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1.MICROPROPAGAÇÃO
2.MICRO-ENXERTIA
3.RESGATE DE EMBRIÕES
4.CULTURA E FUSÃO DE PROTOPLASTOS
5.CULTURA DE CELULAS EM SUSPENSAO
6.CULTURA DE ANTERAS
TÉCNICAS DE CULTURA DE TECIDOS DE PLANTAS
Prof. Dr. Luiz Antonio BiasiDepartamento de Fitotecnia e Fitossanitarismo
Universidade Federal do Paraná
E-mail: [email protected]
1.MICROPROPAGAÇÃO
Planta matriz Assepsia Cultivo inicial
Multiplicação Enraizamento Aclimatização
Alongamento (se necessário)
PLANTA MATRIZCondições necessárias de uma planta matriz:
-Material genético superior selecionado
-Bom estado fitossanitário (sadia)
-Bom estado nutricional
-Bom estado hídrico
ASSEPSIA
Concentração do agente germicida x tempo de exposição
Agentes germicidas:
-Etanol
-Hipoclorito de sódio e cálcio
-Fungicidas
-Antibióticos
-Clorexidina
CULTIVO INICIAL
*Condições de sucesso no isolamento:
-Fluxo de ar asséptico (Câmaras de fluxo laminar, lâmpadas UV)
-Material asséptico (Autoclave, flambagem, calor)
-Técnica e rapidez de isolamento
*Pré-incubação no escuro (evitar oxidação)
*Meio de cultura: geralmente com citocininas
*Isolamento em frascos individuais
*Problemas: Oxidação
Contaminação
Tipos de explantes:
Meristemas(0,2 a 0,5mm)
Ápices meristemáticos(0,5 a 2mm)
Segmentos nodais(5 a 15mm)
MULTIPLICAÇÃO
Multiplicação: 1)Gemas axilares
2)Gemas adventíceas
Eficiência Alta taxa de multiplicação
Curto intervalo entre subcultivos
Brotações com qualidade e homogêneas
Taxa de multiplicação = Número de novos explantes
Explante inicial
Subcultivo 1)Brotações individuais inteiras
2)Micro-estacas
3)Tufos
Momento ideal do subcultivo = fase de crescimento ativo
ENRAIZAMENTO
Sucesso na formação adventícia de raízes:
-Competência da espécie: Herbáceas > Lenhosas
-Juvenilidade
-Qualidade das brotações
-Estímulo de forma correta (auxinas)
Formas de enraizamento:
-In vitro em brotos individuais
-Durante a fase de multiplicação
-Ex vitro
Formação de raízes adventícias:
-Indução - Dependem de auxina
-Iniciação
-Alongamento – Inibido pela auxina
Formas de indução:
-Auxinas no meio de enraizamento
-Auxinas no meio de indução e sem auxinas no meio de alongamento
-Sem auxinas
-Tratamento “pulso”
Meio de cultura: -Concentração reduzida de sais
-Carvão ativado
ACLIMATIZAÇÃO
Fatores que a planta deve superar para sobreviver:
-Elevação do fluxo transpiratório
-Passagem para um estado apenas autotrófico
-Limitação na disponibilidade e absorção de nutrientes
-Ausência de ambiente asséptico
-Grandes variações de temperatura e intensidade luminosa
-Diferença de fotoperíodo
Ambiente para aclimatização:
-Alta umidade - câmaras de nebulização; câmaras plásticas
-Sombreamento
-Temperatura
-Substrato
Pré-tratamentos:
-Redução da concentração de sacarose
-Aumento da intensidade luminosa
-Abertura da tampa dos frascos na sala de crescimento
-Enraizamento ex vitro ou no início do enraizamento
-Toalete de raízes
BIOFÁBRICAS
Sete Lagoas-MG
Joinville-SC
Andradas-MG
Eusébio-CE
Cuiabá-MT
Astolfo Dutra-MG
Holambra-SP
Ilhéus-BA
São Cristovão-SE
BioMudaSe
Holambra-SP
Venda Nova do Imigrante-ESItajaí-SCItápolis-SP
3.RESGATE DE EMBRIÕES
Melhoramento convencional
Progenitor ♀Pireno
Progenitor ♂Apireno
X
25% de apirenos
►2 gerações de 4 anos (8 anos)
► Lançamento da cultivar – 20 anos
Resgate de embriões
Progenitor ♀Apireno
Progenitor ♂Apireno
X
80% de apirenos
► 1 geração de 4 anos
► Lançamento da cultivar– 10 anos
Melhoramento de uvas sem semente (apirenas)
5.CULTURA DE CÉLULAS EM SUSPENSÃO
*Fonte de células para micropropagação
*Produção de protoplastos
*Transformação de plantas
*Produção de metabólitos secundários
*Conservação de recursos genéticos
6.CULTURA DE ANTERAS*Para obtenção de plantas haploides.
*Duplicação do número de cromossomas com colchicina = duplo-haploides
*Redução do tempo de melhoramento
Fonte: http://nptel.ac.in/courses/102103016/module1/lec9/3.html
Fonte: http://www.yourarticlelibrary.com/biotechnology/plant-tissues/haploid-plants-anther-culture-for-haploid-plants-explained-ith-diagram/33239/