Revista Brasileirade Odontologia 209

Efeitos da fumaa de cigarro na morfologia da glndula partida de ratos

Walter Borges Leal FilhoJainara Delane Silva PinheiroLorena Bezerra BarrosGraduandos em Odontologia da Faculdade Integral Diferencial (FACID- DeVry) - PIKarinne Sousa de ArajoDoutoranda em Biotecnologia pela UFPIMestra em Engenharia Biomdica pela UnivapProfessora de Patologia do Curso de Odontologia da FACID- DeVryIsidra Manoela Sousa Portela SantosMestra em Biologia Oral pela USCProfessora de Histologia e Embriologia da FACID--DeVryAntnio Lus Martins Maia FilhoDoutor em Engenharia Biomdica pela UnivapProfessor de Fisiologia da FACID-DeVryCharllyton Luis Sena da CostaDoutor em Biotecnologia pela UFPIProfessor de Qumica Farmacutica da FACID-DeVry

ResumoO objetivo deste trabalho foi verificar as altera-

es morfolgicas nas glndulas partidas de ratos expostos fumaa de cigarro por meio da anlise his-tomorfomtrica dos cinos serosos. Foram utilizados 14 ratos Wistar, machos, divididos em dois grupos. Os animais do grupo experimental foram expostos queima de 4 cigarros por cerca de 30 minutos, duas vezes ao dia, seis dias por semana durante 60 dias consecutivos. Os animais do grupo controle no foram expostos fumaa de cigarro. A anlise estatstica dos dados demonstrou que a rea dos cinos serosos dos animais do grupo controle foi significativamente superior.

Palavras-chave: glndula partida; cinos sero-sos; fumaa de cigarro.

AbstRActThe aim of this study was to determine the mor-

phological changes in the parotid glands of rats expo-sed to cigarette smoke by histomorphometric analysis of serous acini. 14 male Wistar rats were divided into two groups were used. The animals of the experimen-tal group were exposed to burning cigarettes 04 for about 30 minutes twice a day, six days a week over a period of 60 consecutive days. The control group were not exposed to cigarette smoke. Statistical analysis of the data showed that the area of the serous acini of the control group was significantly higher.

Keywords: parotid gland, serous acini; ciga-rette smoke.

Introduo

O tabagismo atualmente um dos principais problemas de sade p-blica e consiste em uma das nicas causas evitveis de morte. con-siderado fator de risco para seis das oito principais patologias que causam a morte (1).

A inalao do fumo provocado pela combusto deste produto (e at mes-mo o seu consumo sob outras formas) considerada a principal causa de morte em todo o mundo e uma das maiores ameaa Sade Pblica. Apesar do generalizado conhecimento destes fatos, grande parte da populao mun-dial continua a consumir tabaco de uma forma regular. Mais detalhadamen-te, so cerca de mil e duzentos milhes de fumantes no planeta (um tero da sua populao com mais de 15 anos de idade) dos quais cinco milhes morrem anualmente. Esta quantia, quando somada aos 600 mil indivduos que morrem por causas associadas ao tabagismo passivo, resulta na marca de seis milhes de mortes por ano, mdia de uma morte a cada seis segundos (2).

Segundo BASSETO et al. (3), na Europa, Japo e Estados Unidos da Am-rica, 80-90% e 55-80% de neoplasias do pulmo em homens e mulheres, res-pectivamente, so atribudos ao cigarro. Seus estudos ainda afirmam que relatrios tm sugerido uma associao entre o tabagismo e experincia de crie em crianas pequena.

A fumaa do cigarro possui uma fase gasosa e uma particulada. A fase gasosa composta por monxido de carbono, amnia, cetonas, formaldedo, acetaldedo e acrolena, entre outras substncias. Algumas produzem irrita-o nos olhos, nariz, garganta e levam paralisia dos movimentos dos clios dos brnquios. A fase particulada contm nicotina e alcatro, que concentra 48 substncias cancergenas, entre elas arsnico, nquel, benzopireno, cd-mio, chumbo, alm de resduos de agrotxicos aplicados nos produtos agr-colas e substncias radioativas (4).

A nicotina uma das muitas substncias absorvidas por fumantes ativos e passivos e que est sendo evidenciada como sendo o agente farmacolgico de ao aguda mais importante, o qual to viciante quanto txico maioria dos rgos, sendo considerada a substncia mais importante do tabaco devi-do ao seu potencial txico, podendo ser absorvida na cavidade oral pelos teci-dos moles, aderir-se s superfcies dentrias ou encontrar-se no plasma (5, 6).

A glndula partida representa a maior glndula salivar; apresenta mor-fologia irregular, em forma de cunha, e unilobular. A glndula partida uma glndula puramente serosa e ainda a nica que contm muitas clu-las de gordura. A unidade secretora consiste nos cinos e tambm apresenta clulas mioepiteliais, ducto intercalar, ducto estriado e ducto excretrio (7).

FERRAGUT et al. (8) demonstraram que os componentes txicos do ci-garros iro causar uma mudana morfolgica da glndula partida, acarre-tando uma atrofia das suas clulas, podendo afetar sua funo. Diante do exposto, o problema da pesquisa foi: a exposio de ratos fumaa de cigar-ro pode desencadear alteraes na morfologia da glndula partida? Tendo como hiptese que os efeitos da exposio de ratos fumaa de cigarro cau-sam atrofia da poro secretora das glndulas partidas.

Effects of cigarette smoke on the morphology of the parotid gland of rats

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ARTIGO ORIGINAL

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O estudo justifica-se por demonstrar os efeitos do con-sumo do cigarro que podem desencadear alteraes morfo-lgicas e funcionais nas glndulas salivares causando uma reduo significante na taxa de fluxo salivar de indivduos fumantes, alterando a produo e qualidade da saliva, e, com isso, interferindo na sade bucal.

O objetivo deste trabalho foi verificar as alteraes morfolgicas nas glndulas partidas de ratos expostos fumaa de cigarro por meio da anlise histomorfomtrica dos cinos serosos.

Material e MtodoEste trabalho est de acordo com a Declarao Universal

dos Direitos dos Animais e os princpios ticos da experi-mentao animal emitidos pelo Conselho Nacional de Ex-perimentao Animal (CONEA), conforme Lei Federal n 11.794, de 08 de outubro de 2008. O protocolo de pesquisa obteve parecer favorvel da Comisso de tica em Uso de Animais CEUA/FACID em 03 de maro de 2013, confor-me processo n 003/13.

O universo de estudo foram 14 roedores da espcie Rat-tus norvegicus, da linhagem Wistar, machos, mantidos des-de o nascimento no Biotrio da Faculdade Integral Diferen-cial (FACID), com 60 dias de idade e peso mdio de 300g.

Os animais foram divididos aleatoriamente em dois gru-pos de sete animais, sendo o grupo experimental exposto fumaa de cigarro e o grupo controle utilizado como pa-dro, no sendo exposto.

Para a exposio dos animais fumaa do cigarro, foi utilizada uma cmara de inalao construda de madeira (100x44x44cm) hermeticamente fechada com uma tampa de vidro, dividida em dois compartimentos iguais por uma tela de ao. Um dos compartimentos foi utilizado para a combusto de quatro cigarros, os quais ficaram dispostos em um suporte de gesso; e o outro, para a acomodao dos animais, que ficaram dentro de sua gaiola. No comparti-mento de queima dos cigarros foi conectada uma fonte de ar (compressor de ar com um fluxo de 10 L/min) que permitiu a combusto dos cigarros e a conduo da fumaa para o compartimento de exposio. Este compartimento, por sua vez, contm pequenos orifcios para a drenagem do ar, por onde era feita a exausto.

Os animais do grupo experimental foram expostos queima de 4 cigarros por cerca de 30 minutos, duas vezes ao dia, seis dias semanais por um perodo de 60 dias conse-cutivos. Os animais do grupo controle no foram expostos fumaa de cigarro.

Os cigarros utilizados foram adquiridos comercialmen-te, produzindo em cada queima 10 mg de alcatro; 0,8 mg de nicotina e 10 mg de monxido de carbono (segundo o fa-bricante). A escolha deste produto deu-se pela grande ade-so entre os fumantes e por possuir alto teor de nicotina em sua composio. Durante todo o experimento foi utilizada a mesma marca e o mesmo lote de cigarro.

Aps o perodo de 60 dias, os animais foram eutana-

siados de acordo com os princpios ticos adequados para a dissecao das amostras que foram submetidas anlise. Os animais receberam a aplicao de anestsico Tiopental Sdico, via intraperitoneal, na dose de 0,05 ml/100g. Aps cinco minutos, foi realizada a aplicao de cloreto de pots-sio 19,1%, via intraperitoneal, em dose nica de 0,4 ml/100g.

Logo aps a eutansia, foi realizada a dissecao e reti-rada da glndula partida. Em seguida, os cadveres foram congelados em freezer para posterior descarte pelo tcnico responsvel pelo biotrio da Instituio.

Cada amostra recebeu uma identificao, e, em seguida, as peas cirrgicas foram submetidas fixao em soluo de formol a 10% por 48h e depois encaminhadas para procedi-mentos de incluso em parafina histolgica. Obtidos os blo-cos, foram realizados cortes longitudinais com espessura de 4 micrmetros em um micrtomo rotativo, resultando em cor-tes semisseriados que foram submetidos colorao pela He-matoxilina-Eosina (H. E.), para estudo histomorfolgico sob microscopia de luz. As lminas foram numeradas de acordo com o nmero do animal e subgrupo ao qual pertencia.

Aps o preparo e obteno das lminas histolgicas, foi realizada a anlise e registro fotogrfico das mesmas em mi-croscpio ptico acoplado a um computador. Aps aquisio das fotomicrografias digitais das glndulas partidas, as ima-gens foram importadas para o software Image J, verso 1.47.

Em cada amostra, foi calculada randomicamente a rea de cinco unidades secretoras (cinos serosos) da glndula partida (Figura 4). Em seguida, os dados foram importa-dos para o software Excel para clculo da mdia das reas dos cinos de cada subgrupo (controle e experimental), para posterior comparao intergrupos.

Os resultados obtidos referentes anlise morfomtrica dos cinos das glndulas partidas foram expressos como mdias desvios padro (M DP). Esses resultados foram apresentados por meio de tabelas e grficos e submetidos anlise estatstica.

As variveis obtidas no estudo foram analisadas com o auxlio do programa GraphPad InStat verso 3.1 (Figura 4). Realizou-se o teste T de Student para anlise dos dados. O nvel de significncia estabelecido foi de 5% (p < 0,05).

Resultados Os dados da anlise histomorfomtrica dos cinos

serosos das glndulas partidas dos animais do grupo controle e do grupo exposto fumaa de cigarro esto expressos no Grfico 1.

Aps anlise dos dados referentes morfometria das pores secretoras das glndulas partidas, pode-se obser-var que os animais do grupo controle e experimental apre-sentaram as mdias das rea dos cinos serosos iguais a 84,48 13,78 m e 50,97 5,01 m, respectivamente.

A anlise estatstica dos dados demonstrou que, aps o perodo de 60 dias, a mdia da rea dos cinos serosos dos animais do grupo controle foi significativamente superior

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ARAJO, Karinne Sousa de et al.

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(p < 0,05), quando comparada mdia da rea dos cinos serosos dos animias que foram expostos fumaa de cigarro. As-sim pode-se verificar que a exposio de ratos fumaa de cigarro promoveu reduo do volume das clulas acinares com consequente reduo da rea dos cinos serosos das glndulas partidas.

DiscussoEstes achados esto em concordncia com o estudo de FERRAGUT et al. (8), que ao observarem a arquitetura do

tecido da glndula partida e submandibular em ratos, aps exposio passiva ao cigarro, os autores verificaram que o citoplasma e ncleo das clulas das glndulas partidas estavam atrofiados. Os ncleos estavam picnticos e hiper-corados, uma descoberta que caracterizou a condensao da cromatina tipicamente vista nos processos de apoptose. A glndula submandibular apresentou caractersticas semelhantes s da glndula partida. Em sua concluso os autores afirmaram que o tabagismo passivo causou mudanas estruturais substanciais nas glndulas salivares, que podem afetar significativamente a sua funo.

Em estudo utilizando culturas de clulas de glndula partida humana para indicar danos no DNA ocasionados por nicotina, GINZKEY et al. (9) encontraram, como resultados, clulas acinares de glndulas partidas atrofiadas e alte-raes citoplasmticas, aps o terceiro dia de exposio. O estudo demonstrou que a exposio da glndula partida nicotina promoveu dano ao DNA. Estes resultados esto de acordo com os encontrados na presente pesquisa, uma vez que a exposio dos animais fumaa de cigarro desencadeou atrofia dos cinos serosos das glndulas partidas.

CALDEIRA et al. (10) estudaram e caracterizaram as alteraes celulares da mucosa da bochecha de ratos submeti-dos ao tratamento com nicotina sistmica a longo prazo, demonstraram que, aps 90 dias de tratamento, os resultados revelaram um epitlio oral contendo clulas atpicas, que foram caracterizadas pela atrofia, desorganizao da membra-na celular e danos nos tecidos. Concluindo que a administrao sistmica da nicotina danifica a integridade celular da mucosa oral, prejudicando a funo do tecido. Tais resultados corroboram com os dados verificados no presente estudo, no qual tambm foi observada uma reduo da rea dos cinos e uma delimitao irregular nas pores secretoras das glndulas partidas dos animais que foram expostos fumaa de cigarro (Figuras 1 e 2).

Aps pesquisa em fumantes passivos, ou seja, pessoas que convivem no mesmo ambiente de fumantes, foi constatado que a concentrao de nicotina salivar nesse grupo aumentou significativamente, podendo indicar que a exposio fumaa de cigarro pode aumentar os riscos de agravos sade (11). Os resultados encontrados no presente estudo tam-bm demonstraram que a exposio passiva fumaa de cigarro promoveu absoro sistmica de nicotina, levando a mudanas morfolgicas nas glndulas salivares.

O fumo pode, por si s, ser a causa de xerostomia, uma condio em que o indivduo tem a sensao de boca seca por disfuno das glndulas salivares, ou seja, dficit de saliva, e que um aumento no nmero de cigarros pode causar uma severidade maior no grau de xerostomia. Ele tambm pode causar efeitos sistmicos como compromisso da quimiotaxia e fagocitose de neutrfilos (orais e perifricos) e uma reduo na produo de imunoglobulinas. Comprometendo assim a proteo do corpo contra bactrias e produtos txicos (2, 12).

CHEDID et al. (13), estudando as caractersticas clnicas, tratamento e complicaes dos tumores de Warthin da glndula partida, observaram que 78,6% dos pacientes submetidos resseco de cisto adenoma papilfero linfomatoso eram fumantes, demonstrando uma correlao entre o hbito de fumar e a incidncia dessa alterao morfolgica em glndula partida.

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Efeitos da fumaa de cigarro na morfologia da glndula partida de ratos

Grfico 1. Mdias e desvios padro das reas (m2) dos cinos serosos das glndulas partidas dos ani-mais grupos controle e experimental

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ConclusoAps a implantao da metodologia proposta e observao dos resultados do estudo, pode-se concluir que a exposio

de ratos fumaa de cigarro foi capaz de ocasionar alteraes morfolgicas na glndula partida, por promover reduo na rea dos cinos serosos, demonstrando que o tabagismo pode desencadear uma atrofia destas estruturas.

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Referncias Bibliogrficas

Recebido em: 09/05/2013 / Aprovado em: 05/06/2013

Karinne Sousa de Arajo

Rua Visconde da Parnaba, 1770/apto. 101; Ininga

Teresina-PI, Brasil - CEP: 64049-570

E-mail: knnaraujo@yahoo.com

8 FERRAGUT, J. M. et al. Epithelial-stromal interactions in salivary glan-ds of rats exposed to chronic passive smoking. Arch. Oral Biol. 2011; 56 (6): 580-7.9 GINZKEY, C. et al. Nicotine and methyl methane sulfonate in mini or-gan cultures of human parotid gland tissue. Revista Toxicol. Lett. 2011; 197 (2): 835-40.10 CALDEIR, E. J. et al. Morphological alterations in the epithelium of the oral mucosa of rats (Rattusnorvegicus) submitted to long-term systemic nicotine treatment. Arch Oral Bio. 2007; 52 (1): 83-9. 11 ELEN, S. G. et al. Exposure to secondhand smoke outside of a bar and a restaurant and tobacco. Exposure biomarkers in nonsmokers. Environ Health Perspect. 2012; 120 (7): 1010-6. 12 SILVA, L. D. Prevalncia e fatores associados xerostomia em idosos: estudo de base populacional em Florianpolis, Santa Catarina [Trabalho de Concluso de Curso]. Florianpolis: Universidade Federal de Santa Ca-tarina; 2011. 48 f. 13 CHEDID, H. M. et al. Tumor de Warthin da glndula partida: estudo de 70 casos. Rev. Col. Bras. Cir. 2011; 38 (2): 90-4.

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ARAJO, Karinne Sousa de et al.

Figura 1. Fotomicrografia da glndula partida - Grupo Con-trole (H. E., aumento 200x)

Figura 2. Fotomicrografia da glndula partida - Grupo Expe-rimental (H. E., aumento 200x)