식품 중 잔류동물용의약품시험법hfplatform.kfri.re.kr/down/_rules_10.pdf · 2018-01-29 · 보관 시에는 냉동보관한다 5 ., .., ., $122!- 의 아포액 , 9 에

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법 ··················································· 10-5-1

5.1 일반사항 ···················································································································· 10-5-1

5.2 간이시험법 ················································································································· 10-5-1

5.3 정량시험법 ················································································································· 10-5-5

5.3.1 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin),

스트렙토마이신(Streptomycin), 스펙티노마이신(Spectinomycin) ·················· 10-5-5

5.3.2 나라신(Narasin), 린코마이신(Lincomycin) ··························································· 10-5-7

5.3.3 나이카바진(Nicarbazin) ························································································· 10-5-10

5.3.4 네오마이신(Neomycin) ·························································································· 10-5-11

5.3.4.1 제1법 ················································································································· 10-5-11

5.3.4.2 제2법 ····················································································································· 10-5-12

5.3.5 노보비오신(Novobiocin) ··························································································· 10-5-14

5.3.6 니트로빈(Nitrovin) ···································································································· 10-5-17

5.3.7 니트로푸란계 대사물질(AOZ, AMOZ, SEM, AHD) ·············································· 10-5-18

5.3.8 데코퀴네이트(Decoquinate) ······················································································ 10-5-20

5.3.9 델타메쓰린(Deltamethrin) ························································································· 10-5-23

5.3.10 도라멕틴(Doramectin), 아바멕틴(Abamectin), 에프리노멕틴(Eprinomectin), 이버멕틴(Ivermectin)

································································································································ 10-5-25

5.3.11 디메트리다졸(Dimetridazole), 메트로니다졸(Metronidazole), 로니다졸(Ronidazole)

10-5-27

5.3.12 디미나진(Diminazene) ···························································································· 10-5-28

5.3.13 암프롤리움(Amprolium), 디싸이클라닐(Dicyclanil) ················································ 10-5-30

1) 5.3.14 디에틸스틸베스트롤(Diethylstilbestrol, DES), 제라놀(Zeranol) ·················· 10-5-32(1) 5.3.15 디클라주릴(Diclazuril) ······················································································ 10-5-35

(2) 5.3.16 라살로시드(Lasalocid), 아빌라마이신(Avilamycin) ········································· 10-5-36

5.3.17 레바미졸(Levamisole) ····························································································· 10-5-38

5.3.18 마두라마이신(Maduramycin), 샘두라마이신(Semduramicin), 티아물린(Tiamulin) 10-5-39

5.3.19 말라카이트 그린(Malachite Green), 크리스탈 바이올렛(Crystal Violet) ············· 10-5-41

5.3.20 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin) ···················································· 10-5-44

5.3.21 목시덱틴(Moxidectin) ······························································································ 10-5-46

5.3.22 바시트라신(Bacitracin) ···························································································· 10-5-49

5.3.23 설파클로르피리다진(Sulfachlorpyridazine), 설파디아진(Sulfadiazine), 설파디메톡신

(Sulfadimethoxine), 설파메톡시피리다진(Sulfamethoxypyridazine), 설파메라진(Sulfamerazine),

설파메타진(Sulfamethazine, Sulfadimidine), 설파메톡사졸(Sulfamethoxazole), 설파모노메톡신

(Sulfamonomethoxine), 설파티아졸(Sulfathiazole), 설파퀴녹살린(Sulfaquinoxaline), 설피속사졸

(Sulfisoxazole), 설파독신(Sulfadoxine), 설파페나졸(Sulfaphenazole), 설파클로르피라진

(Sulfachlorpyrazine, Sulfaclozine) ·········································································· 10-5-50

5.3.24 반코마이신(Vancomycin) ························································································ 10-5-54

5.3.25 밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol) ······························· 10-5-55

5.3.26 나프실린(Nafcillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin), 클록사실린

(Cloxacillin) ············································································································· 10-5-57

5.3.27 세프티오퍼(Ceftiofur) ······························································································ 10-5-59

5.3.27.1 제1법 ··················································································································· 10-5-59

5.3.27.2 제2법 ··················································································································· 10-5-60

5.3.28 스트렙토마이신(Streptomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin) · 10-5-62

5.3.28.1 제1법 ··················································································································· 10-5-62

5.3.28.2 제2법 ··················································································································· 10-5-64

5.3.29 스펙티노마이신(Spectinomycin) ············································································· 10-5-65

5.3.29.1 제1법 ··················································································································· 10-5-65

5.3.29.2 제2법 ··················································································································· 10-5-67

5.3.30 스피라마이신(Spiramycin) ······················································································ 10-5-69

5.3.30.1 제1법 ··················································································································· 10-5-69

5.3.30.2 제2법 ··················································································································· 10-5-70

5.3.31 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 싸이플루쓰린(Cyfluthrin), 싸이할로쓰린(Cyhalothrin) ····· 10-5-71

5.3.32 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin), 클록사실린

(Cloxacillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 나프실린(Nafcillin), 옥사실린(Oxacillin) · 10-5-73

5.3.33 폭심(Phoxim) ············································································································· 10-5-77

5.3.34 아미트라즈(Amitraz), 코마포스(Coumaphos) ························································ 10-5-79

5.3.35 아자페론(Azaperone) ······························································································ 10-5-81

5.3.36 아프라마이신(Apramycin), 콜리스틴(Colistin) ······················································ 10-5-82

5.3.37 알벤다졸(Albendazole), 펜벤다졸(Fenbendazole), 플루벤다졸(Flubendazole), 옥스펜다졸

(Oxfendazole), 티아벤다졸(Thiabendazole), 옥시벤다졸(Oxibendazole) 10-5-85

5.3.38 트리클라벤다졸(Triclabendazole) ··········································································· 10-5-87

5.3.39 페반텔(Febantel) ········································································································ 10-5-88

5.3.40 발네물린(Valnemulin) ····························································································· 10-5-90

5.3.41 에리스로마이신(Erythromycin), 버지니아마이신(Virginiamycin) ························· 10-5-92

5.3.42 에토파베이트(Ethophabate) ···················································································· 10-5-93

5.3.43 엔라마이신(Enramycin) ··························································································· 10-5-95

5.3.44 날리딕스산(Nalidixic acid), 노르플록사신(Norfloxacin), 다노플록사신(Danofloxacin), 디

플록사신(Difloxacin), 마보플록사신(Marbofloxacin), 사라플록사신(Sarafloxacin), 시프로

플록사신(Ciprofloxacin), 엔로플록사신(Enrofloxacin), 오비플록사신(Orbifloxacin), 오플

록사신(Ofloxacin), 옥소린산(Oxolinic acid), 페플록사신(Pefloxacin), 플루메퀸

(Flumequine) ·········································································································· 10-5-97

5.3.45 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin) ································ 10-5-102

5.3.46 오르메토프림(Ormetoprim) ···················································································· 10-5-104

5.3.47 옥소린산(Oxolinic acid) ·························································································· 10-5-105

5.3.48 세파세트릴(Cefacetrile), 세파졸린(Cefazolin), 세파피린(Cephapirin), 세팔렉신(Cefalexin), 세팔로니움

(Cefalonium), 세포페라존(Cefoperazone), 세푸록심(Cefuroxime), 세프퀴놈(Cefquinome) ·· 10-5-107

5.3.49 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline), 테트라싸이클린

(Tetracycline), 독시싸이클린(Doxycycline) ··························································· 10-5-110

5.3.50 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline) ···································································· 10-5-114

2) 5.3.51 올라퀸독스(Olaquindox), 카바독스(Carbadox) ················································· 10-5-117

(1) 5.3.52 올레안도마이신(Oleandomycin) ······································································· 10-5-119

5.3.53 이미도캅(Imidocarb) ······························································································· 10-5-120

5.3.54 이소메타미디움(Isometamidium) ··········································································· 10-5-122

5.3.55 제라놀(Zeranol) ······································································································· 10-5-123

5.3.56 죠렌(Zoalene) ·········································································································· 10-5-126

5.3.57 초산메드록시프로게스테론(Medroxyprogesterone acetate, MPA) ······················· 10-5-127

5.3.58 초산트렌볼론(Trenbolone acetate) ········································································· 10-5-129

5.3.59 카라졸롤(Carazolol) ································································································ 10-5-130

5.3.60 답손(Dapsone) ······································································································· 10-5-132나) 5.3.61 세팔렉신(Cephalexin) ······················································································ 10-5-134다) 5.3.62 콜치신(Colchicine) ···························································································· 10-5-135

라) 5.3.63 락토파민(Ractopamine), 클렌부테롤(Clenbuterol) ······································· 10-5-137마) 5.3.64 클로람페니콜(Chloramphenicol) ······································································ 10-5-140

바) 5.3.65 클로르프로마진(Chlorpromazine) ···································································· 10-5-143

5.3.66 클로산텔(Closantel) ································································································· 10-5-144

5.3.67 클로피돌(Clopidol) ·································································································· 10-5-145

5.3.68 타일로신(Tylosin) ···································································································· 10-5-147

5.3.68.1 제1법 ··················································································································· 10-5-147

5.3.68.2 제2법 ··················································································································· 10-5-148

5.3.69 트리클로르폰(Trichlorfon, Metrifonate) ································································· 10-5-149

5.3.70 티암페니콜(Thiamphenicol) ···················································································· 10-5-151

5.3.71 티오우라실(Thiouracil) ···························································································· 10-5-152

5.3.72 틸미코신(Tilmicosin) ······························································································· 10-5-154

5.3.73 암피실린(Ampicillin), 아목시실린(Amoxicillin) ···················································· 10-5-156

5.3.74 암피실린(Ampicillin) ······························································································· 10-5-158

5.3.75 페니실린(Penicillin G) ···························································································· 10-5-160

5.3.76 플루메쓰린(Flumethrin) ·························································································· 10-5-162

5.3.77 조사마이신(Josamycin), 키타사마이신(Kitasamycin) ············································· 10-5-163

5.3.78 플루발리네이트(Fluvalinate) ··················································································· 10-5-164

5.3.79 플루벤다졸(Flubendazole) ······················································································ 10-5-166

5.3.80 플루아주론(Fluazuron) ···························································································· 10-5-167

5.3.81 피리메타민(Pyrimethamine) ··················································································· 10-5-169

5.3.82 하이그로마이신 B (Hygromycin B) ······································································· 10-5-170

나. 5.3.83 페닐부타존(Phenylbutazone) ············································································ 10-5-172

다. 5.3.84 카나마이신(Kanamycin) ····················································································· 10-5-173

라. 5.3.85 클라불라닌산 (Clavulanic acid ········································································· 10-5-175

마. 5.3.86 플로르페니콜(Florfenicol) ·················································································· 10-5-177

바. 5.3.88 초산멜렌게스트롤(Melengestrol acetate) ·························································· 10-5-179

5.3.89 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin) ················································ 10-5-1815.3.90 프라지콴텔(Praziquantel), 티아물린(Tiamulin) ···················································· 10-5-1845.3.91 트리메토프림(Trimethoprim) ················································································· 10-5-1865.3.92 린코마이신(Lincomycin), 클린다마이신(Clindamycin) ········································ 10-5-1885.3.93 올라퀸독스(Olaquindox) ························································································· 10-5-1905.3.94 프레드니솔론(Prednisolone), 메틸프레드니솔론(Methylprednisolone), 베타메타손(Betamethasone), 덱사메타손(Dexamethasone) ········································································································· 10-5-1945.3.95 멜록시캄(Meloxicam), 플루닉신(Flunixin) ···························································· 10-5-2005.3.96 설파구아니딘(Sulfaguanidine) ··············································································· 10-5-2045.3.97 로베니딘(Robenidine) ····························································································· 10-5-2065.3.98 톨트라주릴(Toltrazuril) ··························································································· 10-5-2085.3.99 디아베리딘(Diaveridine) ························································································· 10-5-2115.3.100 메벤다졸(Mebendazole) ························································································ 10-5-2115.3.101 니트록시닐(Nitroxynil), 클로술론(Clorsulon) ····················································· 10-5-2115.3.102 톨페남산(Tolfenamic acid) ·················································································· 10-5-2115.3.103 툴라스로마이신(Tulathromycin) ·········································································· 10-5-2115.3.104 시미아졸(Cymiazole) ····························································································· 10-5-211

10-5-1

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 일반사항

1) 동물용의약품의 잔류허용기준(불검출 기준일 경우 정량한계 수준)을 확인할 수 있는 미생

물수용체법, 형광면역분석법, 효소면역분석법 등의 원리를 이용한 검사킷트 또는 방법으

로서 시험할 수 있으나 시험결과 양성인 경우에는 규정한 정량시험법에 따라 시험하여

판정하여야 한다. 다만, 제조․가공직전의 원유 등의 원료축산물에 대한 신속한 검사가

요구될 경우는 상기의 검사킷트 또는 방법으로 적․부판정을 할 수 있다..

2) 시험법 적용범위에 대상식품이 해당되지 않을 경우에도 해당 동물용의약품의 정량시험법

에 준하여 시험할 수 있다.

5.2 간이시험법

1) 시험법 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 테트라싸이클린계, 마크로라이드계, 페니실린계, 아미노글리코사이드계, 설폰아마

이드계, 퀴놀론계, 세팔로스포린계, 펩타이드계, 폴리에테르계, 노보비오신 등의 항생물질

및 합성항균제의 잔류여부를 계통별로 확인한다.

3) 시약 및 시액

가) 배지(1) 계대, 증식용：Nutrient agar

(2) 증균용 : Tryptic soy broth (이하 TSB라 한다.)

(3) 시험용：Antibiotic medium No. 2 (pH 6.55±0.05, 이하 AM #2라 한다.)

Antibiotic medium No. 5 (pH 7.9±0.1, 이하 AM #5라 한다.)

Antibiotic medium No. 8 (pH 5.85±0.05, 이하 AM #8라 한다.)

Mueller Hinton medium (pH 7.3±0.1, 이하 MH라 한다.)

Test agar pH 6.0 (pH 6.0, 이하 TA라 한다.)

EEC agar pH 8.0 (물 1 L당 peptone 6.9 g, NaCl 5.1 g, KH2PO4 1.0 g 및

Agar 13.0 g, 이하 EEC라 한다.)

(4) 아포 조제용 : A-K #2 sporulating agar(BBL) 또는 Nutrient Agar (MnSO4∙H2O

0.005% 첨가)

나) 시험균액

(1) B. megaterium (Bacillus megaterium ATCC 9885) 아포액

보통배지에 계대보관되어 온 시험균을 37℃에서 1일간 배양한 후 멸균생리식염수 2～

3 mL에 현탁시킨 후 아포조제용 배지 300 mL를 넣어 굳힌 배양병(Roux bottle)에 접

종하여 37℃에서 1일간 배양 후 실온에서 6일간 아포를 형성시킨다. 멸균유리구슬과

멸균물 25 mL를 넣어 집균한 후 65℃에서 30분간 가열한 후 분당 75,000 G으로 20분

간 원심분리하여 상층액을 제거한 다음 다시 멸균물에 부유시켜 세척을 3회 이상 반

복하고 잔사를 멸균물에 부유시켜 65℃에서 30분간 재가열한다. 이를 멸균물로 10단

계 희석하여 표준한천배지로 균수를 측정한 후 아포농도를 2× 108 CFU/mL가 되도록

희석하여 사용한다. 장기간 보관 시에는 냉동보관 한다.

(2) B. subtilis (Bacillus subtilis subsp. spizizenii ATCC 6633 ) 및 B. cereus (Bacillus

10-5-2

cereus ATCC 11778)의 아포액

Nutrient agar에 계대보관되어 온 시험균을 멸균생리식염수 5 mL에 현탁시킨 후

Nutrient agar 300 mL를 넣어 굳힌 배양병 (Roux bottle)에 접종하여 37℃에서 1일간

배양한 후 멸균생리식염수 2～3 mL에 현탁시킨 후 아포조제용 배지 300 mL를 넣어

굳힌 배양병 (Roux bottle)에 접종하여 37℃에서 1일간 배양한 후 실온에서 6일간 아

포를 형성시킨다. 멸균유리구슬과 멸균물 25 mL를 넣어 집균하여 65℃에서 30분간

가열한 후 분당 3,000 G으로 10분간 원심분리하여 상층액을 제거한 다음 다시 멸균수

에 부유시켜 세척을 반복하고 잔사를 멸균수에 부유시켜 65℃에서 30분간 재가열한

다. 이를 멸균물로 10단계 희석하여 표준한천배지로 균수를 측정한 후 아포농도를

9×106 CFU/mL 정도 되도록 멸균수로 희석 소분하고 냉장보관하여 사용한다. 장기간

보관 시에는 냉동보관한다.

(3) B. stearothermophilus (Geobacillus stearothermophilus ATCC 10149)의 아포액

Nutrient agar에 계대, 보관되어온 균주를 멸균생리식염수 5 mL에 현탁시킨 후

Nutrient agar 300 mL를 넣어 굳힌 배양병( Roux bottle)에 접종하여 시험균을 55℃

에서 1일간 배양한 후 멸균생리식염수 2～3 mL에 현탁시킨 후 아포조제용 배지 300

mL를 넣어 굳힌 배양병(Roux bottle)에 접종하여 55℃에서 1주일간 배양한다. 멸균유

리구슬과 멸균물 25 mL를 넣어 집균한 후 85℃에서 15분간 가열한 후 분당 3,000 G

으로 10분간 원심분리하여 상층액을 제거한 다음 다시 멸균물에 부유시켜 세척을 3회

이상 반복하고 잔사를 멸균물에 부유시켜 85℃에서 15분간 가열한 후 멸균물로 10단

계 희석하여 표준한천배지로 균수를 측정한 후 아포액의 농도를 7×106 CFU/mL 정

도 되도록 희석 소분하여 냉장 보관한다. 장기간 보관 시에는 냉동보관한다.

(4) E. coli (Escherichia coli ATCC 11303) 및 K. rhizophila (Kocuria rhizophila ATCC

9341)의 균액

시험일 하루 전 Triptic soy broth 20 mL에 계대 보존균을 직경 2 mm 백금이로 1 loopful을 접종하여 32℃(K. rhizophila), 37℃(E. coli)항온수조에서 16시간 진탕배양한다. 이 균액 1 mL를 멸균물 19 mL에 희석하여 사용하며(이때 균농도는 약 2×107 CFU/mL), 이 희석 균액은 4℃ 냉장보관하면서 약 1주일간 사용할 수 있다.

다) TMP(Trimethoprim)용액 : TMP 10 mg을 용량플라스크에 달아 메탄올 10 mL에 녹이

고 멸균 물을 넣어 100 mL로 한 후 15 μg/mL용액이 되도

록 희석하여 B. megaterium 평판 조제 시 사용한다.

라) 페트리접시 : 안지름 85±1 mm, 높이 20 mm의 밑면이 평평한 것

마) 디스크 : 직경 10 mm, 펄프디스크 (흡수량 0.07～0.08 mL)

바) 시험용 평판 검사용 감수성 디스크：스트렙토마이신 감수성 디스크(직경 6 mm, 10 μ

g)

사) 착즙기

4) 시험용 평판의 조제

가) B. megaterium 평판

멸균 후 약 50℃로 가온 보존된 MH 배지 100 mL당 조제된 시험균액 1 mL와 TMP용

액 1 mL를 가하여 충분히 섞은 후 페트리접시에 8 mL씩 분주하여 수평으로 유지하여

응고시킨다.

나) B. subtilis 평판

10-5-3

멸균 후 약 50℃로 가온 보존된 AM #5 배지에 100 mL당 조제된 시험균액 1 mL를

가하여 충분히 섞은 후 B. megaterium 평판과 같이 조작한다.

다) B. cereus 평판

멸균 후 약 50℃로 가온 보존된 AM #8 배지에 100 mL당 조제된 시험균액 1 mL를

가하여 충분히 섞은 후 B. megaterium 평판과 같이 조작한다.

라) B. stearothermophilus 평판

멸균 후 55℃로 약 50℃로 가온 보존된 AM #2 배지에 100 mL당 조제된 시험균액 1

mL를 가하여 충분히 섞은 후 B. megaterium 평판과 같이 조작한다.

마) E. coli 평판

멸균 후 약 50℃로 가온 보존된 TA 배지에 100 mL당 조제된 시험균액 1 mL를 가하

여 충분히 섞은 후 B. megaterium 평판과 같이 조작한다.

바) K. rhizophila 평판

멸균 후 약 50℃로 가온 보존된 EEC 배지에 100 mL당 조제된 시험균액 1 mL를 가하

여 충분히 섞은 후 B. megaterium 평판과 같이 조작한다.

5) 시험용 평판의 검사

시험할 때마다 스트렙토마이신 감수성 디스크 (10 μg)를 이용하여 각 시험용 평판의

감도를 확인한다. 즉, B. megaterium, B. cereus, B. subtilis 및 B. stearothermophilus,

K. rhizophila 평판에서는 스트렙토마이신 감수성 디스크의 저지환의 직경이 각 20

mm 이상 되는 평판을 사용하고 E. coli의 평판의 경우 직경이 약 15 mm 이상이 되는

것을 사용한다.

6) 시험조작

가) 짜내기법

검체를 가능한 한 무균적으로 잘게 잘라서 착즙기를 이용하여 검체의 즙을 짜낸 뒤 그

즙을 디스크에 흡수시킨다. 흡수시킨 디스크를 검사용 평판 위에 놓는다. B.

megaterium는 45℃, B. subtilis와 E. coli는 37℃, B. cereus와 K. rhizophila는 30℃, B.

stearothermophilus는 55℃에서 16～18시간 배양한다.

나) 디스크 삽입법

유(乳)의 경우, 검체(다만, 분유류는 14% 수용액으로 조제)를 충분히 혼합하여 82℃로

2.5분간 가열 후 신속히 식혀 준비한다. 알의 경우, 난백과 난황을 교반하여 준비하고,

그 외 식품 경우, 근육을 무균적으로 절개하여 준비한다. 준비한 검체는 디스크를 6개

씩 삽입하여 30～60분간 체액을 흡수시킨다. 이후 디스크를 제거하여 6종류의 검사용

평판에 하나씩 올려놓고 가볍게 눌러준 다음 실온에 약 30분간 방치한 뒤 배양시킨다.

각 시험균은 짜내기법과 동일하게 배양한다.

7) 판정

저지환의 직경이 12 mm 이상인 것을 양성으로 판정한다. 양성으로 판정된 검체는 다음

표에 따라 항생물질 또는 합성항균제의 계통을 추정할 수 있다.

10-5-4

B. megaterium

(MH)

B. stearotherm

o-philus(AM #2)

B. subtilis(AM #5)

B. cereus(AM #8)

K.rhizophila

(EEC)

E.coli(TA)

추정 물질 계통

++ ++ + ++ + + Tetracycline계++ + ++ + ++ － Macrolide계++ +++ －－ ++ +++ Penicillin계

+++ － + － + +++Aminoglycoside

계++ －－－－－ Sulfonamide계+ －－ + － ++ Quinolone계+ +++ － ± ± ++ Cephalosporin계+ + －－－－ Peptide계－ ++ － + －－ Polyether계+ ++ － ++ + － Novobiocin

주) +++: 0.1ppm 이하, ++: 0.1∼1ppm, +: 1∼10ppm, －

5.3 정량시험법

5.3.1 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin), 디히드로스트렙토마이신

(Dihydrostreptomycin), 스트렙토마이신(Streptomycin), 스펙티노마이신

(Spectinomycin)


축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 겐타마이신, 네오마이신, 디히드로스트렙토마이신, 스트렙토마이신 및 스펙티노마

이신을 삼염화초산이 함유된 인산완충용액으로 추출한 후, HLB 및 약양이온교환 카트리

지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프/질량분석기

나) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 : Divinylbenzene -N-vinylpyrrolidone

Copolymer가 200 mg 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

다) 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지 : 약양이온교환수지가 150 mg 충진된

카트리지 또는 이와 동등한 것


가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 표준원액 : 겐타마이신, 네오마이신, 디히드로스트렙토마이신, 스트렙토마이신 및 스펙

티노마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취한다. 물 40 mL에

녹인 후 아세토니트릴 20 mL와 초산 2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채워 각각 100 μ

g/mL로 한다. 조제된 표준원액은 냉동보관 한다.

다) 표준원액을 아세토니트릴 : 초산 : 물 (10:1:39) 혼합용액으로 겐타마이신은 0.01, 0.025,

10-5-5

0.05, 0.1, 0.15 및 0.2 mg/L, 네오마이신과 스펙티노마이신은 0.05, 0.125, 0.25, 0.5,

0.75, 1.0 mg/L, 디히드로스트렙토마이신과 스트렙토마이신은 0.06, 0.15, 0.3, 0.6, 0.9

및 1.2 mg/L가 되게 한다. 시험 당일 제조하도록 한다.

라) 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 : 2 L 메스플라스크에 제일인산칼륨

(KH2PO4) 2.72 g를 넣고 물 1.9 L로 녹인 후 1 N 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에

EDTA-나트륨(Na2EDTA dihydrate) 0.3 g과 삼염화초산 40 g을 넣고 용해시킨 후 물

로 표시선까지 채운다.

마) 1.6% 삼염화초산 용액 : 250 mL 메스플라스크에 삼염화초산 4.1 g을 넣고 물 100 mL

를 넣어 용해시킨 후 아세토니트릴 50 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 20 mM HFBA (heptafluorobutyric acid)/5% 아세토니트릴 : 1 L 메스플라스크에 아세

토니트릴 50 mL와 HFBA (heptafluorobutyric acid) 2.6 mL를 넣은 후 물로 표시선까

지 채운다.

사) 20 mM HFBA (heptafluorobutyric acid)/50% 아세토니트릴 : 1 L 메스플라스크에 아

세토니트릴 500 mL와 HFBA (heptafluorobutyric acid) 2.6 mL를 넣은 후 물로 표시

선까지 채운다.

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 3 g을 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 15 mL를 넣은 후 10분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 3,000 G에서 약 10분간 원심분리한다. 상층액을 여과지로 여과하여 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 잔사에 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 15 mL를 넣은 후 위와 동일하게 원심분리하여 상층액을 합한다. 모아진 상층액에 30% 수산화나트륨용액 0.2 mL를 가하여 pH 7.5로 조정하고(필요시 1 N 염산용액 또는 1 N 수산화나트륨용액을 가하여 pH를 조정한다) 이 액을 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 HLB 카트리지와 약양이온교환 카트리지를 각각 활성화시킨 후 HLB 카트리지 위에 약양이온교환 카트리지를 연결한다. 연결한 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한다. 이때 감압하여 물을 완전히 제거해 준다. 1.6% 삼염화초산 용액 6 mL로 15 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 용출하고 용출용액은 최종 6 mL로 조정한다. 이 용액을 균질화 한 후 멤브레인 필터로 여과하여 액체크로마토그래프용 폴리프로필렌 바이알에 옮겨 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼：C18(2.0 × 75 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 20 mM HFBA/5% 아세토니트릴

② 이동상 B : 20 mM HFBA/50% 아세토니트릴

10-5-6

시간(분) A(%) B(%) 0.0 80 20 0.5 80 209.0 5 9510.0 5 9510.1 80 2015.0 80 20

③ 유속 : 0.3 mL/분

④ 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 450℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy : 10 V

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다.

이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 겐타마이신은 겐타

마이신(C1a), 겐타마이신(C2, C2a), 겐타마이신(C1)을 각각 m/z 322 이온의 면적에

대한 합으로써 검량선을 작성하여 시험용액 중 겐타마이신의 함량을 구한다. 또한 네

오마이신은 m/z 455, 디히드로스트렙토마이신은 m/z 263, 스트렙토마이신은 m/z

263, 스펙티노마이신은 m/z 333 이온에 대한 각각의 면적을 구하고 검량선을 작성하

여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

물질 Precursor ion(m/z) Fragment ion(m/z)

Gentamicin(C1a) 450 322, 160Gentamicin(C2, C2a) 464 322, 160Gentamicin(C1) 478 322, 160Neomycin 615 455, 323, 294, 161Dihydrostreptomycin 584 263, 246, 221Streptomycin 582 263, 246, 221Spectinomycin 351 333, 315, 98

8) 정량한계

가) 겐타마이신 : 0.05 mg/kg

나) 네오마이신 : 0.02 mg/kg

다) 디히드로스트렙토마이신 : 0.01 mg/kg

라) 스트렙토마이신 : 0.05 mg/kg

마) 스펙티노마이신 : 0.05 mg/kg

5.3.2 나라신(Narasin), 린코마이신(Lincomycin)



10-5-7

2) 분석원리

검체 중 나라신 및 린코마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction)

카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기



나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 나라신 및 린코마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL

로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․

H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O)

1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) C18 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급


가) 유(乳)

균질화한 검체 2 g에 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 넣어 균질화하고 1 M 수산화나트륨용액 120 μL를 넣어 10초간 흔든 후 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 다음 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 중 4 mL를 취하여 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)

균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕하고 5분간 초음파 추출한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용약(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

균질화한 검체 2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 강하게 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃에서 질소 농축시킨 후 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 C18 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산 용액 5 mL로 3회 세척한 후, 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여

10-5-8

시험용액으로 한다.6) 시험조작

가) 측정조건


(가) 칼럼：C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상

① 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액② 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분) A (%) B (%) 0.0 100 0 3.0 100 0 4.0 80 20 7.0 10 9013.0 10 9014.0 100 022.0 100 0

(다) 유속 : 0.2 mL/min


(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Spray voltage : 5 kV

(다) Capillary temperature : 280℃

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의

머무름시간을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 린코마이신 및

나라신의 함량을 구한다.

물질 Precursor ion(m/z)Fragment ion(m/z)

린코마이신 407 124, 126, 359

나라신 787 413, 431, 531

나) 나라신 정량한계 : 0.005 mg/kg(알)

5.3.3 나이카바진(Nicarbazin)



2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하여 아세토니트릴․n-헥산 분배를 한 후 아세토니트릴을

감압건고하고 알루미나 칼럼으로 정제한 후 메탄올․클로로포름(1：9)의 혼합액으로 용

10-5-9

출하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기


가) 유기용매：잔류농약 시험용

나) 알루미나：알루미나 90, 활성형, 염기성 활성도 1, pH 10.0～10.5(pH의 측정：본품

10 g을 달아 물 100 mL를 넣어 2분간 격렬히 흔든 후 알루미나가 침전할

때까지 정치하고, 상층을 취해 pH를 측정한다)

다) 표준원액：나이카바진 표준품 10 mg을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mL로

한다.

라) 표준용액：나이카바진 표준원액을 메탄올․아세토니트릴(7：3)의 혼합액으로 희석하

여 각각의 농도를 0.3, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 및 5.0 μg/mL의 용액을 만든다.


가) 추출

검체 10 g을 달아 아세토니트릴 100 mL를 넣어 균질기로 균질하게 한 후 3,000～

3,500 rpm에서 5분간 원심분리하여 상등액을 분액깔때기에 취한다. 잔류물은 아세토

니트릴 50 mL로 앞의 조작을 되풀이한 후 상등액을 앞의 분액깔때기에 합한다.

이 액에 아세토니트릴포화헥산 75 mL를 넣어 10분간 진탕한 후 하층을 분액깔때기에

취한다. 이에 아세토니트릴포화헥산 10 mL를 넣고 위의 조작을 되풀이하여 하층을

감압건고한 후 잔류물을 클로로포름 5 mL로 녹인다.

나) 정제

안지름 10 mm, 길이 200 mm의 칼럼에 알루미나 5 g을 클로로포름 약 25 mL에 현

탁시켜 2 mL/분 속도로 흘려버리고 클로로포름 30 mL로 충전물의 상단에 소량의 클

로로포름이 남을 때까지 씻는다. 이 칼럼에 위의 추출액을 넣어 흘려버리고 다시 클

로로포름 5 mL씩으로 플라스크를 2회 씻어 칼럼에 흘려버린 후 다시 클로로포름 150

mL를 넣어 씻는다. 계속해서 위의 칼럼에 메탄올․클로로포름(1：9)의 혼합액 25 mL

를 용출시켜 이 액을 감압건고한 후 잔류물을 메탄올․아세토니트릴(7：3)의 혼합액

1 mL로 녹여 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼：길이 250 mm, 안지름 4.6 mm, Fine Gel 110

(2) 이동상：메탄올․아세토니트릴(7：3)의 혼합액

(3) 측정파장：340 nm

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 30 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어

진 각 피크의 머무름시간(Retention time)을 비교해서 피크의 높이 또는 면적으로 검량

선을 작성하여 검체 중 나이카바진의 함량을 구한다.

5.3.4 네오마이신(Neomycin)

5.3.4.1 제1법


10-5-10

벌꿀에 적용한다.

2) 분석원리

벌꿀에 물을 넣어 균질화한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로

마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치



가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：네오마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 하고 영하

20℃에 보관한다.

라) 표준용액：표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) MCX(Mixed Mode Cation Exchange) 카트리지 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약：특급


균질화한 검체 5 g에 물 20 mL를 넣고 진탕하여 충분히 녹이고 0.1 M 염산을 사용하

여 pH 2로 조정한다. 이 액을 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 MCX 카트

리지(충진제 60 mg)에 흡착시키고 5 mL의 10% 메탄올성 수산화암모늄용액으로 용출한

다. 용출액은 45℃ 이하의 수욕중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 0.1 M 염산 1 mL로

녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건


(가) 칼럼：C18 (2.1×100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상

① 이동상 A：20 mM 개미산, 10 mM 노나플루오로펜탄산(nonafluoropentanoic acid) 수용액

② 이동상 B：20 mM 개미산, 10 mM 노나플루오로펜탄산(nonafluoropentanoic acid) 메탄올용액

시간(분) A(%) B(%)0.0 50 50

0.5 30 70

5.0 5 95

5.1 50 50

10.0 50 50

(다) 유속：0.2 mL/분

(라) 주입량：10 μL


(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Gas Temp.：350℃

(다) Gas Flow：8 L/분 (질소)

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(라) Nebulizer：35 psi

(마) Collision energy：30 V

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다.

이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 m/z 161의 피크에

대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 네오마이신의 함량을 구한다. 검량선 작

성은 표준용액 2.5, 5.0, 10, 25, 50 μg/L의 5개 농도를 이용한다.

물질 Precursor Ion(m/z) Fragment ion(m/z)네오마이신 615 455, 323, 163, 161

5.3.4.2 제2법


우유, 산양유 등 유(乳)류에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 amberlite CG-50 이온교환수지 칼럼에 직접 통과시키고 칼럼에 존재하는 네오마

이신을 올쏘프탈알데히드(ortho-phthalaldehyde) 시약으로 유도체화시킨 후 붕산칼륨완

충용액/메탄올로 용출하여 액체크로마토그래프/형광검출기로 측정하는 방법이다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기


가) 표준원액：네오마이신 10 mg를 100 mL 물에 녹인다.

나) 표준용액：표준원액 일정량을 취하여 물로 희석하여 사용한다.

다) 알카라인완충용액：사중붕산칼륨(potassium tetraborate) 76 g를 400 mL 물에 녹이고

수산화칼륨으로 pH를 11.0으로 조정하고 물을 가하여 500 mL가

되게 한다.

라) 붕산칼륨완충용액：붕산 3.1 g를 물 100 mL에 녹이고 50% 수산화칼륨으로 pH를

10.5로 조정하고 물로 125 mL가 되게 한다.

마) Amberlite CG-50 이온 교환 칼럼

알카라인 완충용액에 amberlite CG 50 수지를 넣고 흔들어 약 2시간동안 평형시켜 슬

러리를 만든다. 밑바닥에 유리솜을 넣고 수지 슬러리로 높이 3.5 cm까지 채우고 이

칼럼에 물을 가하여 용출액이 중성일 때까지 세척한다.

바) OPA 시약：o-프탈알데히드 100 mg를 1 mL 메탄올에 녹이고 2-머캅토에탄올

(2-mercaptoethanol) 200 μL와 붕산칼륨완충용액 10 mL를 가한다. 이 시

약은 유리병에 담아 냉장보관하면서 사용한다(약 1주일 사용가능).

사) 기타시약：특급


검체 40 mL에 염화나트륨 2 g를 혼합하여 잘 흔들어 녹인 다음 표준용액을 첨가하여

양성검체(0.1～0.5 ppm)를 만들어 사용한다. 미리 준비한 amberlite CG 50 수지 칼럼에

검체 5 mL를 취하여 통과시킨다. 물 8 mL를 가하여 칼럼을 세척하고 OPA 시약 0.6

mL를 칼럼에 통과시킨다. 2분 후 유도체화된 네오마이신을 3 mL 알카라인완충용액:메

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탄올(20:80)으로 용출시킨다. 용출액을 눈금이 있는 바이알에 모으고 메탄올을 가하여 4

mL가 되게 하여 시험용액으로 한다. 바이알을 알루미늄호일로 싸서 15분간 냉동시킨 후

액체크로마토그래프로 측정한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：Supecosil Hisep(Supelco사, 4.6x150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등 한 것

(2) 이동상 A：이.디.티.에이(ethylenediamine tetraacetic acid), 삼칼륨염(tripotassium

salt) 2.0 g를 70% 메탄올 1 L에 녹인 용액

(3) 이동상 B：메탄올

(4) 이동상의 농도구배：15분까지 이동상 B용액을 60%로 한다.

(5) 유속：1.7 mL/분

(6) 측정파장：여기파장 340 nm 형광파장 418 nm

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액(0.1～5 ppm) 10～20 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프

에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교해서 피크의 높이 또는 면적으로 검량

선을 작성하여 검체 중 네오마이신 함량을 구한다.

5.3.5 노보비오신(Novobiocin)

1) 시험법 적용범위축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리검체 중 노보비오신을 메탄올로 추출하고 헥산/메탄올 분배로 지방을 제거한 후 실리카로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것다) 표준원액 : 노보비오신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액 (60 : 40 : 0.1, v/v/v)으로

적당한 농도로 희석한다. 마) 실리카 카트리지(1 g, 6 cc) 또는 이와 동등한 것바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제검체 5 g(유(乳)의 경우에는 5 mL)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 무수황산나트륨 30 g과 메탄올 30 mL를 넣은 후 3분간 균질화 한다. 균질화한 시료를 50 mL 원심분리관에 옮기고 8,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리한다. 상등액 15 mL를 정확히 취하여 40℃이하 수욕상에서 건고한다. 잔류물에 메탄올포화헥산 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화메탄올 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 메탄올층을 여분의 농축플라스크로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화메탄올 10 mL을 가하여 위

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의 과정을 반복한다. 메탄올층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 감압농축 한후 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL에 녹인다. 미리 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL로 활성화 시킨 실리카 카트리지에 추출액을 흡착시키고 추가의 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL를 유출시키고, 고정상 상단이 노출되기 직전에 메탄올 : 아세톤 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL를 용출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 질소농축 하고 잔류물에 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v) 2 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건(가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것(나) 칼럼온도 : 40℃(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v)(라) 유속 : 1.0 mL/min(마) 시료 주입량 : 20 μL(바) 검출기 파장 : UV 340 nm

나) 검량선의 작성표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 축산물 0.02 mg/kg, 유 0.02 mg/L

그림 1. 노보비오신(10.5분)의 크로마토그램

7) 정성시험위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

9) 확인시험액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준

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용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다. 가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(가) 칼럼 : C18(2.0 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것(나) 칼럼온도 : 40℃(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(50 : 50 : 0.1, v/v/v)(라) 유속 : 0.2 mL/min(마) Ionization : ESI(positive)(바) Capillary temperature : 350℃(사) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간 (분) 분자량 Ion monitored (m/z)11.3 612 613

5.3.6 니트로빈(Nitrovin)


축․수산물, 벌꿀 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 니트로빈을 디클로로메탄:메탄올:암모니아수 혼합용액으로 추출하고 메탄올과

초산과 부틸아민 혼합용액으로 재분산한 후 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 분

석한다.

3) 장치





다) 표준원액 : 니트로빈 표준품을 정밀히 달아 2% 암모니아수를 함유한 아세토니트릴에

녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 기타시약 : 특급


균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 Ⓐ과정[디클로로메탄:메탄올:암모니아

수(900:50:1) 혼합용액 20 mL를 가한 후 균질화하고 30분간 진탕한다. 이를 2,500 G에서

10분간 원심분리하고 하층을 취한다.]을 실시한다. Ⓐ과정을 반복하여 하층을 합친 후

40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고 잔류물을 이동상 1 mL에 녹인다. 이를 다

시 4,000 G에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취하고 여기에 헥산 1 mL를 가하여 혼합

한 후 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 하층액을 취한다. 이를 멤브레인 필터로 여과하

여 시험용액으로 한다.

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6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼 : CN(4.6 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 메탄올:물:초산:부틸아민(2500:50:10:1)

(3) 유속 : 1.0 mL/min

(4) 측정파장 : 365 nm

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진

각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 니트

로빈의 함량을 구한다.

나) 정량한계 : 0.05 mg/kg

5.3.7 니트로푸란계 대사물질(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)


축․수산물, 벌꿀 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 푸라졸리돈, 푸랄타돈, 니트로푸라존 및 니트로푸란토인의 대사물질을 염산용

액으로 처리하여 니트로벤즈알데히드(NBA)로 유도체화한 후 에틸아세테이트로 추출․

농축하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치





다) 표준품：3-amino-2-oxazolidinone(AOZ),

3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone(AMOZ),

semicarbazide(SEM),

1-aminohydantoin(AHD)

라) 내부표준품：3-amino-2-oxazolidinone-D4(AOZ-D4),

3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone-D5(AMOZ-D5)마) 표준원액：니트로푸란계 대사물질 표준품(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)을 각각 정밀히

달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

바) 표준용액：표준원액을 메탄올로 희석하여 각각 10 ng/mL, 20 ng/mL, 40 ng/mL,

50 ng/mL, 100 ng/mL 농도가 되게 하여 사용한다.

사) 내부 표준물질 표준원액：내부 표준품(AOZ-D4, AMOZ-D5)을 각각 정밀히 달아 메탄

올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

아) 내부 표준물질 혼합용액：내부 표준물질 표준원액을 하나의 메스플라스크에 메탄올

로 희석하여 각각 100 ng/mL가 되게 혼합하여 사용한다.

자) 0.05 M 유도체화용액：2-니트로벤즈알데히드(2-NBA, MW 151.12, 99%) 0.76 g을 디

메틸설폭사이드 100 mL에 녹여 유도체화 용액으로 한다. 이

용액은 사용직전에 만들어 사용한다.

차) 1 M 인산칼륨 용액：1 L 메스플라스크에 인산일수소칼륨(K2HPO4, MW 174.2,

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99.2%) 175.6 g을 가하여 물 400 mL에 녹인후 물로 표시선까지

채운다.

카) 기타시약：특급


가) 벌꿀

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 ㉠(내부표준물질 혼합용액 100 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 5 mL와 0.05 M 유도체화용액 200 μL를 넣고 37℃ 항온수조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 1 M 인산칼륨용액 5 mL와 1 M 수산화나트륨용액 100 μL를 가해 약 pH 7.0으로 조정한다. 이 용액에 헥산 4 mL를 가하여 균질화한 후 2,000 G에서 10분간 원심분리 한다. 하층을 새로운 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 4 mL를 가하여 혼합한 후 2,000 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 취하여 유리관에 넣는다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 질소하에서 농축 건조한 후 50% 메탄올 0.5 mL에 용해시켜 7,500 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 멤브레인 필터로 여과하여) 시험용액으로 한다.

나) 벌꿀을 제외한 식품

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 ㉡(내부표준물질 혼합용액 200 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 10 mL와 0.05 M 유도체화용액 200 μL를 넣고 37℃ 항온수조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 0.1 M 인산칼륨용액 1 mL와 1 M 수산화나트륨용액 500 μL를 가해서 혼합한다. 0.125 M 염산용액과 0.125 M 수산화나트륨용액으로 약 pH 7.0으로 조정한다. 이 시험용액의 잔류물을 제거하기 위해 2,000 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 원심분리관에 옮겨 헥산 10 mL(우유, 계란의 경우 20 mL)를 가하여 혼합한 후 2,000 G에서 5분간 원심분리 한다. 하층을 새로운 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 8 mL를 가하여 혼합하고 2,500 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취하여 유리관에 넣는다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 질소하에서 농축 건조한 후 이동상 0.5 mL에 용해시켜 7,500 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 멤브레인 필터로 여과하여) 시험용액으로 한다.

6) 표준용액의 유도체화

음성검체 5 g(벌꿀의 경우 2 g)을 50 mL 원심분리관에 넣고 농도 10 ng/mL, 20

ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL인 표준용액을 각각 100 μL를 첨가하여 5)의

㉡(벌꿀의 경우 ㉠)을 따른 후 분석시 표준용액으로 사용한다.

7) 시험조작

가) 측정조건


(가) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상：메탄올：10 mM 암모늄포메이트 (55:45, 개미산으로 pH 3.5로 조정)

(다) 유속：0.2 mL/분


(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Capillary temperature：350℃

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(다) Collision gas：아르곤

(라) Collision energy：10~15 V

8) 정량시험

가) 유도체화한 시험용액 및 표준용액을 질량분석기에 주입하여 아래표의 분석물질별 특

정이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하

여 내부표준물질 AOZ-D4의 m/z 134 이온에 대한 AOZ m/z 134, SEM m/z 192,

AHD m/z 134 이온의 면적비와 AMOZ-D5의 m/z 296 이온에 대한 AMOZ m/z 291

이온에 대한 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 니트로푸란계 대사물

질의 함량을 구한다.

대상물질 분석물질 Precursor ion(m/z)

Fragment ion

(m/z)

AOZ NBAOZ 236 149, 134

AMOZ NBAMOZ 335 262, 291

SEM NBSEM 209 192, 166

AHD NBAHD 249 178, 134

AOZ-D4

NBAOZ-D4

240 134

AMOZ-D5

NBAMOZ-D5

340 296

나) 정량한계：1 μg/kg

5.3.8 데코퀴네이트(Decoquinate)

(가) 1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것다) 표준원액 : 데코퀴네이트 표준품을 정밀히 달아 클로로포름에 녹여 200 mg/L이 되게

한다.라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다. 마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨

가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

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사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 이것을 3,500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL를 통과시켜 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2번 용출한다. 용출액을 60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 메탄올 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것(2) 칼럼온도 : 25℃(3) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM HFBA 수용액(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분) A(%) B(%)0.0 55 453.0 55 455.0 40 607.0 5 9518.0 5 9518.01 55 45

23 55 45(4) 유속 : 1.0 mL/min(5) 주입량 : 20 μL(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 데코퀴네이트(12.5분)의 크로마토그램다) 정량한계

(1) 데코퀴네이트 소 : 0.07 mg/kg, 닭 : 0.09 mg/kg 7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을

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비교하여 데코퀴네이트의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 데코퀴네이트 함량을 구한다.

8) 확인시험액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액(2) 이동상 B : 메탄올 (3) 이온화 방법 : ESI(positive)(4) Capillary temperature : 350℃(5) Collision energy : 27 eV

물질 Precursor ion (m/z) Fragment ion (m/z)데코퀴네이트 418 204, 232, 372

5.3.9 델타메쓰린(Deltamethrin)



2) 분석원리

검체를 헥산으로 균질화하고 아세토니트릴로 추출하여 감압 농축한 후 기체크로마토그

래프/전자포획검출기(GC/ECD)로 분석한다.

3) 장치

기체크로마토그래프/전자포획검출기


가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것


다) 표준원액 : 델타메쓰린 표준품을 정밀히 달아 아세톤에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 기타시약 : 특급


가) 유(乳)

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 헥산 20 mL와 황산마그네슘 2 g을 넣은 다음 20분간 진탕하고 4,500 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 아세토니트릴 20 mL를 넣어 2분간 균질화하고 5분간 진탕한 후 1,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층(하층)을 농축 플라스크에 취하여 50℃ 이하 수욕 중에서 감압 농축하고 잔류물은 헥산 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 디클로로메탄:헥산(1:1) 20 mL를

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넣은 다음 2분간 균질화하고 20분간 진탕한 후 4,500 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 무수황산나트륨 10 g을 넣고 1분간 균질화한 후 -20℃에서 30분간 정치하여 지질을 응고시키고 유기용매층(상층) 10 mL를 취하여 250 mL 분액깔때기에 옮긴다. 포화식염수 20 mL, 증류수 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣고 진탕한 후 정치하고 디클로로메탄층(하층)을 무수황산나트륨을 통과시켜 수분을 제거하면서 농축 플라스크에 취한다. 다시 디클로로메탄 20 mL를 넣어 위 과정을 1회 반복하고 모아진 추출물은 50℃ 이하 수욕 중에서 감압 농축하고 잔류물은 에틸아세테이트 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 가금류

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 2% 초산을 포함한 아세토니트릴 20 mL와 염화나트륨 4 g을 넣은 다음 2분간 균질화하고 30분간 진탕한 후 4,500 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 무수황산나트륨 5 g을 넣고 1분간 균질화한 후 -20℃ 에서 30분간 정치하여 지질을 응고시키고 아세토니트릴층(상층) 10 mL를 취하여 250 mL 분액깔때기에 옮긴다. 포화식염수 15 mL, 증류수 35 mL 및 디클로로메탄 20 mL를 넣고 진탕한 후 정치하고 디클로로메탄층(하층)을 무수황산나트륨을 통과시켜 수분을 제거하면서 농축 플라스크에 취한다. 다시 디클로로메탄 20 mL를 넣어 위 과정을 1회 반복하고 모아진 추출물은 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압 농축하고 잔류물은 에틸아세테이트 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

라) 어류

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 2% 초산을 포함한 아세토니트릴 20 mL와 염화나트륨 4 g을 넣은 다음 2분간 균질화하고 30분간 진탕한 후 4,500 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 무수황산나트륨 5 g을 넣고 1분간 균질화한 후 -20℃ 에서 30분간 정치하여 지질을 응고시키고 아세토니트릴층(상층) 10 mL를 취하여 250 mL 분액깔때기에 옮긴다. 포화식염수 15 mL, 증류수 35 mL 및 디클로로메탄 30 mL를 넣고 진탕한 후 정치하고 디클로로메탄층(하층)을 무수황산나트륨을 통과시켜 수분을 제거하면서 농축플라스크에 취한 후 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압 농축한다. 잔류물은 에틸아세테이트 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

마) 유(乳), 알(卵), 가금류, 어류 외 식품

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 헥산 20 mL를 넣은 다음 2분간 균질화하고 30분간 진탕한 후 4,500 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 아세토니트릴 20 mL를 넣어 2분간 균질화하고 5분간 진탕한 후 -20℃ 에서 30분간 정치한다. 아세토니트릴층(하층)을 농축 플라스크에 취하고 50℃ 이하의 수욕 중에서 감압 농축하고 잔류물은 헥산 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼 : Ultra-2 캐필러리 칼럼(30 m × 0.25 mm ID, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 캐리어가스 및 유량 : 질소, 1 mL/분

(3) 오븐온도 : 180℃에서 검체를 주입하고 10℃/분의 비율로 240℃까지 온도를 상승

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시켜 2분간 유지한다. 다시 5℃/분의 비율로 290℃까지 온도를 상승시

켜 5분간 유지한다.

(4) 주입부 : Split mode(5：1), 270℃

(5) 검출기온도 : 300℃

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 기체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각

피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 델타메쓰

린 함량을 구한다.

5.3.10 도라멕틴(Doramectin), 아바멕틴(Abamectin), 에프리노멕틴(Eprinomectin), 이버멕틴

(Ivermectin)



2) 분석원리

검체 중의 도라멕틴, 아바멕틴, 에프리노멕틴, 이버멕틴을 아세토니트릴로 추출하며, 유

(乳)의 경우는 수산화나트륨으로 가수분해 후 추출한다. 추출액은 냉동하여 지방을 제거

한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외부흡

광검출기로 분석한다. 또한 이들의 정량은 각각 지표물질 (Marker residue)인 도라멕틴,

아버멕틴(avermectin) B1a, 에프리노멕틴 B1a 및 22, 23-디히드로 아버멕틴 B1a로 한다.

3) 장치



가) 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것


다) 표준원액 : 도라멕틴, 아바멕틴, 에프리노멕틴 및 이버멕틴 표준품을 각각 정밀히 달

아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다. 조제된 표준원액은 냉장 보관한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․

H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O)

1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) 아미노(NH2) 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급


가) 유(乳)

균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심 분리관에 취하고 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 가한 후 30초간 균질화 하고 1 N 수산화나트륨 120 μL를 가한 후 30초간 균질화 한다. 이 용액에 아세토니트릴 6 mL를 넣고 강하게 균질화 하여 2,000 G에서 5분간 원심분리 한 후 -20℃에서 30분간 방치한다. 상층액 4 mL를 유리시험관에 옮긴 후 50℃에서 질소농축하고 잔류물을 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 아미노 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세

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척한 후, 아세톤 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)

균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심 분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가한 후 강하게 균질화 한다. 이 균질화한 용액을 5분간 초음파추출하고 2,000 G에서 5분간 원심분리 한 후 -20℃에서 30분간 방치한다. 상층액 6 mL를 유리시험관에 옮긴 후 50℃에서 질소농축하고 잔류물을 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 아미노 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 아세톤 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유(乳), 알(卵) 외 식품

균질화 한 검체 2 g을 15 mL 원심 분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가한 후 강하게 균질화 한다. 이 균질화한 용액을 2,000 G에서 5분간 원심분리 한 후 -20℃에서 30분간 방치한다. 상층액 6 mL를 유리시험관에 옮긴 후 50℃에서 질소농축하고 잔류물을 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 아미노 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 아세톤 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분) A (%) B (%) 0.0 45 5520.0 20 8021.0 45 5530.0 45 55

(4) 유속 : 0.2 mL/분

(5) 주입량 : 20 μL

(6) 측정파장 : 245 nm

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각각의 피크 머무

름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 도라멕틴, 아바멕틴,

에프리노멕틴 및 이버멕틴 함량을 각각 구한다.

5.3.11 디메트리다졸(Dimetridazole), 메트로니다졸(Metronidazole), 로니다졸(Ronidazole)

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2) 분석원리

검체에 아세토니트릴을 가하여 추출하고 헥산으로 지방성분을 제거한다. 추출액은 감압

농축하고 메탄올에 녹여 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치





다) 표준원액：디메트리다졸, 메트로니다졸 및 로니다졸 표준품을 정밀히 달아 에틸아세

테이트에 녹여 100 μg/mL로 한다.

라) 표준용액：표준원액을 에틸아세테이트에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.05 M 인산완충용액(pH 7.0)：1 L 메스플라스크에 인산이수소암모늄(NH4H2PO4) 5.75 g

을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 기타시약：특급


균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 20 mL을 넣어 균질화

한 후 4℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리 한다. 상등액을 분액깔때기에 옮기고 헥산 20

mL를 넣고 강하게 진탕한 후 층이 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 취하여

프로판올 5 mL을 가하고 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한 후 잔류물을 메탄

올 1 mL에 녹이고 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：0.05 M 인산완충용액：아세토니트릴(88:12)

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 측정파장：312 nm

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진

각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여

검체 중 디메트리다졸, 메트로니다졸 및 로니다졸의 함량을 각각 구한다.

나) 정량한계：0.02 mg/kg

5.3.12 디미나진(Diminazene)



2) 분석원리

검체 중 디미나진을 메탄올로 추출한 후 헥산 또는 Sep-Pak C18 카트리지로 정제하여

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 분석한다.

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3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기4) 시약 및 시액



다) 표준원액：디미나진 표준품을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 메탄올 10 mL를 가하여 잘 녹인 다음 메탄올로 표시선까지 채워 100 mg/L의 농도가 되게 한다.

라) 표준용액：표준원액을 메탄올로 적당한 농도가 되도록 희석하여 사용한다.

마) Sep-Pak C18 카트리지

바) 기타시약：특급5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)

유 1 mL에 메탄올 1 mL를 가하여 혼합한 후 미리 메탄올 2 mL, 물 5 mL로 세척한 Sep-Pak C18 카트리지에 통과시킨다. 물로 카트리지를 다시 세척한 후 1 mL의 용출액(아세토니트릴에 0.005 M 옥탄-설폰산 나트륨(sodium octane-sulphonate), 2% 초산이 되도록 만든 용액)로 용출한 후 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유(乳)를 제외한 식품

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 메탄올 20 mL와 무수황산나트륨 5 g, 0.2 M 인산암모늄 0.5 mL 그리고 50% 인산 0.05 mL를 첨가한 후 30분간 진탕한다. 이액을 10분간 원심분리(3,000 G)하여 상층액을 6 mL 취한 후 헥산 6 mL를 가하고 진탕한다. 헥산층은 버리고 남은 액을 바로 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 유(乳)

(가) 칼럼：Nova-Pak C18(5 X 100 mm, 10

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식품 중 잔류동물용의약품시험법hfplatform.kfri.re.kr/down/_rules_10.pdf · 2018-01-29 · 보관 시에는 냉동보관한다 5 ., .., ., $122!- 의 아포액 , 9 에