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Actividad 1
Determinación del grado de reacción en presencia o ausencia de enzima.
La cantidad de p-nitrofenol aumenta con el tiempo; inicialmente se producirá más cantidad debido a las altas concentraciones tanto de enzima como de sustrato. Finalmente, al disminuir el sustrato, se produce más lentamente el producto.
Velocidad de reacción:13,5 nmol/min de p-nitrofenol. Velocidad del patrón: 12,5 nmol/min de p-nitrofenol.
Actividad 2
Efecto de la temperatura.
TIEMPO (min) Cubeta cantidad de p-nitrofenol (nm) producido Absorbancia a 410 nm0 Inicio 0 0,0001 E1 78,4 1,2572 E2 137,2 2,2014 E3 171,1 2,7456 E4 173,7 2,7868 E5 173 2,775
0 1 2 3 4 5 6 7 8 90
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
Actividad 1
Tiempo (min)
p-ni
trofe
nol (
nm)
TEMPERATURA P-nitrofenol (nmol) Absorbancia (410nm) [ ]/min0 39,3 0,63 19,6522 130,9 2,1 65,4537 177,1 2,84 88,55
La elevación de la temperatura incrementa la velocidad de una reacción catalizada por enzimas. Al principio la velocidad de reacción aumenta cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energía cinética de la energía de las moléculas reactantes.Sin embargo, al final, la energía cinética de la enzima excede a la barrera energética para romper los enlaces débiles de hidrogeno que conservan su estructura secundaria y terciaria. A esta temperatura predomina la desnaturalización con pérdida precipitada de la actividad catalítica. Por tanto las enzimas muestran una temperatura óptima de acción. Los limites de actividad para la mayor parte de las enzimas tiene lugar entre los 10°C y 50°C; la temperatura optima para las enzimas en el cuerpo son alrededor de 37°C.
Actividad 3
Efecto del pH.
0 5 10 15 20 25 30 35 400
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Actividad 2
Temperatura (ºC)
[ ]/m
in
pH Absorbancia (410nm) p-nitrofenol (nm) [ ]/ min5 0,2320 14,3 7,15
6,3 0,2410 15 7,58,6 0,2300 14,3 7,15
4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 96,9
7
7,1
7,2
7,3
7,4
7,5
7,6
Actividad 3
[ ]/m
in
La intensidad máxima de la actividad de la enzima, ocurre en el pH óptimo, con rápida disminución de la actividad a cada lado de este valor de pH. La actividad óptima generalmente se observa entre los valores de 5 y 9.
El pH óptimo de una enzima puede guardar relación con cierta carga eléctrica de la superficie, o con condiciones optimas para la fijación de la enzima a su sustrato. Cuando hay un exceso de iones hidrógeno, las enzimas los unen a sus moléculas y ante un déficit los ceden. Este cambio tiene una doble consecuencia sobre la molécula: como todas las proteínas, las enzimas desempeñan su función por los residuos de aminoácidos; algunos confieren a su superficie una distribución de cargas eléctricas. Cuando la concentración de iones hidrógeno es muy baja en comparación con la concentración optima, la molécula los cede desapareciendo cargas positivas o apareciendo cargas negativas en su superficie. Ante una concentración elevada de iones hidrógeno, algunos se fijan a la molécula desapareciendo cargas (-) o poniendo cargas (+) que no existían.
Actividad 4
Efecto de la concentración de la enzima:
A mayor concentración de enzima la velocidad de reacción transcurre más rápido.
Cubetas Absorbancia (410nm) p.nitrofenol (nmol) Tiempo V (nmol/min)Blanco 0 0 0 [alta]
H1 0,65 41,563 1 41,56H2 1,06 66,750 2H3 1,51 95,063 8
Blanco 0 0,000 0 [Baja]L1 0,28 18,250 1 18,25L2 0,52 33,563 2L3 1,03 65,250 8
0 1 2 3 4 5 6 7 8 90
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Actividad 4
Tiempo
p-ni
trofe
nol
Actividad 5
Efecto de la concentración del sustrato:
A concentraciones relativamente bajas de sustrato, la velocidad de la reacción aumenta en forma proporcional a la concentración de sustrato, obteniéndose una relación de tipo lineal. Sin embargo, a concentraciones más altas de sustrato, la relación proporcional no se cumple ya que al aumentar la concentración de sustrato, la velocidad no aumenta considerablemente. Es entonces cuando la velocidad de reacción alcanza un valor máximo Vmax, en el cual aunque se aumente la concentración de sustrato, la velocidad de la reacción no varía.
Actividad 6
Test de viabilidad de un hongo en la producción de p-nitrofenol:
Cubetas Absorbancia (410nm) p.nitrofenol (nmol) Tiempo V (nmol/min)Blanco 0 0 0 [alta]
H1 0,34 21,3 1 21,3H2 0,51 31,7 2H3 1,8 111,9 8
Blanco 0 0 0 [Baja]L1 0,11 6,5 1 6,5L2 0,17 10,7 2L3 0,48 30,1 8
0 1 2 3 4 5 6 7 8 90
20
40
60
80
100
120
Actividad 5
Tiempo
p-ni
trofe
nol
El blanco preparado ya contiene celobiasa proveniente del hongo, con lo que habrá una lectura inicial de p-nitrofenol. Se verifica que la producción de p-nitrofenol sí se puede obtener a partir de un hongo (biodiésel).
Cubetas Absorbancia (410nm) p.nitrofenol (nmol) Tiempo V (nmol/min)Blanco 0 5,3 0
1 0,12 7,3 1 22 0,19 11,6 23 0,27 17,1 44 0,35 21,9 65 0,39 24,4 8
0 1 2 3 4 5 6 7 8 90
5
10
15
20
25
30
Actividad 6
Tiempo
p-ni
ttrof
enol
