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2006 届硕士学位论文答辩会. 硕士学位论文答辩. PI3K-AKT 信号传导通路对鼻咽癌细胞系 CNE-2Z 增殖和凋亡影响的研究. 研究生:龚晓萌 导 师:姜汉国副教授. 广东医学院病理教研室 2006.6.5. 立题依据. 立题依据. 研究背景. ■ 有 研究显示 PI3K/AKT 途径的改变和某些肿瘤的发生 和侵袭转移有关。 ■ PI3K/AKT 的抑制剂和其它药物合用可以增强放化 疗的敏感性。 ■ 目前国内外尚未见 PI3K/AKT 通路在鼻咽癌中的研究。它在鼻咽癌中是否有此作用,可能的机制如何,有待进一步研究。 - PowerPoint PPT Presentation
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20062006 届硕士学届硕士学位论文答辩会位论文答辩会
PI3K-AKT 信号传导通路对鼻咽癌细胞系 CNE-2Z 增殖和凋亡影响的研究
研究生:龚晓萌 导 师:姜汉国副教授
广东医学院病理教研室
2006.6.5
硕士学位论文答辩
立题依据
研究背景立题依据
■ 有研究显示 PI3K/AKT 途径的改变和某些肿瘤的发生和侵袭转移有关。
■PI3K/AKT 的抑制剂和其它药物合用可以增强放化 疗的敏感性。
■ 目前国内外尚未见 PI3K/AKT 通路在鼻咽癌中的研究。它在鼻咽癌中是否有此作用,可能的机制如何,有待进一步研究。
■ PI3K 和其下游分子所转导的抗凋亡信号已经成为药物研究领域的焦点。
本课题研究目的:
■ 研究 PI3K 、 AKT 、 bcl-2 在鼻咽癌中的表达及意义。
■ 初步探讨在鼻咽癌中抑制 PI3K/AKT 通路对鼻咽癌增殖和凋亡的影响及可能机制。
研究目的
技术路线
硕士学位论文答辩
临床病理部分: 技术路线
鼻咽粘膜慢性炎 鼻咽癌
常规组织切片、染色
IHC
PI3K AKT
bcl-2
实验病理部分: 技术路线
CNE2Z wortmannin
MTT
生长曲线IHC ELISA
细胞增殖
P-AKT
FCM
细胞凋亡PI3K 、 AKT
bcl-2 表达
RT-PCR
bcl-2
RNA 水平
结 果
硕士学位论文答辩
PI3K 、 AKT 和 bcl-2 在鼻咽粘膜慢性炎及鼻咽癌中的表达
组 别 N PI3K AKT bcl-2
Positive(%) Positive(%) Positive(%)
鼻咽粘膜慢性炎 31 5(16.12) 11(35.48 ) 12(38.71) 鼻咽癌 33 28(84.85) 24(72.73) 27(81.82)
鼻咽粘膜慢性炎组和鼻咽癌组间比较,差异均有显著性 (P<0.05)
临床病理部分:
结果
临床标本免疫组化结果
0102030405060708090
PI 3K AKT bcl - 2
鼻咽粘膜慢性炎鼻咽癌
空白对照
PI3K 在鼻咽炎组的表达 PI3K 在鼻咽癌组的表达
结果
AKT 在鼻咽炎组的表达 AKT 在鼻咽癌组的表达
结果
bcl-2 在鼻咽炎组的表达 bcl-2 在鼻咽癌组的表达
结果
鼻咽癌中 PI3K 与 bcl-2 表达的相关分析
Spearman 相关分析: PI3K 与 bcl-2 ( r=0.501 , P<0.005 ) ;
PI3K bcl-2 — + + + +++
0 3 2 0
4 2 4 1
2 2 6 6
0 0 0 1
—
+
++
+++
结果
实验病理部分: 结果
Wortmannin 对 PI3K 、 AKT 、 bcl-2 蛋白表达的影响
空白对照( SP×200 ) 对照组 PI3K 的强阳性表达( SP×200 )
低浓度组 wortmanninPI3K 中等强度表达高浓度组 wortmanninPI3K 弱阳性表达
随着 wortmannin 的浓度的增高, PI3K 的表达逐渐减弱
结果
对照组 wortmannin bcl-2 强阳性表达
高浓度 wortmannin 组 bcl-2 弱阳性表达低浓度 wortmannin 组 bcl-2 中等强度表达
随着 wortmannin 的浓度的增高, bcl-2 的表达逐渐减弱
结果
wortmannin 对 CNE-2Z 细胞增殖的影响( MTT)
0102030405060708090
100
0 25 50 75 100 125(nmol / L)浓度
(%)
抑制
率 24h48h
同一时间点各实验组细胞抑制率相比较差异有统计学意义( P<0.01 )
wortmannin 对 CNE-2Z 细胞生长曲线的影响
0
50
100
150
200
250
1 2 3 4 5天
细胞
数
对照25nmol50mnol75nmol
随着 wortmannin 浓度的增高,生长曲线逐渐右移,上升平缓且变得低平。同一时间点,各组间细胞数比较,差异有非常显著性 (P<0.001)
00. 5
11. 5
22. 5
33. 5
4
0 25 50 75(nmol / L)浓度
bcl-
2 mR
NA的
相对
表达
水平
CNE-2Z 细胞在不同浓度的 wortmannin 作用后bcl-2 的 mRNA 的改变
M 0 25 50 75
453bp
248bp
bcl-2mRNA 的表达随 wortmannin 浓度升高而逐渐降低,各组间比较差异均有非常显著性 (P<0.001)
25nM
50nM
0nM
75nM
结果
wortmannin 对 CNE-2Z 细胞凋亡的影响
0
5
10
15
20
25
0 25 50 75nmol / L)浓度(
凋亡
率(
%)
Wortmannin 使凋亡率升高,各组间的凋亡率比较,差异有非常显著性 (P<0.001)
wortmannin 对 CNE-2Z 细胞 P-AKT 的影响
01020304050607080
0 25 50 75noml / L浓度( )
unit/L
浓度
()
Wortmannin 使 P-AKT 表达降低,各组间的 P-AKT 浓度比较,差异有非常显著性 (P<0.001)
讨 论
临床病理部分 讨论
PI3K 、 AKT 、 bcl-2 在鼻咽癌中的表达及其意义
PI3K 、 AKT 和 bcl-2 的过表达与鼻咽癌的发生密切相关
■
■PI3K 和 bcl-2 的相关性提示 PI3K 和 bcl-2 可能在鼻咽癌的发生发展过程中具有协同的作用。
实验病理部分
■ PI3K 信号转导通路的抑制剂 wortmannin 可以通 过干扰 PI3K/AKT 通路有效抑制鼻咽癌 CNE-2Z 细胞的增殖,促进 CNE-2Z 细胞的凋亡
■ PI3K 信号转导通路的抑制剂对于临床鼻咽癌的治疗有一定的潜在应用价值
小结
■ Wortmannin 通过抑制 PI3K 的活性,下调磷酸化的 AKT 的表达水平
■ Wortmannin 有效抑制 CNE-2Z 细胞的生长和增殖,具有明显的量效关系;诱导细胞的凋亡
■ PI3K/AKT 通路的抑制剂在临床鼻咽癌的治疗有很好的应用前景
鼻咽癌中 PI3K 、 AKT 、 bcl-2 在鼻咽癌高表达 ,他们的过表达可能参与了肿瘤的发生发展。
■
致谢
■ 感谢导师姜汉国副教授三年来在学习、工作上所给予的指导和鞭策,在生活上给予的无限关怀与帮助。
■ 感谢教研室唐慰萍教授、陈小毅教授、孙宁教授、胡新荣教授、姚运红副教授、卢庆林副教授,赵颖海副教授在课题设计、实验进展和论文完成过程中给予的宝贵指导和帮助。
■ 感谢邓惠华高级实验师、蔡琼珍、李飞虹、罗泊涛、赵颖海、熊晖、揭伟、唐加步、唐泽立、包刚等病理教研室全体老师,感谢附属医院病理科黄应桂主任和全体老师。
■ 感谢同窗好友和师弟、师妹们的关心和帮助。■感谢我的家人的理解和支持。