Upload
mareo
View
66
Download
5
Embed Size (px)
DESCRIPTION
זיהוי מעבדתי של שפעת עופות בבני אדם. ד"ר יעל שלו וצוות מדור דרכי נשימה המעבדה מרכזית לנגיפים תל השומר. סיווג נגיף השפעת לתתי זנים. נגיף השפעת שייך למשפחת שייך ה- Orthomyxoviridae . נגיף השפעת בנוי מחלקיקים( (ssRNA בעלי מעטפת המכילה את הגליקופרוטאינים:נוירואמינידז והמאגלוטינין. - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
זיהוי מעבדתי של שפעת עופות אדם בבני
ד"ר יעל שלו
וצוות מדור דרכי נשימה
המעבדה מרכזית לנגיפים
תל השומר
סיווג נגיף השפעת לתתי זנים.Orthomyxoviridaeנגיף השפעת שייך למשפחת שייך ה- •
בעלי מעטפת המכילה את ssRNA)נגיף השפעת בנוי מחלקיקים)•הגליקופרוטאינים:נוירואמינידז והמאגלוטינין.
באמצעותו נקשר הנגיף אל התא המאכסן כשלב הכנה לחדירותו. המגלוטינין•
פועל על שיירי הסוכר של גליקופרוטאינים שמצויים על פני נוירואמינידז•התא המודבק ובזאת ומקל את שחרורם של צאצאי נגיף בשלים מהתא.
חלבוני מבנה המשמשים לקשירת הנוקלואוקפסיד אל חלבוני מצע•הגליקופרוטאינים ובכך מקנים חוזק למעטפת.
InfluenzaA B C
Togotovirus
H1N1, H3N2 , H1N2
A/Yamagata, A/New Caledonia
Orthomyxoviridae
A/Sydney A/Panama
Structure of Influenza A Virus
אפידמיולוגיה ומניעה
H1-H15N1-N9
.השפעת יכולת לעבור ממאכסן למאכסן למשל מעופות לאדם לנגיף(. 03סין ,03)הולנד H7N7, H5N1ׁדיווחים על הדבקה באדם של קיימים
FluA כ-- )Real Time PCR)Taqmanב במידה ויגיע זן כזה הוא יזוההזמנית ,ובו זהה. לאחר מכן ישלח לקביעת רצף Matrixמשום שאזור ה-HI .בעזרת יאופיין אנטיגנית
וירוס שפעת
DriftShift
חיות אדם
N1-N2 H1-H3
Drift -וShift ותפקידם באפידמיולוגיה
Shift ( אנטיגני נובע בדרך כלל מערבובreassortment של חומר)שונה לגמרי גנטי בין שני תת זנים שונים וכתוצאה נוצר תת זן
אין הגנה.מאורע כזה מלווה בדרך כלל בפנדמיה שכנגדו לאוכלוסיהומשפיע על אוכלוסיה נרחבת בעולם.
H3N2 H1N1
H1N2
Drift אנטיגני נובע מהתרחשות מוטציה נקודתית בהמאגלוטיניןהוירלי שכתוצאה ממנה הנוגדנים שמקנים הגנה לא נקשרים
באותה יעילות לאפיטופים המוטנטים.התרכיב מאבד את ממשיך.Driftההשפעה המגנה ככל שה-
Influenza האנטיגני ופנדמיות ב shiftמקור ה-
בעולםהתפרצויות קודמות של שפעת עופות
H5N1התפרצויות אחרונות של
Standard case definition for reporting of laboratory-confirmed cases of
Influenza A/H5 viral infection established by the WHO
A confirmed case is an individual alive or deceased, in whom laboratory testing demonstrates one or more of the follwing:
-Positive viral culture for Influenza A/H5.
- Positive polymerase chain reaction )PCR( for Influenza A/H5. - Positive immunofluorescence antibody )IFA( test for H5 antigen using H5 monoclonal antibodies. - 4 fold rise in H5-specific antibody titer in paired serum
samples .
פעילות המעבדה באבחון שפעת עופות
בעופות ומקרים ספורדים של H5N1התרחשות מגיפה של •מוות בבני אדם במזרח הרחוק.
בבני אדם.H5מתקבלת החלטה: הכנת המעבדה לאבחנת •
מקורות חומרים למחקר
•cDNA של A/Vietnam/1194/044 העולמי מארגון הבריאות.•RNA של H9,H7,H5 .מהמכון הווטרינרי( BPL על ידי בתה פרופיולקטון )H9,H7,H5וירוסים מומתים •
בדיקת וירולנטיות בביצים מופרות()מהמכון הווטרינרי.
המטרה
ע"יH5בניית יכולת זיהוי דגימות קליניות החשודות ל
Real Time PCR
לאחר ניקוי RT-PCRתוצאות הרצת תוצרי sequenceולפני משלוח ל-
מרקר- 1- מים2 Fluעם פרימרים ל-H5N3 שלRTתוצר - 3
AFlu Aעם פרימרים ל- H7של RT- תוצר 4Flu Aעם פרימרים ל- H9של RT- תוצר 5 Taqmanעל ידי H5N3של RT- תוצר 6
Flu Aפרימרים ל- עםשהופק מווירוס cDNA, שלRT-תוצר 7
H5N1 A/Vietnam 1194/04 עםH5פרימרים ל-
8-RT של וירוס מומתH5N3 פרימרים עםH5ל-
1 2 3 4 5 6 7 8
351 bp
188 bp
סיכום יכולות הזיהוי המעבדתי
PCR Real ב- Flu Aכ-H1,H3,H7,H9זיהוי דגימות קליניות החשודות ל:•Time )Taqman(
מתאים Probe יוזמן Taqman. תזוהה בזמן הקרוב ב H5דגימה החשודה ל •:לפי
Spackman et al J Clin Micro ,2002
עם RT- PCRב Flu A כ-H3,H5,H7,H9,H1זיהוי דגימה החשודה ל •. matrixפריימרים ל
עם פריימרים ספציפיים H5זיהוי ספציפי של דגימה החשודה ל •להמאגלוטינין.
A/Vietnam 1194/04 של cDNAכביקורת חיובית ישמש •
Alignment המאגלוטינין של רצף חומצות אמינו של H5מוירוסים
HK97 -וCkHK97
Class et al 351 ,1998
Alignment של רצף חומצות אמינו של H5מוירוסים המאגלוטינין
HK97 -וCkHK97
Alignment של רצף חומצות אמינו של(N1הנוירואמינידז )
H5N1
H7N1
השוואה של ההומולוגיה של החומצותוהנוקלאוטידים של סגמנטי האמיניות
HK97-וCkHK97
CkHK97 ו- HK97עץ פילוגנטי שמבוסס על הרצף של
Class et al 1998מסקנות מעבודתם של
דומה מאוד מבחינת רצף HK156 /97מבנה הנגיף שבודד מהאדם •החומצות האמיניות של ההמאגלוטינין לנגיף שבודד מעופות
CkHK97 אחד מהם לא אףנמצאו שלושה הבדלים בחומצות אמינו אשר •
receptor binding siteנמצא ב-לא ידוע אם ההבדלים הבודדים הללו הם שאפשרו את המעבר •
הישיר מעופות לבני אדם. קרוב HK156 /97אנליזה של רצף של כל סגמנטי הגנים הראתה ש -•
CkHK97מאוד מבחינה גנטית לנגיף שבודד מעופות
מעופות לאדם במשך H7N7העברה של 2003 בחוות גידול עופות בהולנד התפרצות
•Coopmans et al, Lancet 363 2004 חוות לגידול עופות 6 ארעה התפרצות ב-2003בסוף פברואר •
חוות.255שהתפשטה ל- 28% מליון תרנגולות שהם 30מניעת ההתפשטות על ידי הרג •
מאוכלוסית התרנגולות ומהווה ענף יצוא חשוב.האדם שנפטר היה במקצועו מנתח וטרינרי שביקר בחווה.הוא נפטר •
.Acute respiratory distressמ-בלבד ומספר קטן Cojuctivitis מרבית החולים אובחנו כסובלים מ•
סבלו ממחלה שקשורה בדרכי הנשימה. RT-PCRעל ידי H7N7הוירוס שבודד מהפרשות בעין אובחן כ-•
ובידוד בתרבית.אנליזה של רצף הגנים מבידוד מאדם הראתה שהואקרוב מבחינה גנטית לנגיף שבודד מעופות
ישנו דווח על מחלתם של בני משפחת עובד חווה )האשה הבת •והסבא( העברה מאדם לאדם?
ולסיום אודה ל:
פרופ' אלה מנדלסון
ד"ר זהבה גרוסמן
צוות מדור דרכי נשימה:
, וירג'ינה ליאורה רוברטו
מרים ויפה
ד"ר דניאלה רם
ד"ר מוסא הינדייה
ד"ר לסטר שולמן