Contribución y avances del laboratorio en el diagnóstico y seguimiento de Leucemias agudas

- Citogenética y FISH en Leucemias Agudas.

Dr. Pablo López.

Desarrollo de la Exposición

• Generalidades de Citogenética y FISH

• Leucemias Agudas Linfoides • Estatus de Ploidía

• Traslocaciones específicas

• Leucemias Agudas Mieloides

• Conclusiones

Leucemias Agudas

• Las Leucemias Agudas es una categoría de enfermedades con una presentación clínica agresiva común cuyo pronóstico y tratamiento es dependiente de las características genéticas subyacentes de la neoplasia.

Evaluación Genética

Citogenética

FISH

Biología Molecular

Evaluación Perfil de Expresión Proteica

Citometría de Flujo

Identificación del Clon Anómalo /s

Citogenética y FISH en Leucemias Agudas.

• Técnicas especializadas que evalúan la composición genética del individuo.

• Citogenética: Ordenamiento y Análisis del componente cromosómico.

• FISH: Hibridación In Situ Fluorescente. Técnica que permite detectar ganancias, pérdidas y reordenamientos génicos específicos.

• 1 banda cromosómica de más o menos 10.000.000 pares de bases (107).

• 1 sonda de FISH alrededor de 100.000 a 700.000 pares de bases (105).

Resolución

Leucemias Agudas

• Mieloides

• Linfoides

Leucemias Linfoides Agudas

World Health Organization classification of myeloid

neoplasms and acute leukemia

B-lymphoblastic leukemia/lymphoma B-lymphoblastic • leukemia/lymphoma, NOS B-lymphoblastic • leukemia/lymphoma with recurrent genetic abnormalities

• B-lymphoblastic leukemia/lymphoma with t(9;22)(q34.1;q11.2);BCR-ABL1 • B-lymphoblastic leukemia/lymphoma with t(v;11q23.3);KMT2A rearranged • B-lymphoblastic leukemia/lymphoma with t(12;21)(p13.2;q22.1); ETV6-RUNX1 • B-lymphoblastic leukemia/lymphoma with hyperdiploidy • B-lymphoblastic leukemia/lymphoma with hypodiploidy • B-lymphoblastic leukemia/lymphoma with t(5;14)(q31.1;q32.3) IL3-IGH • B-lymphoblastic leukemia/lymphoma with t(1;19)(q23;p13.3);TCF3-PBX1

Provisional entity: • B-lymphoblastic leukemia/lymphoma, BCR-ABL1–like • Provisional entity: B-lymphoblastic leukemia/lymphoma with iAMP21

• T-lymphoblastic leukemia/lymphoma • Provisional entity: Early T-cell precursor lymphoblastic leukemia • Provisional entity: Natural killer (NK) cell lymphoblastic leukemia/lymphoma

Leucemias Linfoides Agudas

• Estatus de Ploidía Cromosómica

NÚMERO DE CROMOSOMAS

n

2n

3n

4n

23 crom

92 crom

46 crom

69 crom

n 2n 23 crom

46 crom

2n+35

2n+20

2n+3

46 + 3= 49

46 + 20= 66

46 + 35= 81

n 2n 23 crom

46 crom

2n-12

2n-3 46 - 3= 43

46 - 12= 34

POLIPLOIDÍAS

HIPERPLOIDÍAS

HIPOPLOIDÍAS

Estatus de Ploidía en LAL Hiperdiploidías • Hiperdiploidías mayor a 50 cromosomas • Perfil cromosomico no aleatorio: +X, +4, +6, +10, +14, +17,

+18, +21,+2

Es importante el tipo de Hiperdiploidía?

Hipodiploidías severas/cercanas a triploidías

Estatus de Ploidía en LAL Hipodiploidías

• Anomalías cromosómicas específicas

DELECCIONES

Leucemias Linfoides Agudas

INVERSIONES

TRASLOCACIONES

Traslocación (9;22)(q34;q11) Cromosoma Ph

Traslocaciones MLL/ KMT2A 11q23

t(4;11)(q21;q23)

LAL Traslocación 1;19

El tratamiento agresivo cambio el mal pronóstico natural de la enfermedad

Gen de Fusión TCF3-PBX1

Leucemia Aguda Linfoide

Leucemias Mieloides Agudas

• Acute myeloid leukemia (AML) and related neoplasms AML with recurrent genetic abnormalities • AML with t(8;21)(q22;q22.1);RUNX1-RUNX1T1 • AML with inv(16)(p13.1q22) or t(16;16)(p13.1;q22);CBFB-MYH11 • APL with PML-RARA • AML with t(9;11)(p21.3;q23.3);MLLT3-KMT2A • AML with t(6;9)(p23;q34.1);DEK-NUP214 • AML with inv(3)(q21.3q26.2) or t(3;3)(q21.3;q26.2); GATA2, MECOM • AML (megakaryoblastic) with t(1;22)(p13.3;q13.3);RBM15-MKL1

• Provisional entity: AML with BCR-ABL1 • AML with mutated NPM1

• AML with biallelic mutations of CEBPA

• Provisional entity: AML with mutated RUNX1

• AML with myelodysplasia-related changes Therapy-related myeloid neoplasms

• AML, NOS

• AML with minimal differentiation

• AML without maturation

• AML with maturation

• Acute myelomonocytic leukemia Acute monoblastic/monocytic leukemia Pure erythroid leukemia

• Acute megakaryoblastic leukemia Acute basophilic leukemia Acute panmyelosis with myelofibrosis

• Myeloid sarcoma

• Myeloid proliferations related to Down syndrome Transient abnormal myelopoiesis (TAM)

• Myeloid leukemia associated with Down syndrome

Leucemia Mieloide Aguda

• Anomalías Citogenéticas Recurrentes (WHO 2008). • t(15;17)(q22;q12), PML-RAR

• t(8;21)(q22;q22), RUNX1-RUNX1T

• inv(16)(p13.1q22) - t(16;16) (p13.1;q22), CBFB-MYH11

Diagnóstico de LMA con blastos menores a 20% en sangre periférica o médula ósea.

• t(9;11)(p22;q23), • t(6;9)(p23;q34), • inv(3)(q21q26), t(3;3) (q21;q26), • t(1;22)(p13;q13)

LAM M3- Promielocítica

• t(15;17)(q22;q12), PML-RAR

• Coagulopatía con un elevado riesgo de mortalidad.

• El pronóstico de la leucemia promielocítica aguda es muy bueno si se trata adecuadamente.

LAM M2-M4

• t(8;21)(q22;q22), RUNX1-RUNX1T

• inv(16)(p13.1q22) - t(16;16) (p13.1;q22), CBFB-MYH11

CORE BINDING FACTOR

Maduración celular

BUEN PRONÓSTICO

Remisión complete en el 90% con relativamente larga sobrevida libre de enfermedad cuando es tratado con quimioterapia a altas dosis.

t(6;9)(p23;q34)

t(9;11)(p22;q23) Riesgo Intermedio

Mal Pronóstico

Datos

• 306 LAM • 50% de Cariotipos Anormales

• 5-10% de APM, No Analizables.

• 40% de Cariotipos Normales.

Anomalía Cromosómica

Frecuencia Relativa (%)

t(15;17) 13,2

t(8;21) 7

Inv(16) o t(16;16) 5

t(9;11) 1

t(6;9) 1

+8 10

+21 2,5

Clasificación de Riego de LAM

Citogenética vs FISH

CITOGENÉTICA FISH

• t(8;21) • t(15;17) • t(16;16) • Inv(16;16) • t(9;22) Ph

• Traslocaciones específicas • Reordenamiento 11q23

• t(12,21) • t(4;11)

• Falla en obtención de metafases

• Hiperdiploidías • Hipodiploidías • Secundarias a tratamiento • Traslocaciones específicas

de baja frecuencia o sin clínica o Citometría sugestiva

Muchas Gracias Dr. Pablo López

Prof. Adj. Depto. Inmunología y Biología Molecular

Citogenética Hematológica. Asociación Española Primera en Salud