第二十一章 免疫学检测

第一节 抗原抗体的测定

一、抗原抗体反应的相关理论 抗原具有抗原性（免疫反应性），可与相应的抗体在体外发生特异性结合，并在一定条件下出现可见反应现象。故可用已知的抗原（或抗体）检测未知的抗体（或抗原）。因抗体主要存在与血清中，故又称为血清学反应。

（一）抗原抗体反应的特点1. 特异性2. 可逆性3. 比例性和结合物的可见性4. 阶段性（ 1）特异性结合阶段 （ 2）可见反应阶段

（二）抗原抗体反应的主要影响因素

1. 抗原、抗体反应的浓度、比例 2. 电解质 3. 温度 4. 酸碱度

三、血清学反应的种类（一）凝集反应（ agglutination ） 1.直接凝集反应（ direct agglutination ）

是指颗粒性抗原（凝集原）与相应的抗体（凝集素）直接结合所呈现的凝集现象。如红细胞 ABO血型的测定，细菌凝集试验。

2. 间接凝集反应 （ indirect passive agglutination ）

是可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的微球载体上，形成致敏颗粒，与相应的抗体或抗原在电解质存在的条件下进行反应，出现凝集。

（二）沉淀反应（ precipetation ） 是指可溶性抗原与相应抗体在合适的电解质存在下，出现肉眼可见的沉淀现象。

1. 单向琼脂扩散试验 2. 火箭电泳 3. 双向琼脂扩散试验 4. 对流免疫电泳

（三）补体结合试验 （ complement fixation

test ， CFT) 是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶

血素作为指示系统，来检测未知抗原或抗体的试验。

（四）中和反应（ nertralization ） 毒素、酶、激素或病毒等与其相应

的抗体结合后，导致生物活性的丧失。 1. 病毒中和反应 2. 毒素中和反应

（五）免疫标记技术

1. 免疫酶技术

2. 免疫荧光技术

3. 放射免疫测定

4. 免疫胶体金标记技术

第二节 免疫细胞的检测一、免疫细胞的分离（一）外周血单个核细胞的分离（二） T 、 B 及其它免疫细胞的纯化（三）免疫磁珠分离法（四）荧光激活细胞分离仪分离法二、免疫细胞的计数（一）花环形成试验（二）荧光抗体染色

三、免疫细胞功能的检测（一） T 细胞功能的测定 淋巴细胞转化试验 :T 细胞在体外受特异

性抗原或有丝分裂原（ PHA 、 ConA等）刺激后，能转化为淋巴母细胞。试验时取外周血，分离淋巴细胞，加入有丝分裂原或特异性抗原，在培养液中培养 72 小时，经涂片染色后镜检计算转化百分率。

（二） B 细胞功能的检测1. 空斑形成细胞检测（ plaque formingcell ， PFC ） 是动物体外检测 B 细胞功能的方法。2. 定量溶血分光光度法（ QHS ） 又称 B 细胞介导的红细胞定量溶血分光

光度法，反映机体的体液免疫功能。3. 酶联免疫斑点试验

（三）其他淋巴细胞功能的检测 1.NK 细胞活性测定 （ 1 ） NK 细胞自然杀伤功能的检测 （ 2 ） ADCC 试验 2.LAK 细胞活性测定（四）吞噬细胞功能检测 1. 中性粒细胞吞噬功能的测定 2. 大吞噬细胞的检测

第三节 细胞因子的检测

一、细胞生物学活性检测法二、免疫学标记技术法三、分子生物学方法

人类干扰素的检测 白细胞介素 -1 （ IL-1 ）的检测 肿瘤坏死因子（ TNF ）的检测

第四节 分子生物技术在免疫检测中的应用

一、分子杂交技术二、转基因技术三、多聚酶链反应