اػتبذاسد هلي ايشاى

جوسي اػالهي ايشاىIslamic Republic of Iran

INSO

6-18911 اػتبذاسد ايشاى ػبصهبى هلي 6-11911

Iranian National Standardization Organization 1st. Edition چبح ال

1393

ـ ي پضؿکي ؿبػهذيشيت کیفیت دس هیکشة

بي کتشلؽ: الضاهبت ثشاي ػ6قؼوت

Quality management in medical

microbiology —Part 6: Requiements for

control strains

ICS:07.100.10

2015

ة

خذا بم ث

ايشاى اػتبذاسد ػبصهبى هلي ثب آؿبيي

3کبؼ٠ ٤که ثؽ خت ث ا٤فا ؿت٣ تطم٥مبت اوتبؽاـؼ ؤوى١ اکحش لکب اوکتبؽاـؼ ١ؤوىک مکفـات لکا٥

تؿ٥٥، غ٥ف و اوت وـ ـو٣ فخؽ تب 1371 ب ث ة ا٤فا، ؿت٣ تطم٥مبت اوکتبؽاـؼب٢ کف تکؽ٤

.ؼاـؼ ؾؽ ث ـا ٣ )ـو٣( ا٤فا

ثک 29/6/90 ـظ اؼاـ٢ ؾب٣ ـا٢ خى ؼ٥ پدب ٤ىؽ خت ث ا٤فا ؿت٣ تطم٥مبت اوتبؽاـؼ وى ب

خت اخفا اثحـ ؽ اوت. 35838/206ا٤فا تغ٥٥ف ط٣ ب بـ وبقب ٣ اوتبؽاـؼ

ؤوىکبت فاوکك ػفا بضت *وبـبوب ؤوى اق فوت ف٣ ب٢و٥ى٥ ؼـ ػتف ب٢ ضق ؼـ اوتبؽاـؼ تؽ٤

ت٥کؽ٢، ث کفا٤ط تخ ثب ٣ بص ثب ب و٣ ؼ ٣ ادب فتجط آب التبؼ٢ ت٥ؽ٢ پم٣، ؾ٣،

اوکت تدبـ٢ فبـ٢ کبـوت اق وک کفب١ آببک فکؽ، ضکك کبضجب وکؽب، کف ت٥ؽوکؽب، کب

.کؼ ٣ ضب ؼت٣ غ٥ف ؼت٣ ب٢وبقب بؼب، تػ٣، ؾ٣ فاوك وؽب، اـؼ بؼـوؽب ک٤ه پک٥

فثک فک٣ ب٢ و٥ى٥ اؾضب٢ فؽ ؾ٢ فاخؽ ث ػفغا٣ ثفا٢ ا٤فا ٣ وتبؽاـؼب٢ا اق پکه کؼ ک٣ اـوکب

ا٤کفا ـو٣() ٣ اوتبؽاـؼ ؾا ث ت٤ت ـت ؼـ طفش ـت آ ثب فتجط ٣ و٥ت١ ؼـ پ٥بؼب ػفب ؼـ٤بفت

.ؼ ٣ تف زبح

ضکاثط ـؾب٤ت ثب ٥ك ؾ٤حش ؽؾحل ب٢وبقب ؤوىبت و اوتبؽاـؼب٣٤ ٤ه پ٥ کؽ تؿ٥ک٥ وکؽ ک٣ ت٥ک

ت٤ت، ؼــت ثفـو٣ طفش ٣ ؼـو٥ت١ ثک ک٣ اوکتبؽاـؼ ؾکا ثکؽ٤ تفت٥کت، .کؼ ک٣ تکف زکبح ا٤کفا

ک٣ اوکتبؽاـؼ ؼـ ؽ ت فبؼ اوبن ثف و ؼ ٣ تم٣ ٣ اوتبؽاـؼب٣٤ 5 کبـ٠ ا٤کفا ک٣ و٥تک١ ؼـ تکؽ٤

.ثبؽ ـو٥ؽ ت٤ت ث ؼؽ٣ تى٥ اوتبؽاـؼ وبقب و فث اوتبؽاـؼ

(ISO) اوتبؽاـ ا٣ ث٥ وبقب ا٣ اؾضب٢ اق ا٤فا وبقب ٣ اوتبؽاـؼ 2 (IEC)ا٣ اىتفتى٥هث٥ و٥ى٥ 1

4ـاثط تب ث ؾا اوت 3 (OIML)ب٣ل بو٣ اؽاق ا٣ ث٥ وبقب ؼـ 5 (CAC)وؽوه غؿا٣٤ و٥ى٥

آغف٤ اق وـ، ب٢ غب٥بقؽ٢ و٣ فا٤ط ث تخ ض ا٤فا ٣ اوتبؽاـؼب٢ تؽ٤ ؼـ .وؽ ٣ فؿب٥ت وـ

.ؼ٣ ٥ف٢ثف ا٣ث٥ اوتبؽاـؼب٢ خب ؿت٣ ف٣ ؾ٣، ب٢پ٥ففت

وحت وؽب، ضفعف اق ضب٤ت ثفا٢ لب، ؼـ ؽ ث٣٥پ٥ اق٤ ـؾب٤ت ثب تاؽ ٣ ا٤فا وبقب ٣ اوتبؽاـؼ

اق اخکفا٢ ثؿضک٣ التکبؼ٢، ط٥طک٣ ق٤ىکت حضػکبت طکتت و٥ف٥ت اق اط٥ب ض ؾ٣، ففؼ٢ ا٣٤

اوتبؽاـؼ، اخجکبـ٢ ؾب٣ ـا٢ ت٤ت ثب اـؼات٣، الح ٤ب/ وـ ؼاغ ت٥ؽ٢ طتت ثفا٢ ـا ا٤فا ٣ اوتبؽاـؼب٢

کبؼـات٣ وبتکب٢ اوکتبؽاـؼ اخکفا٢ وکـ، طکتت ثکفا٢ ا٣ ث٥ ثبقاـب٢ ضفع ػـ ث تاؽ ٣ وبقب . ب٤ؽ

ؤوىبت بوبقب غؽبت اق وؽب اوتفبؼ ث ثػ٥ؽ اط٥ب ثفا٢ س٥ ب٤ؽ. اخجبـ٢ ـا آ ثؽ٢ؼـخ فؿکب

ب آقب٤ب ط٥ط٣،ق٤ىت ؽ٤ف٤ت و٥ف٥ت ؽ٤ف٤ت ب٢و٥ىت ؽـا٣ ٥ك٢ ثبقـو٣، آقي، بـ، ؼـ ق١٥

ضکاثط اوکبن ثکف ـا ؤوىبت بوبقب ا٤ اوتبؽاـؼ ؤوى١ ،ود وب٤ وب٥جفاو٥ )اود٣( فاوك ػکب

بآ ؾىفؼ ثف اؾطب ب آ ث حض٥ت تأ٥٤ؽ ا٥ب١ تق، فا٤ط اضفاق ـت ؼـ وؽ ٣ اـق٤بث٣ ا٤فا حض٥تتأ٥٤ؽ

ـ تؿ٥٥ ود، وب٤ وب٥جفاو٥ )اود٣( ٤ىبب، ا٣ ث٥ ؼوتب تف٤ح .وؽ ػبـت ٣ فاجکب فکكات ؾ٥کب ادکب

.اوت وبقب ا٤ غب٤ف ؼ٤ف اق ا٤فا ٣ وتبؽاـؼب٢ا وطص اـتمب٢ ثفا٢ تطم٥مبت وبـثفؼ٢

1-International organization for Standardization

2-International Electro technical Commission

3-International Organization for Legal Metrology (Organization International de Metrologie Legale)

4-Contact point

5-Codex Alimentarius Commission

ج

کویؼیى في تذيي اػتبذاسد

«بي کتشل: الضاهبت ثشاي ػؽ6ي پضؿکي ـ قؼوت ؿبػهذيشيت کیفیت دس هیکشة» سئیغ:

و٥ب٣، و٥ؽخح

بو٣()ؼوتفا٢ ٤فن

ػوت / يب وبيذگي

ؼاب آقاؼ اوح٣ اضؽ تجف٤ك

:دثیش

آثبؼ٢، ٥ؽوبـق٢ ضى٥

بو٣(٥ىبه ثبوتف٢)فق

اعضبء )ث تشتیت حشف الفجبء(:

اج٥اضؽ٢، اآ

٥ىبه ٣٥ تدك٤()فق

آفقاؼ ـضب٣٤، طؽ

بو٣()ؼوتفا٢ ثبوتف٢

پفت٥ب، ٥ؽا

بو٣(٥ىبه ق٤ىت)فق

پـاؾتؽا، قف

تغؿ٤( ٥ىبه ؾ ثؽات٣ ؼـ)فق

ف٤ قب٣،وبه

تغؿ٤(٥ىبه ؾ)فق

آثبؼ٢، غحفضبوپبن ضى

٥ىبه ث٥تىل٢()فق

ف٤ه، ٤وفوف٥ؽ٢

(٥ىفث٥ل٥٢ىبه )فق

اوى٣٤، ضتبؼـ٢

بو٣(٥ىبه لبـذ)فق

ىف٢، ت٥ـ

٥ىبه ث٣٥٥()فق

بن اوتبؽاـؼوبـ

فل٣اد ف٣ ؽ٤فا ف٣ ب٤ؽ اوتب آؾـثب٤دب

ؼاب ؾ پكى٣ تجف٤ك

فل٣اؼاـ و ضفبغت ط٥ط ق٤ىت اوتب آؾـثب٤دب

پمب اوتبؽاـؼ -وبقب ٣ اوتبؽاـؼ ا٤فا

فل٣اؼاـ و اوتبؽاـؼ اوتب آؾـثب٤دب

فل٣وتب آؾـثب٤دباؼاـ و اوتبؽاـؼ ا

ىتفغحقآقب٤ب پم

ؿبت غؿا ؼاـ -ؼاب ؾ پكى٣ تجف٤ك

پمب اوتبؽاـؼ -٣ اوتبؽاـؼ ا٤فا وبقب

ؼ

، ٥فؾ٣وفثح٣٤

٥ىفث٥ل٢(٥ىبه )فق

ى٣، فتض٣

٥ىبه اىتف٥ه()فق

ج٥، ب٤ؽ

(٥ىفث٥ل٢)ؼوتفا٢

ػبف٢، ٥ؽا

(٥ىفث٥ل٢)٥ىبه

طم٣، ٥ط

٥ىبه ث٥تىل٢()فق

٤ط٢٥، اتبثه

تغؿ٤()٥ىبه ؾ

فق، ٥ح٤

(٥ىفث٥ل٢)٥ىبه

فوت آا پكه

فوت آا پكه

ؼاب آقاؼ اوح٣ اضؽ تجف٤ك

ؼپمب اوتبؽاـ -وبقب ٣ اوتبؽاـؼ ا٤فا

آقب٤ب و٥٥بفا آق تجف٤ك

خفب فوتب جى ثؽات ؼـب

فل٣آؾـثب٤دب اوتب اؼاـ و اوتبؽاـؼ

شػت هذسجبتف

صفح عاى

ة آب٣٤ ثب وبقب ٣ اوتبؽاـؼ ا٤فا

ج و٥ى٥ ف٣ تؽ٤ اوتبؽاـؼ

فتبـپ٥

1 ؽ ؼا وبـثفؼ 1

1 اكا٣فاخؽ 2

2 اطحضبت تؿبـ٤ف 3

2 اكابت ؾ٣ 4

5 وتف ـؽ 5

13 وبـ٢ ب٢ ؾغ٥فب٢ دبق اوتفبؼ اق وتضؽاوثف ثبق 6

ب ب٢ ـؼ اوتفبؼ ثفا٢ تىث٥ف ٥ىفاـب٥ىوتب ط٥ط٥( اكا٣پ٥وت اف )

ب٢ ؾغ٥فث ؾا وت

14

ب ث ؾا ب٢ وت ؿ ثفا٢ تىث٥ف ضفع لبـذب ط٥طـي( كا٣پ٥وت ة )ا

بو٣ب٢ ؾغ٥ف ؼـ آقب٤ب ٥ىفةوت

18

پیؾ گفتبس

و «ب٢ وتف: اكابت ثفا٢ وي6پكى٣ ک لىت بو٣ؽ٤ف٤ت و٥ف٥ت ؼـ ٥ىفة» ؼاوتبؽاـ

٥اخحوو٥ؽ تبؼ ؼ٥ ؼـ تؽ٤ ؽ ت٥ ٣ فث ف ب٢ؼـو٥ى٥ آ ٤هپ٥

ث ا٤ه اوت، ففت لفاـ ت٤ت ـؼ 13/11/1393 ـظ ث٥ل٢ ٥ىفث٥ل٢اوتبؽاـؼ ٣ و٥ت١

،1371 ب ث ة ا٤فا، اوتبؽاـؼوبقب ٣ مفـات لا٥ احش لب 3 بؼ٠ ٤ه ثؽ اوتبؼ

ؼ.تف ٣ ا٤فا ٣ اوتبؽاـؼ اؾ ث

غؽبت، ؾ ب٤ؽ، ق١٥ ؼـ خب٣ ٣ ب٢پ٥ففت تطتت ثب ب٣ ب٣ ضفع ثفا٢

ا٤ تى٥ احش ثفا٢ و پ٥بؼ٢ ف ؽ غاؽ ػف تدؽ٤ؽ ك الؽ ؼـ ا٤فا ٣ اوتبؽاـؼب٢

ففت. ثبثفا٤، غاؽ لفاـ تخ ـؼ فث ف٣ و٥ى٥ ؼـ ػف تدؽ٤ؽ ب ؼ، اـائ اوتبؽاـؼب

.وفؼ اوتفبؼ ٣ اوتبؽاـؼب٢ تدؽ٤ؽػف آغف٤ اق اـ ثب٤ؽ

:اوت ق٤ف فش ث ففت لفاـ اوتفبؼ ـؼ اوتبؽاـؼ ا٤ ت١٥ ثفا٢ و غؿ٢أجؽ

DIN 58959-6: 1997, Amd1:1997+ AMD2:1997Quality management in medical microbiology

—Part 6: Requiements for control strains.

1

بي : الضاهبت ثشاي ػؽ6پضؿکي ـ قؼوت ؿبػيهذيشيت کیفیت دس هیکشة

کتشلـذاسـ دس ايي اػتبذاسد توبم هاسد ايوي ثذاؿتي ؿت ـذ اػت. دس صست جد چیي هاسدي،

ثشقشاسي ؿشايط ايوي ػالهتي هبػت اجشاي آى ثش عذ کبسثش ايي اػتبذاسد اػت. هؼئلیت

ذف داه کبسثشد 1

ب٢ وت ؽا وتف 1وبق٢آبؼـؽ، ؽاـ٢، ثفا٢ ٣اكابتاوتبؽاـؼ، تؿ٥٥ ا٤ ؽ اق تؽ٤

،ب٢ ا٤ ٥ىفث٣تػ٥ و٥ف٥ت ض اط٥ب اقثفا٢ اوت و ٢2بؽ غب ػ

.٥فؽاوتفبؼ لفاـ ٣ـؼ ،ب٤ح تدؽ٤ؽپؿ٤فتؼوت٥بث٣ ث

3ب٢ ؾغ٥فب٢ فخؽ، وتب٢ ثبوتف٤ب٣٤ لبـز٣ و ث ؾا وي ويا٤ اوتبؽاـؼ ثفا٢

ففت ث وبـ پكى٣ بو٣ب٢ ٥ىفةبو٥ف٥ت ؼـ آقب٤ اؽا وتفثفا٢ 4ب٢ وبـ٢وت

وبـثفؼ ؼاـؼ.، ؽ٣

هشاجع الضاهي 2

ب اـخبؼ ؼاؼ ؽ اوت. ؽاـن اكا٣ ق٤ف ضب٢ مفـات٣ اوت و ؼـ ت ا٤ اوتبؽاـؼ ٣ ا٤فا ث آ

ؼ.ثؽ٤ تفت٥ت آ مفـات خكئ٣ اق ا٤ اوتبؽاـؼ ٣ ا٤فا طىة ٣

ػفب٢ ثؿؽ٢ آ ب تدؽ٤ؽاـخبؼ ؼاؼ ؽ ثبؽ، احض٥ـت٣ و ث ؽـو٣ ثب ؾوف تبـ٤ع اتبـ ؼـ

ب اـخبؼ ؼاؼ ا٤ اوتبؽاـؼ ٣ ا٤فا ٥ىت. ؼـ ـؼ ؽاـو٣ و ثؽ ؾوف تبـ٤ع اتبـ ث آ ـؼ ػف

ب ـؼ ػف اوت.ب٢ ثؿؽ٢ آػف احض٥ ؽ اوت، اـ آغف٤ تدؽ٤ؽ

فؼ اوتبؽاـؼ اكا٣ اوت:اوتفبؼ اق فاخؽ ق٤ف ثفا٢ وبـث

اكابت : 7بو٣ پكى٣، لىت ، ؽ٤ف٤ت و٥ف٥ت ؼـ ٥ىفة18911-7اوتبؽاـؼ ٣ ا٤فا بـ 2-1

ب٢ وتفؾ٣ ثفا٢ اوتفبؼ اق وي

2-2 ISO 8362-5, Injection containers and accessories -- Part 5: Freeze drying closures for

injection vials

2-3 DIN 58956-3, Medical microbiology; medical microbiological laboratories;

requirements for the organization scheme

2-4 DIN 58959-1, Quality management in medical microbiology - Part 1: Requirements

for the QM system.

2-5 DIN EN 1659, In vitro diagnostic systems - Culture media for microbiology - Terms

and definitions

1-Provision

2-Uniform

3-Stock cultures

cultures 4-Working

2

اصطالحبت تعبسيف 3

DIN EN 1659ؽ ؼـ اوتبؽاـؼب٢ ؼـ ا٤ اوتبؽاـؼ، ؾح ثف اطحضبت تؿبـ٤ف تؿ٥٥

DIN 58959-1 ـؼ:اطحضبت تؿبـ٤ف ق٤ف ٥ك ث وبـ ٣

3-1

ػؽ هشجع

غؼ 1ب٤٢م٣ ثفاوبنو٥ف٥ت اوت، و ض اط٥ب اق، وي ـؼ اوتفبؼ ثفا٢ وي فخؽ

ب٢ ؾغ٥ف لبث ؼوت٥بث٣ اوت )ثؼ اق وىى٥ وت ثفا٢ ت٥ وتثؽ٢ ت٥ف ٣مطج

. (فاخؿ و٥ؽ 18911-٣7 ا٤فا بـ اوتبؽاـؼ پ٥وت اف

3-2

کـت رخیش

ؽاـ٢ ؼـ ض تىث٥ف ػب٢ اق وي فخؽ اوت، و ؼـ آقب٤ب 2ففؾ٣ وت ؾغ٥ف، وت٣

ب٢ وبـ٢ ثفا٢ وت 3ث ؾا بؼ آغبقف بو٣وت ؾغ٥ف ؼـ آقب٤ب ٥ىفةؼ. ٣

وؽ.ب٢ وتف( ؾ ٣)وي

3-3

کـت کبسي

ثفا٢ اؽا )وي وتف( آغبقفاق وت ؾغ٥ف اوت و ث ؾا بؼ ففؾ٣ وت وبـ٢، وت٣

ؽ. وؾ ٣و٥ف٥ت

الضاهبت عوهي 4

شيبيي قبسچيبي ثبکتػؽ 4-1

بي هشجعػؽ 4-1-1

خؿ فا 18911-٣7 ا٤فا بـ ب٢ وت بوت )ث اوتبؽاـؼب٢ فخؽ ثب٤ؽ اق وىى٥وي

ؽ توط ت٥ وت ب٢بوت، ثفا٢ ثب ط٥ط وت ب٢و٥ؽ( ت٥ ؽ ؼـ ط٥ط

،ويفث ث 4ب٢ ؾ٤٣م٣ػف غ ب ثب٤ؽ اقب٢ وت، وت ؼاؼ ؽ. ا٤ ويوىى٥

ؽ، وت ففؾ٣ ؼاؼ ؽ ث طـ بوت ب٢ وت ؾغ٥ف ت٥ؽ، وپه ؼـ ط٥طآق

. فاخؿ و٥ؽ( 4-1-5 3-4)ث ثؽب٢ ؽاـ٢ ؽ

1-Characteristics

2-Subculture

3-Starting

4-Typical

3

بي کبسيبي رخیش کـتکـت 4-1-2

ب٢ ؾغ٥ف جب٤ؽ ب٢ ؾغ٥ف اق ف وي فخؽ ت٥ ؼ. وتتؿؽاؼ وبف٣ اق وتفمط ٤ه ثبـ ثتف اوت

ب٢ ففؾ٣ جب٤ؽ ثفا٢ تى٥ ٤ه وىى٥ وي ث ث و٥ وت ففؾ٣ ؽاـ٢ ؽ ٤ب ز٥ وت

وبـ ـؽ.

ب ؽ. آب٢ وي فخؽ طبثمت ؼات ثب٤م٣ب٢ وبـ٢ ثب٤ؽ ثب ب٢ ؾغ٥ف وتب٢ وت٤م٣

ثبؽ. ثفغـؼاـ ،ثفا٢ اؽا وتف و٥ف٥تضبئك ا٥ت ب٢ بوت٤٣م اقثب٤ؽ

. ثبؽب٢ وبـ٢ وت ضبب٢ ؾغ٥ف جب٤ؽ ثفا٢ اوتفبؼ ث ؾا وت اضبف٣ب٢ ففؾ٣ وت ب٢ اف ة ا٤پ٥وتب٢ وبـ٢ ث ب٢ ؾغ٥ف وتب٢ طئ خت ؽاـ٢ وتثفا٢ آب٣ اق ـي -يبدآسي

فاخؿ و٥ؽ. اوتبؽاـؼ

گزاسيـب 4-1-3

ث و٥ ب اغتبـ٢ وىى٥ وت، بـ وىى٥ اغتبـ٢ اضصب٢ فخؽ ث طـ وي

.(E.coli DSM 1103)ثفا٢ ثب ؽؿاـ٢ ٣ب 1تبوى٣ .فاخؿ و٥ؽ 18911-7ـ ٣ ا٤فا باوتبؽاـؼ ث ATCC DSMب٢ بـثفا٢ آب٣ اق -يبدآسي

ب٢ ؾغ٥ف وبـ٢، ثتف اوت ث فش ق٤ف ؾ ؼ: وتؼـ آقب٤ب٣ ؿاـ٢ ب ث ػـ

وب غؼ ـؼ اوتفبؼ لفاـ ٥فؽ. 2ؿاـ٢تطت بو ثب٤ىت٣ب وي -الف

ؼـ آقب٤ب وت ففؾ٣ اؽ ب٢ وت ؾؽ ث ؼوت آؽب ؼـ اثتؽا اق ٤ى٣ اق وىى٥اف وي -ة

اؽ، ثب٤ؽ دؽؼا ثب بـ اثتؽا٣٤ غؼ ٤ه پىؽ، ب٢ وتف ؽاـ٢ ؽ ث ؾا وت ؼاؼ ؽ

ؾؽؼ٢ ثبؽ.-تاؽ ؾؽؼ٢ ٤ب ضفف٣ا٤ پىؽ ٣ؿاـ٢ ؽ. بـ

ؼ اق ٤ه وؽ غب بف فوت ٤ب آقب٤ب اوتفبؼ ؼ. ثفا٢ ثب،ت٥ ٣ -ح

E.coli DSM 1103 تا ث ـت ـا ٣E.coli DSM 1103/LAB 3 ؿاـ٢ وفؼ )دؽؼا بـLAB 3

ؽاـ٢ ؽ اوت(. ؼـ آ ث ؾا وي وتف E.coli DSM 1103آقب٤ب٣ اوت و وؽ

ب وي، وىى٥ وت جبؽ، وي دؽؼا ثب بـ اثتؽا٣٤ غؼ وؽ وتف زب ز -ت

بـ وثب ا٤ ؿاـ٢ ؼ، ؾؽؼ٢( بـ-ب، ٤ب تفخ٥طب ثب وؽ آقب٤ب ٤ه پىؽ )ؾؽؼ٢ ٤ب ضفف٣آقب٤

.ثبقوبق٢ فؼؼفب٤ وي وي اق ثؽ٢ طجمؼل٥ك ب ؼ وا٤ اىب ففا ٣

.ؼب٢ ثؿؽ٢ آ، خت تغ٥٥ف پىؽ ؼـ بـ بوب٣٤ ٣ب٢ وي وت٤م٣ف تغ٥٥ف ؼـ -ث

اوتفبؼ ؼ. ، جب٤ؽب٢ بوب٣٤فبلؽ بـؽ ؿاـ٢ثفزىتب٢ اق اؼ ٤ب وي

ؿشايط سؿذ 4-1-4

اتػبث٣ ثبؽ. ط٥ط وت ب٢ ؼغ٥ف وبـ٢ جب٤ؽ ط٥ط وت ـؼ اوتفبؼ ثفا٢ ؽاـ٢ وت

ب فبلؽ ف ٢ب٢ ؾغ٥ف وبـ٢ ثبوتفب٢ وت ث وبـ ـفت ثفا٢ ؽاـ٢ وتثتف اوت ط٥ط

وفث٥ؽـات ثبؽ.

1-Taxonomic

2-Designation

4

ب٢ ؾغ٥ف ب٢ فخؽ ٥ك ت٥ وتوت ث وبـ ـفت ثفا٢ ـؽ وي ب٢ط٥ط غبتخك ؼـ اـؼ ؾوفؽ، -يبدآسي

٥ك اطحؾبت٣ ؼـ آ ب٢ اف ة ا٤ اوتبؽاـؼپ٥وتؼـ ؽ.ؾوف ٣ ب٢ وتب٢ وىى٥ وبـ٢ ؼـ ؼوتـاؿ

ؾوف ؽ اوت. ق٥،

گزاسيگشهخبصهبى هذتدهب 4-2

ب٢ ؾغ٥ف ، وتh 48تب h 24ث ؽت C˚ 1 ± C˚ 36ب ؼـ ؼب٢ ب٢ ؾغ٥ف وبـ٢ ثبوتف٢وت

ب )ث طـ ـق طبثك ثب قب ثـ لبـذ 16ث ؽت پح ـق تب C˚ 25 تب C˚ 22ب ؼـ ؼب٢ وبـ٢ لبـذ

ؽ، ف ا٤ و ؼب ٤ب ؽت قب ؼ٤ف٢ ؿاـ٢ ٣فػب h 72ؽت ث فب ـق(، ػ 10ؿ

. ث وبـ ثفؼ ؼ ،وي ٥بق ؿاـ٢ ؾوف ؽ ثبؽ ٤ب ثىت ثثفا٢ فػب

ب قبسچ بهذت ثبکتشيطاليگذاسي حفظ 4-3

ؽت ثؽفا٢ ؽاـ٢ ضفع ب٢ وبؼ ؼ٤ف٢ ثـا، 1)٥ف٥٥كاو٥( ؾح ثف غه وفؼ ادبؼ٢

ث ٤ه ىجت بوت ٥ىتؽ. ثؿض٣ اق ا٤ بخؼ ؼاـؼ، و ثفا٢ ب ؼـ آقب٤ب ب لبـذثبوتف٢

ب ث فش ق٤ف اوت:ـا

ب٢ ى٣؛آة ٤ب ثب غفثبغه وفؼ ؼـ وتف، و٥٥ىبل ث٣ -الف

ا٥ى٣؛ا٢ ٤ب وف٥ 2ب٢غه وفؼ ـ٢ ؼا -ة

لتت٣٥؛ 3ب٢غه وفؼ ؼـ ؼ٤ىه -ح

؛ 4غه وفؼ ؼـ غح -ت

؛-C˚ 76تب -C˚ 80ؼـ ؼب٢ 5ادبؼ ؾم٣ -ث

ؽاـ٢ ؼـ ٥تفل ب٤ؽ. -ج

1اف 1ب٢ )ث خؽ٥فؽ ؽت ـؼ اوتفبؼ لفاـ ٣ثؽب٣٤ و ق ثفا٢ ضفع ؾح ثف ـي

6م٥بنوزهب٢ ـي ووت ؿ ؽ افاخؿ و٥ؽ(، 7ب٢ثفا٢ ؽاـ٢ ادبؼ ؾم٣ )دب٤

ثب اوتفبؼ اق ا٤ ٢ و٣بووپبى٥ ( ٥ك وؼؽ ىتؽ. 8ب٢ ؾم٣فف٤كـ٥تفل ب٤ؽ، ضب٢

ا٢ ٤ب ٥وتت٥ه ٥٤10ب٢ ا٢ ٤ب وفا٥ى٣ ٤ب ب٢ ٥ؼا پحوت٥ى٣، 9ب٢ب، ؼـ ـي

ؽ. دؽ ٣ فاخؿ و٥ؽ. ب٢ اف ة ا٤ اوتبؽاـؼپ٥وتب٢ طئ ث ثفا٢ آب٣ اق ـي -يبدآسي

1- Lyophilization

2-Beads

3-Discs

4-Vacuam –drying (L-drying)

5-Deep-freezing

6- Miniaturized methods

7-Containers

8 -Deep-freezer

9-Straws

10 -Capillaries

5

اقذاهبت ايوي 4-4

ب٢ ثبوتف٤ب٣٤ لبـز٣ ـؼ ػف ثفا٢ فخؽ، ثفا٢ وبـوب ط٥ط غطفات٣ ـا ث فا وبـ وفؼ ثب وي

اق الؽابت ا٣٤ بوت ثف ففت ؼ ب٣٤ ثب٤ؽويثفا٢ وبـ ثب ز٥ ؼاـؼ. اؽ، ادب ؼ. ب٢ تق ـا ؼ٤ؽا٢ ٤ب وبـوب٣ و آقيب٢ ضففب ثب٤ؽ توط اففاؼ٢ ثب حض٥توبـ ثب ا٤ وت -ـذاس

سؿذ کتشل 5

بي هشجعػؽ 5-1

هبثع تبهیي 5-1-1

تؽاـن ،٣بوب٢ ٥ىفةتدؽ٤ؽپؿ٤ف ؼـ آقب٤ب تب٤ح ث ػـ ض اط٥ب اق و٥ف٥ت ٥ك ض

ض اط٥ب اقب٢ فخؽ و ثفا٢ ؼ. وياؼ اوتبؽاـؼؽ بؽ ٤ه ضفـت طىة ٣

ب٢ وت ففت ؽ. ٥فؽ، ثب٤ؽ اق وىى٥و٥ف٥ت ـؼ اوتفبؼ لفاـ ٣ ؾوف ؽ اوت. 18911-٣7 ا٤فا بـ بؽاـؼ اوتف اپ٥وت ؼـ ب٢ فخؽ ويبثؽ تب٥ -يبدآسي

کـتبي سؽ 5-1-2

ب٢ ب٢ وت ٤ب تفؽ ؼـ وبتبيوىى٥ فاب٢ ثتف اوت طبثك ؼوتـاؿ وت ب٢ـي

ب٢ ؿتجف ٥ىفث٣ ثبؽ. ب، طبثك ثب ـيآ

–وبقئ٥ پپت ط٥ط وت ثتف اوت ؼـ ب ، ثبوتف٢ب٢ ؼ٤ف٢ؼـ ـت خؼ جؼ ؼوتـاؿ

ؼـ ط٥ط وت ب لبـذ h 48تب h 24ثفا٢ ؽت قب ٤C˚ 1 ± C˚ 36ب آبـ ؼـ ؼب٢ 1ثفاث پپتو٤ب

ـق 7ـق تب 2ثفا٢ ؽت قب C˚ 28 تب C˚ 20ؼـ ؼب٢ 4ه ؼاوهپ٤ب وكا 3، و2٥٥ؾبـ بت وبثـؼ

ـق وت ؽ.

اص خـک کشدى اجوبدي بي حبصلکـت 5-1-2-1

ثبق ؽ. 5-1-2-1-5تب 1-1-2-1-5ب٢ كثـ ثب٤ؽ طجك ثؽب٢ ب٣٤ اق وتآپ

فاخؿ 1-1-2-1-5ثؽ ؼـ 5تب 1ب٢ ى٥فؼ )ث ـؼ اوتفبؼ لفاـ ٣ؿت پح ؼ ػتف آپ

و٥ؽ(.

غح ؽ اوت. 2-1-2-1-5 1-1-2-1-5ب ؼـ ثؽب٢ ب ثبق وفؼ آػتف آپ ؼاا

5دياستکبي ثبص کشدى آهپل 5-1-2-1-1

وپه ؼغفاي ؼاؼ ٣تخ و٥ؽ( )ث ؾحت پ٥ىب ؼـ ى ثب اوتفبؼ اق اـ آپ، وط آپ

٢ اقؾبـ 80% ؼـ اتب min 5ـ وفؼ ث ؽت ؼ )ثفا٢ ثب اق طف٤ك غطؽقؼا٣٤ ٣ وطص آ

اوپـ(.

1-Casein-pepton soy -meal-pepton broth

2-Sabouraud, malt extract

3-Kimmig medium

4-Czapek Dox

5 -Single

6

ؼ ؼـ ط، بق وتف ٤ب وك وتف پ٥س٥ؽ ٣وتف 1پؽپه اق آ آپ ؼـ اـ٢ اق

ؼ. ؽ ىىت ٣ؿاـ٢ؾحت

(2پـن-پج تک دياس ثذى هجشاثذ ػبد، : 1)ع تک دياسآهپل -1ؿکل

(2)ع پـن -پج جشاثذثب ه دياستکآهپل -2ؿکل

، پـن-ثب هجشاثذ پج دياس، ثبص کشدى دس اتبي فقبي، هحصسؿذدگب )آهپل تکآهپل -3ؿکل

پـن دس صيش دب(-ثب هجشاثذ پج هحصسفشسفت دس يک آهپل تک دياس

(3)ع

1-Wadding

2-Cotton-wool plug

2

1

ساوب و٥ؽلىت فلب٣ ـا ف و٥ؽ ٤ه تب ؼ لطف آة اضبف 1

ثؽ٢ؾب٤ك 2

پ-دفاثؽ پج 3

آپ ث٥ف٣ 4

آپ ؼـ٣ 5

ؽادبؼ٢ب٢ غه٥ىفاـب٥ى 6

فوؽ ٤ب بؾب غه 7

1

3

2

4

5

6

7

ساوب

ؽ ىىتؿاـ٢غفاي ؼـ لىت ؾحتا٤دبؼ 1

پ-دفاثؽ پج 2

ؽب٢ غه ادبؼ٥٢ىفاـب٥ى3

2

3

ساوب ؽ ىىتـ٢ؿاغفاي ؼـ لىت ؾحتا٤دبؼ 1

ا٢آپ ٥ 2

ؽب٢ غه ادبؼ٥٢ىفاـب٥ى 3

3

1

3

7

ؿذ عبهل بي خـکهیکشاسگبیؼن پـن، ثؼتشي ثشاي-ثب هجشاثذ پج (4)ع تک دياسآهپل -4ؿکل

کذخـک

بي تضسيق ثب چة پج ثشاي خـک کشدى اجوبدي هطبثق ثطشي تضسيق )آهپل تک دياس ثشاي ثطشي -5ؿکل

(ISO 8362-5اػتبذاسد

ؼ؛ په اق آ ؼ په اق آ ٤ه تب ؼ لطف آة وفؼ اوتفبؼ ٣٣ ؼ و ؼـ لىت فلب٣ ضفاـت ؼاؼ -1يبدآسي

ؼ.٥ ىىت ؼـ اؽاغت ٣

ؼ.٣ ا٢ قؼضفثا٢ ؼاـ ؼ په اق آ ثب ٥ ٥ؼ زبـ ؼـ ط ب ؼاؼ ؽ غفاي ؼاؼ ٣ -2يبدآسي

، ؼـ ا٤ ضبت آپ ثبقؽ ٤بفت ؽؼـ آپ ؼ وىت٣ ث ى ت ،ب٢ غه ؽ ادبؼ٢اف اـب٥ى-3يبدآسي

ثؽ ؼـآپ ثبقؽ ؼـ ـؼالؽا ؼ ؼ٤ؽ غاؽ زىج٥ؽ. ب ث بض٥ ضفاـتجب٤ؽ ؿ ؼاؼ ؼ ز اـب٥ى

.تض٥ص ؼاؼ ؽ اوت 5-1-2-1-2

پج-پـن اص جغ ثبص کشدى آهپل ثب هجشاثذ 5-1-2-1-2

ا٢ تب وفظ ؽ ضفاـت ؼ. ٥ ٥پج غفاي ؼاؼ ٣-٤ه ثبـ ؼـ وط دفاثؽ پآپ فمط

ثبق ؼ. لىت فلب٣ آپ ؼ تب آپ ؼـ ط ا٤ غط قؼ ٣ ؼ ـ٢ غط غفايؼاؼ ٣

ل٣ ثبؽ. تف آپ ثبپج ثب٤ؽ ؼـ لىت اتب٣٤-ؼ؛ دفاثؽ پؿات ٣ ثبقؽ ؼـ ط ؽقؼا

ؼ.لفاـ ؼاؼ ٣ ؼـ ط ؽقؼا ؽوتف ثفؼات 1دفاثؽ ثب فـوپه ؼـ اؼا،

ط٥ط وت وتف پ٥بؼ٢ ml 5/0تب ml 3/0ؼ ضؽؼ ؿ ؼاؼ ٣ ،ثبقؽ اتب٢ فلب٣ آپ

اق ب ط٥ط ml 5تب ml 2ؼـ ث min 20تب min 15په اق ضؽؼ ووپبى٥ ؼ. اـؼ آپ ٣

ؼ.٣ تموت

ؼ.٤ب پ٥ت آبـ بوت تم٥ص ؼاؼ ٣ ٥2ت آبـ ثفح اوتفبؼ اق ٤ه آغف٤ لطفات اق آپ ا٥ ثب

اق وت ب٤ؽ ا٢ؽ اق بؼ ا٥ ـؽ ىؽ، لطفب٢ ت٥زب ز ٥ر و٣ اق ٤ى٣ اق ووپبى٥

ؼ.ط وت پ٥بؼ٢ تم٥ص ٣ؽ ؼـ ط٥تم٥ص

1-Forceps

2-Agar slope

1

1

ـاب ا٢ ؼاـ ضفث ثك٥ؽغفاي ؼ٥ؽ ثب ٥ ٥ 1

ـاب ؽب٢ غه ادبؼ٥٢ىفاـب٥ى 1

8

ثبق ؽ، تب ا اق طف٤ك دفاثؽ ؽپج ثب٤ؽ ؼـ فوك دفاثؽ غفاي ؼاؼ -ب٢ پب٣٤ ثب دفاثؽآپ -يبدآسي

ؽ ادبؼ٢، ؽ بؼ غهتف٥ ؼ. ا٤ وبـ ثفا٢ خ٥ف٢ اق آؼ٣ طت٤بت آپ ٤ب ف اتبـ وتف

ؼاـؼ.ضفـت

بي دگبثبص کشدى آهپل 5-1-2-1-3

ؼ ثب لفاـ ؼاؼ ؼ ٤ب و لطف آة ـ٢ آ تفن ؿ ضفاـت ؼاؼ ٣ ؼـآپ ثفخىتاتب٢

٤ب غـؼ. ثب ؼلت ث ٥ ىىت ثب و٥ بوج٣ )ثفا٢ ثب فـوپه( ضفث ثك٥ؽ، پ ٥ ٣

غبـج و٥ؽ. ـا ؼاغ٣ ضب٢ وت

اق ط٥ط وت وتف بوت ml 5/0تب ml 3/0ؽ، دفاثؽ پج ـا غبـج و٥ؽ، بؼ غه 1اض٥ب٢فا٢ ث

آة خؿة وؽ. فاض min 20ؽت 2اضبف و٥ؽ، دفاثؽ ـا ؼثبـ وف خب٤ ثؿاـ٤ؽ اخبق ؼ٥ؽ پت

ؾوف ؽ اوت. 2-1-2-1-5ثؿؽ٢ ؼـ ثؽ

بي تضسيقثبص کشدى ثطشي 5-1-2-1-4

ثب اوتفبؼ اق وق وف ب٢ تكـ٤ك، ثطف٢ؼـ ثطف٢ ٢ؼؽ ادبب٢ غهاـب٥ى خؼ ـ ـتؼ

ث ضب min 15ؼ، ؼ. طت٤بت ث غث٣ ػ ٣اق ط٥ط وت پف ٣ ml 2تب ml 1ثب وتف

ا٢ تم٥ص ط٥ط ؽ وپه ثفؼ، ثب وق وف وتف ؼ٤ف٢ اق ثطف٢ غبـج ٣غؼ ؿات ٣

ؽ. ٣ ففآـ٢وت ب٤ؽ /٤ب خبؽ ؿذآهپل آلدهبد 3بيياس 5-1-2-1-5

ب٣٤ ثب ـي بوتثب٤ؽ پ٥ اق اـ وب٤ وى٣ ثفا٢ ثبق وفؼ آپ، غب٣ ؽآپ ىىت

وتف ؼ. ا٢ؽبغت

گزاسيسؿذ گشهخب 5-1-3

يگزاسگشهخب 5-1-3-1

ؼ تب ؼاؼ ٣ لفاـ ،ضفاـت، ا )اوى٥م( ـطثتاق ػف ؽ تطت فا٤ط ىبؾؽ ط٥ط وت تم٥ص

.ب٤ب ؽ وفؼ، ث غث٣ ـؽ ٢بـؽ لبث ـ٤ت ؼ و٣

هجوذ عوقيبي کـت سؿذ اص هشحل 5-1-3-2

ثذى هبد حبهل 5-1-3-2-1

تب ٥C˚ 35تفل ب٤ؽ ثتف اوت ؼـ ضب آة ؼـ ؼب٢ وفؼؽ تطت دؽ ؾم٣ ٤ب ب٢ وت

s 40ا٢ ث٥ ب٢ ٥لؿ٣ و آغف٤ اثفات ٤ع بپؽ٤ؽ ؼ، ؾة ؽ. ثفا٢ لؼ ا٤ ضبت ؼـ آپ

په اق آ قب تق اوت. s 120تب s 60ؽ اق بؼ وتت٥ه ث٥ ب٢ وبغت ثفا٢ آپ s 60تب

ؽ. وت بوت تم ٣ فـا ث ط٥ط ؽب٢ ؾةوت

ب(لل بي کبغزي، اسبي کبغزي، ديؼکهيیبي للاي، بي ؿیـثب حبهل )دا 5-1-3-2-2

1 -Reactivation

2-Pellet

3-Disposal

9

ـ٢ ط٥ط وت ٤ب ؼ٣غبـج ،ثب اوتفبؼ اق فـوپه وتف، ٤ه ضب اق دب٤ وفؼؽ ؾم٣

ؾم٣ ثبقفؼا٥ؽ فف٤كـدؽ ؾم٣ ثبل٥بؽ فـا ث ب٢ ؼ. ضب٣ لفاـ ؼاؼط وت ب٤ؽ ٥ؼـ ط

ؾة ؽ. -C˚ 20ثبت٢ ؼـ ؼب٢ ب ؽ تب دب٤ ضب٣

اص هشحل کـت آگبس 5-1-3-3

ؽ، ٤ه ح ؼـ٤بفتؼـ ط٥ط آبـ 2ب٢ ؾم٤٣ب وت 1آبـ ب٢ب٢ فخؽ ث ـت اوتاف وي

ؼ ث ـت غط ـاوت٣ ـ٢ ( ؼـ وت فف ثفؼ 3٣اوپـقا ب٢لحة وتف ثفا٢ لبـذوتف )٤ب

٥ى /اوپـ ، ػ ؽ )ث تفت٥تففتثفب٢ ؼ اـب٥ىط٥ط و٥ؽ ٣ وط٥ط وت ٤ب

ؽ. ( ـ٢ ط٥ط وت پ٥بؼ٢ ثفا٢ ا٤ اـب٥ى ث و٥ وىى٥ وت پػ ٣زىج٥ؽ

ت٤ ب٢ ففؾ٣، و٥ ٤ب ح ؼـ وت اق طف٤ك ـغ ٤ب ثفا٢ وت 4ب٢ ف٤كب اوتفبؼ اق وت

ؼ تب ت ٣اؽ ا٢ دب٤ؼ وپه په اق ففت بؼ تم٥ص، ؼـ ثفاثف ؼ٤اـ ٥ة فف ثفؼ ٣آ

تب mm 2بـ )ثب ؼـاقا٢ ضؽؼ ب٢ ٥ى٥ب٣٤ غب ثب ثفي لطؿ وزه آوت ب٤ؽ بقاؼ ثتاؽ ثسىؽ.

mm 3 ؽ.وت ففؾ٣ ؼاؼ ٣ ،ث ط٥ط وت بوتآ ( اتمب

دس خال ؿذخـک اص هشحل 5-1-3-4

ؼـ وتف 5ؽغ٣ YNاق ثفاث ml 5/0ـؼ ػفب په اق ثبق وفؼ ث طف٤ك ؾوفؽ، ؼـ ثفا٢ ثب

ط٥ط ـ٢په اق آ ووپبى٥ آ٤ؽ. ؿ٥ك ؼـ ٣ؼ طت٤بت ثب ؼلت ث ضبت توت پ٥پت ٣

ؼ. وت خبؽ بوت تم٥ص ٣

آة(بي طالتیي، ػیلیکبطل ثياص حبهل جبهذ )ثشاي هثبل ؿي، ديؼک 5-1-3-5

ؼ. اتب٢ ثبق پج ؼـ ـت خؼ، ثفؼات ٣-ؽ دفاثؽ پب ث طف٤ك ؾوفؽ ثبق ٣دب٤

ؼ.٣ تػ٥بوت ٤ب ب٤ؽ خبؽوت ؼ طت٤بت ـ٢ ط٥ط ؼاؼ ٣دب٤ ؿ

اص یتشطى هبيع 5-1-3-6

طجك min 5دب٤ اق ٥تفل ب٤ؽ غبـج ؽ، ؼـ ضب آة ثفا٢ ؽت ثب اوتفبؼ اق الؽابت ا٣٤ بوت

. ث ط وؽ min 5 اق ا٤ ؽت جب٤ؽ ث٥ C˚ 35ؼ، ؼـ ؼب٢ ؾة ٣ 1-2-3-1-5تض٥طبت ثؽ

ؽ )ثب ؽات دب٤ ثب اجفن( تب ووپبى٥ ث طـ وب ؾة تىب ؼاؼ ٣ 6ب٢ وفا٤دب٤

ؼ.تم٥ص ؼاؼ ٣ط٥ط وت بوت ،په اق آؼ.

بي الیصهىآ 5-1-4

فاخؿ و٥ؽ( ثب٤ؽ اق ػف 1-2-1-5ؽ ادبؼ٢ )ث ثؽ ب٢ اؼ غهوت ،ب٢ ا٥ـ آقؼ

7ل٢ب٢ وفـفل٢، ث٥٥٥ب٣٤ ؼـ ـت ك، ٤م٣ب٢ ؾ٣ ٤م٣غ، ثؼ،

آق ؽ.

1-Agar slants

2-Stabbed cultures

3-Sporulating

4-Overlaid cultures

5-Supplemented YN-broth

6-Cryo-container

7-Serological features

10

ؽ، تغ٥٥فات ب٢ ٥ىفوىپ٣ اق خؿة آة )ثفا٢ ثب تؼجب٤ؽ ب ؽ ادبؼ٢ب٢ غهؼـ وت

وطط٣ /٤ب تغ٥٥فات ـ( بؽ ؼ.

فاخؿ 1-2-1-5ؽ ادبؼ٢ )ث ثؽ ٤بفت اق اؼ غهب٢ تى٥ب٢ ووپبى٥ػ وتپ

و٥ؽ( جب٤ؽ آؼ ؼ. اف تب٤ح ؼـ اق اتػبـ ثبؽ، ث وىى٥ وت٣ و وي اق آ ففت ؽ اوت،

اطحؼ ؼاؼ ؼ.

بي رخیشکـت 5-2

، ؽ٣ففت ٣ب٢ فخؿاق وي ب٢ وبـ٢ ىتؽ آغبقف٢ ثفا٢ وت بؼب٢ ؾغ٥ف، وت

ب٢ ب٢ ؾغ٥ف ثب٤ؽ اق وي. مؽاـ وبف٣ اق وتاؽپؿ٤ففت ؽب٢ ا٥ آق آ ؼـب٢ و٣و

فاخؿ 3-4ادبؼ٢، ث ثؽ ا٢، ث ـت اؼ غهب٢ ٥فخؽ ففت ؼ )ثفا٢ ثب ـ٢ ؼا

ؽ اق ػف ٤ت ب ؼـ ط٣ ا٤ ـي، ضؽال ٤ه ثبـ وت ففؾ٣ ؼاؼ ٥٣ؽ(. ٥ىفاـب٥ىو

ب ٥فؽ. وت٥ك فاخؿ و٥ؽ( ـؼ ثفـو٣ لفاـ ٣ 6)ث ى 4-1-5غ طجك تض٥طبت ثؽ

C˚ 1 ± C˚ 36ؼـ ؼب٢ h 48تب h 24ب ؽت خك ؼـ اـؼ ؾوفؽ، ثبوتف٢ ؛ؽ٣ ؿاـ٢فػب

ؽ.٣ؿاـ٢ فػب C˚ 25 تب C˚ 22ـق ؼـ ؼب٢ 16ـق تب ب ؽت ولبـذ

، اؽب٢ ؾغ٥ف ث ف ـو٥ؽب٣ و وت ،ب٢ فخؽب٢ ؾغ٥ف خؽ٤ؽ ثب٤ؽ اق ويوت

.ت٥ ؽ ـؼ ٥بق ثبؽ.ب٢ غب فا٤ط اتىفف٢ غب ى اوت ثفا٢ ـؽ ٥ىفاـب٥ى -يبدآسي

ؾوف ؽ اوت. 1-6ؼـ ثؽ ضؽاوثف ثبق دبق اوتفبؼ

اؽ، ثب٤ؽ په اق و٥ وت ففؾ٣ ب٢ آبـ ٤ب ثفاث ؽاـ٢ ؽب٢ ؾغ٥ف و ث ـت وتوت

ؽ. ءاطب وت وبـ٢

بي کـتبي رخیش ثب اػتفبد اص هحیط گذاسي کـت تکثیشهوکي ثشاي بيسؽ 5-2-1

اؽ.ؾوف ؽ ة ا٤ اوتبؽاـؼ ب٢ افپ٥وتب٢ وت ؿ ؼـ ط٥ط

ب٢ اف ة ا٤ اوتبؽاـؼپ٥وت 5ؽاـ٢ طجك ثؽ فاض تىث٥ف ب ؼاؼ ؽ اوت، 6ى ؼـ

پؿ٤فؼ.ـت ٣ ـ٢ ػب٢ ففؾ٣ تتف ث و٥ وب٢ طت٣ب٢ ثبوتف٤ب٣٤ لبـز٣ ثفا٢ ثبق، وتضت٣ افق -سيآيبد

ثف ثؼ ٥ك ف اؼ، ـي وت ففؾ٣ جب٤ؽ ـؼ ؽ. ث ؼت٤ ق٤ف ؼـ وبـ قبب٢ تبق ؽاـ٢ ٣وتط٥ط

اوتفبؼ لفاـ ٥فؼ:

آؼ٣؛ -الف

؛1بتبتاتػبة -ة

ب٢ وي، پحو٥ؽب اثب آ؛٤م٣اق ؼوت ـفت -ح

مبت؛ـفتبـ ؼـ تغ٥٥ف -ت

ب٢ وتف ط٣ وت ففؾ٣؛آ٥ػت٣ وي -ث

.وبؾةؿاـ٢ ب -ج

1-Mutants

11

کـت بيبي رخیش ثذى اػتفبد اص هحیطتکثیش گذاسي کـت هوکي ثشاي بيسؽ 5-2-2

ب تب ضؽ تق، ؾ غه وفؼ ادبؼ٢، غه وفؼ تطت غح دؽ په اق وت ٥ىفاـب٥ى

طجك ب٢ ؾغ٥فؽاـ٢ وت ٥فؼ.ادب ا٤ اوتبؽاـؼ ب٢ اف ةپ٥وتك تاؽ طجوفؼ ؾم٣ ٣

٥فؼ.ادب ٣ ا٤ اوتبؽاـؼ ب٢ اف ةپ٥وت 5ثؽ

کتشل 5-2-3

ا٢ تغ٥٥ف ب ث ب لبـذوؽ ثمب٢ ثبوتف٢تض٥ ىت٣ثب٤ 3-4ؽ ؼـ ثؽ ب٢ ت٥فف زؽ ـي

ب٢ ؾغ٥ف( ثفا٢ تض٥ ب٢ وتف/وتؽ )ويب٢ ضفعو٥ف٥ت وت ٥بفت، ثبؽ، تض٥

ب ضفـت ؼاـؼ.آ وب ، غ ثجبت لت٥ى٣ق٤ىتب٣٤

، غا ٣ب٢ ؾغ٥ف ثب٤ؽ ث طـ ػ اق ػف ضفع غا ؾوفؽ )غا ـفل٤ىاق ا٤ ـ، وت

و٥ف٥ت ث وبـ ـفت اوت، ـؼ وتف ؼـ ا٢ ضىبو٥ت( و /٤ب غا وفل٤ى٣ غب٥٥ب٣٤ ث٥

آق لفاـ ٥فؽ.

ب٢ فخؽ ب ؼاؼ ؽ اوت و ث ؾا بؼ آغبقف وتف غ وي ؾىفؼثب٣ اق 6ؼـ ى

وتف اؽا ثفا٢ب٢ وتف ث ؾا وي ا٢ و لفاـ اوتب٢ ؾغ٥فثفا٢ ث ؼوت آـؼ وت

.ـؽبـ ٣ث و ،ؾ وؽ و٥ف٥ت

ا٤ اف ث خؼ ؼاـؼ،مؽاـ٢ اق ب٤ؿبت اىب ؽــفت ،ب٢ ؾغ٥ف ضب٢ آةثب وتوت٣ ب٢ط٥طؼـ

ؼ.٣دف ٣ غه ؽ، ب٢ ـفل٤ىبثفق

٥فؽ ب په اق ت٥ؽ ـؼ آق لفاـ ٣ 12ب٢ ؾغ٥ف غه ادبؼ٢ دؽ ؾم٣ ا ثبـ وت

ب ـؼ آق لفاـ ب٢ ؾغ٥ف ؼـ فا ؽ. وب٤ف وتوب ثفـو٣ ٣ 2ـ فا وپه ؼ

٥فؽ.٣

ثبؽ. ٣ 1-6ب٢ دبق اوتفبؼ طجك ثؽ ثبق ضؽاوثف

12

DSMؽ اق وىى٥ وت، ثفا٢ ثب ( وي ؽاـ1٢ ( 1

ت بوتؽ ؼـ ط٥ط ووي ؽاـ٢ ثبقوبق٢ (2 (2

ة( ثفا٢ 3وت غط٣ ـ٢ ط٥ط وت خبؽ )ا٥ (3 )ة( 3 ()اف 3

ز٣ غ ث٥٥٥ب٣٤ثفـو٣

وبق٢ ؼ٥ وت غط٣ ـ٢ ط٥ط وت خبؽ غ٣ (4 )ة( 4 ()اف 4

ز٣ غ ث٥٥٥ب٣٤ ثفا٢ ثفـو٣ة( 4) ٣ة( ثفا٢ ثفـو٣ غ ز 5وت غط٣ ) (5 )ة( 5 )اف( 5

ب٢ ؾغ٥ف ) مؽاـ ضىت ٥بق(وت اق٢ وت ففؾ٣ (6 ( 6

ا٢ب٢ ٥خبؽ، ؼا ب٢ وتثفا٢ ثب ـ٢ ط٥ط

ط٥ط وت ب٤ؽ ث ؾا ؼـاتمب وت ؾغ٥ف (7 (7

و٥ف٥ت وتفاوتفبؼ ؼـ ٤ه ثبـ وتف ثفا٢ وت وبـ٢ وي

بي کبسيبي رخیش، کـتکـت -6 ؿکل

بي کبسيکـت 5-3

اصيبي اصي ثيثبکتشي 5-3-1

ب٢ ؾغ٥ف ث طـ ففؾ٣ وت ؼاؼ ب٢ وبـ٢ و اق وتاوت وتثفا٢ وبـوتف٣ ـت٥ ـقا ثتف

اؽ، ث ؾا وي وتف و٥ف٥ت ث وبـ ـؼ.ؽ

ب تطت فا٤ط بوت ؼ وتب٢ ؾغ٥ف تم٥ص ٣اق وت 2-5بوت طجك ثؽ ب٢ط٥ط وت

ؼ تب ـؽ وبف٣ ث لؼ پ٥ؽؼ.ؽاـ٢ ٣

.ىتؽ ف ثبـ٤هب٢ وبـ٢ وت

بي خبفگ کبسي بي رخیش کـت 5-3-2

ب٢ ا٤ فا٤ط ب٢ غب ٥بقؽ فا٤ط ؽاـ٢ ٤م ىتؽ؛ ثفا٢ تؿؽاؼ٢ اق وي٥ىفاـب٥ى

ؾوف ؽ اوت.وتبؽاـؼ اپ٥وت ة ا٤ ؼـ

فخؽ وي

1ووپبى٥ اق فض

ب٢ آبـاوت

وت ب٤ؽ

وت ب٤ؽ

وت ؾغ٥ف وي وتف

وت وبـ٢

پ٥ت آبـ

پ٥ت آبـ

پ٥ت آبـ

13

بقبسچ 5-3-3

٤ب ب٢ بث ثفا٢ تىث٥ف اوپـ ب٢ آبـ، غف پتف٢ ط٥طب٢ وبـ٢ ـ٢ اوتوت

تاؽ ث طـ ىتم٥ ثفا٢ اؽا آق ث وبـ ٥فؼ ٣ب٢ ٥ى٥ب٣٤ ـؼ اوتفبؼ لفاـ ٣ووپبى٥

طبثك ٥بق ،تف٤ ضبت ثـؼـ طةاق آ ٥فؽ و ثتا ٣ ب ا٢ب٢ ؾغ٥فاق وت ب آ ـؼ.

ؽ.٣ ءاوتفبؼ، اطب٤ه ثبـ په اق ففت.ثف زؽ٤ وت اق٢( ـتخبـ٢ )ؼـ ـت ك ث

اوت. 2-6طبثك ثؽ اوتفبؼ ب٢ دبق ضؽاوثف ثبق

کتشل 5-3-4

اق٢ غط٣ وت اق طف٤ك ػف غ ٣، ثفا٢ ثبب٢ وبـ٢ ثب٤ؽ پ٥ اق اوتفبؼ اق وت

ف ؾحت بغب٣ ٤ب بؽ ؼـ ـتثفـو٣ ؽ. ،ـ٢ ط٥ط وت خبؽ ثبقـو٣ ز٣

.لفاـ ؼاؼثفـو٣ بؽ ـا ـؼثبل٣ب٢ ؾغ٥ف ؼـ اؽاغت وت ـا بآثب٤ؽ ،ب٢ وبـ٢ب٣ ؼـ وت

بي رخیش کبسيجبص اػتفبد اص کـتبي هحذاکثش ثبص 6

بب قبسچبي رخیش ثبکتشيکـت 6-1

، C˚ 20فت ؼـ ؼب٢ 10ثفا٢ ضؽاوثف ثـ ث٥ضبت ب٢ ؾغ٥ف لبـز٣ ؼـ ب٢ آبـ ثب وتاوت

٢1 باطحؾبت ؼـ خؽ فخ٥ف٢ فؼؼ. وب٤ب آؽ ثب٤ؽ اق غه ا٤ ؽتط٣ ، ؽؽاـ٢ ٣

ؽ اوت. ؾوف 1 اف

ببي رخیش ثبکتشيکـت-1جذل

aگذاسيدهبي سؽ ثجبت کـت رخیش حذاکثش ثبص گذاسي

b Cغه ادبؼ٢RF 5 غة وب 20وب تب

غة وب ث٥تف RF 5 تطت غحغه وفؼ

توط وب 5ب تب C˚ 30- 6تب DF d ادبؼ ؾم٣

توط وب C˚ 80- 7تب -C˚ 78ؼـ RF ادبؼ ؾم٣

غة بطؽؼ -C˚ 196 ٥تفل ب٤ؽ

توط وب 7ب تب RF 6 /غبن وتف

RF و٥٥ىب ل غة وب 7ب تب 6 *

و ب 10ب تب RF 6 ب٢ آبـ ثب ؼـقثؽ٢ طفظ اق اب٢ ؾم٣، اوتوت

/RF ب٢ آبـب٢ ؾم٣ ٥توتeRT 1 و فت

و ب 6ب تب RF 2 م٥ص اؼاـ٢ت

RF ؽاـ٢ ق٤ف ـغ و وب 20وب تب 2 *

a ب٢فف٤كـ ، پب٤ ؽؽب ث طـ ػ ث و٥ ؼبوح تثب٤ؽ ٤ػسب chest type ث و٥ ثب٤ؽ ب٢ ادبؼ ؾم٣ لفى

.ؼب تطت پب٤ لفاـ ٥فؽ ب٢ اضبف٣ثجبتb ؼ دف ث آو٥ت ث٥ اق ضؽ، پ٥ؽ آة ضؿ ٣ؼـ ـت غه ؽDNA ؼ٣ .

c Refrigerator (2 ˚C - 8 ˚C)

d Deep freeze (below - 15 ˚C)

e Room temperature (15 ˚C - 25 ˚C)

٤ب ؼب٢ اتبق ثؽ ـ غـ٥ؽ *

14

پیػت الف

(الضاهي)

بي رخیشکـت ب ث عاىیکشاسگبیؼنهثشاي تکثیش کـت هسد اػتفبدبيب هحیطسؽ

بي کـتبي رخیش ثذى اػتفبد اص هحیطکـت 1-الف

بي خـک اجوبديکـت 1-1-الف

بوت. ؼـ ـؼ ؽت ثى٥بـ٢ اق ٥ىفاـب٥ىطت٣ ـي غه ادبؼ٢، ـ٣ بوت ثفا٢ ؽاـ٢

آ٤ؽ )وبـ فالجت٣ ثؼ ؼـقثؽ٢ ث ؾ ٣ؽ فمط ٤ه ثفـو٣ ػ اق بوت ب٢ ؼـقثؽ٢آپ

ب تبو٥ ٤ب بؽ، ؼـ آب ثب ا٤ ـي زؽ وب قؽ ٣ثب خؼ ا٤، ثفغ٣ اق غب٣ تق ٥ىت(.

ؼؽ. اق ؼوت ؼاؼ پحو٥ؽب ـ٢ ٣

بفع ؼـ ثفاثف ا٢ ث ؾا ؾب طىتفؼ اوتفبؼ 20تب % 15پؼـ ٥ف ثؽ زفث٣ ثب ىجت خف٣ %

ب ـ٢ ط٥ط وت آبـ ٤ب ؼـ ط٥ط وت ب٤ؽ وت ٥ىفاـب٥ى .ؼاـؼآو٥ت ط٣ ففا٤ؽ ادبؼ ؾم٣

ؾب طبفع ثب وه ح تم٥ص وتف اتمب ml 2تب ml 1ب اق ـ٢ آبـ ث ؽ. و٣ ؼاؼ

آغف٤ فبق ـؽ بـ٤ت٣ ثفؼات ب٢ ب٤ؽ ثب وبتف٤ف٥ل وفؼ په اق ـو٥ؽ وت ثوت٤بثؽ؛ ٣

ؽ ؾب طبفع ػ ٣ ml 2تب ml 1ؽ. بؼ و٣ ث طـ وب ثب ٣

ml 2/0 دؽ طـا٢ وتف ؽ، ثب دفاثؽ پجپف ٣ ا٢ وتفب٢ ٥ب ؼـ اق آ

ؼ.٣ ؼ. په اق آ، بؼ دؽ غه ؼـ غح ؼـقثؽ٣٢

خـک کشدى هبيع )خـک کشدى دس خال( 2-1-الف

پؼـ ٥ف غه )ثب ؼ. ووپبى٥ اوپـ پ٥ اق غه وفؼ دؽ ٣ثب ـي غه وفؼ ب٤ؽ

( و٥ىتئ٥ mmol/l 100)ثب غػت 1فا ثب آؼ٥ت ،ؾب طبفع بوت( ث ؾا 5غػت خف٣ %

ثفا٢ وب فظ تبو٥ اوت. فبـ ف٣ (mmol/l 30)ثب غػت 2اـ٤ب ت٥ (mmol/l 30)ثب غػت

. )ث پ٥وت ة فاخؿ و٥ؽ( ففاتف ـؼ تب اق ادبؼ ووپبى٥ خ٥ف٢ فؼؼ mbar 20جب٤ؽ اق

بي هيی(بي ؿیـ/ػشاهیک )للدا 3-1-الف

ب٢ اق ب اؽاق٤ب mm 3ثب لطف ضؽؼ ا٢ ٤ب وفا٥ى٣ ٥ فؿؼاـب٢ ؼا 50تب 25تمف٤جب

ب په اق ؽ )ؼـپ٥روزى٣ وتف ٣ ٣ب٢ ؼـپ٥سب ؼـ ثطف٢ؽ. ؼا٥٤ وتف ٣

ب ؼـ پب٤ب فض ـؽ بـ٤ت٣ اق (. وثب٤ؽ زفت ؽضفبغت ؼـ ثفاثف ا ثفا٢ ا٤دبؼوبق٢ وتف

-ؽ تب ووپبى٥ غ٥ػ٣ ثفا٢ ثب ؼـ وبقئ٥ؽ، ػ ٣طف٤ك وبتف٤ف٥ل وفؼ ثفؼات

ؼـ ml 2/0تب ml 1/0 ت٥ؽ وؽ. 50تب % 30ثب ٥ىف ثب ىجت ضد٣ % ثفاث پپت-و٤ب-پپت

-C 2 ± ˚C 78˚ب٢ اوت٣ ادبؼ ؾم٣ ؼـ ؼب٢ ؽ ا٢/وفا٥ى٣ پ٥پت ٣ب٢ ٥ؼا

ؼ(.٣ بؼاته ته ب خت تى٥ غفج ب ب اوت وفؼ ؽ ؼاؽ )تق٣٤

1-Adonitol

2-Thiourea

15

"طبفع وفبب٢ و٥ىت"ثب ب٢ طبفع ؼاوفبو ث طـ تدبـ٢ ؼـ ؼوتفن اوت، ضب٢ ب٤ؽ 1

ح وتف اوت، ثب اوتفبؼ اق 2فبـؽه 4تب 3تػػ ثتف اوت ثب وت غب٣ و طبثك اوتبؽاـؼ

ب تب ضؽ ى ؾبـ٢ ؼا ؼ 3طبفع ثب٤ؽ ث غث٣ آوپ٥فوفب٤ؽ بقاؼ بتم٥ص ؽ. په اق اغتح ،

.ؽاق ب٤ؽ

ؽ.ب٢ ٥٤ ث و٥ ٥ف٢ ٥٤ ثب ووپبى٥ پف ٣

یتشطى هبيع 4-1-الف

ث طـ ؼل٥ك ـؾب٤ت ؼ. مفـات ا٣٤ ثفا٢ وبـ ثب ٥تفل ب٤ؽ ثب٤ؽ

ث طـ 5ثب ىجت ضد ب٣٤ % 4(DMSOوفوى٥ؽ )ت٤٥ب ؼ٢ ٥10ىف ثب ىجت ضد ب٣٤ %

ب ـؽ. ٥ىفاـب٥ىب ثفا٢ وب آو٥ت و٣ ط٣ ادبؼ ث وبـ ٣ث ؾا وفبطبفع ا٢ىتفؼ

ا٢ لبث ثىت وتف پف ب٢ پحوت٥ى٣ ٤ب ٥ ٤بآ٤ؽ ؼـؼـ اؼ وفبطبفع ث ضب تؿ٥ك ؼـ ٣

ب٢ ٥٤ پ٥ اق ادبؼ ؽاـ٢ ؼـ فبق بق تفخ٥طب ـ٢ ٥تفل ب٤ؽ و٥ؽ ؽ ٤ب ؼـ ٣

ؽ. ٣

بي يظبي رخیش گکـت 2-الف

ب٢ ٥بقؽ٢ ثب ٣٤باـب٥ىفا٤ط ؽاـ٢ ثفا٢ ٥ىفا٢ اق غح 5-2-تب اف 1-2-ؼـ ثؽب٢ اف

ا٢ غب ل٥ؽ ؽ اوت.تغؿ٤

بيؼشيب گسآ آفلضا وفیلعبي رخیش کـت 1-2-الف

( آفكا ف٥ن( ٤ب فت٣ )ب٤ىف٤ب ـآؽ ثب٤ؽ ـقا )ـب٢ آبـ ف ؼ ؾف و ؼاوت

ضفـت ؼاـؼ. CO2 ؽ ثبت؛ اتىفف فطة غ٣او 5آبـ ط٥ط وت بوت ىحت وت ففؾ٣ ؽ.

ب٢ ثبوتف٤ب٣٤ ب ثب وب٢ آبـ ٤ب واةب٢ ؾغ٥ف اق طف٤ك ادبؼ وتؽت وتطت٣ ؽاـ٢

ى اوت. -C 70˚ؼـ ط٥ط اتمب ؼـ ؼب٢

هبيکثبکتشيمبي رخیش صيشگ کـت 2-2-الف

فت ؼـ ؼب٢ اتبق ؼـ تبـ٤ى٣ قؽ 6تب 6خبى– اتب٤ ـ٢ ط٥ط ب٤ىثبوتف٤ب٢ وت

ب٢ ؾغ٥ف ثب٤ؽ اق طف٤ك غه ادبؼ٢ ٤ب ادبؼ ؼـ ٥تفل ب٤ؽ ت٥ ؽ. بؽ. وت٣

اصيبي ثيیؼنبي رخیش هیکشاسگبکـت 3-2-الف

كثـ ؛ فا٤طؽ ؽاـ٢ ،فا٤ط ثؽ اوى٥م وت ؼاؼ تطتاق٢ ثب٤ؽ ب٢ ث٥٣ىفاـب٥ى

ـاف٥ بپـغ ا٢ اق ب٢ آبـ ثب ت٤پبؽ وتب ادبؼ وفؼ غه ٤ب ادبؼ ٥ك ثب٤ؽ ثفلفاـ ثبؽ.

و اوت آ ( بوت اوت، ثتفوىتف٤ؽ٤)ثفا٢ ثب قاب٢ اوپـوتف فمط ثفا٢

.، تم٥ص ؽتؽب پب٤ؽاـ ى زؽ٤ؾم٣ و تب ب٢وت

1-Cryoprotective-systems

2-Mcfarland

3-Aspirate

4-Dimethylsolfoxide

5-Chocolate agar

6-Lowenstein-jensen

16

کبهپیلثبکتشگ بي رخیش کـت 4-2-الف

آبـ غ ب٢ ٤ب اوت ثفاث ؼـ پپتتا ـا ٣ ٥ثبوتفپوبب٢ ؾغ٥ف وتؼـ وتب ؽت

لىت ضد٣ CO2 5لىت ضد٣ N2 ،10لىت ضد٣ 85ب ؼـ اتىفف٢ ثب . وتؽاـ٢ وفؼ

O2 ؽ.٣ ؿاـ٢فػب

هبيکپالػوبگ بي رخیش کـت 5-2-الف

بتا اق طف٤ك ادبؼ ؽاـ٢ وفؼ. غه ادبؼ٢ ثفا٢ اغت ب ـا ٣ؾغ٥ف اغت ب٢ وت

پب٥٤ اوت.غبجب اب فظ ثمب ،بوت اوت

ػسب ث وي اق٢ ؼـ ؼب٢ اتبق ٤ب ٤ث٣( تطت فا٤ط PPLOب٢ آبـ )آ٥ك وتؽاـ٢ فم٥ت

ثىت٣ ؼاـؼ، ثفا٢ زؽ ـق تب زؽ ب ى اوت اب غبجب بطئ اوت. ثفا٢ ؽاـ٢ وتب ؽت،

ب٢ آبـ ى اوت دؽ ؽ.وت

ب٢ بوت ثفا٢ ٤ب وب٤ف ط٥ط PPLO –ب ـ٢ آبـ تاؽ ثب وتؽاـ٢ ؼـ ضبت غ٥فدؽ ٣

٤ب ؾبـ ػف ثب 1ات٥ك ػف ب٤ؽلىت 1لىت( 2ب وف اوت )ؽ ثلىت( غ٣ 7ب٤ىپحوب )

ؼـ ٤ػسب ٤ب ؼـ ؼب٢ اتبق ؽ،اق٢ تم٥ص ب تطت فا٤ط ث٣وي ادب ؼ. 25ىجت خف٣ %

C 4˚ب ؼـ ؼب٢ تب زؽ ـق ٤ب زؽ فت ثفا٢ ثؿض٣ ويب٣٤ ق٤ىت. تطت ا٤ فا٤ط ؽؽاـ٢ ٣

ؼـ ضبت و٣، ؽاـ٢ طت٣ ؽت ؼـ ضبت غ٥فدؽ ثب خؼ ا٤، ؼ. ال ٤ه وب ضفع ٣ثفا٢ ضؽ

ب٢ آبـ دؽ بوت ق٤بؼ طئ ٥ىت ببوت اوت. ثفا٢ ؽاـ٢ وتب ؽت ؽاـ٢ وت

ثبؽ.٣ فبي خبهعول ثشاي گذاسي هیکشاسگبیؼن کـتبيب هحیطسؽ -1جذل الف

گذاسي بهیکشاسگبیؼن ٥ىفووى٣، آتفثبوتف٤بو، وـ٤ ثبوتف٤

اوتبف٥وون اـئن

ب٢ غه ادبؼ٢ ط٥ط وت ثؽ ٥ىفاـب٥ى

aب٢ لبث ف ؼـ وفث٥ؽـاتRT ؛

تػ٥فىؽ وك ب٢ ف ف٣ ، ٥ثبو٥ن -C ˚ 80تب -C ˚ 78ب٢ دؽ ؾم٣ ؼـ وت

پىؼبن، ـاوىح، آو٥تثبوتف)ثفا٢ ثب

bب٢ غه ادبؼ٢ ؼـ ٥ىفاـب٥ى (ووى٣پ)اق خ اوتفپتوو٣RF ؛

-C ˚ 80تب -C ˚ 78ب٢ دؽ ؾم٣ ؼـ وت

ب٢ غوتب ؽت: اوت

-C ˚ 80تب -C ˚ 78ب٢ دؽ ؾم٣ ؼـ وت ٥ىتف٤ب

؛RF ؼـ ب٢ غه ادبؼ٢وتب ؽت: ٥ىفاـب٥ى

ؼـ ؼب٢ ٣وت دؽ ؼـ ط٥ط اتمب بؼب ثب واة

C ˚ 20- تبC ˚ 70- وب( 2وب تب 1)تمف٤جب

1-Liquid yeast autolysate

17

اداه -1جذل الف

گذاسي بهیکشاسگبیؼن ٤EMب ط٥ط وت Cوت ففؾ٣ ؼـ وـتفه پتاوپ٥فا

d 12 ف

C ˚ 1± C ˚ 28فت ؼـ ؼب٢

وب( 1)تمف٤جب RFؼـ fثفاث ٤ب ؼـ وبو آبـ eـ٢ وبو ف٥ن

ىحت ؼـ ؼب٢ ٢بوتب ؽت: اوت

C ˚ 1± C ˚ 36

؛ RT ؼـ ب٢ غه ادبؼ٥٢ىفاـب٥ى ب٤ىف٤ب

-C ˚ 80تب -C ˚ 78ب٢ دؽ ؾم٣ ؼـ وت

ىحت آبـ )وت ففؾ٣ ـقا( ؼـ ؼب٢ وتب ؽت:

C ˚ 1± C ˚ 36

g آبـ اؼ غه ادبؼ٢ ـ٢ ثـؼ ثـؼتح ؛ RFؼـ

-C ˚ 80تب -C ˚ 78ب٢ دؽ ؾم٣ ؼـ ؼب٢ وت

؛-C ˚ 80تب -C ˚ 78ب٢ دؽ ؾم٣ ؼـ ؼب٢ وت ب٤ىثبوتف٤ب

)ؼـ تبـ٤ى٣ hاتب٤ خبى وتب ؽت: ط٥ط وت

(RTؼـ

؛RT ب٢ غه ادبؼ٢ ؼـ٥ىفاـب٥ى باق٢ث٣

؛-C ˚ 80تب -C ˚ 78ب٢ دؽ ؾم٣ ؼـ ؼب٢ وت

)تطت فا٤ط iوتب ؽت تب ٥ب ؽت: ط٥ط وت ـق

(RTؾبـ٢ اق ا ؼـ

؛ RT ؼـ ب٢ غه ادبؼ٥٢ىفاـب٥ى وبپ٥ثبوتف

؛-C ˚ 80تب -C ˚ 78ب٢ دؽ ؾم٣ ؼـ ؼب٢ وت

RTوتب ؽت: ث٥اق٢ ؼـ

jب ط٥ط وت آبـ؛ ضفع وفا٤اوت ب پفتقآخجه

ضفع وفا٤ پفتقآ٢ ا٣a RT: Room temperature

bRF: Refrigerator

c Korthofs

d EM media

e CASO agar

f CASO broth

g Bordet-Gengou

h Lowenstein Jensen

i Rosenow

j Cryo-preservation

18

پیػت ة

)الضاهي(

بي رخیش دس ب ث عاى کـتبي کـت هعول ثشاي تکثیش حفظ قبسچب هحیطسؽ

ؿبػيآصهبيـگب هیکشة

بي رخیش کبسيبي هشجع کـتبي کـت هسد اػتفبد ثشاي کـت ػؽهحیط 1-ة

بي کـتهحیط 1-1-ة

، تغ٥٥ف ٤بفتآبـ وبثـؼ -

ثفاث وبثـؼ -

آبـ ؾبـ بت -

ثفاث ؾبـ بت -

آبـ وكاپه ؼاوه -

آبـ و٥٥ه -

(YN-agar) آبـ ٥تفلػف -

(YN-broth)ثفاث ٥تفلػف -

تشکیت 2-1-ة

ط٥ط وت ثب٤ؽ طبثك ؼوتـاؿ وبقؽ ت٥ ؼ.

بي کبسي رخیشػبصي گذاسي ثعذي کـتبداهکببت ثشاي آه 2-ة

بي رخیش کـت 1-2-ة

بسي ؿیتبي رخیش کـت 1- 1-2-ة

،بـآ ه ؼاوهپ، وكاآبـ ، ؾبـ ػفآبـ ب٢ فخؽ وت ـ٢ وبثـؼب٢ ٥ت اق ويوت

ث تب ؽؽاـ٢ ٣ C ˚ 25تب C ˚ 22ؽ ؼـ ؼب٢ ؽ ؿات ٣آبـ غ٣ػف ٥تفل ٤ب

غث٣ ـؽ وؽ )فض ث٥ ثـ(.

ب٢ اوفد٣ يپفت پب٤ؽاـ ثبؽ. ث ا٤ ػـ، ؼـ 10ب ثب٤ؽ ث طف٤م٣ ؼـقثؽ٢ ؽ و ضؽال وت

، فز تمف٤جب ؼـ مبث ثػبـ آة بتفاا ىتؽ. اوتفبؼ اق بوت ىتؽ ة ف٤ك لبث وتفآو٥٥ى

وجؼ CO2ب ثف اثف تدؽ ب٢ پبـاف٣٥ غبجب خت في وتب٢ پ٥س٣ ٤ب ؼـقثؽ٢ ؼـپي

ؽ.اوى٥م ٣

ب٢ ث غث٣ ـؽ٤بفت ثب ـغ پبـاف٥ وتف اوت؛ ـغ ثب٤ؽ ـ٢ وت 1ف٤ك وفؼ ،ؼ٤ف ـي٤ه

٢ بوبق٢، لىتفثفا٢ وتـغ پبـاف٥ و٥ؽ ؼ. cm1بـ ضؽال ث ضػبت ضم اوت آ

ضؽال ث ؽت C ˚ 170ؼ ؼـ آ ؼـ ؼب٢ تمى٥ ٣ ؼـقثؽ٢لبث ب٢ ؼـ دب٤ ml 100ضؽاوثف

h 2 ؼ.لفاـ ؼاؼ ٣

1-Overlay

19

خت ب ب٤ت ثب٤ؽ ؼـ ػف ففت ؼ. 1بب آؼ٣ ثب ب٤تت٣، اضزب٢ آبـ لبـؽاـ٢ وت ب

ب٢ ز٣ غ٥ف ىص لبث تػ٥ ب ؼـ اثتؽا ثب ثفـو٣ؽ. ؾفت ثب ب٤تب ٣وتآؼ٣ تػف٤ت

ؼ. و٣ وفؼ دفاثؽب ثب خ٥ وفا٤ؽ دف ث اطب٢ وف٤ؽ وىى٥ وي ٣ؼـ ت٥د ٥ىت

ف ت٥ ، ؼ٤ؼـ پ٣ ؼاـؼ( ٤ب اوتفبؼ اق و ب٤ت ث ؼ٥ ػبطفات٣ و ثفا٢ وبـوب 2)وث٥بت

ب ث ب٢ وبـ ثبقـو٣ وتثفا٢ ط٥ط غةالؽابت پ٥٥فا ؾجبـتؽ اق: الؽابت ثؽات٣ ؼ. ٣

-C ˚ 20ؼـ ؼب٢ h 2تب h 1ب ـا ؽت تا وت٣ ،ب٢ ضب٢ ب٤تـت ػ. ثفا٢ ضفع وت

ب٢ قؽ بؽ ث وتب ب اق ث٥ ثفؽ، ؼـ ضب٣ و اغت لبـذدؽ وفؼ. ثب ا٤ وبـ ى اوت ب٤ت

ؽ.تبق تم ٣

ؿذبي رخیش حفظکـت 2-1-2-ة

ثفـو٣ ؼـ و ٣ب٢ فخؿوت تا اق٣تف، ب٢ طت٣ب٢ لبـز٣ غب ثفا٢ ثبقثفا٢ تب٥ وت

ث ؼوت ـي ثب زؽ تاـا ٣ؽ ب٢ ؾغ٥ف ضفعوت اوتفبؼ وفؼ. ،اؽلبث لج بغت ؽا٥

.آـؼ

بي خـک اجوبديکـت 1-2-1-2-ة

ث ؾجبـت٣ؽ تب غة ـؽ وؽ، تم٥ص ٣بوت ب٢ لبـز٣ ؼـ ط٥ط وت خبؽ ٤ب ب٤ؽ وت

ثف اب٣ و مبت ؼـ ثفـؽ فبق بـ٤ت٣ اتب٢آ٤ؽ. ػفب ثب٤ؽ ؼـ اوپـقا٣٤ بوت ث ؼوت

ؽ.غه وفؼ ث٥تف٤ ضؽ اوت، ثفؼات

ؽ ث ب٢ ب٤ؽ ثفؼات٤ب وبتف٤ف٥ل وفؼ وت ت خبؽآثى٣ ط٥ط و اق طف٤كب ٤ب اوپـب و

و 106ؽ تب ضؽال لىت خف٣ ؼـ آة( تم ٣ 20ووپبى٥ ٥ف ثؽ زفث٣ وتف )%

غح غه ـتمى٥ ؽ، ؼ٣ ٤ب٥تف ث ؼوت آ٤ؽ. ووپبى٥ ث ثػ٤ب اوپـ ث اقا٢ ف ٣٥

ؼ.ؼـقثؽ٢ ٣

ثب ؼـ ج وت ا٢ ى اوت ث طـ ىتم٥ اق وت آبـ غه ؽ ب٢ غ٥فاوپـقا ـتلبـذ

3ؼ٤ف٤-اوتفبؼ اق وـن ب ثب ؾب طبفع ث تم وتف ث زؽ٤ لطؿ تمى٥ ؽ. ا٤

٤ه ثب ؾب طبفع ػ تطت فا٤ط آوپت٥ه ؽ ٤ب وت تم ثب ىجت ٤ه ث٣

.بؽقؽ ٣ـي غه ادبؼ٢ ؼـب٢ ٥ى٥ب٣٤ غب ؼ. غبجب وت٣

)خـک کشدى دس خال( خـک کشدى هبيع 2-2-1-2-ة

پ٥ اق غه وفؼ، دؽ ػاؽ ؽ. ؾب طبفع ط٣ ا٤ ـي، و ث خب٢ ووپبى٥ اوپـ

( پؼـ قغب 10ت خف٣ % ج( فا ثب وبوبـق )ثب ى5ت ٥ف ثؽ زفث٣ ) ثب ىجت خف٣ % بو

ثبؽ تب اق mbar 20آة ثب٤ؽ ق٤ف مؽاـ فبـ ف٣ ثفا٢ ضؿ ثبؽ. ٣( 1)ثب ىجت خف٣ % ؽ فؿب

ؽ. ؼاؼ ٣ضفاـت C ˚ 20ب ؼـ ؼب٢ ،. ثفا٢ تىف٤ؽ ـيؼادبؼ ووپبى٥ خ٥ف٢

ؼ.ت٥ ٣ h 1 4وؽ، ؼـ پىبغهط ٣ h 2 تب h1ففا٤ؽ ا٣ غه وفؼ تمف٤جب

1-Mites

2-Sublimate

3-Cork-drill

4-Post-drying

20

وبـا٣٤ ـي بث ـي غه ادبؼ٢ اوت.

ؿي، خبک يب ػیلیکبطل ػتشى 3-2-1-2-ة

ؼـ آ ؽ ( پف 1٣ث 30ب٢ وزه ؼـپ٥س٣ تب ٥ ثب ػط٣ اق و٥٥ىبل )ثب ىجت

ب٢ ػف اق وطص آبـ ثب ؽ. اوپـب ث خب٢ ووتف ٣ C ˚ 180ؼـ ؼب٢ h 3ؼوت و ؽت

ؼ. وه ضم ٤ب اوپبت تم ثب ػ ٣

ضفـت ب٣٤ق٤ىت اؼاـ٢ وتف ؽ.ؽاـ٢ ٣ C ˚ 8 تب C ˚ 4ؽ طى ؼـ ؼب٢ ثؽ٢قب٢ ؼـ

ب٢ لبـز٣ وبـثفؼ ؽاـؼ. ـي ثفا٢ وت ؼاـؼ ز ا٤

یتشطى هبيع 4-2-1-2-ة

ضد٣ تضب٢ ٥ىف٤ ثب ىجآة مطف اق ب٢ آبـ ثب اوتفبؼب ٤ب اوتب اق پ٥تاوپـب ٥ى

107تب 106ؽ تب ووپبى٣٥ ضب٢ ضؽؼ آـ٢ ٣خؽ 5ثب ىجت ضد٣ % ٤DMSOب %10

ؽ پهوت ؼاؼ ٣ؽ ثفاث غ٣ػف ٥تفل ػفب ؼـ ٥تف ضب ؼ. ٣٥و ؼـ

تب 106)غػت و٣ 10% ٥ىف٤ ث ط٥ط ثب ؽوبتف٤ف٥ل ٣ C ˚ 25ـق ؼـ ؼب٢ 4ـق تب 3اق

ؽ، پ٥س٣ پ٥پت ؼـب ٥تف اق آ ث ثطف٢ پحوت٥ى٣ وتف٣ ث٤بثؽ. ف ٣٥( اتمب ٥٣تفؼـ ٣٥ 107

ا٢ ب ؼـ طفػثطف٢ ؼ.وفؼ ٣ h 3غف ،ؼـ ؼل٥م C ˚ 1ثب وفؾت -C ˚ 70 تب ؼب٢ ؽثىت

ؽ. ضب٢ ٥تفل ب٤ؽ ؽاـ٢ ٣

اي/ػشاهیکبي ؿیـدا 5-2-1-2-ة

ا٢/وفا٥ى٣ ؽاـ٢ ؼ.ب٢ ٥ب٢ ؾغ٥ف ثب اوتفبؼ اق ـي ؼاتا ث ؾا وتػفب ـا ٣

ب٢ پحوت٥ى٣ وزه )ثب ؼـ ثطف٢ ،فؿؼاـ( mm 2 ضؽؼ )ثب اؽاق ا٢ ٤ب وفا٥ى٥٣ ؼا 50ضؽؼ

ب ؼـ فبق ـؽ فؿب اق طف٤ك وبتف٤ف٥ل وفؼ ؽ. ووتف ٣ ؽ،ؼـپي طفظ اق ا( لفاـ ؼاؼ

قؼ 30ثب ٥ىف ثب ىجت ضد٣ % ثفاث پپت -ـؼ و٤بآ-پپت-ؼ ؼـ وبقئ٥آـ٢ ٣خؽ

پ٥پت ا٢/وفا٥ى٢٣ ٥بؼـ ؼا ml 1/0 وپه ؽ تب ووپبى٥ غ٥ػ٣ ث ؼوت آ٤ؽ.٣

ب ؼـ ا٤ ضؿ٥ت غفجؼـ ضؿ٥ت اوت )تفت٥ت ؼا -C ˚ 80تب -C ˚ 70ب ؼـ ؼب٢ ؼ ٣

. ؽ، دؽ ٣وؽ(٥ ٣ففؼ ـا تى ب٢ؼا

بي کبسيکـت 2-2-ة

٥14فؽ و ف ب٢ ؾغ٥ف ب ٣ب ٤ب ثف ـ٢ غف پتف٢ اق وتب٢ وبـ٢ غا ثف ـ٢ اوتوت

اق ثـ ب اوتفبؼ ضب ؽ ا٢ـق ٤ب ضىت ٥بق ثب٤ؽ ـؽ ؼاؼ ؽ تب تض٥ ؼ و ضبت ث٥

اوت.

ؽ.٣ ءب اطبآ ،اوتفبؼ ـثب٤هپه اق