02 practica extracción de adn de células de mucosa bucal

Objetivo

En esta práctica realizaremos la extracción del ADN de las células de descamación del epitelio mucoso delinterior de la boca, poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento,que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de las larguísimas cadenas de esta molécula.

Tras la extracción se suspenderá el ADN recuperado en alcohol de 70º para su conservación.

Material necesario

- Agua mineral - Alcohol de 96º muyfrío

- Cucharillas de plástico

- Palillo o varilla devidrio

- Sal común - Detergentelavavajillas

- Vasos desechables - Tubo de ensayo - Gradilla- Tubos eppendorf - Alcohol de 70º

Fundamento

El ADN se encuentra en el interior del núcleo detodas las células, disperso y muy replegado, unido aproteínas para formar la cromatina. Por lo tanto,podremos extraerlo a partir de prácticamentecualquier material de origen biológico. Para ello esnecesario romper las células para separar el núcleoy romper éste para liberar el ADN, separarlo de lasproteínas y precipitarlo para separarlo de lasolución acuosa.

El ADN (y también algo de ARN) apareceráentonces como un agregado de fibras blanquecinasde aspecto mucoso que se adhieren a una varilla devidrio o a la pipeta. Podemos añadir unas gotas deazul de metileno o verde de metilo al tubo parateñirlo. Por último, se puede situar sobre un porta,teñirlo de la misma manera y observarlo almicroscopio. También se puede conservardejándolo secar sobre papel de filtro o suspendidoen alcohol al 50% o 70%.

Procedimiento

Preparar un tubo de ensayo con alcohol etílico de 96 ºpor cada alumno y poner a1.

Extracción de ADN de células de mucosa bucal http://platea.pntic.mec.es/~cmarti3/bio/ADN/adn3/ppal.htm

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enfriar lo máximo que sea posible,por ejemplo en baño de agua con hielo,mientrasse realizan los pasos siguientes.

Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enérgicamente durante almenos medio minuto para arrastrar el mayor número posible de células dedescamación de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado salivapara eliminar la acción de los enzimas contenidos en ella).

2.

Mientras tanto pondremos una pequeña cantidad de agua destilada (o mineral) enel mismo vaso, unos 20ml, y añadimos dos pizcas de sal común y un par de gotasde detergente lavavajillas.

3.

Expulsar el agua en el vaso de precipitados sobre la solución anterior. Dejaremosactuar durante unos 10 minutos, removiendo de vez en cuando suavemente paradisolver estos componentes evitando la formación de espuma.

4.

A continuación, añadir la solución suavemente al tubo de ensayo que contiene elalcohol muy frío dejándola resbalar por la pared del tubo inclinado. El filtrado, másdenso que el alcohol y algo turbio, se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposardurante 2 ó 3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formará un sobrenadantepor encima de la fase acuosa, en la que se encuentra el ADN en disolución,provocando que éste precipite..

5.

Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcohol-aguaformando una masa blanquecina que asciende lentamente formando un grumo deaspecto algodonoso.

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Tras unos minutos de reposo, el ADN tiende a subir hacia la superficie del alcohol.7.

Entonces podremos recogerlo utilizando una varilla de vidrio, una pipeta Pasteur osimplemente un palillo. Para ello, se introduce en la masa de ADN y se extraesuavemente mientras se hace girar entre los dedos.

8.

Entretanto habremos preparado los tubos eppendorf con alcohol de 70º para laconservación del ADN.

9.

Una vez extraído el ADN podemos suspenderlo en el tubo eppendorf u otrorecipiente adecuado para su conservación.

10.

Guión de la práctica

Enlaces relacionados

César Martínez MartínezDepto. Biología y GeologíaIES "Duque de Rivas"Rivas Vaciamadrid (Madrid)cesar.martinez educa.madrid.org


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