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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA Facutlad de Ciencias Químicas “MEDICIÓN DE METABOLITOS MICROBIANOS” MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS Docente: Dr. Iván Salmerón Martín Narváez Flores 215561

“ MEDICIÓN DE METABOLITOS MICROBIANOS” MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS Docente: Dr. Iván Salmerón Martín Narváez Flores 215561

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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA Facutlad de Ciencias Qumicas

METABOLISMO

Metabolismo: Red de Reacciones Bioqumicas con las que el organismo obtiene la energa requerida para todas sus actividadesMetabolismo microbiano: Conjunto de procesos mediante los cuales un microorganismo obtiene la energa y los nutrientes que necesita para crecer.

2METABOLITOSMetabolitoUn metabolito es cualquier molcula utilizada oproducida durante el metabolismo.

Metabolito primariomolculas de bajo peso molecular que intervienen,bien como productos finales o intermediarios, en lasdistintas rutas anablicas y catablicas.

3METABOLITOS PRIMARIOS

Metabolitos primarios:1) Son necesarios para el crecimiento del microorganismo que los produce.2) Se producen como productos nicos3) Son producidos por todos los microorganismos (son universales).4METABOLITOS SECUNDARIOSSe producen cuando la velocidad de crecimiento es baja, no tienen pues una funcin esencial en el crecimiento.

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FORMACIN DE METABOLITOS6TCINAS DE CUANTIFICACIN DE METABOLITOSMETABOLITOTCNICAMICROORGANISMOPerxidosTitulacincido acticoAcetaldehdoIndolCromatografa lquida de alta eficacia Riboflavina (B2)Ashbya gossypiiLisinaBrevibacterium flaviumSorbosacido glucnicoNefelometraGlicerolEspectroscopia de masasCobalamina (B12)ElectroforesisPropionibacteriumPseudomonas dinitrificans 7METABOLITOTCNICAMICROORGANISMOFenolesEspectrofotometraTitulacincido glutmicoCorynebacterium glutamicumcido lcticoLactobacillusEtanolEbulloscopaSaccharomyces cerevisiaeIndolFluorimetracido lcticoCromatografa en capa finaTitulacinAminascido succnicocido fumricocido ctricoAspergillus nigerGlicerolCromatografa de gases8METABOLITOTCNICAMICROORGANISMOToxinas: Cromatografa lquida de alta eficacia

Aflatoxinas Aspergillus flavusFumonisina B1 FusariumEnzimas:Mtodo de TatiniDesoxirribonucleasa termoestable Staphylococcus aureus9TITULACIN

La titulacin es un mtodo para determinar la cantidad de una sustancia presente en solucin. Una solucin de concentracin conocida, llamada solucin valorada, se agrega con una bureta a la solucin que se analiza. En el caso ideal, la adicin se detiene cuando se ha agregado la cantidad de reactivo determinada en funcin de un cambio de coloracin en el caso de utilizar un indicador interno, y especificada por la siguiente ecuacin de la titulacin. A este punto se le llama punto de equivalencia 10Perxidos: Provocan enranciamiento de alimentos con alto contenido en grasas o aceites adquiriendo un sabor desagradable. Produce degradacin de color en productos crnicos.

cido actico: Sabor a vinagre. Componente fundamental para el aroma de vino.

Acetaldehdo:Le otorga al vino un olor desagradable11CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC)

Ampliamente utilizadaGran sensibilidadDeterminaciones cuantitativas exactasDeterminacin de compuestos no voltiles (alto Peso Molecular,iones metlicos) o termolbilesAplicabilidad a sustancias de inters general (industria, salud,medioambiente).Aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos,carbohidratos, frmacos, terpenoides, plaguicidas, antibiticos,esteroides, etcInteracciones qumicas entre la muestra, la fase mvil y el rellenode la columna, determina el grado de migracin y separacin decomponentes contenidos en la muestra.12Indol :Proviene de triptfano, aromatizante y precursor del pigmentos.

Riboflavina B2:Vitamina del complejo B, benfica para la piel y la vista.

Lisina:Aminoacido esencial.

Sorbosa:Utilizada en produccin comercial devitamina CVitamina C por medio del microorganismoKetogulonicigenium vulgare

13Aflatoxinas:Se desarrolla en granos almacenados, efectos txicos inmediatos.Fumonicina: Txica, inhibe metabolismos de lpidos.

14ESPECTROSCOPA DE MASA

Glicerol:Presente en vino, subproducto de levaduras.

Laespectrometra de masases una tcnica experimental que permite la medicin deionesderivados demolculas. Elespectrmetro de masases un instrumento que permite analizar con gran precisin la composicin de diferentes elementos qumicos eistoposatmicos, separando los ncleos atmicos en funcin de su relacinmasa-carga(m/z). Puede utilizarse para identificar los diferentes elementos qumicos que forman un compuesto, o para determinar el contenido isotpico de diferentes elementos en un mismo compuesto. Con frecuencia se encuentra como detector de uncromatgrafo de gases, en una tcnica hbrida conocida por sus iniciales en ingls, GC-MS.

15NEFELOMETRA

La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa en la dispersin de la radiacin que atraviesan las partculas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensin de partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbiaEl procedimiento generalmente es emprico y slo se consideran 3 factores:1. La concentracin: Mayor sea el nmero de partculas, mayor es la dispersin.2. Tamao de la partcula: Factores como el pH, la velocidad y orden de la mezcla, concentracin de los reactivos, duracin del estado de reposo y la fuerza inica.3. Longitud de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si estn coloreadas, se debe escoger una porcin del espectro electromagntico en la que la absorcin del medio se reduzca al mnimo.La eleccin entre uno de ambos mtodos reside en la dispersin de luz, si es extensa, es apropiado aplicar la turbidimetra, en cambio si es mnima es apropiada la nefelometra. De la nefelometra se obtienen mejores resultados, porque determina concentraciones de pocas partes por milln (ppm), con una precisin de 1 al 5%.La nefelometra se basa en la medicin de radiacin dispersa, en cambio la turbidimetra en la medicin de la intensidad de un haz disminuido.

16 cido glucnico (pentahidroxicaproico) Es el producto de oxidacin de la D-glucosa en el C1Se utiliza como acidulante para alimentos.Usado universalmente como un cido latente en polvos para hornear, sustancias leudantes para panificacin.

17ELECTROFORESISCobalamina Vitamina B12 Fundamental para la absorcin de hierro.

La electroforesis es un mtodo de laboratorio en el que se utiliza una corriente elctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas segn su tamao y carga elctrica a travs de una matriz gelatinosa.18ESPECTROFOTOMETRA

Laespectrofotometraes el mtodo deanlisis pticoms usado en lasinvestigaciones qumicasybioqumicas. Elespectrofotmetroes un instrumento que permite comparar laradiacinabsorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida desoluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.19Fenoles. Funcionan como antioxidantes.cido glutmico. Aminocido esencial.Acido lctico. Producto de la fermentacin lctica, aporta sabor y consistencia.

20EBULLOSCOPA

La ebulloscopa es la determinacin del punto de ebullicin de un lquido en el que se halla disuelta una sustancia, lo que permite conocer el grado de concentracin de la solucin.El soluto que se encuentra en un lquido disminuye su presin de vapor, lo que se traduce en un incremento del punto de ebullicin.se mide con un ebulloscometro o ebullometro

21Etanol (Alcohol Etlico): Presente en bebidas alcohlicas, medicamentos y cosmticos, buen disolvente, anticongelante, combustible y desinfectante.

22CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

En cromatografa en capa fina se utiliza una placa cromarogrfica inmersa verticalmete en un eluyente apolar; La placa cromatogrfica consiste en una fase estacionaria polar (comunmente se utiliza slica gel) adherida a una superficie solida con algun agente cementante. El eluyente debe ser un compuesto liquido apolar, generalmente orgnico. Para realizar la CCF, se debe apoyar la placa cromatografica sobre algun recipiente o camara que contenga la fase lquida a aproximadamente 1 cm (la distancia entre el principio de la placa y la muestra que se desea analizar).23Aminas. Se oxidan con facilidad, cambian el color de los productos y forman compuestos de olor desagradable.Acido succnico. Acidulante y regulador de pH.cido fumrico. Aditivo que proporciona estabilidad.cido ctrico. Conservador y saborizante.24ESPECTROFLUORIMETRA

Indol

La espectroscopia de fluorescencia es un tipo de espectroscopia electromagntica que analiza la fluorescencia a partir de una muestra. La espectroscopia de fluorescencia utiliza un rayo de luz, normalmente ultravioleta, que excita a los electrones de las molculas de ciertos compuestos y hace que emitan luz25CROMATOGRAFA DE GASES

26MTODO DE TATINIDesoxiribonucleasa termoestable: Indica de manera indeirecta la presencia de grandes cantidades de Staphylococus aureus en los alimentos.

Rosa =positivo

20 g de muestra + 40 mL de agua destilada (ajustar pH 3.8) Centrifugacin y luego adicionar cido tricloroactico en fro al centrifugado Centrifugar y luego disolver en tris-buffer-metil-aminometano y en 1 mL de Cl2Ca 0,1M (pH a 8,6) Ebullicin por 15 min. enfriado a 50C Depositar la extraccin en hoyuelos habilitados con agar-DNasa azul de toluidina Incubacin 37C x 24 hrs.

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