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苹果提取物 对喉癌细胞增殖的抑制作用

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苹果提取物 对喉癌细胞增殖的抑制作用. 指导老师 : 张静 报告人 :王新建 侯艳华, 沈婷婷, 桑绍明 陈波, 蒋孝明, 李宇博. 研 究 背 景. 喉癌是来源于喉粘膜上皮组织的恶性肿瘤,是最常见的头颈部恶性肿瘤,其发病率目前有明显增长趋势,常用的化疗药物治疗其疗效不太理想。 治疗喉癌 ?????. 研 究 背 景. · 流行病学研究发现苹果的消费与降低心血管疾病以 及某些癌症的危险性有关。 - PowerPoint PPT Presentation

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Page 1: 苹果提取物                                        对喉癌细胞增殖的抑制作用

苹果提取物 苹果提取物 对喉癌细胞 对喉癌细胞

增殖的抑制作用增殖的抑制作用

指导老师 张静 报告人 王新建

侯艳华 沈婷婷 桑绍明 陈波 蒋孝明 李宇博

bull 喉癌是来源于喉粘膜上皮组织的恶性肿瘤是最常见的头颈部恶性肿瘤其发病率目前有明显增长趋势常用的化疗药物治疗其疗效不太理想

bull 治疗喉癌

研 究 背 景

研 究 背 景middot 流行病学研究发现苹果的消费与降低心血管疾病以 及某些癌症的危险性有关

middot美国康奈尔大学研究所 《 Fresh appleinhibits br

east tumor cells in rats the proliferation of induc

ing apoptosis its generation 》

middot郑州大学教授苹果提取物对食管癌细胞 增殖凋亡及相关蛋白表达的影响

人类研究抗喉癌有了新的思路

苹 果 提 取 物

苹 果 提 取 物

middot通过丙酮法萃取苹果由于含有较多酚类物质酪酸丰富的果胶维生素 c等 具有抗氧化和肿瘤化学预防的作用并可抑制某些肿瘤细胞生长

目 的 与 意 义middot 苹果提取物对喉癌 HEP-2 细胞株增殖凋亡的影响 以了解苹果提取物对喉癌细胞生长的抑制作用

middot抗肿瘤作用及其机制的深入研究 对于癌症的预防和治疗具有重要意义

middot本实验将为开发高效低毒廉价 的绿色抗肿瘤新药提供理论基础 对人类抗癌提供了新的思路

参 考 文 献

bull [1] 宋冰冰金立德刘明等 苹果提取物抑制肝癌细胞系生长的实验性研究 [J] 2003 34 ( 1)958-959

bull [2] 韩德民黄志刚张伟等 腺癌病毒注射液治疗喉癌的 I 期临床试验及追踪观察 [J] 中华医学杂志 2003 83 ( 14) 335-338

bull [3] 裴迎新高涵昌衡正昌等 苹果提取物对食管癌细胞增殖凋亡及相关蛋白表达的影响 [J] 卫生 研究 2008 37( 3) 349-353

bull [4] 赵鹏刘明 董新舒等 苹果提取物抑制大肠癌生长的实验研究 中华外科杂志 [J] 2004 42 ( 15 ) 94-95

bull [5] 戚向阳 陈维军 彭光华等 苹果提取物抗辐射效应的研究 营养学报 2003 25( 4) 397-400bull [6] 孙吉凤 张立 张淑芳等叫噪美辛对喉癌细胞 Hep 一 2 增殖与凋亡及 COX 一 2 蛋白表达的影响 长春医学 20086( 3) 10-14

bull [7] 张慧平 李晓明 路秀英 等 蛋白酶体抑制剂联合 pshSTAT3 对喉癌细胞增殖及凋亡的影响 中国癌症杂志 [J] 201020(3)173-177

bull [9] 余晓燕 张潜英 沈 娜 等 TRAIL 联合 5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡 200931 ( 5) 423-425

bull [10] 徐定远 李泽卿 吴 波 等 内皮素系统在喉癌细胞 HEP2 的表达 医学研究生学报 201023 ( 1) 21-24

bull [11] 孙丽丽 郑颖 高虹 等 多西紫杉醇对人喉癌细胞 Hep-2 增殖的抑制作用 中国生物制品学杂志 [J] 201023(7)748-751

bull [12]孙丽丽金宁一李霄 等 凋亡素基因对人喉癌细胞 Hep-2 的抑制效应研究[ J] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007 42( 2) 148-150

bull [13] 郭凤于广久朱立营 等 人参皂甙单体 Rh2 对人喉癌细胞株 Hep-2 抗增殖作用 中国耳鼻咽喉头颈外科 [J] 201017 (10)548-549

bull [14]Vici PViola GBotti Cet alDocetaxel in the adjuvant therapybull of HER-2 positive breast cancer patients [ J] Clin Ter2008159 ( 6) 449-452bull [15] Montaqnt CRovira AAlbanell JThe proteasomea novel target for anticancer therapy [ J] Clin Transl Oncol20068(5)313-317

bull [16]SUN Jie FU Zhimin FANG Changqing et al Induction of apopt osis inost eogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor1048577relat edapoptosis inducing l igand and chemotherapeutic agents[ J] Chinese Medj 2007102

苹果提取物的制备和储存

喉癌细胞的复苏与培养

实验分组( 10个不同组)

MTT 法测定对喉癌细胞增殖抑制作用

线

Hochest 染色荧光显微镜观癌细胞核形态变化

PI染色 流式细胞术分析 细胞周期

记录结果分析讨论

倒置显微镜观察细胞形态

bull 苹果提取物制备最佳抑制浓度的确定

bull 旋转蒸发仪荧光倒置显微镜 流式细胞仪酶联免疫检测仪等各仪器的联系和使用

bull 试剂提供与购买

bull 时间的调配和经费预算

关键问题及可行性

谢谢

苹 果 提 取 物 制 备将新鲜苹果洗净去皮去籽后均匀切成 2mm 薄片

bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

根据 MTT法得到的时间和浓度培养细胞

第 14-15天

取培养细胞做 Hochest和流式 细胞分析

进 度 安 排 表

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bull 喉癌是来源于喉粘膜上皮组织的恶性肿瘤是最常见的头颈部恶性肿瘤其发病率目前有明显增长趋势常用的化疗药物治疗其疗效不太理想

bull 治疗喉癌

研 究 背 景

研 究 背 景middot 流行病学研究发现苹果的消费与降低心血管疾病以 及某些癌症的危险性有关

middot美国康奈尔大学研究所 《 Fresh appleinhibits br

east tumor cells in rats the proliferation of induc

ing apoptosis its generation 》

middot郑州大学教授苹果提取物对食管癌细胞 增殖凋亡及相关蛋白表达的影响

人类研究抗喉癌有了新的思路

苹 果 提 取 物

苹 果 提 取 物

middot通过丙酮法萃取苹果由于含有较多酚类物质酪酸丰富的果胶维生素 c等 具有抗氧化和肿瘤化学预防的作用并可抑制某些肿瘤细胞生长

目 的 与 意 义middot 苹果提取物对喉癌 HEP-2 细胞株增殖凋亡的影响 以了解苹果提取物对喉癌细胞生长的抑制作用

middot抗肿瘤作用及其机制的深入研究 对于癌症的预防和治疗具有重要意义

middot本实验将为开发高效低毒廉价 的绿色抗肿瘤新药提供理论基础 对人类抗癌提供了新的思路

参 考 文 献

bull [1] 宋冰冰金立德刘明等 苹果提取物抑制肝癌细胞系生长的实验性研究 [J] 2003 34 ( 1)958-959

bull [2] 韩德民黄志刚张伟等 腺癌病毒注射液治疗喉癌的 I 期临床试验及追踪观察 [J] 中华医学杂志 2003 83 ( 14) 335-338

bull [3] 裴迎新高涵昌衡正昌等 苹果提取物对食管癌细胞增殖凋亡及相关蛋白表达的影响 [J] 卫生 研究 2008 37( 3) 349-353

bull [4] 赵鹏刘明 董新舒等 苹果提取物抑制大肠癌生长的实验研究 中华外科杂志 [J] 2004 42 ( 15 ) 94-95

bull [5] 戚向阳 陈维军 彭光华等 苹果提取物抗辐射效应的研究 营养学报 2003 25( 4) 397-400bull [6] 孙吉凤 张立 张淑芳等叫噪美辛对喉癌细胞 Hep 一 2 增殖与凋亡及 COX 一 2 蛋白表达的影响 长春医学 20086( 3) 10-14

bull [7] 张慧平 李晓明 路秀英 等 蛋白酶体抑制剂联合 pshSTAT3 对喉癌细胞增殖及凋亡的影响 中国癌症杂志 [J] 201020(3)173-177

bull [9] 余晓燕 张潜英 沈 娜 等 TRAIL 联合 5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡 200931 ( 5) 423-425

bull [10] 徐定远 李泽卿 吴 波 等 内皮素系统在喉癌细胞 HEP2 的表达 医学研究生学报 201023 ( 1) 21-24

bull [11] 孙丽丽 郑颖 高虹 等 多西紫杉醇对人喉癌细胞 Hep-2 增殖的抑制作用 中国生物制品学杂志 [J] 201023(7)748-751

bull [12]孙丽丽金宁一李霄 等 凋亡素基因对人喉癌细胞 Hep-2 的抑制效应研究[ J] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007 42( 2) 148-150

bull [13] 郭凤于广久朱立营 等 人参皂甙单体 Rh2 对人喉癌细胞株 Hep-2 抗增殖作用 中国耳鼻咽喉头颈外科 [J] 201017 (10)548-549

bull [14]Vici PViola GBotti Cet alDocetaxel in the adjuvant therapybull of HER-2 positive breast cancer patients [ J] Clin Ter2008159 ( 6) 449-452bull [15] Montaqnt CRovira AAlbanell JThe proteasomea novel target for anticancer therapy [ J] Clin Transl Oncol20068(5)313-317

bull [16]SUN Jie FU Zhimin FANG Changqing et al Induction of apopt osis inost eogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor1048577relat edapoptosis inducing l igand and chemotherapeutic agents[ J] Chinese Medj 2007102

苹果提取物的制备和储存

喉癌细胞的复苏与培养

实验分组( 10个不同组)

MTT 法测定对喉癌细胞增殖抑制作用

线

Hochest 染色荧光显微镜观癌细胞核形态变化

PI染色 流式细胞术分析 细胞周期

记录结果分析讨论

倒置显微镜观察细胞形态

bull 苹果提取物制备最佳抑制浓度的确定

bull 旋转蒸发仪荧光倒置显微镜 流式细胞仪酶联免疫检测仪等各仪器的联系和使用

bull 试剂提供与购买

bull 时间的调配和经费预算

关键问题及可行性

谢谢

苹 果 提 取 物 制 备将新鲜苹果洗净去皮去籽后均匀切成 2mm 薄片

bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

根据 MTT法得到的时间和浓度培养细胞

第 14-15天

取培养细胞做 Hochest和流式 细胞分析

进 度 安 排 表

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研 究 背 景middot 流行病学研究发现苹果的消费与降低心血管疾病以 及某些癌症的危险性有关

middot美国康奈尔大学研究所 《 Fresh appleinhibits br

east tumor cells in rats the proliferation of induc

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middot郑州大学教授苹果提取物对食管癌细胞 增殖凋亡及相关蛋白表达的影响

人类研究抗喉癌有了新的思路

苹 果 提 取 物

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middot通过丙酮法萃取苹果由于含有较多酚类物质酪酸丰富的果胶维生素 c等 具有抗氧化和肿瘤化学预防的作用并可抑制某些肿瘤细胞生长

目 的 与 意 义middot 苹果提取物对喉癌 HEP-2 细胞株增殖凋亡的影响 以了解苹果提取物对喉癌细胞生长的抑制作用

middot抗肿瘤作用及其机制的深入研究 对于癌症的预防和治疗具有重要意义

middot本实验将为开发高效低毒廉价 的绿色抗肿瘤新药提供理论基础 对人类抗癌提供了新的思路

参 考 文 献

bull [1] 宋冰冰金立德刘明等 苹果提取物抑制肝癌细胞系生长的实验性研究 [J] 2003 34 ( 1)958-959

bull [2] 韩德民黄志刚张伟等 腺癌病毒注射液治疗喉癌的 I 期临床试验及追踪观察 [J] 中华医学杂志 2003 83 ( 14) 335-338

bull [3] 裴迎新高涵昌衡正昌等 苹果提取物对食管癌细胞增殖凋亡及相关蛋白表达的影响 [J] 卫生 研究 2008 37( 3) 349-353

bull [4] 赵鹏刘明 董新舒等 苹果提取物抑制大肠癌生长的实验研究 中华外科杂志 [J] 2004 42 ( 15 ) 94-95

bull [5] 戚向阳 陈维军 彭光华等 苹果提取物抗辐射效应的研究 营养学报 2003 25( 4) 397-400bull [6] 孙吉凤 张立 张淑芳等叫噪美辛对喉癌细胞 Hep 一 2 增殖与凋亡及 COX 一 2 蛋白表达的影响 长春医学 20086( 3) 10-14

bull [7] 张慧平 李晓明 路秀英 等 蛋白酶体抑制剂联合 pshSTAT3 对喉癌细胞增殖及凋亡的影响 中国癌症杂志 [J] 201020(3)173-177

bull [9] 余晓燕 张潜英 沈 娜 等 TRAIL 联合 5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡 200931 ( 5) 423-425

bull [10] 徐定远 李泽卿 吴 波 等 内皮素系统在喉癌细胞 HEP2 的表达 医学研究生学报 201023 ( 1) 21-24

bull [11] 孙丽丽 郑颖 高虹 等 多西紫杉醇对人喉癌细胞 Hep-2 增殖的抑制作用 中国生物制品学杂志 [J] 201023(7)748-751

bull [12]孙丽丽金宁一李霄 等 凋亡素基因对人喉癌细胞 Hep-2 的抑制效应研究[ J] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007 42( 2) 148-150

bull [13] 郭凤于广久朱立营 等 人参皂甙单体 Rh2 对人喉癌细胞株 Hep-2 抗增殖作用 中国耳鼻咽喉头颈外科 [J] 201017 (10)548-549

bull [14]Vici PViola GBotti Cet alDocetaxel in the adjuvant therapybull of HER-2 positive breast cancer patients [ J] Clin Ter2008159 ( 6) 449-452bull [15] Montaqnt CRovira AAlbanell JThe proteasomea novel target for anticancer therapy [ J] Clin Transl Oncol20068(5)313-317

bull [16]SUN Jie FU Zhimin FANG Changqing et al Induction of apopt osis inost eogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor1048577relat edapoptosis inducing l igand and chemotherapeutic agents[ J] Chinese Medj 2007102

苹果提取物的制备和储存

喉癌细胞的复苏与培养

实验分组( 10个不同组)

MTT 法测定对喉癌细胞增殖抑制作用

线

Hochest 染色荧光显微镜观癌细胞核形态变化

PI染色 流式细胞术分析 细胞周期

记录结果分析讨论

倒置显微镜观察细胞形态

bull 苹果提取物制备最佳抑制浓度的确定

bull 旋转蒸发仪荧光倒置显微镜 流式细胞仪酶联免疫检测仪等各仪器的联系和使用

bull 试剂提供与购买

bull 时间的调配和经费预算

关键问题及可行性

谢谢

苹 果 提 取 物 制 备将新鲜苹果洗净去皮去籽后均匀切成 2mm 薄片

bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

根据 MTT法得到的时间和浓度培养细胞

第 14-15天

取培养细胞做 Hochest和流式 细胞分析

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人类研究抗喉癌有了新的思路

苹 果 提 取 物

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middot通过丙酮法萃取苹果由于含有较多酚类物质酪酸丰富的果胶维生素 c等 具有抗氧化和肿瘤化学预防的作用并可抑制某些肿瘤细胞生长

目 的 与 意 义middot 苹果提取物对喉癌 HEP-2 细胞株增殖凋亡的影响 以了解苹果提取物对喉癌细胞生长的抑制作用

middot抗肿瘤作用及其机制的深入研究 对于癌症的预防和治疗具有重要意义

middot本实验将为开发高效低毒廉价 的绿色抗肿瘤新药提供理论基础 对人类抗癌提供了新的思路

参 考 文 献

bull [1] 宋冰冰金立德刘明等 苹果提取物抑制肝癌细胞系生长的实验性研究 [J] 2003 34 ( 1)958-959

bull [2] 韩德民黄志刚张伟等 腺癌病毒注射液治疗喉癌的 I 期临床试验及追踪观察 [J] 中华医学杂志 2003 83 ( 14) 335-338

bull [3] 裴迎新高涵昌衡正昌等 苹果提取物对食管癌细胞增殖凋亡及相关蛋白表达的影响 [J] 卫生 研究 2008 37( 3) 349-353

bull [4] 赵鹏刘明 董新舒等 苹果提取物抑制大肠癌生长的实验研究 中华外科杂志 [J] 2004 42 ( 15 ) 94-95

bull [5] 戚向阳 陈维军 彭光华等 苹果提取物抗辐射效应的研究 营养学报 2003 25( 4) 397-400bull [6] 孙吉凤 张立 张淑芳等叫噪美辛对喉癌细胞 Hep 一 2 增殖与凋亡及 COX 一 2 蛋白表达的影响 长春医学 20086( 3) 10-14

bull [7] 张慧平 李晓明 路秀英 等 蛋白酶体抑制剂联合 pshSTAT3 对喉癌细胞增殖及凋亡的影响 中国癌症杂志 [J] 201020(3)173-177

bull [9] 余晓燕 张潜英 沈 娜 等 TRAIL 联合 5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡 200931 ( 5) 423-425

bull [10] 徐定远 李泽卿 吴 波 等 内皮素系统在喉癌细胞 HEP2 的表达 医学研究生学报 201023 ( 1) 21-24

bull [11] 孙丽丽 郑颖 高虹 等 多西紫杉醇对人喉癌细胞 Hep-2 增殖的抑制作用 中国生物制品学杂志 [J] 201023(7)748-751

bull [12]孙丽丽金宁一李霄 等 凋亡素基因对人喉癌细胞 Hep-2 的抑制效应研究[ J] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007 42( 2) 148-150

bull [13] 郭凤于广久朱立营 等 人参皂甙单体 Rh2 对人喉癌细胞株 Hep-2 抗增殖作用 中国耳鼻咽喉头颈外科 [J] 201017 (10)548-549

bull [14]Vici PViola GBotti Cet alDocetaxel in the adjuvant therapybull of HER-2 positive breast cancer patients [ J] Clin Ter2008159 ( 6) 449-452bull [15] Montaqnt CRovira AAlbanell JThe proteasomea novel target for anticancer therapy [ J] Clin Transl Oncol20068(5)313-317

bull [16]SUN Jie FU Zhimin FANG Changqing et al Induction of apopt osis inost eogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor1048577relat edapoptosis inducing l igand and chemotherapeutic agents[ J] Chinese Medj 2007102

苹果提取物的制备和储存

喉癌细胞的复苏与培养

实验分组( 10个不同组)

MTT 法测定对喉癌细胞增殖抑制作用

线

Hochest 染色荧光显微镜观癌细胞核形态变化

PI染色 流式细胞术分析 细胞周期

记录结果分析讨论

倒置显微镜观察细胞形态

bull 苹果提取物制备最佳抑制浓度的确定

bull 旋转蒸发仪荧光倒置显微镜 流式细胞仪酶联免疫检测仪等各仪器的联系和使用

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谢谢

苹 果 提 取 物 制 备将新鲜苹果洗净去皮去籽后均匀切成 2mm 薄片

bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

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bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

根据 MTT法得到的时间和浓度培养细胞

第 14-15天

取培养细胞做 Hochest和流式 细胞分析

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苹 果 提 取 物

middot通过丙酮法萃取苹果由于含有较多酚类物质酪酸丰富的果胶维生素 c等 具有抗氧化和肿瘤化学预防的作用并可抑制某些肿瘤细胞生长

目 的 与 意 义middot 苹果提取物对喉癌 HEP-2 细胞株增殖凋亡的影响 以了解苹果提取物对喉癌细胞生长的抑制作用

middot抗肿瘤作用及其机制的深入研究 对于癌症的预防和治疗具有重要意义

middot本实验将为开发高效低毒廉价 的绿色抗肿瘤新药提供理论基础 对人类抗癌提供了新的思路

参 考 文 献

bull [1] 宋冰冰金立德刘明等 苹果提取物抑制肝癌细胞系生长的实验性研究 [J] 2003 34 ( 1)958-959

bull [2] 韩德民黄志刚张伟等 腺癌病毒注射液治疗喉癌的 I 期临床试验及追踪观察 [J] 中华医学杂志 2003 83 ( 14) 335-338

bull [3] 裴迎新高涵昌衡正昌等 苹果提取物对食管癌细胞增殖凋亡及相关蛋白表达的影响 [J] 卫生 研究 2008 37( 3) 349-353

bull [4] 赵鹏刘明 董新舒等 苹果提取物抑制大肠癌生长的实验研究 中华外科杂志 [J] 2004 42 ( 15 ) 94-95

bull [5] 戚向阳 陈维军 彭光华等 苹果提取物抗辐射效应的研究 营养学报 2003 25( 4) 397-400bull [6] 孙吉凤 张立 张淑芳等叫噪美辛对喉癌细胞 Hep 一 2 增殖与凋亡及 COX 一 2 蛋白表达的影响 长春医学 20086( 3) 10-14

bull [7] 张慧平 李晓明 路秀英 等 蛋白酶体抑制剂联合 pshSTAT3 对喉癌细胞增殖及凋亡的影响 中国癌症杂志 [J] 201020(3)173-177

bull [9] 余晓燕 张潜英 沈 娜 等 TRAIL 联合 5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡 200931 ( 5) 423-425

bull [10] 徐定远 李泽卿 吴 波 等 内皮素系统在喉癌细胞 HEP2 的表达 医学研究生学报 201023 ( 1) 21-24

bull [11] 孙丽丽 郑颖 高虹 等 多西紫杉醇对人喉癌细胞 Hep-2 增殖的抑制作用 中国生物制品学杂志 [J] 201023(7)748-751

bull [12]孙丽丽金宁一李霄 等 凋亡素基因对人喉癌细胞 Hep-2 的抑制效应研究[ J] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007 42( 2) 148-150

bull [13] 郭凤于广久朱立营 等 人参皂甙单体 Rh2 对人喉癌细胞株 Hep-2 抗增殖作用 中国耳鼻咽喉头颈外科 [J] 201017 (10)548-549

bull [14]Vici PViola GBotti Cet alDocetaxel in the adjuvant therapybull of HER-2 positive breast cancer patients [ J] Clin Ter2008159 ( 6) 449-452bull [15] Montaqnt CRovira AAlbanell JThe proteasomea novel target for anticancer therapy [ J] Clin Transl Oncol20068(5)313-317

bull [16]SUN Jie FU Zhimin FANG Changqing et al Induction of apopt osis inost eogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor1048577relat edapoptosis inducing l igand and chemotherapeutic agents[ J] Chinese Medj 2007102

苹果提取物的制备和储存

喉癌细胞的复苏与培养

实验分组( 10个不同组)

MTT 法测定对喉癌细胞增殖抑制作用

线

Hochest 染色荧光显微镜观癌细胞核形态变化

PI染色 流式细胞术分析 细胞周期

记录结果分析讨论

倒置显微镜观察细胞形态

bull 苹果提取物制备最佳抑制浓度的确定

bull 旋转蒸发仪荧光倒置显微镜 流式细胞仪酶联免疫检测仪等各仪器的联系和使用

bull 试剂提供与购买

bull 时间的调配和经费预算

关键问题及可行性

谢谢

苹 果 提 取 物 制 备将新鲜苹果洗净去皮去籽后均匀切成 2mm 薄片

bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

根据 MTT法得到的时间和浓度培养细胞

第 14-15天

取培养细胞做 Hochest和流式 细胞分析

进 度 安 排 表

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目 的 与 意 义middot 苹果提取物对喉癌 HEP-2 细胞株增殖凋亡的影响 以了解苹果提取物对喉癌细胞生长的抑制作用

middot抗肿瘤作用及其机制的深入研究 对于癌症的预防和治疗具有重要意义

middot本实验将为开发高效低毒廉价 的绿色抗肿瘤新药提供理论基础 对人类抗癌提供了新的思路

参 考 文 献

bull [1] 宋冰冰金立德刘明等 苹果提取物抑制肝癌细胞系生长的实验性研究 [J] 2003 34 ( 1)958-959

bull [2] 韩德民黄志刚张伟等 腺癌病毒注射液治疗喉癌的 I 期临床试验及追踪观察 [J] 中华医学杂志 2003 83 ( 14) 335-338

bull [3] 裴迎新高涵昌衡正昌等 苹果提取物对食管癌细胞增殖凋亡及相关蛋白表达的影响 [J] 卫生 研究 2008 37( 3) 349-353

bull [4] 赵鹏刘明 董新舒等 苹果提取物抑制大肠癌生长的实验研究 中华外科杂志 [J] 2004 42 ( 15 ) 94-95

bull [5] 戚向阳 陈维军 彭光华等 苹果提取物抗辐射效应的研究 营养学报 2003 25( 4) 397-400bull [6] 孙吉凤 张立 张淑芳等叫噪美辛对喉癌细胞 Hep 一 2 增殖与凋亡及 COX 一 2 蛋白表达的影响 长春医学 20086( 3) 10-14

bull [7] 张慧平 李晓明 路秀英 等 蛋白酶体抑制剂联合 pshSTAT3 对喉癌细胞增殖及凋亡的影响 中国癌症杂志 [J] 201020(3)173-177

bull [9] 余晓燕 张潜英 沈 娜 等 TRAIL 联合 5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡 200931 ( 5) 423-425

bull [10] 徐定远 李泽卿 吴 波 等 内皮素系统在喉癌细胞 HEP2 的表达 医学研究生学报 201023 ( 1) 21-24

bull [11] 孙丽丽 郑颖 高虹 等 多西紫杉醇对人喉癌细胞 Hep-2 增殖的抑制作用 中国生物制品学杂志 [J] 201023(7)748-751

bull [12]孙丽丽金宁一李霄 等 凋亡素基因对人喉癌细胞 Hep-2 的抑制效应研究[ J] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007 42( 2) 148-150

bull [13] 郭凤于广久朱立营 等 人参皂甙单体 Rh2 对人喉癌细胞株 Hep-2 抗增殖作用 中国耳鼻咽喉头颈外科 [J] 201017 (10)548-549

bull [14]Vici PViola GBotti Cet alDocetaxel in the adjuvant therapybull of HER-2 positive breast cancer patients [ J] Clin Ter2008159 ( 6) 449-452bull [15] Montaqnt CRovira AAlbanell JThe proteasomea novel target for anticancer therapy [ J] Clin Transl Oncol20068(5)313-317

bull [16]SUN Jie FU Zhimin FANG Changqing et al Induction of apopt osis inost eogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor1048577relat edapoptosis inducing l igand and chemotherapeutic agents[ J] Chinese Medj 2007102

苹果提取物的制备和储存

喉癌细胞的复苏与培养

实验分组( 10个不同组)

MTT 法测定对喉癌细胞增殖抑制作用

线

Hochest 染色荧光显微镜观癌细胞核形态变化

PI染色 流式细胞术分析 细胞周期

记录结果分析讨论

倒置显微镜观察细胞形态

bull 苹果提取物制备最佳抑制浓度的确定

bull 旋转蒸发仪荧光倒置显微镜 流式细胞仪酶联免疫检测仪等各仪器的联系和使用

bull 试剂提供与购买

bull 时间的调配和经费预算

关键问题及可行性

谢谢

苹 果 提 取 物 制 备将新鲜苹果洗净去皮去籽后均匀切成 2mm 薄片

bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

根据 MTT法得到的时间和浓度培养细胞

第 14-15天

取培养细胞做 Hochest和流式 细胞分析

进 度 安 排 表

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参 考 文 献

bull [1] 宋冰冰金立德刘明等 苹果提取物抑制肝癌细胞系生长的实验性研究 [J] 2003 34 ( 1)958-959

bull [2] 韩德民黄志刚张伟等 腺癌病毒注射液治疗喉癌的 I 期临床试验及追踪观察 [J] 中华医学杂志 2003 83 ( 14) 335-338

bull [3] 裴迎新高涵昌衡正昌等 苹果提取物对食管癌细胞增殖凋亡及相关蛋白表达的影响 [J] 卫生 研究 2008 37( 3) 349-353

bull [4] 赵鹏刘明 董新舒等 苹果提取物抑制大肠癌生长的实验研究 中华外科杂志 [J] 2004 42 ( 15 ) 94-95

bull [5] 戚向阳 陈维军 彭光华等 苹果提取物抗辐射效应的研究 营养学报 2003 25( 4) 397-400bull [6] 孙吉凤 张立 张淑芳等叫噪美辛对喉癌细胞 Hep 一 2 增殖与凋亡及 COX 一 2 蛋白表达的影响 长春医学 20086( 3) 10-14

bull [7] 张慧平 李晓明 路秀英 等 蛋白酶体抑制剂联合 pshSTAT3 对喉癌细胞增殖及凋亡的影响 中国癌症杂志 [J] 201020(3)173-177

bull [9] 余晓燕 张潜英 沈 娜 等 TRAIL 联合 5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡 200931 ( 5) 423-425

bull [10] 徐定远 李泽卿 吴 波 等 内皮素系统在喉癌细胞 HEP2 的表达 医学研究生学报 201023 ( 1) 21-24

bull [11] 孙丽丽 郑颖 高虹 等 多西紫杉醇对人喉癌细胞 Hep-2 增殖的抑制作用 中国生物制品学杂志 [J] 201023(7)748-751

bull [12]孙丽丽金宁一李霄 等 凋亡素基因对人喉癌细胞 Hep-2 的抑制效应研究[ J] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007 42( 2) 148-150

bull [13] 郭凤于广久朱立营 等 人参皂甙单体 Rh2 对人喉癌细胞株 Hep-2 抗增殖作用 中国耳鼻咽喉头颈外科 [J] 201017 (10)548-549

bull [14]Vici PViola GBotti Cet alDocetaxel in the adjuvant therapybull of HER-2 positive breast cancer patients [ J] Clin Ter2008159 ( 6) 449-452bull [15] Montaqnt CRovira AAlbanell JThe proteasomea novel target for anticancer therapy [ J] Clin Transl Oncol20068(5)313-317

bull [16]SUN Jie FU Zhimin FANG Changqing et al Induction of apopt osis inost eogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor1048577relat edapoptosis inducing l igand and chemotherapeutic agents[ J] Chinese Medj 2007102

苹果提取物的制备和储存

喉癌细胞的复苏与培养

实验分组( 10个不同组)

MTT 法测定对喉癌细胞增殖抑制作用

线

Hochest 染色荧光显微镜观癌细胞核形态变化

PI染色 流式细胞术分析 细胞周期

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bull 苹果提取物制备最佳抑制浓度的确定

bull 旋转蒸发仪荧光倒置显微镜 流式细胞仪酶联免疫检测仪等各仪器的联系和使用

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关键问题及可行性

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苹 果 提 取 物 制 备将新鲜苹果洗净去皮去籽后均匀切成 2mm 薄片

bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

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喉癌细胞的复苏与培养

实验分组( 10个不同组)

MTT 法测定对喉癌细胞增殖抑制作用

线

Hochest 染色荧光显微镜观癌细胞核形态变化

PI染色 流式细胞术分析 细胞周期

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bull 苹果提取物制备最佳抑制浓度的确定

bull 旋转蒸发仪荧光倒置显微镜 流式细胞仪酶联免疫检测仪等各仪器的联系和使用

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bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

根据 MTT法得到的时间和浓度培养细胞

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苹 果 提 取 物 制 备将新鲜苹果洗净去皮去籽后均匀切成 2mm 薄片

bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

各浓度选择最适浓度和时间第 10-13天

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第 14-15天

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bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

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时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

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时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

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bull 放入带盖的烧瓶中并置于冰块上 以减少由于酶化反应而引起的颜色褐变

bull 100g苹果中加入 200ml 80 丙酮 ( 1 2) 在匀浆器内搅拌 2min

bull 取出匀浆液放入接有真空泵的滤过瓶中 放置定性滤纸 抽滤

bull 收集滤过物置于旋转蒸发器中在 45度 条件下旋转蒸发 45min

bull 样品用去离子水 调节到终体积为 100ml并于 - 80 度 储存

时间 实验项目第 1-2天 细胞培养的准备及苹果提取物的提取第 3-4天 细胞的复苏与传代培养第 6-9天 MTT法分别测 24 48 72 96 小时下

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