SGIT-INIA DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

1º FORO DE COLABORACIÓN PÚBLICO-PRIVADA EN SANIDAD ANIMAL Sector Porcino

13 de Noviembre de 2012

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

Grupos de investigación (porcino):

• Inmunología porcina:

F. Alonso, J. Domínguez, A. Ezquerra, G. del Real, C. Revilla

• Biotecnología y Biología Molecular y Celular

R. Blasco, J.C. Saiz

• Biotecnología de virus animales

C. Alonso, J. M. Escribano

Spin off

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

Modelos víricos (porcino):

Virus de la estomatitis vesicular

Virus de la fiebre aftosa

Virus de la peste porcina africana

Virus de la peste porcina clásica

Virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino

Virus de la gripe

Enterovirus porcinos

Virus de la hepatitis E

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

Líneas de investigación (porcino):

Desarrollo de:

Vectores virales

Adyuvantes

Biofactorias

Vacunas

Sistemas de detección (serológica y genómica)

Ac Monoclonales

Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

• Hasta 8 veces más producción • Mejor expressión y secrección

Líneas de investigación (porcino):

Vectores virales:

Mejora de sistemas de expresión

Baculovirus

HindIII EcoRI

YFG

Amp

Myc

pRB21-Myc-His

HIS 97 kDa

54 kDa

37 kDa

116kDa

199kDa

Coomassie Suero porcino (IgG)

Vaccinia

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

Líneas de investigación (porcino):

Biofactorias

• IBES® = Improved Baculovirus Expression System

100 mg/L

400 mg/L

1,000 mg/L

Conventional Bac

Top-Bac®

IBES® + Top-Bac®

Líneas de investigación (porcino):

Adyuvantes

Direccionamiento

Uso de ligandos específicos como adyuvantes para el

direccionamiento de antígenos a células de SI

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

Nanopartículas de transporte dirigido para vacunas

Análisis de la capacidad inmunomoduladora

de citoquinas y quimioquinas

Líneas de investigación (porcino):

Adyuvantes

Direccionamiento

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

poly I:C

IRES

S

PBS

nAb

100 pfu

0 5 10 15 0

25

50

75

100

dpi

Surv

ival

(%

)

5´NCR

VPg

S

IRES

Pk

S

IRES

Cn

5´NCR

(403) (470)

(1.335)

Análisis de la capacidad

inmunomoduladora de regiones

genómicas no codificantes de

virus RNA

Líneas de investigación (porcino):

Sistemas de detección (genómica y serológica)

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

Polimorfismos del gen Mx1 en cerdo Ibérico Susceptibilidad a la infección por virus de Influenza porcina y PRRS

450 (a,wt)

450 422

422 (g, D28)

aa

ag

gg

aa ab ag bb gg

N (%) N (%) N (%) N (%) N (%)

IBÉRICO

TORBISCAL 134 (87,6%) _ 19 (12,4%) _ 0 (0%)

GUADYERBAS 27 (71,1%) _ 8 (21,1%) _ 3 (7,9%)

OTROS 139 (97,9%) 3 (2,1%) _ 0 (0%) _

JABALÍ 55 (88,7%) 5 (8,1%) _ 2 (3,2%) _

DUROC 32 (82,1%) 7 (17,9%) _ 0 (0%) _

LANDRACE 13 (65,0%) 6 (31,6%) _ 1 (5%) _

LARGE WHITE 21 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _

MEISHAN 16 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _

ZUMU 80 (100%) 0 (0%) _ 0 (0%) _

a b g

Líneas de investigación (porcino):

Sistemas de detección (serológica y genómica)

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

86 KDa

50 KDa

37 KDa

Antigen (ng/well)

A495

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1.2

80 40 20 10 5 2.5

0

2

4

6

8

0 1 2 3 4 5 6 7 8

EL

ISA

“ca

sero

”

(P/N

)

Golden Standard (Ratio)

ESPECIFICIDAD SENSIBILIDAD

Humano Porcino Humano Porcino

“Casero”

comercial

96.4 % 100 %

96,4 % 88.2 %

96.9 % 100 %

75 % 83,3 %

Desarrollo, optimización y validación de inmunoensayos:

Especificidad y Sensibilidad

Desarrollo y caracterización de anticuerpos monoclonales para:

el análisis del SI porcino, con énfasis en APC

Líneas de investigación (porcino):

Ac Monoclonales

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Inmunoensayos y caracterizacion de interacciones célula-virus

4G

11

2F

8

BAC-ORF2

BAC-OR 2

BAC-Δ (1-111)

ORF2

BAC-Δ (1-111) ORF2

BAC-CONTROL

BAC-CONTROL

SIN INFECTAR

SIN INFECTAR

Líneas de investigación (porcino):

Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

O

OH

VPA

BHK-21 8 h

BHK-21 25 h

Vero 8 h

Vero 25 h Cel

l via

bili

ty (%

)

0

20

40

60

80

100

120

0 0.1 1 10 100 1000 VPA (mM)

7 VIRAL FAMILIES (ENVELOPED & NON-ENVELOPED)

Log

viru

s yi

eld

(PFU

/ml)

1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11 12

EMCV ERAV SFV SINV VSV LCMV WNV USUV EMCV SFV SINV VSV LCMV USUV

Control VPA

ERAV WNV * * * * * * * * * * * * * *

Vero

Non-enveloped Enveloped Non-enveloped Enveloped

ASFV ASFV

Preinfection treatment Post-infection treatment

Inhibición de la multiplicación de virus con envuelta en

cultivo celular

Líneas de investigación (porcino):

Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA

• Antivirales:

Péptidos antivirales inhibidores: impiden el transporte de virus

• Estatinas: Inhiben el colesterol

• Antivirales de fuentes naturales:

• resveratrol y oxyresveratrol (complemento piensos)

Oxyresveratrol Resveratrol

(trans-2,3,4,5-tetrahydroxystilbenes)