View
289
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
1עמוד 6פרק
66פרק פרק
סדר העניינים...סדר העניינים...
2עמוד 6פרק
חלק ראשון: מבוא - תאור התהליך, סוגי חלק ראשון: מבוא - תאור התהליך, סוגי
כרומטוגרפיה ...כרומטוגרפיה ...
חלק שני: תאור כמותי, גימלון חלק שני: תאור כמותי, גימלון
חלק ראשון: מבואחלק ראשון: מבואמטרותמטרות
3עמוד 6פרק
תאור תהליך כרומטוגרפיה בעמוד
תופעת העיכוב
תאור כללי של סוגי כרומטוגרפיה
וחומרי מילוי
ניתוח כרומטוגרמות
תהליך כרומטוגרפיה בעמוד תהליך כרומטוגרפיה בעמודColumn ChromatographyColumn Chromatography
4עמוד 6פרק
פאזה נייחת
Stationary Phase
מריץ
)אלואנט(
עיכובעיכוב
5עמוד 6פרק
מה גורם להבדלים בעיכוב בין חומרים שונים?מה גורם להבדלים בעיכוב בין חומרים שונים?
6עמוד 6פרק
הבדלי גודל
הידרופוביותאינטראקציות
ביולוגיות - ספציפיות עם הפאזה
כימיות - לא ספציפיותהנייחת
אלקטרוסטטיות
ואן-דר-ואלס
שוני בתכונות הפיזיקליות, הכימיות ו/או
הביולוגיות בין מרכיבי תערובת החומרים במרק
תכונות הפאזה הנייחת
המפתח לתכנון כרומטוגרפיה המפתח לתכנון כרומטוגרפיה יעילהיעילה
ניתוח כרומטוגרמותניתוח כרומטוגרמות
7עמוד 6פרק
Time (Volume)
Sig
na
l
Time (Volume)
Sig
na
l
2
2max
max 2
1ttexpss
2
2max
max 2
1VVexpss(6.1)
s - קריאת הגלאי
t - זמן הרצה
V - נפח שנאסף
smax, tmax, Vmax - נפח, זמן, קריאתגלאי בנקודת המקסימום
tmax - סטיית תקן
תאור בעזרת פילוג תאור בעזרת פילוג גאוסיאניגאוסיאני
השבה של מומסהשבה של מומס
8עמוד 6פרק
:tכמות מומס שיצאה עד זמן
x
0
u
max2maxmax
t
0
t
0
2
2max
max
due2
xerf
21tterf1Qst2
dt2
1ttexpQsQydt
2
סה”כ מומס בעמוד: 2maxmax
0 0
2
2max
max Qst2
1dt
2
1ttexpQsQydt
(6.2) 21tterf1R max21
e Reהשבה
(6.3)
כושר הפרדה ודרגת טיהורכושר הפרדה ודרגת טיהור
9עמוד 6פרק
RRssכושר הפרדה - רזולוציה כושר הפרדה - רזולוציה
Rs>1.6שיאים מופרדים
11max,22max,
1max,2max,s *t*t2
ttR
דרגת טיהור דרגת טיהור PPuu
jj,ejmax,
i,eimax,i,u Rs
RsP(6.4)
Time (Volume)
Sig
nal
maxt4 רוחב השיא
סוגי תהליכי כרומטוגרפיהסוגי תהליכי כרומטוגרפיה
10עמוד 6פרק
Gel Filtrationג’ל פילטרציה Gel Permeation Chromatography, GPCSize Exclusion Chromatography, SEC
שינויים בעיכוב שינויים בעיכוב נובעים נובעים
מהבדלי...מהבדלי...
סוג סוג כרומטוגרפיהכרומטוגרפיה
גודל המולקולה
ישומיםישומים
חלבונים, סילוק יונים
פאזה הפוכה
Reveres Phase Chromatography, RPC
אינטראקציות
הידרופוביות
ויטמינים,פפטידים חלבונים,
אנטיביוטיקה
כרומטוגרפיה הידרופובית
Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC
אינטראקציות
הידרופוביות
ויטמינים, חלבונים,
אנטיביוטיקה
)המשך()המשך(סוגי תהליכי כרומטוגרפיה סוגי תהליכי כרומטוגרפיה
11עמוד 6פרק
ספיחהAdsorption Chromatography
שינויים בעיכוב שינויים בעיכוב נובעים נובעים
מהבדלי...מהבדלי...
סוג סוג כרומטוגרפיהכרומטוגרפיה
אינטראקציות
לא-ספציפיות
ישומיםישומים
,DNAחלבונים, RNA
Perfusion Chromatography אינטראקציותשונות
חלבונים
חילוף יונים
Ion Exchange Chromatography, IEC
אינטראקציות חשמליות
חלבונים, חומצות
אורגניות
כרומטוגרפית זיקה
Affinity Chromatographyאינטראקציות
ספציפיות )ביולוגיות(
פפטידים, חלבונים
חומרי מילויחומרי מילויPacking MaterialsPacking Materials
12עמוד 6פרק
(GPCג’ל ) חלקיק נקבובי Perfusion Chromatography
ג’ל - פילטרציהג’ל - פילטרציה
13עמוד 6פרק
Gel FiltrationGel Filtrationג’ל פילטרציה ג’ל פילטרציה Gel Permeation Chromatography, GPCGel Permeation Chromatography, GPC
Size Exclusion Chromatography, SECSize Exclusion Chromatography, SEC
נפוץ לקביעת משקל מולקולרי•
שימוש בדוגמאות כיול•
מתאם שכיח:• bMWln*aV
V
0
עיכוב: הבדלי גודל
Bio-Gel (Polyacrylamid)Sephadex (Dextran)Agarose
Styragel (Polystyren)
כרומטוגרפיה הידרופוביתכרומטוגרפיה הידרופוביתפאזה הפוכה פאזה הפוכה
14עמוד 6פרק
עיכוב: אינטראקציות הידרופוביות
ביו-פולימרים וביוכימיקלים הידרופוביים
אינטראקציות חלשות•
קשורות למצע phenylאו butyl קבוצות •נייח
אלואנט מימי, ריכוז מלח גבוה•
כרומטוגרפיה הידרופובית
Hydrophobic Interaction Hydrophobic Interaction
Chromatography, HICChromatography, HIC
כרומטוגרפית פאזה הפוכה
Reveres Phase Reveres Phase
Chromatography, RPCChromatography, RPC
אינטראקציות חזקות•
• alkanes ( 8-18קשורים למצע נייח פחמנים(
אלואנט אורגני•
חילוף יוניםחילוף יוניםIon-Exchange ChromatographyIon-Exchange Chromatography
15עמוד 6פרק
עיכוב: אינטראקציות חשמליות
חלבונים, חומצות אמינו, חומצות אורגניות
sReABsReBA
-
-
-
-
-
- -
+
+
+
+
+
+
יונים קשורים
Fixed ions
יונים נגדיים
Counter ions
חילוף )הפיך( של יונים נגדיים ביונים בעלי סימן זהה
מהפאזה הניידת
מחליף קטיוני
ם
צעד נוסף לשיפור ההפרדה... צעד נוסף לשיפור ההפרדה...
16עמוד 5פרק
( שינויי בהרכב הממס ( שינויי בהרכב הממס Gradient methodsGradient methods))
- הגדלה הדרגתית של ריכוז מלחמחלף יונים
- שינוי ריכוזי הממיסים כרומטוגרפיות הידרופוביות באלואנט
( הזרקת תוספים ) הזרקת תוספים Displacement Displacement chromatographychromatography))
dextran sulfate
carboxymethyl strach
imminodiacetic acid (IDA)
כרומטוגרפית זרימה רדיאליתכרומטוגרפית זרימה רדיאלית Radial flow chromatographyRadial flow chromatography
17עמוד 5פרק
מריץ
)אלואנט(
זרימה רדיאליתזרימה רדיאלית
18עמוד 5פרק
יתרונות
הקטנת מפל לחץ •
זרימה אחידה •בעמוד
רגישות נמוכה•
לזיהומים מוצקים
הגדלת הספיקה בנפח עמוד נתון )יעילות כלכלית גבוהה יותר(
גימלון כרומטוגרפית זרימה רדיאליתגימלון כרומטוגרפית זרימה רדיאלית
19עמוד 5פרק
אין שינוי בקוטר העמוד
) “הדרך” שעובר הנוזל הזורם במצע הנקבובי(
גימלון לינארי!הגדלת אורך העמוד
הגדלת נפח העמוד, נפח הדוגמא, הספיקה ונפח האלואנט באותו פקטור - בלי שינוי
בזמן ההפרדה
כרומטוגרפיה רציפהכרומטוגרפיה רציפה
20עמוד 5פרק
Annular Chromatography
זמן שהייה
מיקום איסוף התוצר
אין מגבלה על סוג המילוי
עמודי כרומטוגרפיה תעשייתייםעמודי כרומטוגרפיה תעשייתיים
21עמוד 5פרק
זרימה רדיאלית
סיכום חלק ראשוןסיכום חלק ראשון
6פרק 22עמוד
תאור תהליכי כרומטוגרפיה בעמוד
עקרון הפעולה
עיכוב
חומרי מילוי שונים
תאור כמותי של כרומטוגרמות: פילוג גאוסיאני
כלים לחישוב כושר הפרדה, השבה ודרגת טיהור