Цепи, концы и направления

5’ 5’

Одноцепочечная ДНК

Цепи, концы и направления

Ген

5’

5’3’

3’

БелокN C

Какая цепь кодирующая ?

Сопряжение процессов транскрипции и трансляции у прокариот

ДНК3’

РНК-полимераза

РНК5’

Рибосома

N

Белок

Библиотеки на основе К-ДНК

Особенность № 1 - это библиотеки экспрессирующихся областей генома

Геномная библиотека К-ДНКовая библиотека

Конструирование библиотеки К-ДНК

АААААА

Очистка м-РНК

ТТТТТТ

ТТТТТТ

ТТТТТТ

ТТТТТТ

АААААА 5’

Суммарная РНК

Проскок

Элюция

АААААА

АААААА

ААААААМ-РНК

Ко

пи

ро

ва

ни

е

Конструирование библиотеки К-ДНК

Получение к-ДНК

AAAAA

TTTTT

5’ 3’

3’ 5’

Затравка

мРНК

ДНКРевертаза

Как получить вторую цепь ДНК?

AAAAA

TTTTT

5’ 3’

3’ 5’

Затравка

3’OH

ДНК-полимераза

S1 нуклеаза

Клонирование

Прерывистость генов эукариот

A B C D Кальцитонин РКП5’ 3’

Кальцитонин РКП

C D КальцитонинA B РКПC DA B

Альтернативный сплайсинг

Щитовидная железа Гипоталамус

Транскрипция

Сплайсинг

ДНК

A B C D Кальцитонин РКП5’ 3’

мРНК

Трансляция Процессинг

Трансляция Процессинг

Клонирование с использованием полимеразной цепной реакции (PCR).

AAAAAA

CCCCCC

5’

Какова будет структура праймеров

PCR в диагностике урогенетальных инфекций

Что плохо ?

Проблема №1. Ошибки.

Полимераза 1 ошибка на

Pfu 7,7х105

Tli (Vent) 3,6х105

Tag 1,2x105

Проблема №2. Откуда узнать последовательность для

конструирования праймеров?

GGGGAGGGTCGCGCGGG-ACGGCCTGGCTCAT+CA+G+AATG+AA-++T+AT++A+CT+++CA+G++GTG+AA-++TA++AA++CT+++CA+G++GTG+AA-++TA++AA++CT+++CA+G++GTG+AA-++TA++AA++CT+++CA+G++GTG+AA-++TA++AA++CT+++CA+G++GTG+AA-++TA++AA++TT+++CC+G+ATTG+A+T++TCA+GA++TT++TCC+G+AGT++A+T++TTTT+AA+TT++TCC+G+AGT++A+T++TTTT+AA+CT+AGTC+G+AGTA+AA-++TAATGA++

Выравнивание последовательностей

TCCCGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCGGGAG+++A+++++++++++++++++++++++T+++T+++A+T++++++G+++++++++++++A+T++++++++A+A+T++++++G+++++++++++++A+T++++++++A+A+T++++++G++++++++++++++++++++++++A+A+T++++++G++++++++++++++++++++++++A+A+++AT+++G+++++++++++++++++++++AT++++C++TA+C+++A+A++++++++T+++++TT+TA++GAC++TA+C+++A+A++++++++T+++++TT+TA++GA+++G+++++++++++++++++++++++++++++++A+++AC+++++++++++++++++++++++++GT++++

Ori

Apr LacZ Полилинкер

Клонирование амплификата