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1 MANUAL DE PRACTICAS DEL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA II AUTORES: M. en C. REYNA DEL CONSUELO ALMIRAY PINZÓN M.E.C. ANA BERTHA ESCOBEDO LOPEZ M. en C. GLORIA LEÓN TELLO M. en C. MARÍA SUSANA PERÉZ FERNÁNDEZ M. en C. PATRICIA GUADALUPE SUÁREZ ALBORES 2013 BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

6. Manual BacterII

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Page 1: 6. Manual BacterII

1

MANUAL DE PRACTICAS DEL

LABORATORIO DE BACTERIOLOGIacuteA II

AUTORES

M en C REYNA DEL CONSUELO ALMIRAY PINZOacuteN

MEC ANA BERTHA ESCOBEDO LOPEZ

M en C GLORIA LEOacuteN TELLO

M en C MARIacuteA SUSANA PEREacuteZ FERNAacuteNDEZ

M en C PATRICIA GUADALUPE SUAacuteREZ ALBORES

2013

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2

IacuteNDICE

Praacutectica No 1 Infecciones gastrointestinales (Coprocultivo)

3

Praacutectica No 2 Infecciones de las vias urinarias (Urocultivo)

9

Praacutectica No 3 Sensibilidad a los antimicrobianos meacutetodo de Kirby-Bauer

(antibiograma)

16

Praacutectica No 4 Infecciones de viacuteas respiratorias altas (Exudado fariacutengeo y

nasofariacutengeo)

21

Praacutectica No 5 Infecciones de viacuteas respiratorias bajas (Cultivo de esputo)

26

Praacutectica No 6 Buacutesqueda e identificacioacuten de Mycobacterium tuberculosis

32

Praacutectica No 7 Infecciones oculares

39

Praacutectica No 8 Infecciones oacuteticas

42

Praacutectica No 9 Infecciones del aparato genital (Exudado cervico vaginal y exudado

uretral)

45

Praacutectica No 10 Cultivo de heridas

551

Praacutectica No 11 Diagnoacutestico de enfermedades meniacutengeas (Cultivo de LCR)

55

Praacutectica No 12 Hemocultivo

60

3

PRAacuteCTICA No 1

INFECCIONES GASTROINTESTINALES

COPROCULTIVO

Introduccioacuten

El estudio de las bacterias responsables de cuadros cliacutenicos gastrointestinales se realiza

fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo) Las enfermedades

diarreicas agudas representan una de las principales causa de defuncioacuten en nuestro paiacutes

Las viacuteas gastrointestinales son el haacutebitat natural de una extensa variedad de

microorganismos la mayoriacutea de las bacterias de la flora enteacuterica residente corresponden a

miembros de la familia Enterobacteriaceae (Ecoli Proteus etc) aunque tambieacuten son

abundantes Enterococcus faecalis diversas especies de Staphylococcus Mycobacterium y

especies anaerobias Siendo de mayor relevancia diagnoacutestica las enterobacterias patoacutegenas como

Shigella Salmonella Yersinia Escherichia coli esta uacuteltima aunque se considera parte de la

flora algunos serotipos denominados enteropatoacutegenos son capaces de producir gastroenteritis

principalmente en lactantes en forma de brotes epideacutemicos Ademaacutes de otros geacuteneros de

importancia meacutedica como Vibrio Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a otras familias

El objetivo principal de realizar el coprocultivo es que eacuteste sirva como apoyo al

diagnoacutestico cliacutenico en caso de gastroenteritis

Objetivo

El alumno aprenderaacute la teacutecnica para la realizacioacuten del coprocultivo asiacute como conoceraacute las

diferentes pruebas bioquiacutemicas que se utilizan para la identificacioacuten de los patoacutegenos intestinales

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

4

Material

Placas de Petri con Agar Mac

Conkey

Placas de Petri con Agar SS

Placas de Petri con Agar XLD

Placas de Petri con Agar Sulfito de

Bismuto

Placas de Petri con Agar Enteacuterico de

Hecktoen

Placas de Petri con Agar EMB

Placas de Petri con Agar Campy-

BAP

Placas de Petri con Agar TCBS

Placas de Petri con Agar Gelosa

sangre de Carnero

Caldo selenito o tetrationato en tubos

de 13x100 con 2 mL

Agua peptonada Alcalina (APA) a

pH 9

Solucioacuten salina isotoacutenica en tubos de

13x100 con 2mL

Tubos con medio TSI LIA MIO

urea de Christensen citrato de

Simmons para pruebas bioquiacutemicas

Solucioacuten de Iodo

Juego de colorantes de Gram

Portaobjetos

Cubreobjetos

Colorante de Azul de Metileno

Gradillas

Aceite de inmersioacuten

Frasco con benzal

Algodoacuten

Taxos de oxidasa

Tubos con caldo soya tripticasa

Bantildeo mariacutea

Marcador de vidrio

Buffer de PBS

Desarrollo

Toma y transporte de muestra para coprocultivo

Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento

antimicrobiano

1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y

con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de

lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una

jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el

mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de

transporte hay que sembrar de inmediato

2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con

un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un

medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies

3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra

Procesamiento de la muestra

1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas

pastosas o de diferente color

2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia

de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas

indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc

3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del

tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada

esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea

4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h

5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra

fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si

se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a

37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo

6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y

diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes

DIAGRAMA DE TRABAJO

Heces

Agar Mac Conkey

Agar EMB

Azul de metileno

Agar ENDO

Agar XLD

Agar tergitol 7

SSI al 05

Enriquecimiento

Caldo tetrationato o

Caldo selenito

Agar SS

Agar verde Brillante

Agar sulfito de bismuto

Agar XLD

Identificacioacuten bioquiacutemica

IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos

1 Nombre completo del Paciente

2 Edad y sexo del mismo

3 Tipo de cultivo

4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel

intestinal

5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra

6 Sus observaciones con las diferentes tinciones

7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias

8 Firma del responsable

Cuestionario

1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces

2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra

3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente

4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten

gastrointestinal

5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 2: 6. Manual BacterII

2

IacuteNDICE

Praacutectica No 1 Infecciones gastrointestinales (Coprocultivo)

3

Praacutectica No 2 Infecciones de las vias urinarias (Urocultivo)

9

Praacutectica No 3 Sensibilidad a los antimicrobianos meacutetodo de Kirby-Bauer

(antibiograma)

16

Praacutectica No 4 Infecciones de viacuteas respiratorias altas (Exudado fariacutengeo y

nasofariacutengeo)

21

Praacutectica No 5 Infecciones de viacuteas respiratorias bajas (Cultivo de esputo)

26

Praacutectica No 6 Buacutesqueda e identificacioacuten de Mycobacterium tuberculosis

32

Praacutectica No 7 Infecciones oculares

39

Praacutectica No 8 Infecciones oacuteticas

42

Praacutectica No 9 Infecciones del aparato genital (Exudado cervico vaginal y exudado

uretral)

45

Praacutectica No 10 Cultivo de heridas

551

Praacutectica No 11 Diagnoacutestico de enfermedades meniacutengeas (Cultivo de LCR)

55

Praacutectica No 12 Hemocultivo

60

3

PRAacuteCTICA No 1

INFECCIONES GASTROINTESTINALES

COPROCULTIVO

Introduccioacuten

El estudio de las bacterias responsables de cuadros cliacutenicos gastrointestinales se realiza

fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo) Las enfermedades

diarreicas agudas representan una de las principales causa de defuncioacuten en nuestro paiacutes

Las viacuteas gastrointestinales son el haacutebitat natural de una extensa variedad de

microorganismos la mayoriacutea de las bacterias de la flora enteacuterica residente corresponden a

miembros de la familia Enterobacteriaceae (Ecoli Proteus etc) aunque tambieacuten son

abundantes Enterococcus faecalis diversas especies de Staphylococcus Mycobacterium y

especies anaerobias Siendo de mayor relevancia diagnoacutestica las enterobacterias patoacutegenas como

Shigella Salmonella Yersinia Escherichia coli esta uacuteltima aunque se considera parte de la

flora algunos serotipos denominados enteropatoacutegenos son capaces de producir gastroenteritis

principalmente en lactantes en forma de brotes epideacutemicos Ademaacutes de otros geacuteneros de

importancia meacutedica como Vibrio Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a otras familias

El objetivo principal de realizar el coprocultivo es que eacuteste sirva como apoyo al

diagnoacutestico cliacutenico en caso de gastroenteritis

Objetivo

El alumno aprenderaacute la teacutecnica para la realizacioacuten del coprocultivo asiacute como conoceraacute las

diferentes pruebas bioquiacutemicas que se utilizan para la identificacioacuten de los patoacutegenos intestinales

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

4

Material

Placas de Petri con Agar Mac

Conkey

Placas de Petri con Agar SS

Placas de Petri con Agar XLD

Placas de Petri con Agar Sulfito de

Bismuto

Placas de Petri con Agar Enteacuterico de

Hecktoen

Placas de Petri con Agar EMB

Placas de Petri con Agar Campy-

BAP

Placas de Petri con Agar TCBS

Placas de Petri con Agar Gelosa

sangre de Carnero

Caldo selenito o tetrationato en tubos

de 13x100 con 2 mL

Agua peptonada Alcalina (APA) a

pH 9

Solucioacuten salina isotoacutenica en tubos de

13x100 con 2mL

Tubos con medio TSI LIA MIO

urea de Christensen citrato de

Simmons para pruebas bioquiacutemicas

Solucioacuten de Iodo

Juego de colorantes de Gram

Portaobjetos

Cubreobjetos

Colorante de Azul de Metileno

Gradillas

Aceite de inmersioacuten

Frasco con benzal

Algodoacuten

Taxos de oxidasa

Tubos con caldo soya tripticasa

Bantildeo mariacutea

Marcador de vidrio

Buffer de PBS

Desarrollo

Toma y transporte de muestra para coprocultivo

Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento

antimicrobiano

1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y

con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de

lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una

jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el

mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de

transporte hay que sembrar de inmediato

2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con

un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un

medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies

3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra

Procesamiento de la muestra

1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas

pastosas o de diferente color

2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia

de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas

indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc

3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del

tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada

esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea

4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h

5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra

fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si

se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a

37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo

6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y

diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes

DIAGRAMA DE TRABAJO

Heces

Agar Mac Conkey

Agar EMB

Azul de metileno

Agar ENDO

Agar XLD

Agar tergitol 7

SSI al 05

Enriquecimiento

Caldo tetrationato o

Caldo selenito

Agar SS

Agar verde Brillante

Agar sulfito de bismuto

Agar XLD

Identificacioacuten bioquiacutemica

IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos

1 Nombre completo del Paciente

2 Edad y sexo del mismo

3 Tipo de cultivo

4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel

intestinal

5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra

6 Sus observaciones con las diferentes tinciones

7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias

8 Firma del responsable

Cuestionario

1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces

2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra

3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente

4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten

gastrointestinal

5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 3: 6. Manual BacterII

3

PRAacuteCTICA No 1

INFECCIONES GASTROINTESTINALES

COPROCULTIVO

Introduccioacuten

El estudio de las bacterias responsables de cuadros cliacutenicos gastrointestinales se realiza

fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo) Las enfermedades

diarreicas agudas representan una de las principales causa de defuncioacuten en nuestro paiacutes

Las viacuteas gastrointestinales son el haacutebitat natural de una extensa variedad de

microorganismos la mayoriacutea de las bacterias de la flora enteacuterica residente corresponden a

miembros de la familia Enterobacteriaceae (Ecoli Proteus etc) aunque tambieacuten son

abundantes Enterococcus faecalis diversas especies de Staphylococcus Mycobacterium y

especies anaerobias Siendo de mayor relevancia diagnoacutestica las enterobacterias patoacutegenas como

Shigella Salmonella Yersinia Escherichia coli esta uacuteltima aunque se considera parte de la

flora algunos serotipos denominados enteropatoacutegenos son capaces de producir gastroenteritis

principalmente en lactantes en forma de brotes epideacutemicos Ademaacutes de otros geacuteneros de

importancia meacutedica como Vibrio Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a otras familias

El objetivo principal de realizar el coprocultivo es que eacuteste sirva como apoyo al

diagnoacutestico cliacutenico en caso de gastroenteritis

Objetivo

El alumno aprenderaacute la teacutecnica para la realizacioacuten del coprocultivo asiacute como conoceraacute las

diferentes pruebas bioquiacutemicas que se utilizan para la identificacioacuten de los patoacutegenos intestinales

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

4

Material

Placas de Petri con Agar Mac

Conkey

Placas de Petri con Agar SS

Placas de Petri con Agar XLD

Placas de Petri con Agar Sulfito de

Bismuto

Placas de Petri con Agar Enteacuterico de

Hecktoen

Placas de Petri con Agar EMB

Placas de Petri con Agar Campy-

BAP

Placas de Petri con Agar TCBS

Placas de Petri con Agar Gelosa

sangre de Carnero

Caldo selenito o tetrationato en tubos

de 13x100 con 2 mL

Agua peptonada Alcalina (APA) a

pH 9

Solucioacuten salina isotoacutenica en tubos de

13x100 con 2mL

Tubos con medio TSI LIA MIO

urea de Christensen citrato de

Simmons para pruebas bioquiacutemicas

Solucioacuten de Iodo

Juego de colorantes de Gram

Portaobjetos

Cubreobjetos

Colorante de Azul de Metileno

Gradillas

Aceite de inmersioacuten

Frasco con benzal

Algodoacuten

Taxos de oxidasa

Tubos con caldo soya tripticasa

Bantildeo mariacutea

Marcador de vidrio

Buffer de PBS

Desarrollo

Toma y transporte de muestra para coprocultivo

Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento

antimicrobiano

1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y

con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de

lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una

jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el

mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de

transporte hay que sembrar de inmediato

2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con

un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un

medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies

3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra

Procesamiento de la muestra

1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas

pastosas o de diferente color

2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia

de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas

indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc

3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del

tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada

esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea

4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h

5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra

fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si

se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a

37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo

6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y

diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes

DIAGRAMA DE TRABAJO

Heces

Agar Mac Conkey

Agar EMB

Azul de metileno

Agar ENDO

Agar XLD

Agar tergitol 7

SSI al 05

Enriquecimiento

Caldo tetrationato o

Caldo selenito

Agar SS

Agar verde Brillante

Agar sulfito de bismuto

Agar XLD

Identificacioacuten bioquiacutemica

IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos

1 Nombre completo del Paciente

2 Edad y sexo del mismo

3 Tipo de cultivo

4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel

intestinal

5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra

6 Sus observaciones con las diferentes tinciones

7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias

8 Firma del responsable

Cuestionario

1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces

2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra

3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente

4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten

gastrointestinal

5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 4: 6. Manual BacterII

4

Material

Placas de Petri con Agar Mac

Conkey

Placas de Petri con Agar SS

Placas de Petri con Agar XLD

Placas de Petri con Agar Sulfito de

Bismuto

Placas de Petri con Agar Enteacuterico de

Hecktoen

Placas de Petri con Agar EMB

Placas de Petri con Agar Campy-

BAP

Placas de Petri con Agar TCBS

Placas de Petri con Agar Gelosa

sangre de Carnero

Caldo selenito o tetrationato en tubos

de 13x100 con 2 mL

Agua peptonada Alcalina (APA) a

pH 9

Solucioacuten salina isotoacutenica en tubos de

13x100 con 2mL

Tubos con medio TSI LIA MIO

urea de Christensen citrato de

Simmons para pruebas bioquiacutemicas

Solucioacuten de Iodo

Juego de colorantes de Gram

Portaobjetos

Cubreobjetos

Colorante de Azul de Metileno

Gradillas

Aceite de inmersioacuten

Frasco con benzal

Algodoacuten

Taxos de oxidasa

Tubos con caldo soya tripticasa

Bantildeo mariacutea

Marcador de vidrio

Buffer de PBS

Desarrollo

Toma y transporte de muestra para coprocultivo

Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento

antimicrobiano

1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y

con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de

lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una

jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el

mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de

transporte hay que sembrar de inmediato

2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con

un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un

medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies

3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra

Procesamiento de la muestra

1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas

pastosas o de diferente color

2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia

de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas

indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc

3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del

tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada

esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea

4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h

5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra

fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si

se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a

37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo

6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y

diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes

DIAGRAMA DE TRABAJO

Heces

Agar Mac Conkey

Agar EMB

Azul de metileno

Agar ENDO

Agar XLD

Agar tergitol 7

SSI al 05

Enriquecimiento

Caldo tetrationato o

Caldo selenito

Agar SS

Agar verde Brillante

Agar sulfito de bismuto

Agar XLD

Identificacioacuten bioquiacutemica

IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos

1 Nombre completo del Paciente

2 Edad y sexo del mismo

3 Tipo de cultivo

4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel

intestinal

5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra

6 Sus observaciones con las diferentes tinciones

7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias

8 Firma del responsable

Cuestionario

1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces

2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra

3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente

4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten

gastrointestinal

5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 5: 6. Manual BacterII

Desarrollo

Toma y transporte de muestra para coprocultivo

Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento

antimicrobiano

1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y

con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de

lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una

jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el

mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de

transporte hay que sembrar de inmediato

2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con

un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un

medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies

3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra

Procesamiento de la muestra

1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas

pastosas o de diferente color

2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia

de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas

indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc

3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del

tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada

esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea

4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h

5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra

fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si

se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a

37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo

6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y

diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes

DIAGRAMA DE TRABAJO

Heces

Agar Mac Conkey

Agar EMB

Azul de metileno

Agar ENDO

Agar XLD

Agar tergitol 7

SSI al 05

Enriquecimiento

Caldo tetrationato o

Caldo selenito

Agar SS

Agar verde Brillante

Agar sulfito de bismuto

Agar XLD

Identificacioacuten bioquiacutemica

IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos

1 Nombre completo del Paciente

2 Edad y sexo del mismo

3 Tipo de cultivo

4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel

intestinal

5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra

6 Sus observaciones con las diferentes tinciones

7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias

8 Firma del responsable

Cuestionario

1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces

2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra

3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente

4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten

gastrointestinal

5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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y Plesiomonas Tesis UAP

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 6: 6. Manual BacterII

2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia

de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas

indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc

3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del

tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada

esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea

4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h

5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra

fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si

se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a

37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo

6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y

diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes

DIAGRAMA DE TRABAJO

Heces

Agar Mac Conkey

Agar EMB

Azul de metileno

Agar ENDO

Agar XLD

Agar tergitol 7

SSI al 05

Enriquecimiento

Caldo tetrationato o

Caldo selenito

Agar SS

Agar verde Brillante

Agar sulfito de bismuto

Agar XLD

Identificacioacuten bioquiacutemica

IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos

1 Nombre completo del Paciente

2 Edad y sexo del mismo

3 Tipo de cultivo

4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel

intestinal

5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra

6 Sus observaciones con las diferentes tinciones

7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias

8 Firma del responsable

Cuestionario

1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces

2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra

3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente

4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten

gastrointestinal

5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

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Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 7: 6. Manual BacterII

IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos

1 Nombre completo del Paciente

2 Edad y sexo del mismo

3 Tipo de cultivo

4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel

intestinal

5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra

6 Sus observaciones con las diferentes tinciones

7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias

8 Firma del responsable

Cuestionario

1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces

2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra

3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente

4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten

gastrointestinal

5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

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5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

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14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 8: 6. Manual BacterII

5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra

6 Sus observaciones con las diferentes tinciones

7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias

8 Firma del responsable

Cuestionario

1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces

2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra

3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente

4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten

gastrointestinal

5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 9: 6. Manual BacterII

PRAacuteCTICA No2

INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS

UROCULTIVO

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo

femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves

como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad

aguda o croacutenica

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras

que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de

la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella

Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans

Objetivo

El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su

cultivo

Material

Placas de Petri con Agar Mac Conkey

Placas de Petri con Agar Sal y Manitol

Placas de Petri con Agar sangre de carnero

Placas de Petri con Agar Thayer Martin

Placas de Petri con Agar de DNAsa

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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y Plesiomonas Tesis UAP

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Tesis UAP

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 10: 6. Manual BacterII

Tubos con medio de Biggy

Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas

Asa calibrada

Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U

Portaobjetos y cubreobjetos

Placas esteacuteriles

Pipetas esteacuteriles

Tubos esteacuteriles

Solucioacuten Salina Isotoacutenica

Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril

Cuenta colonias

Desarrollo

Toma de muestra

La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de

bacterias durante la noche

Teacutecnicas para mujeres

1 La paciente debe quitarse la ropa interior

2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute

con una toalla limpia

3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento

hasta que se haya recogido la orina

4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se

repetiraacute el proceso un total de 4 veces

5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten

6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y

sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente

7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna

vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie

interior

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 11: 6. Manual BacterII

Teacutecnica para hombres

1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten

2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se

haya recogido la orina

3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro

4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida

5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir

la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril

Teacutecnica para nintildeos

1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos

2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles

especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma

a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos

b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector

c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben

retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento

d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una

nueva bolsa

Otros pacientes

1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se

realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas

oportunas

2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente

a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada

Dejar secar unos minutos

b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando

entre 3-5 mL

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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y Plesiomonas Tesis UAP

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 12: 6. Manual BacterII

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente

esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC

d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una

muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento

Aspiracioacuten suprapuacutebica

1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener

el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de

demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se

originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias

2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa

3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo

Transporte de la muestra

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe

refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el

transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 13: 6. Manual BacterII

siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten

conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)

Volumen miacutenimo de la muestra

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Meacutetodo del asa calibrada 10-3

1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa

2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la

rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea

3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h

4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades

formadoras de colonias por mL (UFCmL)

5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas

Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta

1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se

homogeneiza el tubo perfectamente

2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo

conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)

3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo

seleccionados

DETERMINACION VOLUMEN

(mL) COMENTARIOS

Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana

Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana

Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos

Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte

para anaerobios

Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y

transportar al laboratorio inmediatamente

Paraacutesitos Orina de 24 horas

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 14: 6. Manual BacterII

4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-

24 h

5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente

Meacutetodo de vaciado en placa

1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri

esteacuteriles

2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para

que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio

3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h

4 Se cuenta el nuacutemero de colonias

5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o

maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es

primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para

Agar Mac Conkey

Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3

Cent 2000g10 min Sedimento

Cuantificacioacuten No de colonias X 1000

No de UFCmL

Thayer Martin (N gonorrhoeae)

Agar Biggy (Candida albicans)

Identificacioacuten bioquiacutemica

Primera miccioacuten matutina

Chorro medio

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 15: 6. Manual BacterII

recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria

verdadera

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el

1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es

muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente

El reporte deberaacute contener los siguientes datos

Nombre del Paciente

Edad

Sexo

Fecha

Hora de la toma de muestra

Nombre del meacutedico

Tipo de estudio

Resultado

Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL

Negativo a las 48 h de incubacioacuten

Firma del Responsable

Cuestionario

1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril

2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la

uretra

3 iquestQueacute es la bacteriuria

4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina

5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

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20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 16: 6. Manual BacterII

PRACTICA No 3

SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER

ANTIBIOGRAMA

Introduccioacuten

En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de

infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas

nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos

utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La

informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el

agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten

Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar

el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas

terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados

Para esto es necesario conocer

1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo

2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie

3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad

distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten

4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento

5 Historia natural del proceso patoloacutegico

6 El estado inmune del hueacutesped

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 17: 6. Manual BacterII

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la

susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el

antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro

Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son

1 Dilucioacuten seriada en tubo

2 Dilucioacuten seriada en placa

3 Difusioacuten en discos de papel filtro

4 Sistemas automatizados

La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de

1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente

2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc

3 Equipo automatizado que se cuente

Objetivo

Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la

susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos

DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del

meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)

Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene

diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es

indispensable

1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se

deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados

2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control

3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74

4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus

aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)

5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 18: 6. Manual BacterII

6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio

suplementado con sangre de carnero

Material

1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro

2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero

3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton

4 Hisopos esteacuteriles

5 Pinzas

6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos

7 Cepas control

8 Regla transparente

9 Alcohol

10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05

11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril

Desarrollo

1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un

tubo con caldo Mueller Hinton

2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland

4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten

bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo

5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar

uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa

6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador

automaacutetico con una presioacuten ligera

7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC

8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla

9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las

tablas entregadas por el fabricante

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

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14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 19: 6. Manual BacterII

Diagrama de procedimientos

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

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20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 20: 6. Manual BacterII

Reporte

1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados

2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento

a otros antibioacuteticos

3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra

alternativa

4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al

antibiograma

Cuestionario

1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas

2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma

3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe

4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica

5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 21: 6. Manual BacterII

PRAacuteCTICA No 4

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO

Introduccioacuten

El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas

infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el

mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los

estreptococos

Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas

para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los

patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo

El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio

bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean

tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos

Objetivo

Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica

de viacuteas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier

tratamiento

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

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13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 22: 6. Manual BacterII

1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal

2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento

3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano

4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada

5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten

6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada

7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por

exudado o aspirado

1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre

flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera

2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo

el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes

3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 23: 6. Manual BacterII

Aspirado

1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona

2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal

por debajo del marco supraorbital del ojo

3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril

y aspirarlo nuevamente

4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en

un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa

Transporte de la muestra

1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de

transporte

2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos

se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las

muestras inmediatamente

Material

1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5

2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol

3 Placas de Petri con Mac Conkey

4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin

5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)

6 Placas de Petri con medio de Biggy

7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas

8 Tubos con caldo Soya Tripticasa

9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa

10Hisopos esteacuteriles

11Abatelenguas esteacuteriles

12Colorantes de Gram

13Frasco con cloro

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 24: 6. Manual BacterII

14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U

15Sensidiscos de Optoquina

16Sensidiscos de Novobiocina

17Tubos con agar bilis esculina

18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl

Desarrollo

Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso

de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico

1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de

carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc

2 Se incuban 24 h a 37ordmC

3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten

con fusoespirilar

4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de

trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la

SSA

5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos

Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae

Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria

meningitidis

Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las

muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten

asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA

Reporte

El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y

sexo del paciente

1 Se aisloacute Flora Normal

2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie

3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 25: 6. Manual BacterII

4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria

patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo

2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra

3- Menciona la flora normal de faringe

4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de

una faringitis

5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes

Caldo estreptosel

Agar Biggy

Agar sangre de carnero

(CGP BGN)

GHBEL (H influenzae)

Candida albicans

Agar sangre de carnero

Medio de transporte Stuart

Pruebas de identificacioacuten

Colonias β-hemoliacuteticas

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 26: 6. Manual BacterII

PRAacuteCTICA No 5

INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS

(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)

Introduccioacuten

Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte

a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes

frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes

y a consecuencia principalmente del uso del tabaco

De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer

teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias

del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la

buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas

atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans

En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra

representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con

secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la

orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado

obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de

calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten

adecuada del resultado

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 27: 6. Manual BacterII

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos

de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos

Toma de muestra

1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina

2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal

3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de

suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje

postural o fisioterapia respiratoria

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas

2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral

3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva

croacutenica (EPOC)

4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

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14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 28: 6. Manual BacterII

Volumen miacutenimo

De 2 a 10 mL si es posible

Transporte y conservacioacuten

Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en

refrigeracioacuten 4ordmC

Observaciones

1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico

2- No es uacutetil para anaerobios

3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia

4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25

leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)

Material

1 Placas de Agar sangre de carnero

2 Placas de Agar de Mac Conkey

3 Placas de Agar Cetrimida

4 Placas de Agar de Sal y Manitol

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 29: 6. Manual BacterII

5 Placas de Agar de Thayer Martin

6 Placas de Agar Levinthal

7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina

8 Tubos con medio de Biggy

9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas

10 Portaobjetos

11 Cubreobjetos

12 Microscopio

13 Juego de colorantes de Gram

14 Tinta China

15 Aceite de inmersioacuten

16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U

17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable

18 Pipetas Pasteur esteacuteriles

19 Centriacutefuga

Desarrollo

Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes

medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes

protectores o en su defecto mascarillas

Seleccioacuten de la muestra

1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material

purulento asiacute como el color de la misma

2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace

una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el

cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya

3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo

4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en

ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten

Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 30: 6. Manual BacterII

CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos

Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 lt25 lt25

1 gt25 lt10

2 gt25 10-25

II 3 gt25 gt25

III 4 10-25 gt25

5 lt10 gt25

6 lt25 gt25

Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524

5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas

6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar

Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una

nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo

debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)

7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por

estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para

certificar la hemoacutelisis

8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2

9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie

Reporte

1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos

2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada

3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los

microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del

responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes

4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo

crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

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20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 31: 6. Manual BacterII

En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que

ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo

posible

En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es

importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se

encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 degC CO2 24 ndash 48 h

Cuestionario

1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar

2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas

3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten

4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae

5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen

Muestra (Esputo)

Pruebas de identificacioacuten

Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy

Examen en fresco Tincioacuten de Gram

BAAR

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 32: 6. Manual BacterII

PRAacuteCTICA No 6

BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE

Mycobacterium tuberculosis

Introduccioacuten

La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en

los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el

mundo

El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos

como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia

fecal sangre menstrual heridas

Objetivo

Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de

Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra

Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir

algunos requisitos indispensables como son

1 Calidad de la muestra

2 Cantidad

3 Envase esteacuteril y desechable

EXPECTORACIOacuteN

1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 33: 6. Manual BacterII

2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que

tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor

3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo

4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha

ORINA

1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales

2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana

3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada

LAVADO GASTRICO

1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico

2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable

3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril

4 Se trabaja el sedimento

5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 34: 6. Manual BacterII

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL

1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de

asepsia

2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le

realizaron al paciente

3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben

4 Se trabaja con el sedimento de la misma

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable

2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina

3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min

4 Se elimina el sobrenadante

5 Se utiliza la capa gelatinosa

6 Se realiza la tincioacuten de BAAR

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 35: 6. Manual BacterII

7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica

2 Se reciben en tubos esteacuteriles

3 Se centrifuga la muestra

4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra

5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe

TEJIDOS

1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha

2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril

3 Se hacen frotes delgados

4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa

Material

1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes

desechables

2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla

3 Frascos esteacuteriles

4 Agitador vortex

5 Equipo de Ziehl-Neelsen

6 Equipo de Auramina Rodamina

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 36: 6. Manual BacterII

7 NaOH al 4

8 Pipetas Pasteur esteacuteriles

9 Frasco con fenol al 10

10Pinzas

11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen

12Microscopio

13Aceite de inmersioacuten

14Portaobjetos

Desarrollo

BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO

1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera

2 Extender la muestra en forma uniforme

3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra

4 Se deja secar el frote al aire

5 Se fija al calor

6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR

INTERPRETACION

El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad

del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la

preparacioacuten

Informe de las baciloscopias para BAAR

Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977

No de bacilos Reporte de Resultados

Negativo No se observan BAAR en 100 campos

De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos

Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos

Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados

Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 37: 6. Manual BacterII

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO

Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y

poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo

Meacutetodo de Petroff modificado

1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y

se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol

2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min

3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si

no se ha detenido completamente)

4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante

5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de

neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni

superior a 72

6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de

Lowenstein-Jensen

7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos

existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen

o de auramina rodamina

8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante

24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar

que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas

9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa

como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten

10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son

masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo

muy paacutelido hasta anaranjado rojizo

11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el

geacutenero y la especie

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 38: 6. Manual BacterII

TRATAMIENTO DE LA ORINA

1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la

mantildeana

2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min

3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo

con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento

4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al

sedimento

5 Se deja 15 min a 37ordmC

6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con

pipeta Pasteur esteacuteril

7 Se realiza del sedimento la baciloscopia

Reporte

En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo

con el cultivo

Cuestionario

1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis

2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes

darle a la muestra

3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute

4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo

necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten

5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 39: 6. Manual BacterII

PRAacuteCTICA No 7

INFECCIONES OCULARES

Introduccioacuten

Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los

microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad

Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles

secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular

1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos

2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva

3- Identificar de que ojo procede la muestra

4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio

de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se

utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 40: 6. Manual BacterII

Material

1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron

2 Guantes esteacuteriles y desechables

3 Placas de Gelosa sangre de carnero

4 Placas de sal y manitol

5 Placas de agar Mac Conkey

6 Placas de Thayer -Martin

7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate

8 Placas con Agar DNAsa

9 Tubos con Biggy

10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas

11 Reactivo de oxidasa

12Taxos de optoquina y bacitracina

13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia

Desarrollo

1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados

2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran

3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram

4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama

5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de

inmunofluorescencia

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 41: 6. Manual BacterII

Reporte

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su

tratamiento inmediato

1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten

2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo

2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el

problema que se presenta en el ojo

3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo

4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar

5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud

Tincioacuten de Gram Medio de

transporte Stuart

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

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infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 42: 6. Manual BacterII

Praacutectica No 8

INFECCIONES OacuteTICAS

Introduccioacuten

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los

oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones

respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles

etc

Objetivo

Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las

bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo

Toma de muestra

1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos

2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde

soporta el hisopo

3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo

4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000

para eliminar la flora contaminante

5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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y Plesiomonas Tesis UAP

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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

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UAP

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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 43: 6. Manual BacterII

Material

1 Guantes esteacuteriles desechables

2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron

3 Gasas esteacuteriles

4 Placas de gelosa sangre de carnero

5 Placas de Sal y Manitol

6 Placas de Mac Conkey

7 Placas de agar de Levinthal

8 Placas con agar DNAsa

9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea

10Taxos de optoquina

11Taxos con bacitracina

12Tubos con Biggy

13Colorantes de Gram

14Tubos con OF con glucosa al 1

15Reactivo para catalasa

16Reactivo para oxidasa

Desarrollo

Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en

forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La

identificacioacuten se realiza en base al diagrama

Reporte

En el reporte al meacutedico se debe indicar

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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y Plesiomonas Tesis UAP

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Tesis UAP

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 44: 6. Manual BacterII

1 El resultado por separado de cada oiacutedo

2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra

3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo

4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo

5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo

2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas

3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo

4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra

5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy

Medio de transporte Stuart

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No9

INFECCIONES DEL APARATO GENITAL

(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)

Introduccioacuten

Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica

Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y

ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del

laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden

introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos

al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la

madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto

En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de

cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema

pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis

que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de

tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar

secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse

por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

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10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 46: 6. Manual BacterII

Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en

cuenta las siguientes recomendaciones

1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos

de la pareja sexual

2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano

3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio

de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras

4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma

inmediata

5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento

6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos

sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal

Exudado vaginal

1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es

necesario para lubricar utilizar agua templada)

2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su

defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies

(figura xx)

3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y

colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco

4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de

aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el

cual se debe a aminas volaacutetiles

5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis

Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical

6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su

procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 47: 6. Manual BacterII

Figura Toma de muestra vaginal

Observacioacuten en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe

secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en

la tricomoniasis en pacientes masculinos

1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica

2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un

cubreobjetos

3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten

4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y

lactobacilos

Desarrollo

Exudado uretral

1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles

2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta

penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia

trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo

3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo

4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

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12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 48: 6. Manual BacterII

5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave

prostaacutetico-vesicular

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el

caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de

muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio

Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera

parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es

importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se

efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama

Figura Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 49: 6. Manual BacterII

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey

Biggy

Gardnerella vaginalis

Candida albicans

Identificacioacuten bioquiacutemica

Medio de transporte

Stuart

Agar Sangre de Carnero

Agar Sangre Humana

Streptococcus Staphylococcus

Thayer-Martin

Neisseria gonorrhoeae

Enterobacterias

Tincioacuten de Gram

Agar Chocolate

Solucioacuten salina

isotoacutenica

Observacioacuten en fresco

Trichomonas vaginalis

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

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20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 50: 6. Manual BacterII

Reporte

En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente

1- Edad del paciente

2- Sexo

3- Tipo de muestra

4- Fecha en el que se realizoacute el estudio

5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc

6- pH Vaginal

7- Tincioacuten de Gram

8- Examen en fresco

9- Resultado del cultivo

10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)

Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis

Buacutesqueda de Treponema pallidum

Firma del responsable

Cuestionario

1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal

2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart

3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal

4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil

5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en

vagina

BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

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7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

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PRAacuteCTICA No 10

CULTIVO DE HERIDAS

Introduccioacuten

Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la

formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u

oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios

abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos

invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y

fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado

puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos

en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se

encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos

nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y

virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales

Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a

menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico

Objetivo

Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo

Toma de muestra de lesiones en la piel

1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida

2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 52: 6. Manual BacterII

3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo

nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10

cmsup3

4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las

partes profundas de la herida con un hisopo

5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente

identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte

Toma de muestra de exantemas

1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea

suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo

Toma de muestra de abscesos cerrados

1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el

centro Abarcar una zona de unos 10 cm

2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de

povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas

3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica

4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja

5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios

6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa

parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una

coloracioacuten azul

7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un

contenedor esteacuteril

Toma de muestra de fistulas

1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar

el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a

5 mL

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 53: 6. Manual BacterII

Procesamiento de la muestra

1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen

2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama

3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min

4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h

5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se

procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie

6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para

iniciar tratamiento

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no

existe crecimiento

DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero

Agar Chocolate Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Tincioacuten de Gram

Hisopo Jeringa

Tioglicolato

Anaerobios

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 54: 6. Manual BacterII

Cuestionario

1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel

2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables

microorganismos podriacuteamos aislar

3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada

4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado

5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas

para su cultivo

PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

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PRAacuteCTICA No 11

DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS

CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)

Introduccioacuten

Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido

cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de

su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera

circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten

Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo

provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado

funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite

la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho

Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a

traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten

neutral

Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis

que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas

que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten

baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden

alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente

el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)

El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el

meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 56: 6. Manual BacterII

la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador

directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR

Objetivo

El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR

Material

1 Placas con gelosa sangre de carnero

2 Placas con agar de Mac Conkey

3 Placas con Agar de Sal y Manitol

4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)

5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen

6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas

7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1

8 Portaobjetos

9 Cubreobjetos

10Aceite de Inmersioacuten

11Tinta china (Marca Pelikan)

12Equipo de tincioacuten de Gram

13Taxos de bacitracina y optoquina

14Reactivo de Kovacs

15Pipetas Pasteur esteacuteril

16Centriacutefuga

Metodologiacutea

Toma de muestra

El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica

LCR obtenido por puncioacuten lumbar

1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios

intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada

2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

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2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la

aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se

repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto

3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo

las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)

4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido

cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca

Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio

microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente

aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a

Microbiologiacutea

Fig 9 Toma de muestra de LCR

Volumen miacutenimo

1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer

de voluacutemenes superiores

2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de

los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL

3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes

Transporte

El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos

como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es

posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo

que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 58: 6. Manual BacterII

dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se

puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae

En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una

investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en

hemocultivo de anaerobios

Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24

horas se deberaacute de conservar a -70ordmC

Observaciones

Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente

hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas

Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias

habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)

Diagrama de trabajo

LCR

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Gelosa Sangre

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowenstein-Jensen

Centrifugar 10-20 min

1000-1500 rpm

Sedimento Tinciones

Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

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Cuestionario

1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal

2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del

microorganismo presente

3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico

4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR

5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 60: 6. Manual BacterII

PRAacuteCTICA No 12

HEMOCULTIVO

Introduccioacuten

El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico

ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su

evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada

en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por

a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este

puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el

cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas

urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la

presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas

enfermedades da manifestaciones cliacutenicas

b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos

acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma

activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local

o sisteacutemica)

c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad

asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS

LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 61: 6. Manual BacterII

Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en

el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los

fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten

tisular piroacutegeno exoacutegeno

Objetivos

1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre

2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un

hemocultivo

3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el

aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno

Material

1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)

2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL

3 Agujas esteacuteriles calibre 21

4 Torniquete y torundas con alcohol

5 Frasco con tintura de Iodo

6 Equipo de tincioacuten de Gram

7 Placas de gelosa sangre de carnero

8 Placas de agar de Mac Conkey

9 Placas de Sal y Manitol

10Placas de Thayer- Martin

11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea

12Microscopio

13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina

14Taxos de oxidasa

Metodologiacutea

Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 62: 6. Manual BacterII

Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento

escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco

perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del

periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro

cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad

Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya

que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el

complemento y la fagocitosis

Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico

1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por

venopuncioacuten

2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al

70 o con tintura de iodo en alcohol

3 Hay que esperar que seque sin soplar

4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado

5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo

6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de

la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante

7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien

en forma homogeacutenea para evitar que se coagule

8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20

minutos

9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 63: 6. Manual BacterII

Fig Toma de muestra sanguiacutenea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser

Hemocultivo liacutequido

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal

manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio

2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias

3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a

3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas

Botella de Cultivo Bifaacutesico

Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)

1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente

2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso

que se sospeche de Brucella

3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10

4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como

sentildeal de un cultivo positivo

5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram

6 Se realizan las resiembras en los medios indicados

7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana

hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo

se puede descartar y considerar negativo

Botellas Bactec

Botellas BacTAlert

Fig 10

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 64: 6. Manual BacterII

Meacutetodo de Lisis

1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes

2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min

3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo

Meacutetodo de Fluorescencia

1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente

2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de

cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo

objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la

muestra

3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando

suavemente

4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia

la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo

bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella

con produccioacuten de CO2

5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos

Reporte

Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre

en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una

mala toma de muestra

Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella

En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por

el mismo

Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes

principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 65: 6. Manual BacterII

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes

Cuestionario

1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo

2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril

3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo

4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste

5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente

importante

Sangre

Pruebas de identificacioacuten

Agar Mac Conkey

Agar Sangre

Agar Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Biggy

Agar Lowestein-Jensen

Botella para hemocultivo

Tincioacuten de

Gram

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

Page 66: 6. Manual BacterII

BIBLIOGRAFIacuteA

1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de

sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71

2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana

3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd

Cambridge University

4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto

Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar

5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill

6 Manual de Bioxoacuten No 1

7 Manual de Difco

8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana

9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana

10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico

11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico

12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico

13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF

14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en

nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP

15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN

16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas

y Plesiomonas Tesis UAP

17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora

de beta lactamasa Tesis UAP

18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares

Tesis UAP

19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis

UAP

20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana

21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th

ed Burgess

Publishing Co

22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico

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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de

infecciones enteacutericas agudas Ginebra

23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En

Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF

24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de

laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992

25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico

26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico