες

Page 33: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΕμπορικάΕμπορικά ΣυστήματαΣυστήματα αυτόματηςαυτόματηςταυτοποίησηςταυτοποίησης

Vitek System

Phoenix System

Microscan Walkaway System

Wider

Sensititre autoidentification System

Page 34: Ταυτοποίηση βακτηρίων

Vitek 2 σύστημαΚάρτα 64-μικροϋποδοχών– Μια υποδοχή ελέγχου– Υποδοχές προμετρημένων ποσοτήτων 19-20 αντιμικροβιακών παραγόντων σε συνδυασμό με υλικόκαλλιέργειας

Πλήρωση, σφράγισμα της κάρτας καιτοποθέτησή της στην μονάδαεπώασης/ανάγνωσης του οργάνουΠαρακολούθηση ανάπτυξης σε κάθε υποδοχήτης κάρτας ανά 15min (φθορισμός, θολερότητα, χρώμα)

Page 35: Ταυτοποίηση βακτηρίων

35

60 & XL

Εναιώρημα σε:

•3mL 0.45-0.50% NaCl

•0.50-0.63 McF

Page 36: Ταυτοποίηση βακτηρίων

Phoenix σύστημαPanels ταυτοποίησης και αντιβιογράμματος

Ταυτοπ

οίησ

η

ΤαυτοποίησηΑντιβιόγραμμα

– 84 πηγαδάκια + 1 μάρτυρας ανάπτυξης– τουλάχιστον 3 αραιώσεις / αντιβιοτικό– προσδιορισμός MICΔιπλός τρόπος ανάγνωσης

– Θολερότητα σαν δείκτης ανάπτυξης– Χρώμα ως αντίδραση μικροβιακούμεταβολισμού

Μέτρηση ανάπτυξης κινητικής μορφής / 20 min

Page 37: Ταυτοποίηση βακτηρίων

37

Page 38: Ταυτοποίηση βακτηρίων
Page 39: Ταυτοποίηση βακτηρίων

MICROSCAN: Prompt MICROSCAN: Prompt Ετοιμασία εναιωρήματος

MICROSCAN:MICROSCAN: RenokRenokΕνοφθαλμισμός

πλάκας

Page 40: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΔιαδικασίαΔιαδικασία MICROSCANMICROSCAN

1 αποικία

30 mlδιαλύματος

RENOK®

Prompt ® ή0.5 McF

35°C3355°°CC

Page 41: Ταυτοποίηση βακτηρίων

41

Ημιαυτόματο σύστημα επεξεργαστή εικόνας για:1. ταυτοποίηση2. έλεγχο ευαισθησίας με πλάκες με συγκεκριμένεςαραιώσεις αντιβιοτικών σύμφωνα με τη CLSI

Το σύστημα διαθέτει:λογισμικό για την ψηφιακή επεξεργασία τωναπεικονίσεων και μετατροπή τους σε αριθμητικές τιμέςεξελιγμένο πρόγραμμα “expert rules” σύμφωνα με τουςκανόνες της CLSI με δυνατότητα συνεχούςενημέρωσης με τα νεώτερα δεδομένα (update)προγράμματα αρχειοθέτησης, αναζήτησης, ελέγχου ποιότητας των αποτελεσμάτων

Wider I σύστημα

Page 42: Ταυτοποίηση βακτηρίων

ΟρολογικήΟρολογική ταυτοποίησηταυτοποίησηΤυποποίησηΤυποποίηση

Γρήγορη ταυτοποίηση σε κλινικά δείγματα

Μηνιγγιτιδογόνα βακτήρια σε ΕΝΥΠνευμονιόκοκκος σε αίμα ,πλευριτικό υγρό κ.άΣτρεπτόκοκκος ομάδας Α σε φαρυγγικό επίχρισμα

-----------------------------------------------------------------Αναπνευστικοί ιοί (γρίπης, RSV, adeno) σε ρινικό έκπλυμα

---------------------------------------------------------------------------------------------ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΟΥΝΤΑΙ

. Αντιοροί,

. Αντιδραστήρια latex

. Ανοσοχρωματογραφία

RSV

Page 43: Ταυτοποίηση βακτηρίων
Page 44: Ταυτοποίηση βακτηρίων
Page 45: Ταυτοποίηση βακτηρίων

Ορολογική ταυτοποίηση / Τυποποίηση

Απαιτείται για κλινικούς καιεπιδημιολογικούς κυρίως λόγους:

Συμπλήρωμα της βιοχημικής ταυτοποίησηςΟμαδοποίηση αιμολυτικών στρεπτοκόκκων(Α,Β,C,D,F,G)Ομαδοποίηση αιμοφίλων (a,b,c,d,e,f)Ομαδοποίηση Salmonella, Shigella, E. coliΟμαδοποίηση N. meningitidis (A,B,C,D,X,Y,Z,W135 )Τυποποίηση πνευμονιόκοκκωνΤυποποίηση βρουκελλών (B. melitensis, B. abortus )Ταυτοποίηση S.aureus