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发发发发发发发发发发发发发 发发发发发发发发 发发发 发发 发发发发发发发发发发 发发发发发发发发发发发发发发发发发发发发发发 发发发发发发发发发发发发发 ( ISBC 发发发发 Council member of scientific advisory board of International Society on Bioluminescence & Chemilumi nescence

发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

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发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题. 杨晓林 博士 北京大学医学部研究员 中国生物物理学会光生物学专业委员会副主任委员 国际生物发光和化学发光学会 ( ISBC )学术理事 Council member of scientific advisory board of International Society on Bioluminescence & Chemiluminescence. 化学发光 ( Chemiluminescence ). 由于化学反应(通常是氧化)产生电子能级处于激发态的物质,后者通过跃迁释放能量产生光子,从而导致的发光现象。. - PowerPoint PPT Presentation

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Page 1: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

发光免疫检测技术的临床应用及其应注意的问题

发光免疫检测技术的临床应用及其应注意的问题

杨晓林 博士

北京大学医学部研究员中国生物物理学会光生物学专业委员会副主任委员国际生物发光和化学发光学会 ( ISBC )学术理事

Council member of scientific advisory board of International Society on Bioluminescence & Chemiluminescence

Page 2: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

由于化学反应(通常是氧化)产生电子能级处于由于化学反应(通常是氧化)产生电子能级处于激发态的物质,后者通过跃迁释放能量产生光子激发态的物质,后者通过跃迁释放能量产生光子,从而导致的发光现象。,从而导致的发光现象。

化学发光化学发光(( ChemiluminescenceChemiluminescence ))

化学发光化学发光(( ChemiluminescenceChemiluminescence ))

生物发光和化学发光均属于冷光,即发光不是由于生物发光和化学发光均属于冷光,即发光不是由于发光体温度升高所至,发射波长也与其温度无关发光体温度升高所至,发射波长也与其温度无关

Page 3: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

按化学反应类型 按化学反应类型

化学发光的分类化学发光的分类化学发光的分类化学发光的分类

酶促化学发光:酶促化学发光: 辣根过氧化物辣根过氧化物

酶系统酶系统

碱性磷酸酶系碱性磷酸酶系

统统

黄嘌呤氧化酶系黄嘌呤氧化酶系

统统

非酶促化学发光:非酶促化学发光:

吖啶酯系统吖啶酯系统

草酸酯系统草酸酯系统

三价铁三价铁 -- 鲁米诺鲁米诺

系统系统

闪光(闪光( FlashFlash )) : :

按发光持续时间按发光持续时间

发光时间在数十分钟以上,如: 发光时间在数十分钟以上,如:

HRP-LuminolHRP-Luminol 系统系统

AP-AMPPDAP-AMPPD 系统系统

黄嘌呤氧化酶系统黄嘌呤氧化酶系统

无须原位进样、 以速率法测量。无须原位进样、 以速率法测量。

发光时间在数秒内,如吖啶酯发光时间在数秒内,如吖啶酯

以原位进样以原位进样 (In Situ Injector) (In Situ Injector) 和时和时

间积分法测量间积分法测量

辉光(辉光( GlowGlow )) ::

Page 4: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

时间时间

发光信号发光信号

辉光坪区辉光坪区

速率法测量速率法测量

原位进样原位进样

积分法测量积分法测量

闪光尖峰闪光尖峰

闪光与辉光及其测量方式的差别闪光与辉光及其测量方式的差别闪光与辉光及其测量方式的差别闪光与辉光及其测量方式的差别

Page 5: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统

HH22OO22++

NHNH22 OO

OO

NHNHNHNH

NN22OHOH--

HRPHRP

NHNH22

COCO22--

COCO22--

+Photon (425nm)+Photon (425nm)

RR OHOH

RR

OHOHNN

SSRR BB

OHOH

OHOH

增强剂增强剂(( EnhancerEnhancer ))

商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统

Page 6: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

AMPPDAMPPD 及其衍生物及其衍生物的化学发光系统的化学发光系统 ++

**

光子光子 (477nm)(477nm)

APAPOO OO OCHOCH33

OPOOPO332-2- OO--

OO OO OCHOCH33

OO

OO--

OOOCHOCH33

商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统

Page 7: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

CHCH33

C=OC=OOO

RR

NN++

OHOH--

HH++

HH22OO22 + H+ H22OO

++

RR

OHOH

光子 光子 + CO+ CO2 2 ++

CHCH33

C=OC=OOO

RR

NN

HOHO

CHCH33

C=OC=OOO

RR

NN

HOOHOO

CHCH33

OO

NN

CHCH33

OO

NN

C=OC=OOO

商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统

吖吖啶啶酯酯化化学学发发光光系系统统

Page 8: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

发光信号检测发光信号检测发光信号检测发光信号检测

光敏二极管、光敏电池、光电偶合器(光敏二极管、光敏电池、光电偶合器( CCDCCD ))

结构简单、性能稳定结构简单、性能稳定 但灵敏度低、线性范围较窄。但灵敏度低、线性范围较窄。

主要特点主要特点

原理原理

光信号光信号 光电转换器件光电转换器件 电压或电流信号电压或电流信号 放大放大

Page 9: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

单光子计数器是目前高灵敏度单光子计数器是目前高灵敏度发光分析仪的核心部件发光分析仪的核心部件

单光子计数器是目前高灵敏度单光子计数器是目前高灵敏度发光分析仪的核心部件发光分析仪的核心部件

光电倍增管光电倍增管高高压压

高速放大器高速放大器高速比较器高速比较器高速分频器高速分频器

发光样品发光样品产生光子产生光子

激发光阴极激发光阴极产生光电子产生光电子

在阳极上形在阳极上形成较强信号成较强信号

脉冲信号脉冲信号相对发光单位相对发光单位数字脉冲数字脉冲 (RLU)(RLU)

在各打拿极之间得到在各打拿极之间得到能量和数目的倍增能量和数目的倍增

Page 10: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

单光子计数式发光检测仪单光子计数式发光检测仪单光子计数式发光检测仪单光子计数式发光检测仪

计计算算机机

打打印印机机

发光仪控制模块发光仪控制模块发光仪执行模块发光仪执行模块

控制器控制器

程控高压程控高压

计数计数 // 贮存器贮存器单光子计数器单光子计数器

样品运动样品运动 // 定位装置定位装置

程控自动门锁及检测装置程控自动门锁及检测装置

原位注射泵原位注射泵

Page 11: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

光生物学技术的应用范围光生物学技术的应用范围光生物学技术的应用范围光生物学技术的应用范围

军事侦测军事侦测 公安稽查公安稽查 卫生检疫卫生检疫 药物筛查药物筛查 医学诊断医学诊断 环境检测环境检测 航天遥感航天遥感 生命科学生命科学 …… ……

已成为现代生物技术最活跃的领已成为现代生物技术最活跃的领域之一域之一

Page 12: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

光生物学检测技术的优越性光生物学检测技术的优越性光生物学检测技术的优越性光生物学检测技术的优越性

彻底消除了放射性危害彻底消除了放射性危害

无半衰期限制,试剂稳定无半衰期限制,试剂稳定性和有效期大大延长性和有效期大大延长

容易实现连续、动态、重容易实现连续、动态、重复测定复测定

适合于复合标记系统进行多指适合于复合标记系统进行多指标并行测定标并行测定

操作简单,反应速度快,容易操作简单,反应速度快,容易实现自动化实现自动化

灵敏度和线性范围超过以往技灵敏度和线性范围超过以往技术术

Page 13: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

几种标记几种标记 // 检测技术灵敏度的比较检测技术灵敏度的比较几种标记几种标记 // 检测技术灵敏度的比较检测技术灵敏度的比较

酶标酶标 荧光荧光 放免放免 发光发光

灵敏度灵敏度 (mol/L(mol/L))

1010-18-18

1010-15-15

1010-12-12

1010-9-9

Page 14: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

几种标记几种标记 // 检测技术线性范围的比较检测技术线性范围的比较几种标记几种标记 // 检测技术线性范围的比较检测技术线性范围的比较

酶标酶标 荧光荧光 放免放免 发光发光

线性范围线性范围

101055

101044

101033

101022

Page 15: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

几种标记几种标记 // 检测试剂的有效期比较检测试剂的有效期比较几种标记几种标记 // 检测试剂的有效期比较检测试剂的有效期比较

酶标酶标 荧光荧光 放免放免 发光发光

有效期(月)有效期(月)

1818

1515

1212

99

66

33

00

Page 16: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

0

20,000

40,000

60,000

80,000

100,000

试剂盒 仪器

特殊防护 治理污染

人民币人民币

三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用放免放免放免放免 酶标酶标酶标酶标 发光发光发光发光

Page 17: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

抗原:可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗原:可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。 抗体:由动物免疫系统产生,可特异性结合某种物抗体:由动物免疫系统产生,可特异性结合某种物

质的球蛋白。 质的球蛋白。

免疫分析技术基本原理免疫分析技术基本原理免疫分析技术基本原理免疫分析技术基本原理

利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法

Page 18: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

免疫测定技术分类免疫测定技术分类免疫测定技术分类免疫测定技术分类

反应结束后是否需要分离

反应结束后是否需要分离

均相法均相法(( HomogeneouHomogeneou

ss ))

非均相法非均相法(( HeterogeneouHeterogeneou

ss ))

Page 19: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

均相法均相法(( HomogeneousHomogeneous ))均相法均相法(( HomogeneousHomogeneous ))

免疫凝集法:免疫凝集法: 自然凝集:血型测定自然凝集:血型测定 肥达氏反应;肥达氏反应; 敏化凝集:血球凝集法敏化凝集:血球凝集法 凝胶(微粒)比凝胶(微粒)比

浊法浊法 免疫扩散法;免疫电泳法近场液闪法,免疫扩散法;免疫电泳法近场液闪法, 酶酶 ---- 辅酶(亚基)配位法辅酶(亚基)配位法 荧光偏振法,荧光共振法荧光偏振法,荧光共振法 吖啶酯水解法,生物传感器吖啶酯水解法,生物传感器

Page 20: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

非均相法非均相法(( HeterogeneouHeterogeneouss ))

非均相法非均相法(( HeterogeneouHeterogeneouss ))

免疫印迹(免疫印迹( Western-blotWestern-blot ):基因表达分析、):基因表达分析、 HIVHIV感染确认实验感染确认实验 免疫组织化学技术:原位基因表达分析、临床病理学分析免疫组织化学技术:原位基因表达分析、临床病理学分析 纸片法:早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测纸片法:早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测 放射免疫法(放射免疫法( RIARIA ):沉降法(放免)、固相法(免放,):沉降法(放免)、固相法(免放, IRMAIRMA

)) 荧光免疫法(荧光免疫法( FIAFIA );酶联免疫法();酶联免疫法( EIAEIA ,, ELISAELISA )) 酶联荧光法(酶联荧光法( FEIAFEIA )、化学发光法()、化学发光法( LIALIA )) 酶联化学发光法(酶联化学发光法( ELIAELIA )、时间分辨荧光法()、时间分辨荧光法( DELFIADELFIA )、电)、电

化学发光法(化学发光法( ECLIAECLIA );……);……

Page 21: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

双抗体夹心法(三明志法)原理双抗体夹心法(三明志法)原理双抗体夹心法(三明志法)原理双抗体夹心法(三明志法)原理

固相支持物表面固相支持物表面

包被抗体包被抗体

标记抗体标记抗体

待测物待测物

Page 22: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

夹心法的剂量夹心法的剂量 ----反应关系曲线反应关系曲线夹心法的剂量夹心法的剂量 ----反应关系曲线反应关系曲线

信号强度(信号强度( YY ))

线性范围线性范围待测物浓度(待测物浓度( XX ))

Hook(Hook( 前滞前滞 )) 效应效应

分析灵敏度(最低检测限)(分析灵敏度(最低检测限)( 95%95% 可信度):可信度): S0S0++2SD2SD 在该曲线上所对应的浓度值。在该曲线上所对应的浓度值。功能灵敏度:功能灵敏度: 测定误差(变异)≤测定误差(变异)≤ 20%20% 的最低可检测浓度。的最低可检测浓度。线性范围:线性范围: (分析)功能灵敏度(分析)功能灵敏度 ------ 变异≤变异≤ 20%20% 的最高检测浓度的最高检测浓度相关系数≥相关系数≥ 0.990.99 的曲线范围的曲线范围

Page 23: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

竞争法的原理竞争法的原理竞争法的原理竞争法的原理

固相支持物表面固相支持物表面

待测物待测物

包被抗体包被抗体

标记抗原标记抗原

Page 24: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

竞争法的剂量竞争法的剂量 ----反应关系曲反应关系曲线线

竞争法的剂量竞争法的剂量 ----反应关系曲反应关系曲线线

待测物浓度( 待测物浓度( X X ))

信号强度( 信号强度( Y Y ))

线性范围线性范围

分析灵敏度(最低检测限)(分析灵敏度(最低检测限)( 95%95% 可信度):可信度): S0-2SDS0-2SD 在该曲线上所对应的浓度值在该曲线上所对应的浓度值功能灵敏度:功能灵敏度: 测定误差(变异)≤测定误差(变异)≤ 20%20%的最低可检测浓度的最低可检测浓度线性范围:线性范围:   (分析)功能灵敏度   (分析)功能灵敏度 ------ 变异≤变异≤ 20%20%的最高检测浓的最高检测浓度度相关系数≥相关系数≥ 0.990.99的曲线范围的曲线范围

Page 25: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

间接法原理间接法原理间接法原理间接法原理

包被体包被体

待测抗体待测抗体

包被抗原包被抗原

标记抗体标记抗体(二抗)(二抗)

Page 26: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

俘获法原理俘获法原理俘获法原理俘获法原理

俘获抗体俘获抗体(二抗)(二抗)

待测抗体待测抗体标记抗原标记抗原

包被体包被体

Page 27: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

双抗原夹心法原理双抗原夹心法原理双抗原夹心法原理双抗原夹心法原理

包被体包被体

待测抗体待测抗体

包被抗原包被抗原

标记抗原标记抗原

Page 28: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

间接包被夹心法原理 间接包被夹心法原理

间接包被夹心法原理 间接包被夹心法原理

包被体包被体

待测抗原待测抗原

包被连接物包被连接物

标记抗体标记抗体

俘获抗体俘获抗体

特点:所有试剂盒均采用同一包被物和包被工艺特点:所有试剂盒均采用同一包被物和包被工艺

Page 29: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

发光免疫分析基本操作步骤(一步法) 发光免疫分析基本操作步骤(一步法)

发光免疫分析基本操作步骤(一步法) 发光免疫分析基本操作步骤(一步法)

待测样品待测样品 标记抗体或抗原标记抗体或抗原

洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物

发光底物发光底物仪器检测仪器检测

包被抗体或抗原的反应管包被抗体或抗原的反应管

反应反应 30-6030-60分钟分钟

反应反应 0-50-5分钟分钟

Page 30: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

发光免疫分析基本操作步骤(二步法) 发光免疫分析基本操作步骤(二步法) 发光免疫分析基本操作步骤(二步法) 发光免疫分析基本操作步骤(二步法)

待测样品待测样品

洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物

发光底物发光底物仪器检测仪器检测

包被抗体或抗原的反应管包被抗体或抗原的反应管

反应反应 30-6030-60分钟分钟

反应反应 0-50-5分钟分钟

标记抗体或抗原标记抗体或抗原

洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物

反应反应 30-6030-60分钟分钟

Page 31: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

发光免疫分析技术发光免疫分析技术的现状及应注意的问题的现状及应注意的问题发光免疫分析技术发光免疫分析技术

的现状及应注意的问题的现状及应注意的问题

Page 32: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

目前已商品化的光生物学标目前已商品化的光生物学标记检测技术整体性能比较记检测技术整体性能比较

目前已商品化的光生物学标目前已商品化的光生物学标记检测技术整体性能比较记检测技术整体性能比较

技术类型 技术类型 标记、反应体系 标记、反应体系 主要优点主要优点 主要不足主要不足

化化学学发发光光

酶酶促促

过氧化物酶、鲁米过氧化物酶、鲁米诺、氧化剂、增强诺、氧化剂、增强剂等剂等

测量方式简单(速率测量方式简单(速率法)成本较低、灵敏法)成本较低、灵敏度较高度较高

工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移

螺旋金刚烷环氧化螺旋金刚烷环氧化物、碱性磷酸酶物、碱性磷酸酶

测量方式简单(速率测量方式简单(速率法)灵敏度较高法)灵敏度较高

非非酶酶促促

吖啶酯、过氧化氢吖啶酯、过氧化氢 灵敏度较高灵敏度较高 试剂成本高、发光时间短测量方式复杂(积试剂成本高、发光时间短测量方式复杂(积分法)需原位进样分法)需原位进样 (In Situ Injector)(In Situ Injector) 仪仪器成本及维护费用较高试剂成本较高器成本及维护费用较高试剂成本较高

时间分辨荧光时间分辨荧光 铕(铕( EuEu )、镝)、镝 (D(Dy)y) 、钐(、钐( SmSm )、)、铽(铽( TbTb )、等络)、等络合物脉冲光源激发合物脉冲光源激发

灵敏度较高、试剂较灵敏度较高、试剂较稳定稳定

测量方式复杂(脉冲激发、间歇式测量、流测量方式复杂(脉冲激发、间歇式测量、流动池)仪器成本及维护费用高环境及样品中动池)仪器成本及维护费用高环境及样品中同类元素可导致本底干扰同类元素可导致本底干扰

电化学发光电化学发光 钌钌 (Ru)(Ru) 的络合物的络合物脉冲电场激发脉冲电场激发

时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光):时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光): Time Resolved FluorescenceTime Resolved Fluorescence (( Time Delayed PhotoluminescenceTime Delayed Photoluminescence )解离增强荧光免疫分析()解离增强荧光免疫分析( DEFIADEFIA ))电化学发光(也称场致发光):电化学发光(也称场致发光): ElectrochemiluminescenceElectrochemiluminescence (( ElectroluminescenceElectroluminescence ))化学发光:化学发光: ChemiluminescenceChemiluminescence

Page 33: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

例如:电化学发光例如:电化学发光 TSHTSH 检测试剂的分析灵敏度为检测试剂的分析灵敏度为 0.005mIU/L0.005mIU/L

第四代化学发光第四代化学发光 TSHTSH 检测试剂的分析灵敏度为检测试剂的分析灵敏度为 0.001mIU/L0.001mIU/L

原因在于抗体的亲合力,而不是检测技术。原因在于抗体的亲合力,而不是检测技术。

筛选抗体、屏蔽干扰,生产工艺、管理筛选抗体、屏蔽干扰,生产工艺、管理水平和技术服务是试剂生产的关键水平和技术服务是试剂生产的关键

这些发光检测技术的灵敏度及线性范这些发光检测技术的灵敏度及线性范围都已经接近了免疫反应的极限。围都已经接近了免疫反应的极限。

灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰免疫反应的因素,而不是检测技术。免疫反应的因素,而不是检测技术。

片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强弱,不仅毫无意义,而且也是荒谬的。弱,不仅毫无意义,而且也是荒谬的。

Page 34: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

发光技术——发光技术——临床免疫分析划时代的进步临床免疫分析划时代的进步

发光技术——发光技术——临床免疫分析划时代的进步临床免疫分析划时代的进步

以以 TSH(TSH( 促甲状腺素促甲状腺素 )) 为例为例

第一代第一代

TSHTSH 检测试剂盒检测试剂盒

普通放免普通放免

功能灵敏度功能灵敏度 1-2mIU/L1-2mIU/L

基本无法测到基本无法测到

正常值下限以下正常值下限以下

的血清的血清 TSHTSH 浓度浓度

对甲亢的诊断意义不大对甲亢的诊断意义不大

固相放免固相放免

功能灵敏度功能灵敏度

0.1-0.2mIU/L0.1-0.2mIU/L

在甲亢的诊断中在甲亢的诊断中

开始发挥作用开始发挥作用

第二代第二代

TSHTSH 检测试剂盒检测试剂盒

发光免疫发光免疫

功能灵敏度功能灵敏度

0.01-0.02mIU/L0.01-0.02mIU/L

成为甲亢诊断的成为甲亢诊断的

首选指标之一首选指标之一

发光免疫发光免疫

功能灵敏度功能灵敏度

0.001-0.002mIU/L 0.001-0.002mIU/L

一系列新的临床现象一系列新的临床现象

改写了垂体甲状腺轴改写了垂体甲状腺轴

的调控状态的调控状态

第三代第三代

TSHTSH 检测试剂盒检测试剂盒第四代第四代

TSHTSH 检测试剂盒检测试剂盒

Page 35: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

目前商品化发光免疫分析产品的几个特点目前商品化发光免疫分析产品的几个特点目前商品化发光免疫分析产品的几个特点目前商品化发光免疫分析产品的几个特点

大多采用全自动工作方式,部分采用微孔板半自动方式大多采用全自动工作方式,部分采用微孔板半自动方式 多数采用磁性或非磁性微粒包被,以增加表面积,使灵敏度进一多数采用磁性或非磁性微粒包被,以增加表面积,使灵敏度进一

步提高,反应时间大大缩短步提高,反应时间大大缩短 使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线 部分产品采用流动池测定方式部分产品采用流动池测定方式 ((适合于闪光型发光或电化学发光适合于闪光型发光或电化学发光 ))

Page 36: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

流动池检测方式示意图流动池检测方式示意图流动池检测方式示意图流动池检测方式示意图

检测器检测器

检测池检测池

负压泵负压泵

废液废液四通阀四通阀

冲洗液冲洗液

样品管样品管

计量泵计量泵

干燥空气干燥空气

原位进样泵原位进样泵

氧化剂氧化剂

Page 37: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

使用商品化发光免疫分析产品使用商品化发光免疫分析产品可能遇到的几个问题可能遇到的几个问题

使用商品化发光免疫分析产品使用商品化发光免疫分析产品可能遇到的几个问题可能遇到的几个问题

与以往方法(放免等)在检测指标的正常值及临床意义上的差异。与以往方法(放免等)在检测指标的正常值及临床意义上的差异。 如:免疫源性胰岛素与真胰岛素、如:免疫源性胰岛素与真胰岛素、 HCGHCG 、性激素等、性激素等 采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较大差异。采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较大差异。 (单抗特异性好,受干扰小,因此测值低)(单抗特异性好,受干扰小,因此测值低) 不同厂家产品测定结果之间一致性差(未与国家标准品比对)。不同厂家产品测定结果之间一致性差(未与国家标准品比对)。 所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完善。所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完善。 部分产品不显示原始数据,无法监控其准确性。部分产品不显示原始数据,无法监控其准确性。

Page 38: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

免疫分析结果的干扰因素免疫分析结果的干扰因素免疫分析结果的干扰因素免疫分析结果的干扰因素

温度温度

氧化剂氧化剂还原剂还原剂 光线光线

磁场磁场

金属离子金属离子

防腐剂防腐剂

杂质杂质

本底物质本底物质

Page 39: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

同一干扰因素对不同检测方法的不同影响同一干扰因素对不同检测方法的不同影响同一干扰因素对不同检测方法的不同影响同一干扰因素对不同检测方法的不同影响

待测物

包被(结合)抗体

放免法

免放或发光法

标记抗原

TBG

离心沉降

洗涤祛除

以甲状腺素结合蛋白(以甲状腺素结合蛋白( TBGTBG )干扰竞争法测定)干扰竞争法测定 T3T3 为例为例

信号↑结果↓

信号↓结果↑

Page 40: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

使用商品化发光免疫分析产品使用商品化发光免疫分析产品必须做好的几个工作必须做好的几个工作

使用商品化发光免疫分析产品使用商品化发光免疫分析产品必须做好的几个工作必须做好的几个工作

在厂家提供的数据基础上,自行建立正常参考值系统。在厂家提供的数据基础上,自行建立正常参考值系统。 明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况 如:小分子激素之间,以及与自身前体或代谢物之如:小分子激素之间,以及与自身前体或代谢物之

间的交叉间的交叉 胰岛素与胰岛素与 C-C-肽、胰岛素原之间的交叉肽、胰岛素原之间的交叉 FSHFSH 、、 LHLH 、、 HCGHCG 之间的交叉。之间的交叉。 充分利用现有国标参考品校正结果(注意防腐剂干扰)充分利用现有国标参考品校正结果(注意防腐剂干扰) (可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得(可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得

到)到) 自行建立多点质控(自行建立多点质控( 2-32-3 点)监控每次实验的准确性。点)监控每次实验的准确性。尽可能避免干扰因素尽可能避免干扰因素 采样:清洁样品管(防止还原剂干扰)、不使用酶抑制剂、及时送检采样:清洁样品管(防止还原剂干扰)、不使用酶抑制剂、及时送检 实验室:恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修实验室:恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修

Page 41: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

人数

含量

正常人群 疾病人群

正常值漏诊 误诊

灰色区域

正常值参考的意义及灰色区域的存在 正常值参考的意义及灰色区域的存在 正常值参考的意义及灰色区域的存在 正常值参考的意义及灰色区域的存在

如果测定结果处于灰色区域(约在正常值上下限以内如果测定结果处于灰色区域(约在正常值上下限以内 20%20% )内,)内,则需要进一步追踪检查。则需要进一步追踪检查。

95%95% 或或 99%99%

-20%-20% +20%+20%

Page 42: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

自身基础数据自身基础数据————最佳“正常参考值”最佳“正常参考值”

自身基础数据自身基础数据————最佳“正常参考值”最佳“正常参考值”

对于患者来讲,最佳的参考值是自己以往的测定数据,即自身对照;因此积累病人的基础数据非常重要。尤其是性激素、生长激素、胰岛素等具有周期性分泌或释放规律的激素。

时间时间

FSHFSH

卵泡期 排卵期 黄体期 月经期卵泡期 排卵期 黄体期 月经期

正常人平均值变化规律正常人平均值变化规律

正常参考值范围正常参考值范围

某一患者变化规律某一患者变化规律(无排卵峰)(无排卵峰)

Page 43: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

保证检验结果准确性的保证检验结果准确性的 对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释

不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断

建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度

检验医师检验医师必须牢记必须牢记

检验医师给临床所提供的一切检验医师给临床所提供的一切服务服务仅限于仅限于

Page 44: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

化验结果与临床不符的原因化验结果与临床不符的原因化验结果与临床不符的原因化验结果与临床不符的原因

由于个体差异或不明干扰因素的存在,总有少数病例的化验结果与其临床表现不符由于个体差异或不明干扰因素的存在,总有少数病例的化验结果与其临床表现不符

操作失误、操作失误、仪器故障、仪器故障、

试剂失活等因素试剂失活等因素

某些夹心一步法试剂某些夹心一步法试剂往往存在前滞效应往往存在前滞效应

药物以及其它药物以及其它基础疾病的干扰基础疾病的干扰

排除这些因素后排除这些因素后重复测定或重复送样重复测定或重复送样

用同试剂盒的校准品用同试剂盒的校准品 AA稀释后再重新测定稀释后再重新测定

及时与临床沟通及时与临床沟通结合说明书综合判断结合说明书综合判断

原因原因 解决解决

Page 45: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

不同实验方法,不同实验方法,或同一方法的不同厂家产品之间,或同一方法的不同厂家产品之间,

其测定结果和临床正常值都会有所差异其测定结果和临床正常值都会有所差异

不同实验室环境和不同人群条件下,不同实验室环境和不同人群条件下,其测定结果和临床正常值也会有所不同其测定结果和临床正常值也会有所不同

在厂家提供的正常参考值基础上在厂家提供的正常参考值基础上建立自己的正常参考系统建立自己的正常参考系统

待测物质的降解待测物质的降解及其与血清蛋白结合状态的改变,及其与血清蛋白结合状态的改变,

某些化验项目的检测结果往往受某些化验项目的检测结果往往受标本存放时间及其贮存条件的影响标本存放时间及其贮存条件的影响

及时采样、送检,及时采样、送检,实验室及时完成化验,实验室及时完成化验,

严格按照试剂盒说明书要求存放严格按照试剂盒说明书要求存放

Page 46: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

常见临床免疫检测指标的意义常见临床免疫检测指标的意义及其限制因素及其限制因素

常见临床免疫检测指标的意义常见临床免疫检测指标的意义及其限制因素及其限制因素

Page 47: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

调节通路

下丘脑

垂体

甲状旁腺

甲状腺

肾上腺

胰腺

卵巢(女性)

睾丸(男性)

激素类型激素类型氨基酸:甲状腺激素氨基酸:甲状腺激素蛋白(肽):甲状旁腺激素、蛋白(肽):甲状旁腺激素、 下丘脑激素、 下丘脑激素、 垂体激素、垂体激素、 降钙素、降钙素、 胎盘激素、胎盘激素、 心肌激素、心肌激素、 胃肠激素胃肠激素类固醇:性激素和皮质激素类固醇:性激素和皮质激素儿茶酚胺:肾上腺素儿茶酚胺:肾上腺素

下丘脑下丘脑 -- 垂体垂体 -- 内分泌轴内分泌轴及其调节关系 及其调节关系

下丘脑下丘脑 -- 垂体垂体 -- 内分泌轴内分泌轴及其调节关系 及其调节关系

长反馈:垂体或下丘脑激素受靶细胞长反馈:垂体或下丘脑激素受靶细胞 分泌激素的反馈调节,以负分泌激素的反馈调节,以负 反馈为主,但排卵时雌激素反馈为主,但排卵时雌激素 为正反馈。为正反馈。短反馈:垂体激素对于下丘脑的反馈短反馈:垂体激素对于下丘脑的反馈 负反馈负反馈超短反馈:下丘或垂体激素直接负反馈超短反馈:下丘或垂体激素直接负反馈 自身的合成和分泌 自身的合成和分泌

Page 48: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

类固醇激素的合成类固醇激素的合成类固醇激素的合成类固醇激素的合成

男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径,男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径,其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。

Page 49: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

甲状腺功能指标评价甲状腺功能指标评价甲状腺功能指标评价甲状腺功能指标评价

甲亢的诊断价值依次为:甲亢的诊断价值依次为: TSH=FT3TSH=FT3>> FT4FT4 >> TT3TT3>>TT4TT4甲低的诊断价值依次为:甲低的诊断价值依次为: FT4=TSHFT4=TSH>> TT4TT4 >> FT3FT3>>TT3TT3

发光法发光法 TSHTSH 、、 FT3 FT3 、 、 FT4FT4 提高了灵敏度,使得其临床意义大于提高了灵敏度,使得其临床意义大于 TT4TT4 和和 TT3TT3

两步法操作时间长灵敏度差准确性差

类似物法操作时间短灵敏度较好准确性较好

反向竞争法(标记抗体)操作时间短灵敏度更好准确性更好

第一代 第二代 第三代

血清 FT3 、 FT4试剂盒的发展(消除结合蛋白对测定的影响)

TGAb TGAb

TMAb =TPOTMAb =TPO 抗体抗体

Page 50: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

其生理作用需要通过生长介素其生理作用需要通过生长介素 (SM)(SM)介导介导 SMSM 也称胰岛素样生长因子也称胰岛素样生长因子 (IGF)(IGF) ,主要在肝脏及多种,主要在肝脏及多种 GHGH靶细胞合靶细胞合

成成 SM-CSM-C 即即 IGF IIGF I ,结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。,结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。

生长激素(生长激素( GHGH))生长激素(生长激素( GHGH))

生长激素紊乱生长激素紊乱 生长激素缺乏症(侏生长激素缺乏症(侏

儒)儒) 巨人症及肢端肥大症巨人症及肢端肥大症

GHGH测定的临床意义测定的临床意义

垂体腺瘤、肾癌、肺癌垂体腺瘤、肾癌、肺癌

运动刺激试验运动刺激试验药物刺激试验药物刺激试验 (胰岛素(胰岛素 --低血糖试验)低血糖试验)GHGH分泌的抑制试验分泌的抑制试验

Page 51: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

胰岛素胰岛素胰岛素胰岛素

免疫源性胰岛素:免疫源性胰岛素: 采用多抗或普通采用多抗或普通

单抗单抗 与胰岛素原和与胰岛素原和 CC肽肽

有交叉有交叉 正常值较高正常值较高糖尿病分型:Ⅰ型空腹胰岛素低,糖尿病分型:Ⅰ型空腹胰岛素低, OGTTOGTT后变化缓慢,甚至无变化;后变化缓慢,甚至无变化;

Ⅱ Ⅱ型空腹高胰岛素,型空腹高胰岛素, OGTTOGTT后胰岛素释放延迟,总量不低。后胰岛素释放延迟,总量不低。肝硬变:空腹胰岛素高于正常肝硬变:空腹胰岛素高于正常 22-- 33倍。 倍。 OGTTOGTT各个时相胰岛素升高。 各个时相胰岛素升高。 胰岛素瘤:静脉注入亮氨酸后血中胰岛素水平明显升高。胰岛素瘤:静脉注入亮氨酸后血中胰岛素水平明显升高。甲亢:初期空腹胰岛素水平高, 甲亢:初期空腹胰岛素水平高, OGTTOGTT与正常人相似;与正常人相似; 长期严重甲亢可导致胰岛长期严重甲亢可导致胰岛 ββ 细胞功能衰竭,发展为糖尿病。细胞功能衰竭,发展为糖尿病。

真胰岛素:真胰岛素: 采用胰岛素原掩蔽性胰岛采用胰岛素原掩蔽性胰岛

素单抗素单抗 与胰岛素原和与胰岛素原和 CC肽无交肽无交

叉叉 正常值较低正常值较低

Page 52: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

C-C-肽肽C-C-肽肽

胰岛素升高胰岛素升高 CC肽正常,外周肽正常,外周血血 CC肽/胰岛素比值降低。肽/胰岛素比值降低。

糖尿病糖尿病

如患者存在胰岛素抗体或用外源如患者存在胰岛素抗体或用外源性胰岛素治疗,则改为测定性胰岛素治疗,则改为测定 CC肽肽

肝硬化肝硬化

生理性升高:禁食及大量活动生理性升高:禁食及大量活动 病理性升高:糖尿病,增高数值病理性升高:糖尿病,增高数值

和糖尿病的严重程度有关 和糖尿病的严重程度有关

胰高血糖素胰高血糖素胰高血糖素胰高血糖素

胰高血糖素静脉注射实验胰高血糖素静脉注射实验

胰高血糖素瘤鉴别胰高血糖素瘤鉴别 评价糖尿病人胰岛功能评价糖尿病人胰岛功能

Page 53: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

胰岛素抗体胰岛素抗体胰岛素抗体胰岛素抗体

GAD GAD 是Ⅰ型糖尿病的关键是Ⅰ型糖尿病的关键始动靶自身抗原始动靶自身抗原

其抗体是Ⅰ型糖尿病及前期其抗体是Ⅰ型糖尿病及前期的重要标志的重要标志

长期用胰岛素的病人可产生长期用胰岛素的病人可产生 未用过胰岛素的未用过胰岛素的 II 型糖尿病人胰型糖尿病人胰

岛素抗体阳性是自身免疫性细胞岛素抗体阳性是自身免疫性细胞损害的标志损害的标志

谷氨酸脱羧酶(谷氨酸脱羧酶( GADGAD )抗体)抗体谷氨酸脱羧酶(谷氨酸脱羧酶( GADGAD )抗体)抗体

与抗胰岛细胞抗体(与抗胰岛细胞抗体( ICAICA )相比,)相比,GAD-AbGAD-Ab阳性率高、持续时间长、测定方法简单,阳性率高、持续时间长、测定方法简单,

有很好的临床预见性,可替代有很好的临床预见性,可替代 ICAICA 。。

Page 54: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

性激素性激素性激素性激素

LHLHFSHFSH

正常婴儿和小孩极微;在青春期前开始分泌;女性绝经后明显升高。正常婴儿和小孩极微;在青春期前开始分泌;女性绝经后明显升高。 成年男性含量比较恒定,老年男性因睾丸功能衰减,含量大大升高。成年男性含量比较恒定,老年男性因睾丸功能衰减,含量大大升高。 垂体瘤切除术后患者垂体瘤切除术后患者 LHLH 和和 FSHFSH减少,估计垂体瘤手术效果有一定价减少,估计垂体瘤手术效果有一定价

值值

性腺发育不良性腺发育不良垂体瘤垂体瘤某些癌症(肺癌)某些癌症(肺癌)慢性肾衰慢性肾衰腺皮质激素治疗后腺皮质激素治疗后异位激素分泌综合征异位激素分泌综合征…………

垂体性性功能衰退垂体性性功能衰退神经性厌食神经性厌食使用性激素使用性激素溢乳闭经征溢乳闭经征青春期延期青春期延期

…………

Page 55: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

催乳素瘤好发于女性催乳素瘤好发于女性表现为表现为 泌乳泌乳 闭经闭经 多毛多毛 痤疮痤疮 不育不育

垂体催乳素垂体催乳素(( hPRLhPRL))

垂体催乳素瘤、月经异常和不孕的病因鉴别,应激刺激可引起垂体催乳素瘤、月经异常和不孕的病因鉴别,应激刺激可引起 hPRLhPRL 的分泌。的分泌。

男性以男性以

性功能减退性功能减退阳萎阳萎不育不育垂体压迫症状为主垂体压迫症状为主偶见泌乳。偶见泌乳。

Page 56: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

睾酮睾酮睾丸间质细胞瘤睾丸间质细胞瘤真性男性性早熟真性男性性早熟女性多毛症女性多毛症皮质醇增多症皮质醇增多症

完全性雄性激素不应综合征完全性雄性激素不应综合征…………

原发生睾丸功能减退原发生睾丸功能减退垂体前叶功能减退垂体前叶功能减退男性不育男性不育高高 hPRLhPRL 血症血症红斑狼疮红斑狼疮骨质疏松骨质疏松慢性肝病慢性肝病慢性肾衰慢性肾衰…………

血液中睾酮血液中睾酮 98%98%与蛋白结合,只有与蛋白结合,只有游离态具有生物活游离态具有生物活性性

女性性早熟女性性早熟男性乳房发育男性乳房发育红斑狼疮红斑狼疮肝硬变肝硬变

子宫内膜癌子宫内膜癌乳腺癌乳腺癌

糖尿病孕妇糖尿病孕妇…………

女性性发育不全女性性发育不全多囊卵巢综合症多囊卵巢综合症葡萄胎葡萄胎妊娠高血压症妊娠高血压症柯兴氏综合症柯兴氏综合症卵巢囊肿卵巢囊肿…………

雌二醇雌二醇

灵敏度要求高灵敏度要求高

Page 57: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

多胎妊娠多胎妊娠17α-17α-羟化酶缺乏症羟化酶缺乏症

子宫内膜腺癌子宫内膜腺癌先兆子痫先兆子痫妊娠高血压妊娠高血压

妊娠合并糖尿病妊娠合并糖尿病胎儿宫内生长迟缓胎儿宫内生长迟缓

卵巢颗粒层膜细胞瘤卵巢颗粒层膜细胞瘤…………

无排卵性子宫功能性出血无排卵性子宫功能性出血闭经闭经不孕不孕早产早产黄体功能不全黄体功能不全异位妊娠异位妊娠…………

孕酮孕酮

血浆中孕酮绝大部分为结合型,极小数为游离型。血浆中孕酮绝大部分为结合型,极小数为游离型。孕酮与黄体及胎盘关系密切,用于监测排卵、黄体功能以及判断妊娠继续。孕酮与黄体及胎盘关系密切,用于监测排卵、黄体功能以及判断妊娠继续。

Page 58: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

小分子性激素测定方法的进展小分子性激素测定方法的进展小分子性激素测定方法的进展小分子性激素测定方法的进展(消除蛋白结合和类似物(消除蛋白结合和类似物 //前体前体 // 代谢产物的干扰)代谢产物的干扰)

直接测定法直接测定法经典方法经典方法

消化样品消化样品↓↓

萃取有机相萃取有机相↓↓

分子筛柱分离各类甾体分子筛柱分离各类甾体↓↓

测定测定

血清直接测定血清直接测定++

高特异性单抗高特异性单抗++

结合蛋白屏蔽技术结合蛋白屏蔽技术

Page 59: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

hCGhCG 游离游离 ββ 亚单位试剂亚单位试剂ββ 亚单位特异且不与完整的亚单位特异且不与完整的 hCGhCG 分子结合的单抗分子结合的单抗

专门测定专门测定 hCGhCG的游离的游离 ββ 亚单位亚单位多用于唐氏综合征的早期筛查。多用于唐氏综合征的早期筛查。

绒毛膜促性腺激素绒毛膜促性腺激素(( hCGhCG))临床意义临床意义

早孕、先兆流产的监护、异位妊娠、葡萄胎、绒癌、精原细胞瘤早孕、先兆流产的监护、异位妊娠、葡萄胎、绒癌、精原细胞瘤肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、肝癌、畸胎瘤、唐氏综合征等。肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、肝癌、畸胎瘤、唐氏综合征等。

普通型试剂普通型试剂多抗多抗

受其它激素干扰受其它激素干扰灵敏度不高灵敏度不高

βhCGβhCG 试剂试剂

ββ亚单位特异单抗亚单位特异单抗特异性和灵敏度较高特异性和灵敏度较高

Page 60: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

分类分类 ::特异性特异性——特定肿瘤时才会显著性升高——特定肿瘤时才会显著性升高

辅助性辅助性——正常情况下也可产生,在发生肿瘤时急剧升高——正常情况下也可产生,在发生肿瘤时急剧升高

肿瘤标志物肿瘤标志物肿瘤标志物肿瘤标志物定义:由肿瘤细胞合成、释放,或者是机体受肿瘤刺激而产生的物质。定义:由肿瘤细胞合成、释放,或者是机体受肿瘤刺激而产生的物质。

用途:高危人群的用途:高危人群的早期筛查早期筛查 肿瘤确诊病人的肿瘤确诊病人的疗效观察疗效观察和和预后分析预后分析。。

性质:胚胎源性、含糖物质、酶、激素,其它蛋白质性质:胚胎源性、含糖物质、酶、激素,其它蛋白质

不能单纯依赖肿瘤标志物确诊肿瘤不能单纯依赖肿瘤标志物确诊肿瘤

Page 61: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

原发性结肠癌(原发性结肠癌( 4545-- 90%90% )) 腺胰、胆管、胃、食道、肺、乳腺胰、胆管、胃、食道、肺、乳

腺癌和泌尿系肿瘤(腺癌和泌尿系肿瘤( 5050-- 70%70%

) ) 结肠癌术后结肠癌术后 11-- 33周内血周内血 CEACEA可可

下降到正常,如持续阳性说明切下降到正常,如持续阳性说明切除不全或转移,提示预后差或有除不全或转移,提示预后差或有复发可能复发可能

乳头状癌时胆汁乳头状癌时胆汁 CEACEA 检测特异性检测特异性100%100%

良性肿瘤、炎症和退行性疾病、良性肿瘤、炎症和退行性疾病、吸烟者可小幅升高吸烟者可小幅升高

原发性肝癌(原发性肝癌( 90%90% )手术疗效)手术疗效和预后判断指标和预后判断指标

其它肿瘤(胃癌、结肠癌) 其它肿瘤(胃癌、结肠癌) 各种胎儿发育缺陷、低氧症、死各种胎儿发育缺陷、低氧症、死

胎胎 肝良性病变(肝炎)轻度增高肝良性病变(肝炎)轻度增高

甲胎蛋白 (甲胎蛋白 ( AFPAFP ))癌胚抗原(癌胚抗原( CEACEA ))

升高升高

唐氏综合症唐氏综合症

降低降低

Page 62: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物 浆液性子宫内膜样癌、透明细胞癌、浆液性子宫内膜样癌、透明细胞癌、

输卵管癌、未分化卵巢癌输卵管癌、未分化卵巢癌 卵巢癌复发早期增高卵巢癌复发早期增高 良性卵巢疾患(良性卵巢疾患( 3%-6%3%-6% )、怀孕期)、怀孕期

前前 33个月、行经期、子宫内膜异位症个月、行经期、子宫内膜异位症、子宫纤维变性、急性输卵管炎、肝、子宫纤维变性、急性输卵管炎、肝病、胸腹膜和心包感染可稍有上升病、胸腹膜和心包感染可稍有上升

CA15-3CA15-3

乳腺癌(乳腺癌( 30-50%30-50% ) 、肺癌、) 、肺癌、肺腺癌及卵巢癌肺腺癌及卵巢癌

乳腺癌术后复发转移乳腺癌术后复发转移 妊娠可引起升高妊娠可引起升高

CA125CA125

胰腺癌和结、直肠癌,肿瘤切除后如胰腺癌和结、直肠癌,肿瘤切除后如再次上升表示复发。再次上升表示复发。

胆囊癌、胆管癌、肝癌、胃癌也升高胆囊癌、胆管癌、肝癌、胃癌也升高 胆道癌胆汁检测灵敏度胆道癌胆汁检测灵敏度 100%100%

胰腺癌胆汁检测灵敏度胰腺癌胆汁检测灵敏度 76.5%,76.5%, 特异特异性性 96.4%96.4%

胰腺炎和黄疸时可呈一过性增高胰腺炎和黄疸时可呈一过性增高

普遍性肿瘤标志相关抗原,不是特指普遍性肿瘤标志相关抗原,不是特指某个器官的肿瘤标志物。某个器官的肿瘤标志物。

胰腺癌、胆囊癌(胰腺癌、胆囊癌( 90%90% );肝癌、);肝癌、胃癌、结直肠癌、卵巢肿瘤胃癌、结直肠癌、卵巢肿瘤

胰腺炎、结肠炎和肺炎时,也会升高胰腺炎、结肠炎和肺炎时,也会升高

CA50CA50

CA199CA199

Page 63: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

是目前小细胞肺癌最敏感最特异的肿是目前小细胞肺癌最敏感最特异的肿瘤标志物之一,阳性率瘤标志物之一,阳性率 65%-100%65%-100%

NSENSE水平与小细胞肺癌转移程度相关水平与小细胞肺癌转移程度相关,与转移的部位无关,与转移的部位无关

治疗前后动态观察血清治疗前后动态观察血清 NSENSE浓度可以浓度可以监测小细胞肺癌的治疗效果。监测小细胞肺癌的治疗效果。

水溶性铁贮存蛋白,具有不同的同水溶性铁贮存蛋白,具有不同的同工铁蛋白图谱。工铁蛋白图谱。

酸性同分异构体铁蛋白增高与白血酸性同分异构体铁蛋白增高与白血病、肺癌、乳腺癌有关病、肺癌、乳腺癌有关

肝癌时如果肝癌时如果 AFPAFP 测定值较低,可测定值较低,可用铁蛋白测定结果作为补充证据用铁蛋白测定结果作为补充证据

色素沉着旺盛、炎症,尤其是肝炎色素沉着旺盛、炎症,尤其是肝炎时,铁蛋白也会升高时,铁蛋白也会升高

神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶(( NSENSE)) 铁蛋白铁蛋白(( FrriFrri ))

Page 64: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

目前国际上强调用目前国际上强调用等克分子反应等克分子反应的的

单克隆抗体检测单克隆抗体检测 PSAPSA ,否则测定值,否则测定值

偏高。但美国很多公司甚至大公司偏高。但美国很多公司甚至大公司

的多种的多种 PSAPSA试剂盒均未采用等克分试剂盒均未采用等克分

子抗体,目前在欧洲已被逐渐排挤子抗体,目前在欧洲已被逐渐排挤

出市场。 出市场。

目前国际上强调用目前国际上强调用等克分子反应等克分子反应的的

单克隆抗体检测单克隆抗体检测 PSAPSA ,否则测定值,否则测定值

偏高。但美国很多公司甚至大公司偏高。但美国很多公司甚至大公司

的多种的多种 PSAPSA试剂盒均未采用等克分试剂盒均未采用等克分

子抗体,目前在欧洲已被逐渐排挤子抗体,目前在欧洲已被逐渐排挤

出市场。 出市场。

前列腺特异抗原前列腺特异抗原 (PSA)(PSA)

前列腺癌筛查和治疗后监控前列腺癌筛查和治疗后监控良性前列腺疾病也可升高良性前列腺疾病也可升高女性乳腺癌患者中可检出女性乳腺癌患者中可检出

FPSA/TPSAFPSA/TPSA 值值25%25% 良性前列腺增生良性前列腺增生前列腺癌前列腺癌00 100%100%

前列腺癌的特异性标志物,少数几个器官前列腺癌的特异性标志物,少数几个器官特异性肿瘤标志物之一特异性肿瘤标志物之一

Page 65: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

地高辛地高辛地高辛地高辛

测定易受地高辛的某些代谢物,以及某些内源性类固醇物质的干扰 测定易受地高辛的某些代谢物,以及某些内源性类固醇物质的干扰

取血应在服药取血应在服药 1010 天以后及最后一次服药天以后及最后一次服药 1616 小时(出现中毒除外)小时(出现中毒除外)

0.80.8 2.02.0 3.03.0 4.04.0 ng/mlng/ml血清浓度血清浓度

治疗剂量治疗剂量>> 80%80% 病人病人心律紊乱心律紊乱

治疗心房纤颤和治疗心房纤颤和心房扑动除外心房扑动除外

高度怀疑中毒高度怀疑中毒

注意特征性注意特征性心率失常和心率失常和心电图改变心电图改变

必须停药必须停药

考虑抢救措施考虑抢救措施

Page 66: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

MoMMoM正常人群中位数的倍数,即正常人群为正常人群中位数的倍数,即正常人群为 1.0MoM1.0MoM

唐氏综合征的实验室诊断唐氏综合征的实验室诊断唐氏综合征的实验室诊断唐氏综合征的实验室诊断

母体血清母体血清 AFPAFP 低于低于 1.0 MoM1.0 MoM (( 0.47-0.86MoM0.47-0.86MoM ,均值,均值 0.65MoM0.65MoM ))

母体血清游离母体血清游离 β-hCGβ-hCG亚单位孕早期显著高于正常亚单位孕早期显著高于正常

妊娠相关血浆蛋白妊娠相关血浆蛋白 A(PAPP-A)A(PAPP-A) 孕早期显著降低孕早期显著降低

PAPP-APAPP-A 和游离和游离 β-hCGβ-hCG 亚单位联合应用亚单位联合应用8-148-14 周时检出率周时检出率 62%62% ,假阳性率为,假阳性率为 5%5% ;孕;孕 15-2215-22 周检出率为周检出率为 59%59%

Page 67: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

19871987 年研究,年研究, 19911991 年申请化学发光液专利(几乎与国外同步)。年申请化学发光液专利(几乎与国外同步)。 19951995 年获得上述专利,开始研制单光子计数式发光仪。年获得上述专利,开始研制单光子计数式发光仪。 19971997 年研制成功第一代微孔板单光子计数式发光分析仪年研制成功第一代微孔板单光子计数式发光分析仪 , , 开发出开发出

部分发光免疫试剂盒。部分发光免疫试剂盒。 20002000 年获得单光子计数器专利,开始发光免疫检测试剂盒的新药年获得单光子计数器专利,开始发光免疫检测试剂盒的新药

申报。申报。 20032003 年获医疗器械和药品生产许可证,正式批量生产。 年获医疗器械和药品生产许可证,正式批量生产。

源德的发展历程源德的发展历程源德的发展历程源德的发展历程

Page 68: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

自主开发出具有国际水平的发光底物自主开发出具有国际水平的发光底物自主开发出具有国际水平的发光底物自主开发出具有国际水平的发光底物

在国际上率先创立的分程增敏、辅助增敏、坪区延长和干在国际上率先创立的分程增敏、辅助增敏、坪区延长和干扰屏蔽技术扰屏蔽技术

使发光灵敏度和线性范围均比同类技术提高一个数量级使发光灵敏度和线性范围均比同类技术提高一个数量级 坪区(信号稳定期)和抗干扰能力也明显提高坪区(信号稳定期)和抗干扰能力也明显提高 因而使试剂盒的稳定性、线性范围超过了国外同类产品因而使试剂盒的稳定性、线性范围超过了国外同类产品 而且还克服了酶促发光固有的工作曲线漂移、低端斜率非而且还克服了酶促发光固有的工作曲线漂移、低端斜率非

线性下降等不足线性下降等不足

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Page 71: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

本底噪音 最低检测限 线性范围 稳定性 本底噪音 最低检测限 线性范围 稳定性 (( RLU/0.1RLU/0.1 秒秒 ) (HRP pg/) (HRP pg/ 样品样品 ) (HRP pg/) (HRP pg/ 样品样品 ) () ( 平均变异系数平均变异系数 )) 某国外产品 某国外产品 27±3.1 0.1±0.01 0.1--204.8 24.427±3.1 0.1±0.01 0.1--204.8 24.4

自行研制 自行研制 7±0.9 0.01±0.01 0.01--819.2 5.57±0.9 0.01±0.01 0.01--819.2 5.5

发光液的主要技术性能比较发光液的主要技术性能比较

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检测大麻标准曲线

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

0 5 10 15 20 25 30 35

pg/ ml

B/ B0

本公司发光液Bi oFi x(美国)

本公司发光底物美国某知名公司发光底物

Page 73: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

国际领先的免疫测定试剂盒国际领先的免疫测定试剂盒国际领先的免疫测定试剂盒国际领先的免疫测定试剂盒

我们攻克了发光液贮存、抗体玻璃化及标记物稳定剂等相关配我们攻克了发光液贮存、抗体玻璃化及标记物稳定剂等相关配套技术,使试剂盒的有效期和稳定性达到了国际水平。套技术,使试剂盒的有效期和稳定性达到了国际水平。

Page 74: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

甲状旁腺功能类、肾上腺功能类、贫血类、维生素类、产前筛查、甲状旁腺功能类、肾上腺功能类、贫血类、维生素类、产前筛查、新生儿疾病筛查、甲型、丙型肝炎类、艾滋病检测… … 新生儿疾病筛查、甲型、丙型肝炎类、艾滋病检测… …

FSHFSH 、、 LHLH 、、 PRLPRL 、、 TT 、、 PP 、、 EE

22 、、 HCGHCG 、、 GH……GH……ASA ASA 、、 AEA AEA 、、 ACA ACA 、、 AOAAOA …… ……

肝炎标志物类肝炎标志物类HBVHBV (定性、定量)……(定性、定量)……

甲状腺激素类甲状腺激素类TT3TT3 、、 TT4TT4 、、 FT3FT3 、、 FT4FT4 、、

TSHTSH 糖尿病类糖尿病类

INSINS 、、 C-PC-P 、、 INS-AbINS-Ab 、、 GAD-GAD-

AbAb 性激素类性激素类

肿瘤标志类肿瘤标志类PSAPSA 、、 FPSAFPSA 、、 CEACEA 、、 AFPAFP 、、 NSENSE 、、

FerrFerr 、、 CA-50CA-50 、、 CA-125CA-125 、、 CA-153CA-153 、、

CA-199CA-199………… 优生优育类优生优育类

TORCHTORCH (( IgMIgM 、、 IgGIgG )) 不育不孕类不育不孕类

八大类近 60个检测项目八大类近 60个检测项目

Page 75: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

率先建立了用发光免疫法直接检测患者血清内率先建立了用发光免疫法直接检测患者血清内 SARSSARS 病毒的技术病毒的技术 为更早期发现为更早期发现 SARSSARS 病例提供了快速、简便、廉价的技术手段。病例提供了快速、简便、廉价的技术手段。 第一个在中国境内注册并正式合法生产的发光免疫检测试剂盒。第一个在中国境内注册并正式合法生产的发光免疫检测试剂盒。

全球第一个 SARS冠状病毒抗原检测试剂盒全球第一个 SARS冠状病毒抗原检测试剂盒

新药证书和药品生产批准文号新药证书和药品生产批准文号新药证书和药品生产批准文号新药证书和药品生产批准文号

Page 76: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

国际领先的发光检测仪制造技术国际领先的发光检测仪制造技术

高线性度光电校正光源,大大提高了单光子计数仪的可靠性和一致性。高线性度光电校正光源,大大提高了单光子计数仪的可靠性和一致性。 我们还在国际上首先提出了双量程自动转换单光子计数器的设计思想我们还在国际上首先提出了双量程自动转换单光子计数器的设计思想 在充分保持高灵敏度特性的基础上大大拓宽了线性范围,达到在充分保持高灵敏度特性的基础上大大拓宽了线性范围,达到 108108 左右左右 而一般单量程计数器的线性范围不超过而一般单量程计数器的线性范围不超过 106106。。

Page 77: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

我们的仪器产品 我们的仪器产品 我们的仪器产品 我们的仪器产品

微孔板发光免疫分析系统微孔板发光免疫分析系统

新型模块化全自动发光免疫分析系统新型模块化全自动发光免疫分析系统

基于发光检测技术的食品农药残留检测设备基于发光检测技术的食品农药残留检测设备

微生物污染现场快速测试产品微生物污染现场快速测试产品

……

Page 78: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

JETLIA-96/2JETLIA-96/2内置电脑自动加液型发光免疫分析仪内置电脑自动加液型发光免疫分析仪

Page 79: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

AUTOLIA-12/48型全自动发光免疫分析仪AUTOLIA-12/48型全自动发光免疫分析仪

Page 80: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

国际上为数不多的在整个发光检测技术平台所有领域内都具备自国际上为数不多的在整个发光检测技术平台所有领域内都具备自

主知识产权的企业之一。主知识产权的企业之一。

被美国《时代》周刊收入的某微型全自动发光免疫检测仪,在其被美国《时代》周刊收入的某微型全自动发光免疫检测仪,在其

技术更新中也曾征询过我们的建议。技术更新中也曾征询过我们的建议。

当选国际生物发光及化学发光学会(当选国际生物发光及化学发光学会( International Society on International Society on

Bioluminescence & Chemiluminescence: ISBCBioluminescence & Chemiluminescence: ISBC )学术理事)学术理事

(( Council Member of Scientific Advisory BoardCouncil Member of Scientific Advisory Board )和申办)和申办 ISIS

BCBC 国际会议为标志,国际会议为标志,

我们已经成为国际化学发光检测技术研究中心之一。我们已经成为国际化学发光检测技术研究中心之一。

SUMMARY SUMMARY SUMMARY SUMMARY

Page 81: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

试剂生产车间主楼试剂生产车间主楼

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一楼接待大厅一楼接待大厅

Page 83: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

二楼商务中心二楼商务中心

Page 84: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

GMP洁净车间GMP洁净车间

Page 85: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

质检中心质检中心

Page 86: 发光免疫检测技术的临床应用 及其应注意的问题

研发中心研发中心

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仪器装配线仪器装配线

局部局部