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临床 临床 PCR PCR 检验标本的采集、 检验标本的采集、 处理、保存及核酸提取方法 处理、保存及核酸提取方法 江西省肿瘤医院 陈文学 江西省肿瘤医院 陈文学

临床 PCR 检验标本的采集、处理、保存及核酸提取方法

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临床 PCR 检验标本的采集、处理、保存及核酸提取方法. 江西省肿瘤医院 陈文学. 检验误差的发生率. 1997 年,一位意大利著名检验专家对急诊检验误差发生的种类和发生率进行了统计。结果显示,约有 68.2% 的检验误差发生在检验前期,而来自检验中期和检验后期的误差率分别为 13.3% 和 18.5% 。 2007 年,这位专家又进行了类似的统计,结果显示,检验前期的误差发生率仍高达 61.9%. 正确采集、运送、保存临床标本 的重要性. 质量保证关键性环节 解决涉及实验室检验的医患纠纷的方法之一. 核酸提取的重要性. 核酸提取是临床 PCR 检验最为关键的部分 - PowerPoint PPT Presentation

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  • PCR

  • 199768.2%13.3%18.5%200761.9%

  • PCR

    PCR

    PCR

  • ,,

  • ,RNAGITC()DNAEDTA,

  • DNARNAEDTA(PCR)6(2)12-20-70

  • ,,EDTA-Na2,DNA,4,RNARNA

  • ,,,,-70.

  • ,DNA,,1 mol/L NaOHPCR ,-70

  • 1Universal sample processing, USP 4-6 mol/LGuHCl 50 mmol/L Tris-HCl, pH7.5 25 mmol/L EDTA 0.5%Sarkosyl 0.1~0.2 mol/L -20.05%Tween 80310%Chelex-100( 0.03% Triton X-1000.3% Tween 20)

  • 1:0.1 mol/L NaOH50gK0.05% Triton X-100

  • GuSCNDNAPCR-alpha-casein

  • PCR,,,,510,,,DNA,-70.

  • ,(),DNA,23,DNA,,,,,,DNA;,-70

  • ,,,,,

  • HBV DNAHCV RNAPCR

  • DNA 50 mmol/L Tris-HCl10 mmol/L EDTA, 2% Triton X-100, 4 mol/L GITC, 0.3 mol/L 425-600um

  • ,,K50%,,1cm,,,50%.,46,,KDNA

  • DNARNA PCR

  • PCR : :UV

  • MLVTAQ DNADNARNA

  • g0.1U,100%

    I 1~3 U/g(5 mM Tris pH7.5, 1 mM CaCl2, 40 U RNase 25 2)

  • PCR,1PCRDNAHeminPCR21%(V/V)Taq

  • IgG IgGDNADNADNA

    PCR,IgGPCR

  • NaOHTaq DNADNANaOHDNA

  • 0.6% (wt/vol)BSATaq DNA2%vol/vol0.2%BSATaq DNA1020DNAT432gp32BSA

  • ,, (Triton-100)(K)

  • DNA-

  • RNA,RNARNaseRNase,

    RNaseRNaseRNA,RNA

  • RNA,RNase,RNA. RNase,1808,0.1%(DEPC)RNA,DEPCRNaseDEPC3721001515DEPC,DEPCRNA

  • RNA RNA,RNA,,RNase,0.1%DEPC3712,1001515

    ,DEPC,Tris,,TrisRNase

  • RNARNase RNase RNA,RNA, RNA

  • RNA

    K-

    -

  • -

  • SPIN COLUMN Se NaI Immobilon-P

  • SPIN COLUMN123

  • Se

  • NaI

  • m2000 DNA/RNAPCR 96

  • SPRI-TE1-10 Vidiera NsP:96

  • QIAGEN BioRobot MDx Workstation96

  • MagNA Pure LC 2.0 System

  • A260A260/A280/

  • 1

  • 1 2 PCR

  • PCR2-3cm2cm

  • 34 RNAase

  • 5 EDTAPCR

  • 2 3 RNAchao tropic4mol/L(Guanidinium isothiocyanae,GITC),

  • 5mol/LGITCRNase4mol/LRNaseRNAGITC7RNARNAEDTA70

  • DNA10mmol/LTris,lmmol/LEDTA(pH7.5~8.0)4RNA8020