ИССЛЕДОВАНИЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ И МЕХАНИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЦИТОСКЕЛЕТА АСТРОЦИТОВ В СРЕДЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МЕТОДОМ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ

Embed Size (px)

Text of ИССЛЕДОВАНИЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ И МЕХАНИЧЕСКИХ СВОЙСТВ...

  • 96 | ActA nAturAe | 3 3 (10) 2011

    57.086.8

    -

    . . 1*, . . 1,2, . . 1, . . 1, . . 2, . . 1 1 . .. , 119991, , , 1, . 122 , 123182, , . , 2*E-mail: yu.efremov@gmail.com 23.05.2011 .

    . - - () () . , -, . , - - . - , . , . - , , , - , . - ; ; - .

    - , - : - , , [1]. - - c , , - , , - [2], - [3] . - - , [2,

    4]. , - [5].

    - () - - [6, 7], [810] [11, 12]. - - . -, , - [9, 13]. - - [14, 15]. - -

  • 3 3 (10) 2011 | ActA nAturAe | 97

    () . - , - . , - , .

    , , -, [16]. 35- - . 2 0.5% - 1 37, . - . 1112-- , , - 2 -. F12 (, ) , , -, 10% .

    - (nGF 7s) 5 /. - . - - [1]. - - () ( ) , [17].

    - - Solver BIO Olympus ( - , ) 100 100 7 3 . , , -, . - - . , . -

    ( - , , -, ) - Veeco MSct-AuHW (Veeco Instruments, c) . - ( ) . , -, ( 14 ) [18]. , - , . , . - [19]. - Im-ageAnalysis ( , ) FemtoScan Online ( , ).

    , - , - [20, 21]. , - ( ), - (23 ), ( ). - - PnP-DB (nanoWorld, ) - Veeco MSct-AuHW (Veeco Instruments, c) . - [22, 23], - , . - , . eF3 ImageAnalysis ( , -), [9, 24].

    - - (DM1, Santa cruz Biotechnology, )

  • 98 | ActA nAturAe | 3 3 (10) 2011

    Alexa 594 (Alexa594 anti-mouse polyclone, Invit-rogen, ). : (GFAP, Ab-cam, ) Alexa 546 (Alexa546 anti-rabbit polyclone, Invitro-gen, ). - -. [17].

    LSM 510 MetA (carl Zeiss, ). - Plan-Apochromat 100 carl Zeiss ( 1.4), -

    514 , 530600 , 164 . 1024 1024 - (85 /).

    - Plan-Apochromat 100 carl Zeiss ( 1.4), 543 , 615700 , - 184 . 1024 1024 (85 /).

    63 carl Zeiss ( 1.4), 514 , 530600 , - 124 .

    . 1. - . - . -. - - . , - - -. - . - - - (dM1 + Alexa 594). - -. , -, - - - .

  • 3 3 (10) 2011 | ActA nAturAe | 99

    1024 1024 (127 /-).

    - - , , - , [10]. - - .

    , 10 . - (. 1), - () -. - , . (. 1), - . - - . [8, 25].

    [26]. , - .

    - , , , - - F- (. 1,). - , - , (. 1). - (. 1) , - . - - (. 1,).

    , , -

    - (. 2). - [13, 27] , , - , .

    - , (. 1,). - - , . , - - . (. 1,,), - , - - . , - (. 1), - [13, 27] - .

    , - - . [5], -

    30

    . 2. - . Anti-GFAP + Alexa 546, , dAPI.

  • 100 | ActA nAturAe | 3 3 (10) 2011

    - - 10 , - 78 . , - . - -, , .

    , - - -, . - - , . [28].

    - - . , (10 20 ) ( 4 4 7 7 ). , - , ( - k1 = 0.02 / k2 = 0.18 /). - - . (. 3)

    1 = 2.2 1.6

    2 = 2.1 1.6 , -

    .

    - (0.369.6 ), . , - 0.02 400 [14], - 1 40 [13]. , - , - / [29], 60 . [11, 30], , .

    , , - (. 4). , - (. 4). (. 4,,). , , , , - . - , - . , , - (. 5), [13]. , - , - . -

    . 3. , PNP-dB, k = 0.02 / () PNP-dB, k = 0.179 / ().

    , ,

    E = 2.21.6 E = 2.11.6

    0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 6

    25

    20

    15

    10

    5

    0

    15

    10

    5

    0

  • 3 3 (10) 2011 | ActA nAturAe | 101

    . 4. . ( ) , - . - , - . . B , , - . , . , -. - , . 2 .

    0 10 20 30 40 50 60

    0 10

    20

    30

    40

    50

    60

    . 5. . A - , - (14 ) . ( ) ( ) - . - . , , (- ), .

    5

    ,

    ,

    ,

    450

    400

    350

    300

    250

    200

    150

    100

    50

    00 2 4 6 8 10 12

  • 102 | ActA nAturAe | 3 3 (10) 2011

    , ~700 700 [31]. , - . , , . (. 3) , - -, .

    , - , - , . , - , - , . - . -

    , - , , - , , . , - -, - . - - . - , - [32].

    -

    20092013 .

    1. Montgomery D. // Vet. Pathol. Online. 1994. V. 31. P. 145167.2. rodriguez J., Olabarria M., chvatal A., Verkhratsky A. // cell

    Death Differ. 2008. V. 16. P. 378385.3. Goczalik I., ulbricht e., Hollborn M., raap M., uhlmann

    S., Weick M., Pannicke t., Wiedemann P., Bringmann A., reichenbach A., et al. // Investig. Ophthalmol. Vis. Sci. 2008. V. 49. P. 45784589.

    4. Maragakis n.J., rothstein J.D. // nat. clin. Pract. neurol. 2006. V. 2. P. 679689.

    5. Dent e.W., Gertler F.B. // neuron. 2003. V. 40. P. 209227.6. engel A., Muller D.J. // nat. Struct. Mol. Biol. 2000. V. 7.

    P. 715718.7. Graham H.K., Hodson n.W., Hoyland J.A., Millward-Sadler

    S.J., Garrod D., Scothern A., Griffiths c.e.M., Watson r.e.B., cox t.r., erler J.t. // Matrix Biol. 2010. V. 29. P. 254260.

    8. Parpura V., Haydon P.G., Henderson e. // J. cell Sci. 1993. V. 104. P. 427432.

    9. rotsch c., radmacher M. // Biophys. J. 2000. V. 78. P. 520535.10. .., .., .., ..,

    .. // . 2011. . 56. . 288303.11. Lu Y.B., Franze K., Seifert G., Steinhuser c., Kirchhoff F.,

    Wolburg H., Guck J., Janmey P., Wei e., Ks J., et al. // Proc. natl. Acad. Sci. uSA. 2006. V. 103. P. 1775917764.

    12. Butt H.J., cappella B., Kappl M. // Surf. Sci. rep. 2005. V. 59. P. 1152.

    13. Yamane Y., Shiga H., Haga H., Kawabata K., Abe K., Ito e. // J. electron Microsc. 2000. V. 49. P. 463471.

    14. Kuznetsova t.G., Starodubtseva M.n., Yegorenkov n.I., chizhikc S.A., Zhdanov r.I. // Micron. 2007. V. 38. P. 824833.

    15. Kirmizis D., Logothetidis S. // Int. J. nanomed. 2010. V. 5. P. 137145.

    16. Moore K., Macsween M., Shoichet M. // tissue eng. 2006. V. 12. P. 267278.

    17. cramer L., Desai A. // Fluorescence Procedures for the Actin and tubulin cytoskeleton in Fixed cells. Protocol at http://mitchison.med.harvard.edu/protocols/gen1.html.

    18. Braet F., Wisse e. // Meth. Mol. Biol. 2004. V. 242. P. 201217.19. Santacroce M., Orsini F., Perego c., Lenardi c., castagna

    M., Mari S.A., Sacchi V.F., Poletti G. // J. Microsc. 2006. V. 223. P. 5765.

    20. costa K.D. // Meth. Mol. Biol. 2006. V. 319. P. 331361.21. .., .., ..,

    .. // . 2009. . 35. . 5461.22. Burnham n., chen X., Hodges c., Matei G.A., thoreson e.J.,

    roberts c.J., Davies M.c., tendler S.J.B. // nanotechnol. 2003. V. 14. P. 16.

    23. Sader J.e., chon J.W.M., Mulvaney P. // rev. Sci. Instrum. 1999. V. 70. P. 39673970.

    24. Sneddon I.n. // Int. J. eng. Sci. 1965. V. 3. P. 4757.25. Mcnally H.A., Borgens r.B. // J. neurocytol. 2004. V. 33.

    P. 251258.26. Yamada K.M., Spooner B.S., Wessells n.K. // Proc. natl.

    Acad. Sci. uSA. 1970. V. 66. P. 12061212.27. Yamane Y., Hatakeyama D., tojima t., Kawabata K., ushiki

    t., Ogura S., Abe K., Ito e. // Jpn. J. Appi. Phys. 1998. V. 37. P. 38493854.

    28. Firouzi M., Sabouni F., Ziaee A.A., taghikhani M. // Iran. Biomed. J. 2004. V. 8. P. 101105.

    29. Mustata M., ritchie K., Mcnally H.A. // J. neurosci. Meth. 2010. V. 186. P. 3541.

    30. Franze K., reichenbach A., Kas J. // Mechanosensitivity of the nervous System/ ed. Kamkin A., Kiseleva I. Dordrecht: Springer netherlands, 2009. V. 2. P. 173-213.

    31. Braet F., rotsch c., Wisse e., radmacher M. // Appl. Phys. A: Materials Sci. & Processing. 1998. V. 66. P. 575578.

    32. George e.B., Glass J.D., Griffin J.W. // J. neurosci. 1995. V. 15. P. 64456452.