7/23/2019 7375-24391-1-PB
2/6
JKK, Tahun 2014, Volume 3(3), halaman 30-35 ISSN 2303-1077
31
pereaksi Wagner, pereaksi Mayer, pereaksiLieberman-Burchard,
asam tanat, reagen Folin-Ciocalteu dan Asam Askorbat (vitamin
C).
Prosedur Penelitian
Preparasi Sampel
Sampel tumbuhan lakum diperoleh dari JalanParit Husein I Kota
Pontianak Kalimantan Baratdibersihkan dan dilakukan determinasi
spesiesdi Herbarium Bogoriense Pusat PenelitianBiologi-LIPI Bogor.
Selanjutnya dipisahkanantara batang dan daun, Kemudian
sampeldikeringanginkan dan dihaluskan denganmenggunakan
blender.
Ekstraksi dan Partisi SampelSerbuk daun lakum 1,4 Kg dan
batang
lakum 1,5 Kg yang telah kering dimaserasi
dengan metanol selama 3x24 jam pada suhukamar. Ekstrak kemudian
disaring agardiperoleh filtrat yang terpisah dari residu.Ekstrak
metanol kemudian dilakukan partisimenggunakan pelarut dengan
tingkat kepolaranyang berbeda yaitu pelarut n-heksana danpelarut
kloroform selanjutnya dipekatkanmenggunakan evaporator untuk
memperolehekstrak pekat dari masing-masing fraksi.
Analisis fitokimiaIdentifikasi kandungan kimia dalam ekstrak
dilakukan terhadap senyawa senyawa(Harbone, 1987):
a. Steroid/ triterpenoidSebanyak 1 ml larutan ekstrak
ditambah
dengan pereaksi Lieberman-Burchard. Adanyasenyawa steroid
ditandai timbulnya warna hijauatau biru dan triterpenoid
menimbulkan warnamerah atau violet.
b. AlkaloidLarutan ekstrak sebanyak 3 ml ditambah
dengan 1 ml HCl 2 N, dan 6 ml air suling,
kemudian panaskan selama 2 menit, dinginkankemudian disaring.
Filtrat diperiksa adanyasenyawa alkaloid dengan pereaksi
Dragendorff,Mayer dan Wagner
c. PolifenolLarutan ekstrak ditambahkan 2 tetes pereaksi
besi (III) klorida 1%. Senyawa fenol akanmenghasilkan warna
biru, hijau, merah, unguatau hitam.
d. FlavonoidLarutan ekstrak sebanyak 2 ml ditambah
dengan sedikit serbuk magnesium dan 2 ml HCl2N. Senyawa
flavonoid akan menimbulkanwarna jingga, kuning sampai merah.
Penentuan kandungan total fenol (Bhaskar etal., 2011)
Penentuan Kandungan total fenol dilakukandengan metode
Folin-Ciocalteu. Sebanyak 0,5mL larutan ekstrak 0,05% dari ekstrak
metanol,fraksi metanol, fraksi kloroform dan fraksi n-
heksana dan dicampurkan 0,75 mL reagenFolin-Ciocalteu 10% dan 2
mL Na2CO3 (2%w/v). Kemudian campuran dihomogenkandengan alat vortek
selama 15 detik dandipanaskan pada suhu 45oC selama 15
menit.Absorbansi sampel diukur pada maks 720 nmmenggunakan
spektrofotometer UV-Vis.
Kurva standar asam tanat ditetapkan denganmenggunakan persamaan
regresi linier, yangmenyatakan hubungan antara konsentrasi
asamtanat (0, 20, 40, 60, 80, 100 ppm) yangdinyatakan sebagai sumbu
X dengan besarnya
absorbansi hasil reaksi asam tanat denganpereaksi
Folin-Ciocalteu yang dinyatakansebagai sumbu Y.
Uji aktivitas antioksidan dengan metodeDPPH (Kekuda et al.,
2009)
Sebanyak 1 mL larutan dari ekstrak metanoldan masing-masing
fraksi (metanol, kloroformdan n-heksana) dengan konsentrasi 50,
100,150, 200, dan 250 g/mL dicampurkan dengan2 mL larutan DPPH
0,002%, kemudiancampuran didiamkan selama 30 menit.selanjutnya
serapannya diukur pada panjanggelombang 525 nm. Sebagai kontrol
positifdigunakan vitamin C (konsentrasi 2, 4, 6, 8 dan10 ppm).
Kekuatan inhibisinya dihitungmenggunakan rumus :
% Inhibisi= x100%
Uji toksisitas dengan metode Brine ShrimpLethality Test
(BSLT)(McLaughlin, 1998)
a. Persiapan larva udang dan larutan indukWadah disekat dua
bagian, diisi dengan air
laut sebanyak 1 liter. Telur Artemia salinadimasukkan pada
bagian sekat yang tertutupdan sekat yang satu dibiarkan
terbuka,kemudian diberi lampu diatas bagian yangterbuka untuk
menarik udang Artemia salinamenuju bagian yang terkena cahaya
lampusehingga terpisah dari cangkangnya. Telur-telurdariArtemia
salinaakan menetas menjadi larvadalam waktu 48 jam dan digunakan
untuk ujitoksisitas dari ekstrak metanol, fraksi n-heksana, fraksi
kloroform dan fraksi metanoldaun dan batang lakum.
Dibuat larutan induk 2000 ppm denganmelarutkan sebanyak sebanyak
0,5 g ekstrakmetanol, fraksi n-heksana, fraksi kloroform dan
