61

ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

  • Upload
    others

  • View
    2

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà
Page 2: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

اأجن الجسدي" "

ن يعتبر ل اأنسج مزارع فى الجسدي ااجن تك مثدرة مميز من ل ي الك خ ى الحي ل ره تغير ع العمل مسى س ع ين اان ئن تك مل حى ك من ينش الجسدى الجنين .كي ص جسدي خ ء انسج أحد من من بينم النب أعض

تى الجنين تج الزيج ي من الن ر عم يح تت التى التط الت .اإخص

نه يتميز تركي :اأجن تعرف ئى ب طبي ثن أنه يعنى هذا الري المراحل فى ن المبكرة التط ي أحد ف جذرا تعطى الن

ق تعطى اأخرى ع س ه فى ت د ااتج يير من .المض المعم ن ا انه الجنين تعريف فى أيض ال لنسيج متصل يك ب

ئى ع نب ال ره مراحل من مرح أى فى اأ ل . تط

Page 3: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

سي لأجن Kohlenbach (1978)تتي اأجن -1 جي أجن) الزيج تج اأجن هى (تزا من الن

يض ح بحبه مخصب ب .(الزيج من) ل تي غير اأجن -2 جي ا أجن) الزيج ن التى هى (تزا تتك

ي اي طري عن اع تشمل .جسدي خ :آاتي اان

الجسدي اأجن .أ الد أجن . البكرى الت الذكري الخلي أجن . جـ

Page 4: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà
Page 5: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà
Page 6: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

تي جي)اأجن غير الزيج (أجن ا تزا

شئ أجن : الجسدي اأجنأ- ر خلي من ن مى الط ليس (2N) الجرثي من ن أجن هن ، المعمل فى أ الطبيع فى ام الزيج خ احي

ن شرة تتك ء أ أخرى أجن من مب ن مثل) أعض يط (الجزر فى السيي سي من تنش العرضي اأجن ع يض غلف أ الني رجى الب . الخ

الد أجن - ن : البكرى الت يض من تتك داخل من مخصب غير ب

ن البيض نم من اأجن نش اذا . الجنينى الكيس تسمى اخص بدالد شئ اأجن .بيضى بكرى ت عدة الخلي من الن تج يالسمت أ المس ن

الد من الد أجن .بيضى غير بكرى ت يم البكرى الت يمكن ا (N) عء ى اإب ت ع تج النب ره أمكن اذا اأ الن .خضري اكث

ن : الذكري الخلي أجن -ج مي الخلي من اأجن هذه تتك الجرث

دي ن اأح ح لحب المك ح حب من أ ال ضج الغير ال .ن

Page 7: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

جى - ل رف ى التكشف الم درة ع دان ال فى المزارع الجنيني ف

ل الى يعز تجمع نتيج التحضين أ الزراع فترة ط ي ل د الخ لسير نظري عدة ضع هرة هذه لت :الظ

رض نظري .1 راثى ال اة فى تحدث التى لتغيراا إن : ال التعدد مثل النعى م المجم س م كر دة كذل ل ص أ الزي دي غير الن فى الع

م أعداد س م عف كذل الكر م تض س م ان المحتمل من الكرن هرة هذه راء تك ن التغيير هذا . الظ ه فى يك يمكن ا احد اتج

عه . ارجرض نظري .2 جى ال ل سي نى ااتزان فى التغير : ال رم ي داخل ال قد الخ

دى د الى ي درة هذه ف ى ال ا بعض فى . التكشف ع يمكن الحدة درة استع ى ال فى المركب بعض فى التغير طري عن التكشف عسط دة يمكن أيض . الغذائى ال درة ت استع ف طري عن ال %4-1 اض

ح من سط الى النشط ال لى الغذائى ال طري عن أ اأكسين من الخم ض حرارة بدرج الخلي مع . منخ

Page 8: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

رض نظري .3 فسى ال ى : التن صل يحت تى المن ى النب ع، التجمع من العديد ي ي كمي لكن الخ درةا هى من ق لى ين ع درة ت يمت ا الكثير اأجن تك ء ، ال ى بن ع

رض فسى ال ن الخلي بين التن ع ف درة غير الخلي مجم الى ين ع ف اأجن تك افر عند النم فى فرصت تجد س ت

ف سب الظر .ل المنن اذا لكن ى المزارع هذه ك ى تحت درة الخلي بعض ع ال

ى ين ع د التى أجن تك ثير نتيج قدرت ت بى الت خلي الس لدرة غير ى ال ين ع دة يمكن ، اأجن تك درة اع ى ال ع

ى فى التغير طري عن المزرع هذه الى التكشف سط محت الى الغذائى خلي تسمح طري ب درة ل ى ال النم التكشف ع

ر ين التط . اأجن تك

Page 9: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ج اأجن الجسدي انتفظ تحسين فى الجسدي لأجن العظمى لأهمي نظرا ى المح ع

، السلا تي ن النب دا هن ف هذه عن المزيد ل يبذل كبيرا مجهرة ل الظ ى الحص اع من جسدي اجن ع تي اان تستج ل التى النب

د .بعد حظ ل ت ان ل ئل تتبع التى النب ني يميالخ الع ذنج البع بدرج تستجي ى تزرع عندم مرت ل اجل من مغذي بيئ ع الحص

ى تي اجزاء استخدم كم .جسدي اجن ع ل اجل من مخت نب الحصى ، من جسدي اجن ع را الس ر، ، اا ، البراع الجذ الزهري

، سبر تى الجنين ااند ضج الزيج ضج، غير الن ، نسيج الن سي النيدرة من اجزاء .الب

Page 10: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

تي ااجزاء هذه جميع ى النب ى تحت ، مثل مرستيمي خلي ع مبي الكر، بداي ن البراع الجذ ، الخلي بج ذا المتكش ى ب ال يب ئم الس قى ة اصل ع ن هل الجسدى الجنين نش ي من يتك نتيج متميزة متكش خي هذه ان من قدرة ل الخ ين فى ك مل، نب تك ي من ينش انه ا ك خ

بعد؟؟ تكشفت ل مرستيميم نه عم لطري ام الجسدي ااجن تنتج قد ف شرة ب الغير ا المب

شرة لى الطري فى . مب ن اا شرة جسدي اجن يتك المنزرع الجزء من مبى س ع ، البيئ ن شرة الغير الطري فى ام المغذي ن مب لس يتك ا ك ى أ ع

تى الجزء لس هذه من المنزرع، النب ل عندم الجسدي ااجن تنتج الك الى تنن ينشط تركي ذا مغذي بيئ .ااجن هذه تك

ل يمكن يير هن ليس انه ال اع بين محددة مع ء اان تي اأعض النباحد النب داخل اسطت التى ال قع يمكن ب خلل من جسدي اجن تنتج ان التشرة الطري شرة غير ا المب .المبد ء ان جد ف تي ااعض نب المخت النب احد ل ف ال الطري فى تخت، ااجن تنتج ب التى بكل الجسدي ااجن تنتج ان يحدث قد الجسدي

تين ى الطري س ع تى العض ن ى المنزرع النب طري هن .مغذي بيئ عل في يمكن اخرى ى الحص اسط ذل جسدي اجن ع زراع ب

بلس ت .البر

Page 11: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ج اأجن الجسدي طر انت

شرة الغير الطري .1 مبر م بذ صل – نم انب - مع تى المن ي من النب ،الجنيني السر من قطع ى تزرع - الجذ ى مغذي بيئ ع ى املح تحت نسب علي جين من ع ز، تمد التى MS بيئ مثل النيتر لسكر ل، ب ستي اين مي

حديد مصدر كينين، ، ل بيع عدة بعد - اكسين سيت ن اس لس يتك ى الك عتى الجزء ى المنزرع النب الخلي مع إعداد يجرى - المغذي البيئ عاسط ل ب لس من قطع ن ن الك ى المتك ئ بيئ ع س ل س تركي ن

ب البيئ ى لكن الس ض تركيز تحت البيئ ترج ،ااكسين من منخيل ل لتس ص ين الخلي ان ى المع تك خلي حث يراد عندم - الخ

ى المع ين ع ل اجن تك س ل مغذي بيئ الى الخلي هذه تن نب التركي لي لكن الس دة من خ بيئ البيئ هذه تسمى ااكسين مر .الحث ى الشكل مرح فى الجسدي اأجن بعض يظ خلل الكر

ع ل اأسب ل من اا ن اأجن ان غير الحث، بيئ الى الن ن المتك تكري مراحل ذا .مخت تط

Page 12: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

د م ان جد ل ل الجزر خلي مع ز بمح لر1 بتركيز سكر مل الخلي نسب يزيد ن الى المتح ل كذا ،الجنينى التك ين من ي التب

ى تج اأجن بين المرح ء استخد .الن م دة متعددة طر الع نسب لزيى الجسدي اأجن ى التى الخلي فصل اجرى الطر بعض ف تحتا ري فج ى ا التى الخلي من (جنيني غير خلي) عص ا تحت فج

د ..(جنيني خلي) حظ ل دة ل ن اأجن نسب زي زراع عند المتكى ا التى الخلي ى تحت ا ع لي مغذي بيئ فى فج .اأكسين من خ

ين نسب ق جد كم ى التب تج اأجن بين المرح .الن

بى الشكل الى الجنين يصل عندم ل من يصبح ال ط تحديد الس المنلجنين ر التى ب ر تعطى التى اأخرى س الى تتط .جذ

Page 13: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

اع بعض فى تي اأن فيل خلي طب فصل اجرى النب الميزنيك ى مغذي بيئ فى زراعت ميك كينين، اكسين تحت سيت

س نتيج زى للن نه المتعدد الميت ن ف التركيب من عديد يتكي به التى الخ لس تش ل عندم .الك ي التراكي هذه تن الخ

ى ا بيئ الى ى ا اكسين تحت نه ضعيف اكسين تحت ن ف يكن يعتبر ، جسدي اجن فيل خلي من الجسدي اأجن تك الميزر من م اأم ل يمكن ان حيث ال عمر ذا الخلي هذه ان ال

جي ص ل احد ل ب فسي ذج ذا خلي أن متش نم .احد

Page 14: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ن افتراض هن ي ب دة الجنيني الخ ج لس الم لك ى ب كن تب ليس سدرة ل ى الم س ع زى اان ع تركيز فى الميت دة من مرت فى اأكسين م

ء المغذي البيئ ى بن قع من هذا ع ن اا المت لس من جسدي أجن يتك كى منزرع لى تركيز ع اع بعض فى لكن .اأكسين من ع تي اأن النبن د عدد تك ع التركيزا فى الجسدي اأجن من محد من المرت

سر اأكسين، ن قد الجنيني المرستيمي الخلي بعض أن هذا ي ل يكدرة ى الم ر ع ثير من ال ى اأكسين المثبط الت س ع لى اان لت ب

س ن تن ين ) جسدي اجن مك .(نشط غير مرتبط اكسين تك

ج ي بخر ثير من الخ ن المثبط الت س فى تبدأ ف ي تدخل اان فى الخمج ين ذ ظي برن ا ش لس تجديد ا ني منه، نش التى الك ين ث تك .الجسدى الجنين

Page 15: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ل تجرب فى حص ى ل مل نب ع جسدى جنين من كل اجرى ى مغذي بيئ الى الجنين ن ين تحت جبري

حظ .ادينين بنزيل دى البيئ هذه ان ل تزهير الى تى يدل هذا . الجسدى الجنين تدخل قد اأجن هذه ان ع

ر ين التزهير ط ء تك ثري اأعض ن التك ر بد المرر لط هرة هذه .الخضرى ب ى تبرهن الظ ي ان ع الختي من كبيرة قدرا ل يزال م النب زال ك تكتشف ل م

.بعد

Page 16: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

شرة. 2 الطري المب

ى منزرع زهري براع ى مغذي بيئ ع ى تحت ئل %10 ع سز لبن ند، ج جيرا 1 ال ل م ن . اسيد استي اند لس يتك ا ك ا

ى ي ع ضع تمثل التى ن طع م ى ال ن هذا ي جسدي اجن تكى لس ع ن الك ى الجسدي ااجن نبأ .المتك س ع البيئ ن

ين المغذي درة، لتك ن ب ى يتك درة هذه س ع من جديد جيل الب ااجن ان التشريحي الدراس بعض تشير .الجسدي ااجن

ن الجسدي د متكش خلي من تتك ظي يع خلي لتصبح تاع بعض هن ان غير ،جنيني تي اان اثب للن في يت ل النب .النظري هذه

Page 17: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

(H) Somatic embryogenesis of Coffea canephora.

Page 18: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Figure: Various stages of direct somatic embryogenesis of Nicotiana tabacum. (A)

Fused globular stage embryos;(B) early heart shape stage; (C) heart shaped stage; (D)

early torpedo stage; (E) torpedo stage; (F) cotyledonary stage. Pictures were taken by

Nikon I X -SMZ1500.

Page 19: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

(a) Initiation of Somatic embryos on 3.0 mg/l 2, 4-D.

(b) High frequency of Somatic embryos on 3.0 mg/l 2, 4-D + 1.0 mg/l BAP.

(c) Globular Somatic embryos.

(d) Heart shaped Somatic embryos.

(e) Torpedo stage Somatic embryos.

Figure: Different stages of somatic embryos of Sesamum indicum L

Page 20: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Cut usual of explant leaf

avoiding midvein and edges.

Page 21: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Glass bottle with plastic tap where direct

embryogenesis is induced

Page 22: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Direct somatic embryos obtained after 6 wk

embryogenesis

Page 23: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Direct somatic embryos obtained after 6 wk

embryogenesis

Page 24: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

A cotyledonary somatic embryo

Page 25: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

A cotyledonary somatic embryo

Page 26: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Different stages of embryo germination

Page 27: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Plantlet from somatic embryo after 25 wk.

Page 28: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

را في استخدم تجرب فى را العمر حديث أ عمرا أقد أرن ب لم ين ااستج عدى الجزء من الجسدي ااجن لتك الجزء ال

را اطراف ان جد الطرفى ن الحديث اا ي يتك جسدي اجن علطري شرة ب رن المب رق م ل نتذكر ان بن يجدر هن .عمرا ااقد ب

عدى الجزء ان رق من ال ى ال الجزء ام مرستيمي خلي يحتنه الطرفى ى ف ى يحت ذا ،متكش خلي ع ن ل المرستيمي الخلي ف

درة ل ى الم س ع ن اان لس تتك ى الزراع عند الك مغذي بيئ عنه المتكش الخلي ام د ف ظي يع ل بذل ت جسدي أجن الى تتح

شرة ذا مب ن ل ري مرحال ف رق لخلي التط دف تزرع التى ال بل ى الحص ص اهمي ذا تعتبر جسدي اجن ع الطري تحديد فى خ

. الجسدي ااجن ب ينتج التى

Page 29: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

بلس. 3 ت ج ااجن الجسدي من البر انتل يمكن ى الحص بلس زراع من جسدي اجن ع ت مغذي بيئ فى البر

، ئ د س تي اجزاء استخدم ل ر قطع مثل الجزر نب من مخت نب ،الجذى المع ر من المحضر الخ دف اأعن الجذ ل ب ى الحص ع

بلس ت ره الذى البر .جسدي اجن يعطى بدا يجرى بلس فصل ا ت ى البر ى ث الخ ستخدا ين تر ب يجمع ف

بلس ت ستخدا البر ز ب ضع مركزى طرد ج ضغط ذا مغذي بيئ فى يزى س اسم ل .من زى الضغط ي ل استمرار مع تدريجي ااسم ن

بلس ت حظ قد ..البر بلس شكل فى التغيير ان ل ت له حجمه البرين علق ى الجدار بتك حظ كم الجديد، الخ اع معظ فى ان ل تي اان النبنه ل يحدث ف س ا ى ان الى بعد خ ى الزراع من اي خمس ح بيئ ع

، س هذا يت مغذي م من عديد اان س عديد تركي من ينتج التى اانن منه الخلي . الجسدى الجنين يتك

Page 30: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Freshly isolated mesophyll protoplasts of

Echinacea purpurea

Page 31: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

A dividing protoplast-derived cell

after 6 d

Page 32: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Second and third cell division of

protoplast

Page 33: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Protoplast-derived colony after 6 wk of culture

Page 34: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Potato leaf protoplasts immediately after

digestion of cell walls

Page 35: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Close up of protoplasts - green discs are

chloroplasts

Page 36: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Somatic Embryogenesis

• Donor plant and explants

Page 37: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

• Sterilization

• Co-cultivation

Somatic Embryogenesis

Page 38: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Induction

Somatic Embryogenesis

Page 39: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Embryo Development

Somatic Embryogenesis

Page 40: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Germination

Somatic Embryogenesis

Page 41: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Plant Development

Somatic Embryogenesis

Page 42: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ين اأجن الجسدي ثرة فى تك امل الم الع

ن .2 .المغذي البيئ تركي .1 رم . الجسدي ااجن مثبط .3 .ال

المغذي البيئ تركي .1

مي الملحظ بعض ع من كل اهمي الى تشير الع جين ن النيترف ، البيئ الى المض ن المغذي سي اي ت ى الب ن ع .الجسدي ااجن تك

د جين ج رة فى النيتر ن ص ني اي ين اهمي ذا ام ااجن لتكن اهمي الى الدراس تشير .الجسدي ني اي ثير فى اام ى الت الجين عراثي ره التى ال ثر بد ل فى ت ي تح مج الى الخ ين الجنينى البرن تكن .جسدى جنين ن النترا اي ر له يك سى د ر فى اس . الجسدى الجنين تط

Page 43: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

م نه عم ل يمكن ف د ان ال جين ج رة فى النيتر ني ص فى اميسين، أ المغذي البيئ مين، الج ت راجين اأرجنين الج ى تعمل اأسب ع

ن تنشيط ى .الجسدي اأجن تك ى المحت سي من الخ ت كبيرة أهمي له البن فى ى الجنينى، التك ر هذه ف ن جد التج يل عدد تك الجسدي اأجن من ق

سي نترا يزال عندم ت ل مع المغذي البيئ من الب ى استعم معتدل مستني نترا من د ..اام دة جد ل ن ااجن زي ف عندم المتك س يض ف

سي ت فى بنسب الب سي نترا تك ت ن يثبط ،الب عندم الجسدي اأجن تكس استخد دي ف اهمي الى يشير بلش هذا .. المغذي البيئ فى الصن سي اي ت ن فى الب .الجسدي اأجن تك

Page 44: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

هيدرا مصدر ثر الكرب ن فى ي .الجسدي ااجن تكز رة ه السكر ئع الص ، البيئ فى ااستخدا الش المغذي

اع بعض ان غير تي اأن دة يمكن النب د من ااست جهيدرا رة فى الكرب ز، ص ك ز، ج ز، فركت ن ز، م لت م

ز د .. رافين ى التمثيل بين علق هن ان يعت الحيدة ل لم سيت اين هيدرا مي دة الكرب ج البيئ فى الم

، ز ان حيث المغذي ك ز الج جدين الجلكت لبيئ الم بدة هم المغذي لي الم ى التمثيل فى تدخل التى اا الحي

ين دة لتك ل م سيت اين ع التى مي را ت ين فى د التك . الجنينى

Page 45: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ن. 2 رم الل ان الى الدراس تشير ي تح يستدعى جسدى جنين الى الخي بعض تنشيط ى ليالتمث عم ض تسب التى الحي ى فى انخ مست

ى ااكسين ذا الداخ ى الخلي تحث ب ل ع ان جد .الجنينى التحلس درة له الجنينى الك ى الم ص ع ى ااكسين من التخ الداخاسط طه ب راتي بحمض ارتب ي تثبيط كذا ااسب ع ااكسين فاسط دكسين، ب ذا البير فظ يمكن ب ى المح ى ع اامثل المست

ى للكسين د .الداخ كينين ان يعت ثير ل الجبرلين السيت فى تين اء الجسدي ااجن تك ى س ى ع ل مست ي تح مج الى الخ البرن

ر ا الجنينى ي تط ضج جنين الى الجنيني الخ . ن

Page 46: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

مثبطا ااجن الجسدي. 3

ى المع ا اانسج زراع تكرار عند• دف الخ فظ ب يه المح نه ع فل ن الجسدي ااجن عدد تدريجي ي بذاته هذا ..زراعته تكرار مع المتك

اد بعض هن ان الى يشير ن المثبط الم تك فى تتراك التى الجنينى لل المغذي البيئ نه ذل اثب .الجسدي ااجن من ت ف اجرى ف اضح تى ال بيئ النشط النب ص يحدث ا انه جد المغذي ل عدد فى نن ااجن دة زراع تكرار مع المتك تي الم دم النب هذا ..العمر فى تد الى يشير اد بعض ج اسط تنتج التى المثبط الم تي الخلي ب النب

اسط تمتص ح ب تى ال ف النب ثر ا بذل المغذي البيئ الى المض تى ن ع الجسدي ااجن تك

Page 47: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ي لأجن الجسدي التطبي العم

ر السلا الخضري. 1 .إكث

عي. 2 ر صن ج بذ .انت

بلس لتجديد . 3 ت بر اأجن كمصدر ل س ل استخدا الكت . النب

راثى. 4 ل ال .التح

ي. 5 ن اتج الث ن ى ل ء الحي .البن

Page 48: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ي. 1 ل لساا ك ر .أ تي ااجن اكث دة طري عن الزيج ين اع الجسدي ااجن تك

ل فى ال قدرة ي ف صل الص تى كمن ثير تح نب ى ااكسين ت ين ع تكصل لكل جنين209 الجسدي ااجن تى (مستل )من جين طري عن يمكن .نب التل راثي الص هذه ن لي ال دة الع ل هذا مثل .المنزرع السلا الى الج الن

راثى ع ان يمكن ال را ي م د ي فى ه راثى التحسين عم صيل ال مح ي ل الحني .البست

ج . اع فى جسدي سلا انت الشجري اانن ااجن شرة المتك رجي البشرة خلي من مب ن الخ ث تك ن راثي متم تكلسلل يعرف م تج ااجن بينم .الخضري ب شرة غير الطر عن الن يمكن المب

ن ان لي جسدي سلا تك ين ع راثى التب ي ااجن .ال سي م مثل الني اللي المرستيمي س من خ ير ج استخدام طري عن يمكن ال لي سلل انت خ

س من ير ص ال ر فى خ الح اشج ر اجل من .الم الخضري السلا اكثاع ن الشجري للن خلي الجسدي ااجن ف ي ل سي عظيم فرص تعطى قد النيين ت لتك ي نب ي ق درا مس ب ن ل ء من المتك .ااب

Page 49: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

عي . 2 ر صن ج بذ انت

رة فى الجسدي ااجن ضع طري عن ا ص زراعت كبسشرة ل فى مب س يعرف م تح الح ر ب عي البذ .الصنر عي البذ ى هذه الصن ى تحت ف جنين ع اسط مغ غلف ب

رة هى اقى يل نظ عن عب ليف ق ج ذى التك ل انت فى .عل هذه ن الح ج ف ر محل استخدام الجسدي ااجن انت البذ

ي ر استخدا الح ي البذ ي ج فى الح .الجسدي ااجن انتي دي هن العم ج طري عن هبحت اقتص ااجن هذه انتي كمي من كبيرة بإعداد الجسدي ر من ق ي البذ ي التى الح

.اخرى أغراض تستخد ان يمكن

Page 50: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ف عي ل تع ي ج عن ع بأن لص تج جس ني خا من تي انسج ع ت ه ج ل ع

ه ي ح تج ص ى اك فى لاس مائ ل ل عج عي ل ت .ل ي ج من لص مح جس

ثل قى بغاف ، غاف ي ف لغاف ه ل ي ي لحء ين ث ع إع ل ي لغاف يح ق .لى ي ل بعض ع غ ن ل م ش ل ى ل ف ل تق مل ل م لع ين ل لا لك .لج ف ب ين ي ج لم كل لجس م ل ى ل لا ه ل ف ي

س ين ان ج تى ل يج يعي ل فى ل . ل

Page 51: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

يف ي اج تغ ف لجس في لى ي ي ت م لح لا

ي لاج ي اض من لجس ني ي ى ل حق ق ل ب ت

ء ين ل ث ع ل ف ك .ل بعض ي ت

، ي غ ، م ل ل ل ل بعض ل

ي ه ل ئ من غي قي ل ى ل جم ق ل ين ت لج

ء لجس حل ث غ اج .ل ان م ن ل م

ى لح ي ع س ي ل حي ج فى ضع ب

م لى ح تحت مح .°4 ح

Page 52: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ج مين ي ع ن يف فى ي ي اج تغ يج ا ل فى .لجسيف ل اج تغ ي ق م ف تحت ع جل من لك تج ح م

جي لص فى في ج يف يج اخ ل فى ،ل اج تجي ل ا لجس ي ق ب نس) تغ لى لى ب ل (%15 -10 ح

ل فى ع جل من لك ف تحت لح ي ل م لغي لج ح مظ .في ي اج تح ج لجس ي ل ع ي ل لك بحي

ي ف ج فى ت ي ابح ش ل .ج يف لى لع تجي اج س لجس ء ي ين ان فى ك ت ت م ن ل .ك

ت ج ث ي ل ي اج م لع ى لجس خ ع من ف فى لح م ل ي ج ع ض تج ح نس خ بى ل فى ل

ه .خاي

Page 53: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ع ه عي ل من ن Hydrated and Desiccated. ه لص

ء س ق عي ب ن لع عن Hydrated ن من صي أج أخ يق سيم) من جس فس، لحج ل ل يط ، ن ، ل

، ن، لج ، ل س ل س (ل ق ب Sodium م من غ مع

alginate ي مح فى س ثم لسي ك ين ل غاف لل نب فى .ح ء بعض س اخ لج عي ب ن لع عن ص

س Desiccated يق ط ب ي حج خ س ق من م مع اج معلى م ين ل ي ء فى ي ل كسي ي يف ثم ل ج ل ي ب

ل س ي .ك ي ل غ اج حي ا ل س ل مح فى ضعت بكي س ي ثم %12 ب . ل

Page 54: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

اي ي ل ص لجس ء من ل ع ل من م ج ى ل عي بي ل مغ م تح ي ص فى مع تي ) ن ه (ب لى ت

ي ي ل ح مح ب ق نسيج فى ك ق ل يش لع لي ي ه لج ء من غي تي اع ى ل ه تش تم ل ي ه ..تاي ص ا يجب ل م ه من ت ع ح ل ي با خاي تص هلك م س ي ب ع ي ل ى لج ى تح ل فى ل ع

مج ن ى ل ي لك . لج يض ف يع ل ع م ل اكسين ل ليص لى ت اي ت م من ل ع ى ل ح في تح ل ت

اي ج غي ح لى ل مج لى م ن ، ب ف ت ل تى ج ل اي تح ل إنج ل ع ل ه م تى، ل ت ه لس ين ي يض ف فى ل ع ج .لاكسين ل ح ب اي ت لى لل ج لغي لح م م اي ت اكسين تأثي ي ع ى ل بي علي نه اكسين من خ م ف شيط ي ى لجي ت جه ل اي ت ل لى ل

ى ي ين لج ين ت . لجس لج

Page 55: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ي أج س أجل من عي ب إن لجس ا يجب فأن صشيط ي أج ت ن ت ى لجس ح لى تصل ح ي ل لى سب لحجم ل عي ل ن فى لاس ل نهف ل ..لص

ل ي أج ت ن لجس ي بي لى ل ع س ضغط مغ ت مفي مع ف ت ئي ك ، ض ع ت م ه م ع حجم ي لى ت ل

ين ي ف فى مم 8 لى 3 من لج حظ ك .ي 7 لى تصل م ي له فى فيل من مح ي ل حجم ي ل ي لس ي .لج

ف ق ي ب ي ت تي ل ل ت فى ل ى ص لاس لعي ل ن فى . لص

Page 56: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ت ك ي ن س ل عي ل ن ب ب يع لص ي س يض فى ف ت تح .ل

عي ل س ن ت بعض فى لص ل ل ن ي ي إك قص هت جين ل ه ل ل ج.. ل جين ل ن ت ف ت ل ل

يخ يم ل ع ل ع ت جع لك م ي لى ي ج ل حي %30 لى تصل لط عف لى ي ه ف ج ل سع ت ف ثاث ل لك .إن ت ضع فأ ب

عي ل ن يخ فى لص يم ل ل ل ع ي ي ى ه .عب ه جين ل ن فى صع ي ل ت بعض فى تج ن م ل ف ل

ي ه لس لك لص يع ب فأ ل ..ه ج أن ج ع ل هى لتج يح من ن تى ل ن ن غي . ل ي ع ن ي ت من مح ق ل

جين، ن ب ل جين ل ك ي ي ل س ل عي ل ن ب بأع لصي .ك

م ي أشج مع ي بأن ت يح خ لك ل ف يصعب ب ح ى ل كيب ع ثي ل لي ب لص ل غ عي ل ن يع ل .ل ل لحل ه لص أمف ح ى ل تي ل ك ع ب ل غ .ل

Page 57: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ت . 3 بلس لتجديد النب ت بر اأجن كمصدر ل س ل استخدا الك

س ل ئ كذل (اأرز - الذرة) الحب فى اأجن الك العيبي الح أيض الص بلس تنتج الم ت س بر ن ين كت مك

ي ين كذل خ ين ث اأجن تك ت تك مي هذه النب نى س غذائى سط ع الح فى اأجن مزارع .من اعط المل فرص حص ى ل بلس ع ت در بر ى ق ج التكشف ع إنتت ، نب م يه ك ج فى استخدام يمكن ع عي هجن انت نعين اى بين الح من ن ني هذه استخدم أيض الم فى الت

ر ب اشج .الغ

Page 58: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

Two potato leaf protoplasts about to fuse

Page 59: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

راثى. 4 ل ال التح

ن ين ع ي ي خاي من أج ت ش من خ ب ل ص ل

س ي ب ي ه Agrobacterium ب مت ل فى س

ء ي ج ح ع ثى ل ي اج فى ل ا لجس اج من ب

تي يج ف ه ل يح س ء ي ي ج ع .ثي مح جس

ي أج ع لجس س ي ل ي مس اس م لج

ي أح ح ع ثى ل ف . ل إض ي س لى ب ي فى ل

ح ح ثى ل اي .ل له ل ح ن ل ج ت ي

ي ين ع يق عن مح جس ي أج ت ن لجس ي

ه ي ه ع .ك

Page 60: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

ي . 5 ن اتج الث ن ى ل ء الحي البن

ن ك س ي ي ت ك ن فى ل ي ل ن ل

ل) ك م ئي ل ي ل تي ل يق عن (ل

ين ع ي أج ت س أي .لجس ه ب

ي ل فى ل ع ن ل شحيم يت ن ي ن من ل

ب ه لك ل كب ك Leo-palmitostearin م

كب سى ل ك يت فى أس .ل

Page 61: ó©³ ß çagr.asu.edu.eg/uploads/agr/Lecture_3_201504291422.pdf" ó©³ ß ç ÷ Ý ã ³ç÷ É ¯ã ðÓ ó©³ ß ç û åíÛ Ìó ÝãÌß í ë ³ã óÐ ðàË ó£ß óà

THANK YOU