22
תתתתת תתתתתת תת תתתת תתתתת תתתת תתת ת"ת תתת תתת תתתתת תתתת תתתת תתתתת תתתתתת תתתתתת תתתתתתת תת תתתתת

זיהוי מעבדתי של שפעת עופות בבני אדם

  • Upload
    mareo

  • View
    66

  • Download
    5

Embed Size (px)

DESCRIPTION

זיהוי מעבדתי של שפעת עופות בבני אדם. ד"ר יעל שלו וצוות מדור דרכי נשימה המעבדה מרכזית לנגיפים תל השומר. סיווג נגיף השפעת לתתי זנים. נגיף השפעת שייך למשפחת שייך ה- Orthomyxoviridae . נגיף השפעת בנוי מחלקיקים( (ssRNA בעלי מעטפת המכילה את הגליקופרוטאינים:נוירואמינידז והמאגלוטינין. - PowerPoint PPT Presentation

Citation preview

Page 1: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

זיהוי מעבדתי של שפעת עופות אדם בבני

ד"ר יעל שלו

וצוות מדור דרכי נשימה

המעבדה מרכזית לנגיפים

תל השומר

Page 2: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

סיווג נגיף השפעת לתתי זנים.Orthomyxoviridaeנגיף השפעת שייך למשפחת שייך ה- •

בעלי מעטפת המכילה את ssRNA)נגיף השפעת בנוי מחלקיקים)•הגליקופרוטאינים:נוירואמינידז והמאגלוטינין.

באמצעותו נקשר הנגיף אל התא המאכסן כשלב הכנה לחדירותו. המגלוטינין•

פועל על שיירי הסוכר של גליקופרוטאינים שמצויים על פני נוירואמינידז•התא המודבק ובזאת ומקל את שחרורם של צאצאי נגיף בשלים מהתא.

חלבוני מבנה המשמשים לקשירת הנוקלואוקפסיד אל חלבוני מצע•הגליקופרוטאינים ובכך מקנים חוזק למעטפת.

InfluenzaA B C

Togotovirus

H1N1, H3N2 , H1N2

A/Yamagata, A/New Caledonia

Orthomyxoviridae

A/Sydney A/Panama

Page 3: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

Structure of Influenza A Virus

Page 4: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

אפידמיולוגיה ומניעה

H1-H15N1-N9

.השפעת יכולת לעבור ממאכסן למאכסן למשל מעופות לאדם לנגיף(. 03סין ,03)הולנד H7N7, H5N1ׁדיווחים על הדבקה באדם של קיימים

FluA כ-- )Real Time PCR)Taqmanב במידה ויגיע זן כזה הוא יזוההזמנית ,ובו זהה. לאחר מכן ישלח לקביעת רצף Matrixמשום שאזור ה-HI .בעזרת יאופיין אנטיגנית

וירוס שפעת

DriftShift

חיות אדם

N1-N2 H1-H3

Page 5: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

Drift -וShift ותפקידם באפידמיולוגיה

Shift ( אנטיגני נובע בדרך כלל מערבובreassortment של חומר)שונה לגמרי גנטי בין שני תת זנים שונים וכתוצאה נוצר תת זן

אין הגנה.מאורע כזה מלווה בדרך כלל בפנדמיה שכנגדו לאוכלוסיהומשפיע על אוכלוסיה נרחבת בעולם.

H3N2 H1N1

H1N2

Drift אנטיגני נובע מהתרחשות מוטציה נקודתית בהמאגלוטיניןהוירלי שכתוצאה ממנה הנוגדנים שמקנים הגנה לא נקשרים

באותה יעילות לאפיטופים המוטנטים.התרכיב מאבד את ממשיך.Driftההשפעה המגנה ככל שה-

Page 6: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

Influenza האנטיגני ופנדמיות ב shiftמקור ה-

Page 7: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

בעולםהתפרצויות קודמות של שפעת עופות

Page 8: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

H5N1התפרצויות אחרונות של

Page 9: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

Standard case definition for reporting of laboratory-confirmed cases of

Influenza A/H5 viral infection established by the WHO

A confirmed case is an individual alive or deceased, in whom laboratory testing demonstrates one or more of the follwing:

-Positive viral culture for Influenza A/H5.

- Positive polymerase chain reaction )PCR( for Influenza A/H5. - Positive immunofluorescence antibody )IFA( test for H5 antigen using H5 monoclonal antibodies. - 4 fold rise in H5-specific antibody titer in paired serum

samples .

Page 10: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

פעילות המעבדה באבחון שפעת עופות

בעופות ומקרים ספורדים של H5N1התרחשות מגיפה של •מוות בבני אדם במזרח הרחוק.

בבני אדם.H5מתקבלת החלטה: הכנת המעבדה לאבחנת •

Page 11: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

מקורות חומרים למחקר

•cDNA של A/Vietnam/1194/044 העולמי מארגון הבריאות.•RNA של H9,H7,H5 .מהמכון הווטרינרי( BPL על ידי בתה פרופיולקטון )H9,H7,H5וירוסים מומתים •

בדיקת וירולנטיות בביצים מופרות()מהמכון הווטרינרי.

Page 12: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

המטרה

ע"יH5בניית יכולת זיהוי דגימות קליניות החשודות ל

Real Time PCR

Page 13: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

לאחר ניקוי RT-PCRתוצאות הרצת תוצרי sequenceולפני משלוח ל-

מרקר- 1- מים2 Fluעם פרימרים ל-H5N3 שלRTתוצר - 3

AFlu Aעם פרימרים ל- H7של RT- תוצר 4Flu Aעם פרימרים ל- H9של RT- תוצר 5 Taqmanעל ידי H5N3של RT- תוצר 6

Flu Aפרימרים ל- עםשהופק מווירוס cDNA, שלRT-תוצר 7

H5N1 A/Vietnam 1194/04 עםH5פרימרים ל-

8-RT של וירוס מומתH5N3 פרימרים עםH5ל-

1 2 3 4 5 6 7 8

351 bp

188 bp

Page 14: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

סיכום יכולות הזיהוי המעבדתי

PCR Real ב- Flu Aכ-H1,H3,H7,H9זיהוי דגימות קליניות החשודות ל:•Time )Taqman(

מתאים Probe יוזמן Taqman. תזוהה בזמן הקרוב ב H5דגימה החשודה ל •:לפי

Spackman et al J Clin Micro ,2002

עם RT- PCRב Flu A כ-H3,H5,H7,H9,H1זיהוי דגימה החשודה ל •. matrixפריימרים ל

עם פריימרים ספציפיים H5זיהוי ספציפי של דגימה החשודה ל •להמאגלוטינין.

A/Vietnam 1194/04 של cDNAכביקורת חיובית ישמש •

Page 15: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

Alignment המאגלוטינין של רצף חומצות אמינו של H5מוירוסים

HK97 -וCkHK97

Class et al 351 ,1998

Page 16: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

Alignment של רצף חומצות אמינו של H5מוירוסים המאגלוטינין

HK97 -וCkHK97

Page 17: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

Alignment של רצף חומצות אמינו של(N1הנוירואמינידז )

H5N1

H7N1

Page 18: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

השוואה של ההומולוגיה של החומצותוהנוקלאוטידים של סגמנטי האמיניות

HK97-וCkHK97

Page 19: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

CkHK97 ו- HK97עץ פילוגנטי שמבוסס על הרצף של

Page 20: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

Class et al 1998מסקנות מעבודתם של

דומה מאוד מבחינת רצף HK156 /97מבנה הנגיף שבודד מהאדם •החומצות האמיניות של ההמאגלוטינין לנגיף שבודד מעופות

CkHK97 אחד מהם לא אףנמצאו שלושה הבדלים בחומצות אמינו אשר •

receptor binding siteנמצא ב-לא ידוע אם ההבדלים הבודדים הללו הם שאפשרו את המעבר •

הישיר מעופות לבני אדם. קרוב HK156 /97אנליזה של רצף של כל סגמנטי הגנים הראתה ש -•

CkHK97מאוד מבחינה גנטית לנגיף שבודד מעופות

Page 21: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

מעופות לאדם במשך H7N7העברה של 2003 בחוות גידול עופות בהולנד התפרצות

•Coopmans et al, Lancet 363 2004 חוות לגידול עופות 6 ארעה התפרצות ב-2003בסוף פברואר •

חוות.255שהתפשטה ל- 28% מליון תרנגולות שהם 30מניעת ההתפשטות על ידי הרג •

מאוכלוסית התרנגולות ומהווה ענף יצוא חשוב.האדם שנפטר היה במקצועו מנתח וטרינרי שביקר בחווה.הוא נפטר •

.Acute respiratory distressמ-בלבד ומספר קטן Cojuctivitis מרבית החולים אובחנו כסובלים מ•

סבלו ממחלה שקשורה בדרכי הנשימה. RT-PCRעל ידי H7N7הוירוס שבודד מהפרשות בעין אובחן כ-•

ובידוד בתרבית.אנליזה של רצף הגנים מבידוד מאדם הראתה שהואקרוב מבחינה גנטית לנגיף שבודד מעופות

ישנו דווח על מחלתם של בני משפחת עובד חווה )האשה הבת •והסבא( העברה מאדם לאדם?

Page 22: זיהוי מעבדתי של שפעת עופות      בבני אדם

ולסיום אודה ל:

פרופ' אלה מנדלסון

ד"ר זהבה גרוסמן

צוות מדור דרכי נשימה:

, וירג'ינה ליאורה רוברטו

מרים ויפה

ד"ר דניאלה רם

ד"ר מוסא הינדייה

ד"ר לסטר שולמן