EVALUACION DE ECOTOXICIDAD MEDIANTE EL EMPLEO DE ALGAS AISLADAS DEL RIO URUGUAY

Storino A., Parise C., Planes E.*INTI Química

biotec@inti.gob.ar

1. OBJETIVO

2. DESCRIPCIÓN

3. LOGROS Y RESULTADOS

Ensayo con sulfato de cinc con algas aisladas del Río Uruguay, controles y concentraciones ensayados

Los estudios de toxicidad empleando algas verdes unicelulares se encuentran entre los más utilizados para la evaluación de la ecotoxicidad de efluentes, cursos de agua contaminados y sustancias químicas. La cepa de alga empleada para realizar ensayos normalizados es de origen europeo (Pseudokirchneriella subcapitata); en los casos que se desea evaluar un sitio específico, se recomienda usar especies que sean propias de ese ambiente.

Ensayo con sulfato de cincEl ensayo consiste en determinar la inhibición del crecimiento de un cultivo del alga aislada al ser expuesto a distintas concentraciones de sulfato de cinc.Se prepararon soluciones con distintas concentraciones (de 1000 a 2 µg/l) de sulfato de cinc, y se inocularon con el número de algas necesario para alcanzar una densidad celular inicial de 100.000 células de alga por mililitro y sus respectivos controles. Se incubaron durante 72 hs a 28º C, bajo luz blanca continua. Al finalizar el período de incubación se realizó el conteo de algas en cámara de Newbauer.La concentración de cinc de la solución a partir de la cual se prepararon las distintas diluciones se determinó por espectrometría de absorción atómica.

Se determinó para cada concentración la tasa de crecimiento específica y la inhibición de la tasa de crecimiento respecto del control; se calculó la concentración inhibitoria 50 (CL50) que es la concentración de cinc que inhibe en un 50% la tasa de crecimiento.

La cepa aislada creció en forma satisfactoria en un medio de cultivo sintético. Fue identificada dentro del género Pseudokirchneriella.El método desarrollado puede aplicarse para evaluar tanto muestras ambientales como sustancias químicas puras.El resultado obtenido con el tóxico de referencia (cinc) muestraque la cepa aislada es más resistente a la acción tóxica del cinc

que la cepa empleada para realizar ensayos normalizados. Si bien ambas pertenecen al mismo género, pueden existir diferencias en la sensibilidad a un mismo compuesto entre lascepas que expliquen estos resultados. Se continuará trabajando con esta cepa para estudiar su respuesta a otras sustancias y a muestras ambientales.

El objetivo del trabajo fue desarrollar un método para evaluar la toxicidad en muestras ambientales con una cepa aislada en nuestro laboratorio a partir de agua del Río Uruguay.

Pseudokirchneriella subcapitata

Concentración inhibitoria 50 (CL50) = 140 µg/l

Se realizó el aislamiento y la purificación de una cepa de alga unicelular, a partir de una muestra de agua del Río Uruguay tomada por INTI-Ambiente en la zona cercana a Concepción del Uruguay durante el mes de junio del año 2009.Se estudió el crecimiento del alga aislada en medios de cultivo sintéticos y se evaluó la respuesta de la cepa al sulfato de cinc, empleado como sustancia de referencia para establecer la sensibilidad de la cepa frente a la acción tóxica de una sustancia.

Aislamiento y purificación de la cepa de algaSe realizó un cultivo de la muestra de agua de río en un mediolíquido, el cual se incubó durante una semana a 24º C, bajo luzblanca continua.La separación de la cepa de alga de la flora acompañante, se realizó a partir del cultivo líquido, en agar para crecimiento de algas; se tomaron las colonias de color verde bien definidas y se realizaron sucesivos pasajes, hasta lograr un cultivo puro de algas. Se verificó la pureza de la cepa mediante la observación microscópica y el recuento de microorganismos; se conservó la cepa en tubos con agar algas y en cultivos líquidos con los cuales se realizaron los ensayos.