实验项目实验项目细菌感染标本检验细菌感染标本检验 II

医学检验实验教学中心医学检验实验教学中心

实验目的：实验目的： 以未知标本标本的临床诊断为切入点，采以未知标本标本的临床诊断为切入点，采

用用 PBLPBL 教学方法，培养学生自主学习、临教学方法，培养学生自主学习、临床思维和分析解决问题的能力。床思维和分析解决问题的能力。

实验教学设计实验教学设计 实验课前预先实验课前预先 22 周给同学提供来自周给同学提供来自 22 名细名细

菌感染患者标本及相关的临床资料，要求菌感染患者标本及相关的临床资料，要求学生做出病原学诊断。学生做出病原学诊断。

实验课前学生查阅资料，分组讨论，提交实验课前学生查阅资料，分组讨论，提交实验设计。教师引导学生网上讨论，对设实验设计。教师引导学生网上讨论，对设计方案评价分析。计方案评价分析。

学生根据实验设计进行实验。学生根据实验设计进行实验。 对实验结果结果讨论分析，明确实验诊断。对实验结果结果讨论分析，明确实验诊断。

细菌感染标本检验遇到的实际问题细菌感染标本检验遇到的实际问题 两个血液增菌标本，标本两个血液增菌标本，标本 11 在在 EMBEMB 培培

养基上不生长，在血平板上生长，小菌落，养基上不生长，在血平板上生长，小菌落，有溶血有溶血 ; ; 标本标本 22 在在 EMBEMB 培养基上生长，培养基上生长，有金属光泽，在血平板上生长，中等大小有金属光泽，在血平板上生长，中等大小菌落，有溶血菌落，有溶血 ;;

接下来对这两个标本应如何进行鉴定？接下来对这两个标本应如何进行鉴定？

对标本对标本 11 的鉴定的鉴定 分析：在分析：在 EMBEMB 上不生长，血平板上生长，上不生长，血平板上生长，

提示为革兰阳性细菌！提示为革兰阳性细菌！

故应实现做革兰染色故应实现做革兰染色 根据染色结果进一步做鉴定根据染色结果进一步做鉴定

革兰染色结果可能为：革兰染色结果可能为：

如为革兰阳性球菌，要进行葡萄菌属和链如为革兰阳性球菌，要进行葡萄菌属和链球菌属的鉴别。球菌属的鉴别。

触酶试验鉴定：触酶试验鉴定：

如触酶试验阳性应做葡萄菌属内的细菌鉴定如触酶试验阳性应做葡萄菌属内的细菌鉴定 金葡菌和表葡菌等鉴定：金葡菌和表葡菌等鉴定： 甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验 血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 耐热核酸酶试验耐热核酸酶试验 胶乳凝集试验胶乳凝集试验 APIAPI 葡萄球菌鉴定葡萄球菌鉴定

如触酶试验阴性，属链球菌属。应做如触酶试验阴性，属链球菌属。应做溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶

溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶

CAMPCAMP 试验阳性试验阳性 ---B---B 群链球菌群链球菌

PYR, VP PYR, VP 和和 BGUR BGUR 鉴别其他菌链球菌鉴别其他菌链球菌

做血清分型鉴定，做分出做血清分型鉴定，做分出 A, B, C, D, FA, B, C, D, F 和 和 GG 群链球菌群链球菌

溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶 ptochinptochin 试验和胆汁溶菌试验阳性为何菌？试验和胆汁溶菌试验阳性为何菌？

胆汁七叶苷试验阳性为牛型链球菌。胆汁七叶苷试验阳性为牛型链球菌。

溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶溶 应用应用 VP,VP, 脲酶，精氨酸，七叶苷，甘露醇脲酶，精氨酸，七叶苷，甘露醇

和三梨醇试验鉴定。和三梨醇试验鉴定。

可鉴定出温和链球菌群，变异链球菌群，唾液链球菌群和米勒链球菌群

如为革兰阳性杆菌应怀疑李斯特杆菌如为革兰阳性杆菌应怀疑李斯特杆菌

特点： 狭窄的溶血环， 25 度有动力， 37 无动力。溶溶溶溶溶胆汁七叶苷阳性，脲酶和硝酸盐阴性。

对标本对标本 22 的鉴定：的鉴定： 分析：根据在分析：根据在 EMBEMB 的生长现象，应为革兰的生长现象，应为革兰

阴性菌。阴性菌。 故首先做革兰染色：可能为故首先做革兰染色：可能为

如何根据葡萄糖氧化发酵试验和氧化酶试如何根据葡萄糖氧化发酵试验和氧化酶试验等确定是否为肠杆菌科细菌？验等确定是否为肠杆菌科细菌？

O/F 培养基（半固体高层） O/F ： O O/F ： F

指示剂：溴麝香草酚蓝 培养基 pH ： 7.0,

肠杆菌科：葡萄糖发酵和氧化酶阴性肠杆菌科：葡萄糖发酵和氧化酶阴性 弧菌科： 葡萄糖发酵和氧化酶阳性弧菌科： 葡萄糖发酵和氧化酶阳性 非发酵菌：葡萄糖氧化或不分解和氧化酶阳性非发酵菌：葡萄糖氧化或不分解和氧化酶阳性 巴斯德菌科：葡萄糖发酵和氧化酶阴性，球杆巴斯德菌科：葡萄糖发酵和氧化酶阴性，球杆 状，无鞭毛。状，无鞭毛。

肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌鉴定鉴定

1) 1) 常规生化鉴定常规生化鉴定 :: 为实验室最常用的方为实验室最常用的方 法。各菌属法。各菌属 (( 种种 )) 主要生化特性有助主要生化特性有助 于鉴定细菌。于鉴定细菌。

肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌鉴定鉴定

2) 2) 鉴定试剂盒鉴定试剂盒 :: 选用标准化和商品化的选用标准化和商品化的 微生物鉴定试剂盒，特点是质量可微生物鉴定试剂盒，特点是质量可 靠稳定鉴定能力强，并与编码技术靠稳定鉴定能力强，并与编码技术 结合，可用仪器读取结果，实现自结合，可用仪器读取结果，实现自 动化，并提高了工作效率。 动化，并提高了工作效率。

3) 3) 血清学鉴定：用特异性抗血清进血清学鉴定：用特异性抗血清进 行血清学分型鉴定后才能作出最行血清学分型鉴定后才能作出最 终报告。终报告。

4) 4) 分子生物学鉴定：可鉴定至科、分子生物学鉴定：可鉴定至科、 属 、种、血清型和肠毒素基因属 、种、血清型和肠毒素基因 等。甚 至可区分致病菌株和非等。甚 至可区分致病菌株和非 致病菌株。致病菌株。

标本标本 22也可能为不发酵革兰阴性杆也可能为不发酵革兰阴性杆菌菌

一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌。胞的革兰阴性杆菌。

不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌

假单胞菌属假单胞菌属 ((PseudomonasPseudomonas) ) 产碱杆菌属产碱杆菌属 ((AlcaligenesAlcaligenes)) 不动杆菌属不动杆菌属 ((AcinetobacterAcinetobacter)) 莫拉菌属莫拉菌属 ((MoraxellaMoraxella)) 无色杆菌属无色杆菌属 ((AchromobacteAchromobacter)r) 金氏杆菌属金氏杆菌属 ((KingellaKingella))

黄杆菌属黄杆菌属 ((FlavobacteriuFlavobacteriu

mm)) 艾肯菌属艾肯菌属 ((EikenellaEikenella)) 土壤杆菌属土壤杆菌属 ((AgrobacteriumAgrobacterium)) 黄单胞菌属黄单胞菌属 ((XanthomonasXanthomonas)) 丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属 ((ComamonasComamonas))

常见不发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定常见不发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定

试验试验 假单胞菌属假单胞菌属 无色杆菌属无色杆菌属 黄杆菌属黄杆菌属 不动杆菌属不动杆菌属 产碱杆菌属产碱杆菌属 丛毛菌属丛毛菌属 莫拉菌属莫拉菌属

氧化酶氧化酶 ++ ++ +/-+/- -- ++ ++ +/-+/-

O/FO/F 试验试验 O/-O/- OO OO O/-O/- -- -- --

动力动力 +/-+/- +/-+/- +/-+/- -- ++ ++ --

注：注： ++ ：： 90%90% 以上阳性；以上阳性； -10%-10% 以下的阳性；以下的阳性； +/-+/- ：约：约 70%70% 为阳性；为阳性； OO ：为氧化。：为氧化。

不发酵革兰阴性杆菌

非发酵菌 嗜麦芽窄食单胞菌

葡萄糖产酸 无色杆菌属

土壤杆菌属

假单胞菌属

动力

+OX

OX－ 不动杆菌属

+葡萄糖产酸黄色素

摩拉氏菌属

黄杆菌属

－ －－++

端鞭毛

－

+

－

+

+

产碱杆菌属

尿素

－

+

常见不发酵菌的鉴定双岐索引

铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌（（ P. aeruginosaP. aeruginosa))

血平板上毛玻璃血平板上毛玻璃样，金属光泽，样，金属光泽，生姜味生姜味

可产生多种色素：可产生多种色素： 荧光素与绿脓素荧光素与绿脓素

铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（ P. aeruginosaP. aeruginosa))

绿脓素绿脓素

不动杆菌不动杆菌 醋酸钙不动杆菌醋酸钙不动杆菌 ((A.calcoaceticusA.calcoaceticus)) 洛菲不动杆菌洛菲不动杆菌 ((A.lwoffiA.lwoffi)) 溶血不动杆菌溶血不动杆菌 ((A.haemolgticusA.haemolgticus)) 鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌 ((A.baumanniiA.baumannii)) 琼氏不动杆菌琼氏不动杆菌 ((A.juniiA.junii)) 约翰逊不动杆菌约翰逊不动杆菌 ((A.johnsoniiA.johnsonii))

思考题思考题 1.1. 肠杆菌科细菌的主要特点？肠杆菌科细菌的主要特点？ 2.2. 临床微生物自动化检测系统及其实验原临床微生物自动化检测系统及其实验原理？理？