Clonetics™ 皮膚細胞

ロンザはヒト初代細胞パイオニアとして、皮膚細胞製品をご提供します。ケラチノサイト、皮膚線維芽細胞、メラノサイト および皮膚微小血管内皮細胞の製品ラインナップを有し、皮膚疾患研究、美容分野研究、再生医療研究ツールとして幅広く ご利用いただけます。

オーダー情報

カタログ番号 製品名 ドナー サイズ 価格（円）専用培地

カタログ番号 製品名 サイズ 価格（円）

00192907 NHEK-Neo-皮膚ケラチノサイト 正常新生児（単一）

≥ 5.0× 105 cells/vial

95,000

00192060 KGM ™ Gobl BulletKit™

500 ml

20,00000192906 NHEK-Neo-皮膚ケラチノサイト 正常新生児（プール） 95,000

00192627 NHEK-Ad-皮膚ケラチノサイト 正常成人（単一） 95,000

CC-2509 NHDF-Neo-皮膚線維芽細胞 正常新生児（単一） 90,000CC-3132 FGM ™ -2 BulletKit™ 27,500

CC-2511 NHDF-Ad-皮膚線維芽細胞 正常成人（単一） 60,000

CC-2504 NHEM-Neo-皮膚メラノサイト 正常新生児（単一） 120,000CC-3249 MGM ™ -4 BulletKit™ 27,500

CC-2586 NHEM-Ad-皮膚メラノサイト 正常成人（単一） 90,000

CC-2505 HMVEC-dNeo-皮膚微小血管内皮細胞 正常新生児（単一） 120,000

CC-3202 EGM ™ -2MV BulletKit™ 27,500CC-2516 HMVEC-dNeo-皮膚微小血管内皮細胞 正常新生児（プール） 100,000

CC-2543 HMVEC-dAd-皮膚微小血管内皮細胞 正常成人（単一） 120,000

*NHEM-Adの培養には別途ET-3増殖因子（CC-4510） 13,000円が必要です

》 ケラチノサイトおよび皮膚線維芽細胞は継代数P1細胞製品をご提供》 ケラチノサイト培地（KGM™ Gold）の優れた培養パフォーマンス（裏面参照）》 ロット数、ロット毎の在庫本数。国内在庫も潤沢です》 専用培地キットBulletKit™ による豊富な培養実績

■ ケラチノサイト　形態観察により細胞特性を確認、成人：18回分裂　新生児：20回分裂保証■ 皮膚線維芽細胞　形態観察により細胞特性を確認、15回分裂保証■ メラノサイト　Mel-5免疫蛍光標識による純度確認（>85%）、L-DopaからのMelanin生成を確認■ 皮膚微小血管内皮細胞　LDL取り込み陽性、第VⅢ因子陽性、15回分裂保証

【製品仕様】

Epidermal KeratinocytesDermal FibroblastsEpidermal MelanocytesDermal Microvascular Endothelial Cells

0

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2 0

2 5

0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 3 5

Company I

KGM™ Gold

Growth Performance of Adult Keratinocytes

Days in Culture

KGM™ Gold MediumKGM™ Medium

Days in Culture

Cum

ulat

ive

Popu

latio

n Do

ublin

gs

ロンザのNHEK（解凍時継代数P1）とKGM™ Gold BulletKit™ の使用により、長期間のケラチノサイト培養が可能です

ロンザのNHEMは、メラノサイトとしての純度、 細胞機能が長く維持されている細胞製品です

2 Bioscience Solutions – KGM™ Gold Keratinocyte Growth Medium

Day 13, 16 TPD Day 13, 14 TPD

Day 20, 21 TPD Day 22, 14 TPD

P4 P4

P5 P5

KGM™ Gold Medium KGM™ Medium

Figure 2B. Morphology of NHEK-Neo in KGM™ Gold Medium vs. KGM™ Medium. The same lot of NHEK-Neo isolated in KGM™ Medium were plated in either KGM™ Gold Medium or KGM™ Medium. Population Doublings were determined for passages 2 – 5 (up to 22 days). Photo-graphs (Figure 2B) show NHEK morphology at the corresponding data points on the graph (Figure 2A). Long-term growth and morphology of keratinocytes isolated in KGM™ Medium are superior in KGM™ Gold Medium compared to KGM™ Medium; NHEK cultured in KGM™ Gold Medium continue to proliferate while those in KGM™ Medium have senesced.

0

5

1 0

1 5

2 0

2 5

0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 3 5

Company I

KGM™ Gold

Growth Performance of Adult Keratinocytes

Days in Culture

KGM™ Gold MediumKGM™ Medium

Days in Culture

Cum

ulat

ive

Popu

latio

n Do

ublin

gs

Figure 2A. Lifespan of NHEK in KGM™ Gold Medium vs. KGM™ Medium. The same lot of NHEK-Neo Neonatal Human Epidermal Keratinocytes was cultured through passage 5 in ei-ther KGM™ Medium or KGM™ Gold Medium. At the end of passage 5, cells proliferating in KGM™ Gold Medium were able to achieve 21 total Population Doublings, retaining a healthy morphology (see Figure 2B). NHEK maintained in KGM™ Medium reached senescence after only 14 total Population Doublings. This experiment shows that KGM™ Gold Medium is able to support a 34% increase in NHEK lifespan compared to KGM™ Keratinocyte Growth Medium.

A B

Figure 3. Morphology of Company I’s keratinocytes at low density in KGM™ Gold Medium (A) vs. Competitor I’s medium (B). Passage 2 neonatal foreskin keratinocytes from Company I were grown in either KGM™ Gold Medium (A) or in Competitor I’s medium (B). Cultures were fed with fresh medium every other day and photographed 5 days after seeding. Cells plated in Competitor I’s medium show slow growth, low mitotic index and diffuse colony formation (B). The same lot of cells shows healthy, rapid growth in KGM™ Gold Medium, with characteristic epithelioid colony morphology (A).

We further show that even keratinocytes from Company I grow and look significantly better in Lonza’s KGM™ Gold Keratinocyte Growth Medium than in Company I’s medium (Figure 3).

In addition, Lonza’s NHEK-Ad Adult Normal Human Epidermal Keratino-cytes grown in KGM™ Gold Keratinocyte Growth Medium-Gold outper-formed Company I’s adult keratinocytes grown in their own medium in growth rate and morphology (Figure 4) up to and even beyond 15 Population Doublings. This data shows that, although Company I claims extended lifespan of their keratinocytes in their own medium, the health and morphology of these adult keratinocytes is poor be-yond 13 – 15 Population Doublings, rendering the cultures unusable for further experimentation.

SummaryKGM™ Gold Keratinocyte Growth Medium-Gold was created in response to deficiencies in the performance of keratinocyte media currently on the market. It is a rich medium, capable of maintaining high den-sity keratinocyte cultures, while at the same time supporting clonal growth and the maintenance of healthy keratinocyte cell morphology.

ロンザNHEK-Ad（左）と他社成人ケラチノサイト（右）との培養比較。

ロンザはP4まではほとんどの細胞が正常な形態であることを示す。

Article written for Lonza’s Fall Resource Notes™ Newsletter ©2009

3 Bioscience Solutions – KGM™ Gold Keratinocyte Growth Medium

Day 4, 4 TPD

Day 13, 15 TPD

Day 8, 9 TPD

Day 20, 19 TPD

Figure 4. Morphology of Lonza’s NHEK-Ad grown in KGM™ Gold Medium compared to Company I’s adult keratinocytes in their own medium. The growth performance and longevity of Company I’s adult keratinocytes grown in their own medium were compared with Lonza’s NHEK-Ad grown in KGM™ Gold Medium. Although Company I claims ≥25 total Population Doublings for their adult keratinocytes, actual results show that this lot barely obtained 19 PD. Note the presence of several enlarged cells in Passage 2 in Company I’s medium (Circle). At the end of passage 4 (15 PD) Lonza’s NHEK-Ad consist of mostly small proliferative cells.

P2

P3

P4

P5

Day 25, 17 TPD

Day 14, 13 TPD

Day 6, 6 TPDP2

P3

P4

Day 32, 19 TPDP5

Lonza’s NHEK-Ad in KGM™ Gold Medium Company I’s Adult Keratinocytes in Company I’s Medium

ケラチノサイト培地, KGM™ Gold BulletKit™優れた培養パフォーマンス

ロンザNHEK-NeoにおけるKGM™ Gold BulletKit™ と旧製品KGM™ BulletKit™ の培養比較。 KGM™ Gold培養のNHEKは、継代数5回の時点で倍加回数が21回に達し、かつ正常な形態を 維持していた。一方、旧培地では倍加回数14の時点で細胞老化が示された。グラフはKGM™ GoldによりNHEKのライフスパンが旧培地に比べて34%増加したことを示す。

RES-LF2006-03

4D-Nucleofector™ による

ケラチノサイト遺伝子導入効率

NHEK-Neo　68%

NHEK-Ad　 60%

メラノサイト, NHEM-Ad適切な細胞キャラクタリゼーション

ロンザNHEM-Adを使用して、細胞融解後、倍加回数3, 5, 7, 11回において、Mel-5免疫蛍光標識による細胞純度の確認を実施した。 またメラノサイトの細胞機能確認として、L-DopaからDopa-melaninへのコンバージョンを確認した。長期にわたり、メラノサイトの純度

および機能が維持されていることを示す。