制限酵素

FastDige

st® Gr

eenバッフ

ァー従来の共通バッファー FastDigest®バッファーの他に、トラッキングダイ入 り の FastDigest® Greenバッファーも添付されています。

この Green バッファーを用いれば、DNA 消化後、そのままゲルにアプライ可能、時間をさらに節約できます！

FastDigest 検索

®

反応時間はたったの

反応バッファーは酵素

全てに

共通！Green反

応バッファーも添付

DNA消化の新しいスタンダード

５～15分！

そのままゲルにアプラ

イ可！

®

反応時間はたったの

反応バッファーは酵素

全てに

共通！Green反

応バッファーも添付

５～15分！

そのままゲルにアプラ

イ可！

たったの５～15分で切れる制限酵素

ご注意* DNA の量は濃度によって 10 μl へスケールアップ、または 5 μl へスケールダウンすることが出来ます。　

** 制限酵素と基質によってインキュベーションの時間が異なります。予め添付のデータシートをご覧下さい。

制限酵素

② サンプルが入ったチューブにそれぞれマスターミックスを加え、混合しスピンダウンします。

③ 37℃のヒートブロックまたはウォーターバスで 5～ 15 分間 **インキュベートします。

④ 10×FastDigest® バッファーをお使いの場合は、ローディングダイを加えます。

⑤ サンプルを 0.8 ～ 1.0%アガロースゲルにアプライし、10 ～ 20分間電気泳動します。DNAラダーはフェルメンタス社分子量マーカーをお勧めします。

2種類の酵素で二重消化する場合① 反応用マスターミックスを下記の通り調製します。

内　容量DNA

ヌクレアーゼフリー、滅菌水*10×FastDigest® バッファーまたは10×FastDigest® Green バッファーDNA*FastDigest® 制限酵素1FastDigest® 制限酵素2トータル

必要量

2μl　

必要量 (1μgまで )1μl1μl20μl

① プラスミドDNA、PCR 産物、ゲノムDNAを精製します。

② 反応用マスターミックスを下記の通り調製します。

1種類の酵素で消化実験する場合

内　容量

ヌクレアーゼフリー、滅菌水*10×FastDigest® バッファーまたは10×FastDigest® Green バッファーDNA*FastDigest® 制限酵素トータル

ゲノムDNA30μl

5μl

10μl (5μg)

5μl50μl

PCR産物17μl

　 2μl**

10μl (0.2μgまで )

1μl30μl

プラスミドDNA15μl

2μl

2μl (1μgまで )

1μl20μl

③ サンプルが入ったチューブにそれぞれマスターミックスを加え、混合しスピンダウンします。

④ 37℃のヒートブロックまたはウォーターバスで 5～ 15 分間 ** インキュベートします。

⑤ 10×FastDigest® バッファーをお使いの場合は、ローディングダイを加えます。

⑥ サンプルを 0.8 ～ 1.0%アガロースゲルにアプライし、10 ～ 20 分間電気泳動し　 ます。DNAラダーはフェルメンタス社分子量マーカーをお勧めします。

内　容 量ヌクレアーゼフリー、滅菌水 (品番 : R0581)

10×FastDigest® バッファーまたは10×FastDigest® Green バッファー

FastDigest® 制限酵素

① 2μl の DNA* サンプルをチューブに入れます。

② （n+1）サンプル分のマスターミックスを用意します。

③ 18μl のマスターミックス*を DNAを入れたチューブに加えます。

複数のDNAサンプルを消化する場合のセットアップ方法

( n + 1 )× 1 5μ l

( n + 1 )× 2μ l

( n + 1 )× 1μ l

● 通常 1時間～1晩かかる制限酵素処理がたったの 5～15分です！　 ( 二重消化、三重消化もたったの 5分～15分！）● 使用するバッファーは全て共通なので、入れ間違いによる失敗がなく、 二重消化の際にとても便利です。

● ラムダDNA、プラスミドDNA、ゲノムDNA、PCR 産物で消化確認済。中面ポスター上で最適反応時間をご確認いただけます。

● フェルメンタス社の「Fast Protocol」を利用すれば、DNA 抽出から電気泳動まで通常の３分の１の時間に短縮できます（データ、表１）。

● 反応時間を延長しても、スター活性は認められません。★

● FastDigest® バッファーは、様々なダウンストリームアッセイにも対応しています　　　（データ、表 2）。

● 低価格なので、ルーチンのクローニングのチェック等、お気軽にご利用いただけます。★但し、酵素によっては長時間消化した場合は一部スター活性が認められます。中面のポスター上の” スター活性が認められる時間” の項目でご確認ください。プラスミドDNAの純度が低い場合は、反応時間の延長が必要になる場合があります。

特　長

DNA消化反応のスケールアップ

量 内　容 1μｇ 2μｇ 3μｇ 4μｇ 5μｇFastDigest® 制限酵素 1μl 2μl 3μl 4μl 5μl

10×FastDigest® バッファーまたは 2μl 2μl 3μl 4μl 5μl

10×FastDigest® Greenバッファー

トータル 20μl 20μl 30μl 40μl 50μl

● DNA のメチル化に対する感度を常にカタログまたはデータシートで確認してください。

● ターゲットDNA配列によってはDNAの切断効率に影響を与える場合があります。完全に消化するために、インキュベートの時間を延長してください。

● DMSO やグリセロール等の PCR 添加物は、切断効率に影響を与えたり、スター活性の原因になる可能性があります。

● PCR 産物をクローニング、または 2 回目以降の制限酵素消化などのためにプライマーに制限酵素認識部位を付加する場合、フェルメンタス社ホーム ページ上（http://www.fermentas.com/techinfo/re/restrdigpcrii.htm）“PCR 断片の末端付近の切断効率（Cleavage Efficiency Close to the Termini of PCR Fragments）” をご覧いただき、効果的に切断が行えるように数塩基付加させてください。

● PCR 産物をクローニングする時は、PCR 産物を制限酵素処理前に精製すると、PCR 反応液由来の好熱性DNAポリメラーゼの活性を除去できます。

　 DNA ポリメラーゼは、DNA 末端を変化させ、ライゲーション効率を低下させる可能性があります。

● 反応液のトータルが20 μlを超える場合は、反応時間を3～5分延ばしてください。エアサーモスタットは反応液への熱の伝わりが遅いため、推奨していません。

注意事項

プロトコル

● 迅速なクローン解析に

● クローニング用ベクターの迅速準備

● PCR産物、ゲノムDNA、プラスミドDNA、ラムダDNAの切断

● 迅速なRFLPジェノタイピング

● 切断が困難なDNA の切断

表1：一般的なプロトコルとフェルメンタス社製品を用いた場合の実験時間の比較

手順 一般的なプロトコル フェルメンタス社「Fast Protocol」

DNA抽出

マスターミックスの準備

制限酵素によるDNAの消化

電気泳動

実験時間

40分

6分

60分

40分

146分

15分

6分

5～15分

17分

43～53分

GeneJET™ プラスミド ミニプレ キット

FastDigest® 制限酵素シリーズ

分子量マーカー・ZipRuler™ ・GeneRuler™ ・FastRuler™

表 2：FastDigest® Green Buffer、FastDigest® Buffer 中のDNA/RNA修飾酵素の活性

DNA/RNA修飾酵素 FastDigest® Green /FastDigest® Buffer 中での活性DNA Polymerase I, E.coli 100%Klenow Fragment 100%Klenow Fragment, exo‒ 100%T4 DNA Polymerase 100%T7 DNA Polymerase 100%T4 DNA Ligase* 75-100%

FastAP™ Thermosensitive 100%Alkaline Phosphatase

Shrimp Alkaline Phosphatase 100%T4 Polynucleotide Kinase 100%

* 0.5 mM ATPは、T4 DNAリガーゼ活性を要求する。

図1：フェルメンタス社の提供する「Fast Protocol」を用いた組換えDNAの解析

GeneJET™ミニプレキットで抽出したサンプルDNA（0.2μg） を

37℃、5分間 FastDigest® 制限酵素で処理した。

M：GeneRuler™ Express DNA Ladder ( 品番：SM1551 )

１：組換え pJET プラスミド

２：組換え pJET プラスミドを Fast Digest® NotⅠで消化

３：組換え pJET プラスミドを Fast Digest®BamⅠで消化

４：組換え pJET プラスミドを Fast Digest® NotⅠ/BamⅠで二重消化

５：始点から逆向きに外来遺伝子を挿入した組換え pJET プラスミドを Fast Digest® NotⅠ/BamⅠで二重消化

5000 bp

1500 bp

500 bp

M 1 2 3 4 5 M

図2：FastDigest® /FastDigest® Green Buffer での迅速なDNA消化とライゲーション

M：GeneRuler™ Express DNA Ladder ( 品番：SM1551)

C：プラスミドDNAコントロール（未消化）

１：プラスミドDNAを FastDigest® Buffer 中で FastDigest® EcoR I, FastDigest® Kpn I、 FastDigest® Sma I で三重消化

２：FastDigest® Buffer でライゲーション後の反応液

３：プラスミドDNAを FastDigest® Green Buffer 中で FastDigest® EcoR I、 FastDigest® Kpn I 、 FastDigest® Sma I で三重消化

４：FastDigest® Green Buffer 中でライゲーション後の反応液

M C 1 2 C 3 4 M

FastDigest®

BufferFastDigest® Green

Buffer

適　用

データ

トータルで1.5～2時間の節約！

For more information visitwww.fermentas.com/fastdigest

1μg/20μlプラスミドDNA

50501002020202015020202010010010050300200100200100200200208002500300201003005020010020050502020202050200100201001002010010050100202020020050501002050501002050201001005050100100505010020050255010050100501002001002008002500200400205020100502020040020200100800250040020050200202030010020505020501001005020505020400100200505020020100300100300100050100100202020501502501001005010010020200501002020800250015010020400100201002002002020401002010010050202015010020050205020100100200200205040020205050100100501003007504001200

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G↓GATCC

G↓GYRCCGAAGAC(2/6)↓GCAGC(8/12)↓T↓GATCAC↓TAG

GCCNNNN↓NGGC

A↓GATCT

GC↓TNAGCGKGCM↓CGCTAG↓C

↓(8/13)GAG(N)5CTC(13/8)↓CTGGAG(16/14)↓CCTNAGC(-5/-2)↓

YAC↓GTRGATNN↓NNATCGR↓CGYCC↓CNNGGGGATG(2/0)↓ACTGG(1/-1)↓GCAGC(8/12)↓

CG↓CGCGRY↓CGC↓GTACG

CCNNNNN↓NNGGCGTCTC(1/5)↓GGGAC(10/14)↓TT↓CGAAG↓GGCCCGDGCH↓C

T↓GTACA

CTCAG(10/8)↓T↓CATGA

ACCTGC(4/8)↓CCGCTC(-3/-3)↓GCAATG(2/0)↓R↓CCGGYG↓CGCGC

CCANNNNN↓NTGGGTA↓TACCC↓TNAGG

AT↓CGAT

G↓TACC↓TNAG

Gm6A↓TC

TTT↓AAACACNNN↓GTG

GACNNNN↓NNGTCC↓GGCCG

GACNNN↓NNGTCCTCTTC(1/4)↓GAG↓CTC

GGTCTC(1/5)↓

G↓GTNACCCCTNN↓NNNAGGRG↓GNCCY

G↓AATTC

GAT↓ATC

GGC↓GCC

GC↓NGCGGATG(9/13)↓TGC↓GCARTGC↓GCAYRGCGC↓YGG↓CC

GACGC(5/10)↓GCG↓CGTY↓RAC

A↓AGCTT

G↓ANTCG↓CGCGTT↓AACC↓CGGGTN↓NAC

GCNNNNN↓NNGCGGTAC↓CT↓CCGGACG↓CGCGCG↓GATC

GAAGA(8/7)↓

C↓AATTG

A↓CGCGTGAGTC(5/5)↓CCTC(7/6)↓CG↓CCGGCGTGG↓CCAT↓TAA

CAYNN↓NNRTGC↓CGG

GTTT↓AAACCC↓WGG

GAATGC(1/-1)↓GCC↓GGCCC↓SGG

C↓CATGG

CA↓TATG

G↓CTAGC

CATG↓GGN↓NCC↓GTSAC

GC↓GGCCGC

TCG↓CGAATGCA↓TRCATG↓Y

GAANN↓NNTTCCCANNNN↓NTGGT↓CCNGGACAC↓GTGRG↓GWCCY

GACNN↓NNGTCTTA↓TAA

CCCAGC(-1/-5)↓

CTGCA↓G

R↓GATCYGACN↓NNGTCCGAT↓CGCAG↓CTGGT↓AC

CG↓GWCCG

GAGCT↓C

G↓TCGACGG↓GWCCC

GCTCTTC(1/4)↓↓GATCG↓GNCC

CCTGCA↓GGAGT↓ACTCC↓NGGA↓CCWGGTGCATC(5/9)↓C↓TRYAG

GGCCNNNN↓NGGCC

CCC↓GGG

TAC↓GTA

A↓CTAGT

GCATG↓CAAT↓ATTAGG↓CCTC↓CWWGGATTT↓AAATACN↓GTACGT↓T↓CGAW↓GTACWGCSG↓CG↓AWTCT↓TAA↓AATT

CASTG(2/-7)↓

R↓AATTY

T↓CTAGA

C↓TCGAG

AatIIAccI (XmiI)Acc65IAciI (SsiI)AclI (Psp1406I)AcuI (Eco57I)*AfeI (Eco47III)AflII (BspTI)AgeI (BshTI)AjuI*AleI (OliI)AluIAlw21IAlw26IAlwNI (CaiI)ApaIApaLI (Alw44I)AscI (SgsI)AseI (VspI)AsiSI (SfaAI)AvaI (Eco88I)AvaII (Eco47I)AvrII (XmaJI)

BamHI

BanI (BshNI)BbsI (BpiI)BbvI (Lsp1109I)BclIBfaI (FspBI)BglI

BglII

BlpI (Bpu1102I)Bme1580I (BseSI)BmtI (BspOI)BplI*BpmI (GsuI)Bpu10IBsaAI (Ppu21I)BsaBI (BseJI)BsaHI (Hin1I)BsaJI (BseDI)BseGIBseNIBseXIBsh1236IBsiEI (Bsh1285I)BsiWI (Pfl23II)BslI (BseLI)BsmBI (Esp3I)*BsmFI (FaqI)*Bsp119IBsp120IBsp1286I (SduI)

Bsp1407I

BspCNI (BseMII)*BspHI (PagI)BspMI (BveI)*BsrBI (MbiI)BsrDI (BseMI)BsrFI (Cfr10I)BssHII (PteI)BstXIBstZ17I (Bst1107I)Bsu36I (Eco81I)

ClaI (Bsu15I) Csp6IDdeI (HpyF3I)

DpnI

DraIDraIII (AdeI)DrdI (AasI)EagI (Eco52I)Eam1105IEarI (Eam1104I)Ecl136II

Eco31I

Eco91IEcoNI (XagI)EcoO109I

EcoRI

EcoRV (Eco32I)

EheI

Fnu4HI (SatI)FokIFspI (NsbI)FspAIHaeII (BfoI)HaeIII (BsuRI)HgaI (CseI)HhaIHincII

HindIII

HinfIHinP1I (Hin6I)HpaI (KspAI)HpaIIHpy8IHpyF10VIKpnIKpn2IMauBIMboIMboII

MfeI (MunI)

MluIMlyI (SchI)MnlIMreIMscI (MlsI)MseI (SaqAI)MslI (RseI)MspIMssIMvaIMva1269INaeI (PdiI)NciI (BcnI)

NcoI

NdeI

NheI

NlaIII (Hin1II)NlaIV (BspLI)NmuCI

NotI

NruI (RruI)NsiI (Mph1103I)NspI (XceI)PdmIPflMI(Van91l)PfoIPmlI (Eco72I)PpuMI (Psp5II)PshAI (BoxI)PsiI (AanI)PspFl

PstI

PsuIPsyIPvuIPvuIIRsaIRsrII (CpoI)

SacI

SalISanDI (KflI)SapI (LguI)Sau3AI (Bsp143I)Sau96I (Cfr13I)SbfI (SdaI)ScaIScrFI (Bme1390I)SexAI (CsiI)SfaNI (BmsI)SfcI (BfmI)SfiI

SmaI

SnaBI (Eco105I)

SpeI (BcuI)

SphI (PaeI)SspIStuI (Eco147I)StyI (Eco130I)SwaI (SmiI)TaaITaiITaqITatITauITfil (PfeI)Tru1ITsp509I (TasI)TspRI (TscAI)

XapI

XbaI

XhoI

\8,000\13,000\6,000\12,000\8,000\7,000\19,000\9,000\10,000\11,000\10,000\11,000\12,000\9,000\10,000\6,000\9,000\12,000\12,000\10,000\11,000\11,000\20,000\7,000\18,000\8,000\8,000\10,000\11,000\14,000\9,000\7,000\13,000\14,000\13,000\12,000\11,000\11,000\7,000\11,000\9,000\9,000\6,000\12,000\12,000\4,000\11,000\11,000\5,000\14,000\12,000\6,000\5,000\7,000\9,000\6,000\12,000\6,000\10,000\11,000\9,000\8,000\13,000\8,000\10,000\13,000\7,000\5,000\9,000\6,000\10,000\6,000\12,000\6,000\8,000\8,000\10,000\12,000\9,000\6,000\6,000\12,000\9,000\10,000\9,000\6,000

￥16,000\6,000\11,000\7,000\15,000\11,000\10,000\11,000\16,000\11,000\6,000\11,000\10,000\11,000\6,000\16,000\9,000\9,000\5,000\8,000\11,000\7,000\9,000\11,000\9,000\14,000\8,000\5,000\10,000\7,000\13,000\14,000\9,000\14,000\11,000\12,000\9,000\14,000\6,000\14,000\10,000\11,000\5,000\19,000\48,000\8,000\20,000\54,000\7,000\13,000\12,000\9,000\12,000\5,000\12,000\32,000\51,000\9,000\9,000\10,000\12,000\12,000\24,000\6,000\12,000\13,000\15,000￥11,000\9,000\25,000\9,000\10,000\9,000\8,000\9,000\11,000\6,000\10,000\9,000\14,000\14,000\9,000\9,000\7,000\7,000\12,000\10,000\24,000\9,000\9,000\5,000\9,000\10,000\5,000\12,000\5,000\13,000\7,000\5,000\14,000\9,000\11,000\7,000\11,000\11,000\10,000\12,000\10,000\10,000\8,000\14,000\9,000\30,000\7,000\17,000

完全消化に必要なDNA末端からの距離 (bp)

酵素の不活化温度と時間

スター活性が認められる時間 (時間後 )

メチル化の影響 品番 包装

(反応回数)希望販売価格PCR産物 ゲノムDNA

FastDigest® 制限酵素1μl の消化時間 (分 )反応温度 (℃)

1μg/10μl1μg/20μl 0.2μg/30μlラムダDNA5’→3’特異性酵素

no effect

no effect

no effect

no effectno effect

no effect

no effect

no effect

no effectno effect

no effect

no effect

no effectno effectno effectno effect

no effect

no effectno effectno effectno effect

no effect

no effect

no effect

no effect

no effect

no effectno effectdoes not cutdam- DNAno effect

no effectno effect

no effectno effect

no effectno effect

no effect

no effect

no effect

no effect

no effect

no effectno effect

no effectno effectno effectno effectno effectno effect

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メーカー略号：FER

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制限酵素DNA消化の新しいスタンダード● 共通の反応バッファーとGreen 反応バッファーが全制限酵素に添付 ● 全制限酵素処理に必要な温度設定は1設定のみ　● 1μgのDNAの消化には、1μl の FastDigest® 制限酵素で消化可能 ● 5～ 15分で完全消化 !

* FastDigest® BsmBI (Esp3I) の消化には1mM DTTを加えます。FastDigest® AcuI (Eco57I)、AjuI 及び BspCNI (BseMII) の消化には 0.01mM SAM を加えます。 FastDigest® BpII 及び BsmFI (FaqI) の消化には 0.05mM SAMを加えます。 FastDigest® BspMI (BveI) の消化には 0.5μMオリゴヌクレオチドを加えます。

** 酵素の不活化にはスピンカラム精製もしくはDNAのフェノール/クロロフォルム抽出、エタノール沈殿処理をおすすめします。

ND ： 決定していません。

Dam

Dcm

CG

Dam

Dcm

CG

ターゲットDNAのDamメチル化によって活性が阻害されます。ターゲットDNAのDcmメチル化によって活性が阻害されます。ターゲットDNAのCpGメチル化によって活性が阻害されます。オーバーラップするDamメチル化によって活性が阻害される場合があります。オーバーラップするDcmメチル化によって活性が阻害される場合があります。オーバーラップするCpGメチル化によって活性が阻害される場合があります。

R = G or A K = G or T B = C, G or TY = C or T S = C or G D = A, G or TW = A or T H = A, C or T N = G, A, T or CM = A or C V = A, C or G

塩基のコ－ド表

®

　● 希望販売価格 ･･･ 「希望販売価格」は参考であり、販売店様からの販売価格ではございません。 記載の希望販売価格は２０1０年6月１日現在の希望販売価格です。 予告なしに改定される場合がありますので、ご注文の際にご確認下さい。消費税は含まれておりません。　● 使 用 範 囲 ･･･ 記載の商品は全て、「研究用試薬」です。 人や動物の医療用・臨床診断用・食品用等としては使用しないよう、十分ご注意ください。

品質私達にお任せください

制限酵素のパイオニア。フェルメンタスフェルメンタス

リトアニア南東部のビリニュスにあるフェルメン

タス社は、制限酵素をはじめとして分子生物学研

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限酵素、DNA/RNA修飾酵素、PCR関連製品、

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PureExtreme® FastDigest® 制限酵素は、ISO9001/ISO14001保証下で生産されています。

　● exo/end-ヌクレアーゼ活性のコンタミはありません。

　● ホスファターゼは含みません。

　● DNAを分解しません。

　● ロット差がありません。

フェルメンタス社の提案するPureExtreme®とは？？

フェルメンタス社では全ての商品を、EU や ISPE ガイドラインに準じて認定されたクラスDクリーンルームで製造しています。

確実な品質保証体制、ISO 標準要件に沿った業務フロー、商品の高い品質と性能を保証します。

最善のサポート＆サービスと優れた製品をご提供します。

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