Embed Size (px)
Citation preview
INTRODUCCIÓN
• La extracción de biomoléculas de ADN, ARN y proteínas es el método más usado en biología molecular.
• Estas biomoléculas pueden ser aisladas a partir de cualquier material biológico.• En el pasado los procesos de extracción y purificación de los ácidos nucleicos
solían ser complejos.• En la actualidad existen sistemas automáticos diseñado para laboratorios
medianos y grandes ya que permiten un mayor rendimiento de las muestras.• Dos categorías envueltas en la purificación del ADN: Aislación del ADN
recombinante y aislamiento del cromosoma del ADN.• El ARN es una molécula inestable una vez que es extraído de la célula.• La extracción de cell- based es el primer paso para la purificación de casi todas
las proteínas.• Métodos usados: Lisis con detergentes, tratamiento con sal iónica y rápidos
cambios en la presión.• Factores en la manipulación de proteínas: Temperatura(4°c), pH.
EXTRACCIÓN DE ACIDOS
NUCLEICOS
HISTORIA
1869
• El físico suizo Friedrich Miescher realizo el primer aislamiento de ADN.
• El esperaba resolver los fundamentales principios de la vida para determinar la composición química de las células.
• Para la separación de ADN de las proteínas a partir de su extracto Miescher desarrollo dos protocolos:
• 1er protocolo: Fallo en producir material para su posterior análisis.
• 2do protocolo: Obtuvo largas cadenas de núcleos purificados, a lo que se llamó más adelante ácidos nucleicos por su estudiante Richard altman.
EXTRACCIÓN DE PROTEINAS
EN EL SIGLO XVIII
las proteínas fueron conocidas como una distintiva clase de moléculas biológicas por Antoine Fourcroy y otros
EN 1983
El químico holandés GerhardusJohannes Mulder realizo la primera descripción de la proteina
Sus estudios en la composición de sustancias de origen animal, principalmente la fibrina, albumina y gelatina, mostro la presencia de carbono, hidrogeno, oxígeno y nitrógeno
Extracción de Ac. Nucleicos
Definición : Sacar los componentes desde un compartimento celular.
• Involucra:
– Lisis de las células que contienen a los AN
– Inactivación de nucleasas
– Clarificación: separación de los AN de los restos celulares (debris).
Disgregación o fragmentación del tejido
Lisis celular
Clarificación
Purificación
Análisis
Cualitativo:
electroforesis
Cuantitativo:
espectrofotometría
UV
Etapas básicas de un procedimiento
general para Extracción y
Purificación de AN
Métodos de fragmentación y lisis
celular para la extracción de AN
El procedimiento ideal de lisis debe tener la fuerza necesaria para
romper el material de inicio (células o tejido) y la delicadeza requerida
para preservar las moléculas de interés (ADN o ARN).
Métodos físicos
– Homogenización mecánica,
– Homogenización en solución
– Molienda manual en mortero
– Bolitas de vidrio
– Sonicación
Métodos químicos
– Detergentes
Métodos enzimáticos
– Lysozima: rompe enlaces -1.4- entre N-acetil murámico y N-acetil glucosamina de peptidoglicán de la pared celular de bacterias
– Lyticasa: rompe enlaces -1.3 de glucano de levaduras
– Proteasas: rompe enlaces peptídicos de prot. de pared y membrana plasmática e interacciones célula-célula.
Lisis Celular
2. Clarificación. Eliminación de restos celulares (debris)
– Centrifugation
– Filtración
– Método mixto: enzimas + centrifugación
3. Purificación
¿Por qué purificar? Nucleasas que se liberan al lisar las células degradan los ácidos nucleicos.
Técnicas:Desproteinización con fenol, que al desnaturar proteínas causa su precipitación.
Precipitación de proteínas con sales (“salting out”)
EXTRACCION DE ACIDOS
NUCLEICOS
1.-Extracción tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo.
2.-Método de la
extracción alcalina
3.-Método de extracción
CTAB
4.-Gradiente de
centrifugación de bromuro
de etidio (EtBr) -Cesium
Cloruro (CsCl)
5.-Purificación de poli (A)
+ RNA por Oligp (dT)
Celulosa cromatografía
Método convencional
Extracción de ácidos nucleicos utilizando una solución del agente caotrópicode Tiocianato de Guanidino que genera lisis celular y degradación deproteínas con la liberación de los ácidos nucleicos.
Posteriormente el uso de solventes orgánicos fenol- cloroformo que permitensu separación de restos de proteínas, lípidos y la posterior precipitación de losácidos nucleicos usando etanol o isopropanol.
EXTRACCIÓN CON TIOCIANATO
DE GUANIDINO – FENOL –
CLOROFORMO (MÉTODO DE
CHOMCZYNSKI):
Muestra
Solución de Tiocianato de guanidinio a pH básico
LISIS DE MEM. CELULAR Y NUCLEAR-DEGRADACIÓN DE PROTEÍNAS EINACTIVACIÓN DE ENDONUCLEASAS
Centrifugación
ADN + Restos de Lípidos y Proteínas
Restos de alto peso Molecular
Fenol: Cloroformo:
Alcohol Isoamilico (25:24:1)
Fase Orgánica
Fase Acuosa (ADN)
Etanol
Centrifugación
Centrifugación
ADN
El exceso de sal es enjuagado con 70% de etanol y centrifugado para descartar el etanol supernadante. La bolita de ADN es disuelto con un buffer TE o con agua destilada estéril
EXTRACCIÓN DE ADN CON
SOLUCIÓN DE CHONCZYNSKI
MuestraMétodo de un solo paso:
Solución ácida que contiene tiocianato de guanidinio , acetato de sodio , fenol y
cloroformo , seguido por centrifugación.
ARN
ADN y proteínas
Se agrega Isopropanol para
precipitar ARN
Fase Acuosa
Interfase
Fase Orgánica
EXTRACCION DE
CHOMCZYNSKI Y SACCHI
(1987)
FUNDAMENTO DEL METODO:se basa en las diferencias de las propiedades dedesnaturalización y renaturalizacion del ADN deplasmidico y ADN cromosómico.Al aplicar NaOH en presencia de un detergentefuertemente amoniaco Dodecilsulfato de sodio(SDS), y Acetato de potasio Se usa principalmente para extracción de ADN
plasmídico de E. coli.
EXTRACCION DEL ADN
PLASMIDICO
POR LISIS ALCALINA
Crecimiento de
Cultivo
bacteriano de
E.coli
Cosecha de cultivo bacteriano
Detergente SDS + NaOH
PH fuertemente alcalino del medio
- Lisis celular- Desnaturaliza Proteínas ADN cromosómico ADN plasmidico
Acetato de potasioPH neutro del medio
Precipitación: ADN
cromosómico proteínas
ADN plasmidico se mantiene en
solucióncentrifugación
EXTRACCION DE ADN PLASMIDICO
POR LISIS ALCALINA
Las células vegetales pueden lisarse con el detergente
iónico bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB), que
forma un complejo insoluble con los ácidos nucleicos
en medio hiposalino. De ese modo, los polisacáridos,
los compuestos fenólicos y los demás contaminantes
permanecen en el sobrenadante y pueden eliminarse
por lavado
Método de extracción CTBA
1.- Se debe moler la muestra después de congelación con Nitrógeno líquido
2.- Suspender la muestra en solución tampon de extracción, que contiene EDTA, Tris-HCl y CTAB
3.-Centrifugar, eliminar el sobrenadante y lavar
4.- Incrementar la concentración salina
5.-Añadir etanol y ARNasa
ADN puro
Separa ADN plasmídico superenrrollado del ADN plasmídicocircular que está en estado relajado, concentrándolos por centrifugación en una gradiente de Bromuro de Etidio –Cloruro de Cesio(BrEt – CsCl.)
El BrEt ingresa y se intercala en la cadena de ADN disminuyendo sudensidad, pero lo hace en mayor cantidad en el ADN plasmídico enestado relajado que en el ADN plasmídicosuperenrrollado, pudiéndoseseparar por centrifugación en el gradiente de densidad de CsCl.
Centrifugación en gradiente
de BrEt - CsCl
Purificación de poli (A) ARN por
cromatografía de afinidad en
columnas de oligo dT celulosa
El poli (A): extensión de 200-300residuos de adenina en el ARNmde las células eucariotas
Cromatografía de afinidad:
La Cromatografía de Afinidad permite la separación de mezclasproteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinadoligando. En este caso, las proteínas que se retienen en la columnason aquellas que se unen específicamente a un ligando quepreviamente se ha unido covalentemente a la matriz de lacolumna.
• La cola poli A hibridara con la cadena oligo dT, fijándose en la columna1
• Lavar los ARN no fijados 2
• ARN poli A se eluye y se precipita con alcohol etílico frio. 3
MÉTODOS COMÚNMENTE
UTILIZADOS EN LA
SELECCIÓN DE POLI (A)
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA DE OLIGO (DT)
COLUMNASCROMATOGRAFÍA POR LOTES
Es usada normalmente para la purificación de grandes
cantidades de ARN Poli(A) no radiactivo aisladas de células
mamíferas
cromatografía por lotes trabaja con ARN mamífero en pocas cantidades de muestras que
pueden ser radioactivos o no.
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE
ADSORCION
Se basa en la adsorción y desorción de los
ácidos nucleicos en presencia de sales
caotrópicas. Bajo condiciones nativas, los
ácidos nucleicos están recubiertos de una
capa hidratante de moléculas de agua que
mantienen la solubilidad del DNA en
soluciones acuosas.
Con la adición de iones caotrópicos a los
ácidos nucleicos, se destruye esta
ordenada estructura de moléculas de agua
de la capa hidratante, por lo que las sales
caotrópicas crean un entorno hidrofóbico
alrededor del DNA.
EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS
NUCLEICOS EN FASE SOLIDA
Logra una purificación rápida y eficiente comparada con losmétodos convencionales.
Los sistemas de fase solida absorberán los acidos nucleicos en elproceso de extracción dependiendo del pH y contenido de salesdel buffer
Extracción de ácidos
nucleicos en fase solida
El proceso de absorción se basa en los siguientes principios
la interacción de unióncon enlaces dehidrógenos con unamatriz hidrófila bajocondicionescaotrópicas
intercambio iónico en condiciones acuosas por medio de un intercambiador de aniones
exclusión de afinidad y de tamaño de los mecanismos
Pasos
Lisis celular
Adsorción de acidos
nucleicos
Lavado
Elución
PASOS EN EL PROCESOS DE
EXTRACCIÓN EN FASE
SOLIDA (SPE)
1
•Acondicionar la columna para la adsorción de la muestra (puede ser hecho utilizando un buffer a un Ph particular para convertir la superficie o grupos funcionales sobre el solido dentro de una forma química particular)
2•Luego la muestra la cual ha sido degradada por el uso de
buffer de lisis es aplicada sobre la columna
3
•El acido nucleico deseado absorberá a la columna con la ayuda de pH elevado y concentración de sales de la solución enlazante
Clasificación de absorbentes
para la SPE
Matrices de sílica
Tierra de diatomeas
Transportadores de intercambio
iónicoPartículas de vid
Grupo de absorbentes utilizados se clasifican en los siguientes grupos:
• gel de sílice modificados quimicamente
• Polímeros absorventes • Grafitado o carbono poroso.
Clasificación de absorbentes usados en el SPE de ADN
Clasificación general del SPE
Absorbentes generales del SPE
PARTÍCULAS DE VIDRIO
• Gel de agarosa involucrado en el uso de sales caotropicas facilitan elenlazamiento de ADN a vidrio común de sílice.
• La absorción de acido nucleicos es el sustrato de vidrio ocurre debido almecanismo y principio similar al de la absorción de cromatografía deadsorción
• Esta invención ha descubierto que una mezcla de gel sílice y partículas devidrio puede ser usada para separar acido nucleico de otras sustancias enla presencia de soluciones de sales caotropicas
matrices de sílice
• El sodio juega un rol como un catión enlazante o puente que atrae al oxigeno cargado negativamente en los fosfatos de las cadenas de acidos nucleicos
matrices de sílice
El principio de purificación de las matrices de sílice se basa en la alta afinidad del ADNcargado negativamente hacia las partículas de sílice cargados positivamente.
TIERRA DE DIATOMEAS
• Es una roca • Resultado de la descomposion del
esqueleto de las diatomeas• Las diatomeas son algas unicelular
• Están formadas por partículas perforadas conteniendo agujeros de
aprox. 1 um en diámetro.• Es usado en cromatografía de absorción y como apoyo en la fase
acuosa en cromatografía de partición
Sílice hasta un 94%
Tierra diatomeas (soporte de columna cromatografica)
Tierra diatomeas (como filtrante )
Moléculas de sílice -------- molécula de ADN
Agente caotrópico
Moléculas de sílice -------- molécula de ADN
Purificación de ácidos
nucleicos basados en partículas
magnéticas
Figura: de una perla magnética de
silica adherida con el ADN
Figura: , uso de las perlas
magnéticas
Se producen apartir de:• diferentes polímeros sintéticos• biopolímeros• vidrio poroso• o basadas en partículas magneticas inorgánicas
tales como el oxido de hierro
El principio se basa en el comportamiento de los imanes. Magnetismoes: “La fuerza invisible que tiene la habilidad de desarrollar trabajomecánico de atracción y repulsión de materiales magnetizables”
Características partículas
magnéticas
Se caracteriza: porque pueden ser capturados fácilmente a partir de cualquier líquido y ser re-suspendido en el mismo líquido, que al mismo tiempo pueden unirse y separarse de un imán desdeuna pared que los contiene
1. Tamaño gama 0.1 ~ 10mm2. Posee una área de gran superficie que
promueve reacciones eficientes y rápidos.3. El Aislamiento y purificación de las muestras
son mas fáciles de realizar4. la superficie de las perlas se pueden adaptar,
para optimizar la captura de una variedad de muestras tales como ADN, ARN, ARNm
Purificación de ácidos
nucleicos basados en
partículas magnéticas
los ácidos nucleicos se unen selectivamente a bolas paramagnéticas en presencia desales caotrópicas mientras que el resto de los contaminantes son eliminados de lamuestra.
Purificación de ácidos nucleicos
basados en partículas magnéticas
Figura: uso de varilla magnética
CUENCAS DE ZIRCONIA
Estas microesferas tienen una gran disposición a la superficie de unión y se puede dispersar en la solución
Solución caotrópica: tiocianato de guanidinio Dilución de las muestras: isopropanol
RESINA DE
INTERCAMBIO IONICO
El uso de resinas hidrocarbonadas con estructuras rígidas en tres dimensiones permite que la superficie se encuentre cargada con alguna sustancia como el dietilaminoetilo que puede protonarse
en medio ácido y quedar cargado positivamente por lo que interacciona con los grupos fosfatos del ADN.
Resinas:• Metilaminoetanol• Dietilaminoetil celulosa
Tamaño del poro
Figura A: poro de menor tamaño
= menor capacidad de unión
Figura B: poro de mayor tamaño
= mayor capacidad de unión
EXTRACCIÓN DE PROTEÍNAS
Figura : primer paso de la extracción
es la lisis celular
Figura : membrana plasmática
CLASIFICACIÓN DE METODOS DE
EXTRACCIÓN DE PROTEINAS
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO
• Es un método que permite la separación de moléculas basada en sus propiedades de carga eléctrica. Se compone de dos fases :
– Fase estacionaria (intercambiador iónico)
– Fase movil
PROPIEDAES DE INTERCAMBIADORES
IÓNICOS
Intercambiadores catiónico
Intercambiadores Anicónico
La matriz puede estar hecha de diferentes materiales. Los de uso mas corriente como son el dextrano, la celulosa, policrilamida, copolimeros de estrieno y divinilbenceno
1.- EQUILIBRIO
2.- APLICACIÓN Y LAVADO 3.- ELUSION
4.- REGENERACION
• La cromatografía de filtración en gel seseparan moléculas en virtud de susdiferencias de tamaño. La capacidadseparadora reside en el gel cuya matrizconsta de un gran número de esferasporosas microscópicas. Estas esferasestán constituidas por largas cadenasde polímeros unidas entre si porenlaces químicos para formar una redtridimensional.
CROMATOGRAFIA DE
FILTRACION EN GEL
CROMATOGRAFÍA DE
FILTRACIÓN EN GEL
La separación de moléculas puede serdividida en tres tipos principales:-Exclusión total, las moléculas grandes
no pueden entrar sus poros y eluír demanera rápida.-Permeación selectiva, moléculas de
tamaño intermedio pueden entrar en losporos y, tal vez, tengan una duraciónpromedio dependiendo de su tamaño yforma.-Límite total de permeación, moléculaspequeñas tienen la mayor duración enella una vez que entran en los poros dela columna
MATERIALES PARA LA
FILTRACIÓN EN GEL
Los geles normalmenteutilizados son de tres tipos:dextrano, agarosa ypoliacrilamida. El gel dedextrano (polímeroramificado de glucosa,entrecruzado y formado enpequeñas bolitas)
CROMATOGRAFIA DE
AFINIDAD
• La Cromatografía de AfinidadOfrece la mayorespecificidad y selectividadpara el aislamiento ypurificación de biomoleculas
• En esta técnica la moléculaque se une específicamente ala proteína se conoce con elnombre de ligando mientrasque otras pasan por lacolumna
Las proteínas que tienen una fuerte afinidadhacia los grupos químicos específicos como losligandos, se unirán y enlazaran covalentementea la columna matriz mientras las otras proteínasatravesarán la columna.
El enlace entre el ligando y las moléculas de proteínasdebe ser reversible para permitir que las proteínassean removidas de forma activa. Después del lavadode los contaminantes, el ligando asociado deberetener su enlace de afinidad específico hacia lasproteínas fijadas.
TIPOS DE
LIGANDO
MOLÉCULAS DIANA
Enzima Análogo de sustrato, inhibidor, cofactor
Anticuerpo Antígeno, virus
Lectina Polisacárido, glicoproteína, receptor de superficie celular,célula
ácido nucleico Secuencia de bases complementaria, histonas, nucleico
polimerasa de ácido, la proteína de unión de ácido nucleico
hormonas y
vitamina
Receptor, proteína portadora
El glutatión Glutatión-S-transferasa o proteínas de fusión GST
Los iones metálicos Poli (su) proteínas de fusión, proteínas nativas con histidina,
cisteína y residuos / triptófano en sus superficies
ELECTROFORESIS
De frente
móvil Zonal
Continua
TIPOS
determinación de las
movilidades y puntos
isoeléctricos de
las proteínas.
La muestra se aplica también en una zona,
pero se suministra
continuamente a lo largo del
proceso.
se basa en analizar
mezclas, la pureza de una mezcla y la
purificación de sustancias, y para detectar cambios
de movilidad o conformación.
Materiales de soporte
• Papel y film( polisacaridos de gran pm y lipolisacaridos)
• Acetato de celulosa isoenzimas análisis de suero
• Geles agarosa y poliacrimalida
Electroforesis en gel
• carga neta• Tamaño• intensidad de campo eléctrico• temperatura • medio de soporte buffer
Factores que afectan la electroforesis:(E. poliacrilamina)Técnica de separación de proteínas cargadas
por migración en un campo eléctrico se separan en función a su carga eléctrica al electrodo de carga contraria .
PAGE
resultado de una polimerización química es una mezcla deacrilamida y bis acrilamida, controlando la conc. De ambas seobtiene diferente grado de reticulación diferente poro.
No desnaturalizantes: separamos por CARGA y TAMAÑO PAGE
SDS llamado dodecil sulfato de sodio es un detergenteanionico se une a las proteínas por fuerzasintermoleculares(cadenas polipeptidasY le dan carga negativa a la proteína en función de sutamaño.
Electroforesis en gel de
poliacrilamida SDS
Separa las proteínas en función de su masa molecular
(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)
β-mercaptoetanol para reducir los puentes disulfuro, separando así lassubunidades de la proteína y permitiendo que se extiendan por efecto del SDS
La proteína es desnaturalizada ,el gel produce una fuerza de resistencia ,fricciónhidrodinámica a la acción de la fuerza impulsora del campo eléctrico.
Se visualiza añadiendo colorante azul Coomaissie
¿Cómo se realiza la electroforesis en
gel de poliacrimina y SDS?
Marcadores de peso molecular:
Mezcla de diferentes proteínas pre
teñidas de las que conocemos el
peso molecular. Por comparación
podemos averiguar el PM aparente
de nuestra proteína
ISOELECTROENFOQUE
¿Que es la electroforesis bidimensional ?
ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA CON SDS
técnica de alta resolución cuyo objetivo es la separación de mezclas de proteínas
altamente complejas. Estas proteinas , separadas en un gel con gradiente de pH en
condiciones desnaturalizantes de acuerdo PI
primera dimensión mediante isoelectroenfoque ¿?
segunda dimensión según peso molecular mediante electroforesis en poliacrilamida.
ISOELECTROENFOQUE
Las moléculas anfotéricas,
como los aminoácidos, se
separan en un medio en el
que existe una diferencia de
potencial y un gradiente de
pH . La región del ánodo es
Ácida y la del cátodo es
alcalina
La técnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que laautorradiografía, y permite identificar la presencia de una banda concreta en un gel deelectroforesis, bien sea de proteínas o de ácidos nucleicos:
proteínas
Western blot.
ADN
Southern blot
ARN
Northern blot.
Técnicas de blotting:
Southern,Northern,Western
Resultado del western blot
Es una técnica analíticapara detectar y caracterizar proteínas especificas de una muestra que se basa en el especificidad de reconocimiento entre antígeno y anticuerpo
Directo
Indirecto
emplean anticuerpos virales (cultivo celular )y mediante la electroforesis (separan las proteínas x PM) .seguidamente se transfiere a un papel denitrocelulosa y se incuba con el suero problema ,los anticuerpos sedetectan añadiendo una Anti IgG humana marcada con una enzimaperoxidasa que produce una banda coloreada al añadir el sustrato.
Western blot o Inmunoblot
Detecta la presencia de una secuencia de ADN de una
mezcla de una mezcla de acido nucleico.
Usa la técnica de electroforesis en gel en gel de
agarosa para separar los fragmentos de ADN por su
longitud.
Perfil de ADN
Southern Blot
Las moléculas son transferidas y unidas al filtro al igualque el Southern blot después de la hibridación conuna sonda marcada las bandas en el gel indican laubicación de los tipos de RNA que seancomplementarios con la sonda .
Permite detectar ARN, la técnica consiste en extraer ARN de las células y su extracción por tamaño mediante la electroforesis en gel de agarrosa.
Northern blot
Extracción de biomoléculas
all-in-one
• El kit “todo en uno” esta diseñado para poder extraer simultaneamenteRNA, DNA genómica y proteínas de la misma muestra biológica (celulaseucarióticas, tejidos vegetal o animal). Este kit contiene un buffer y unacolumna basada en silica para purificación y separación de ácidosnucleicos.
• DNA obtenido es efectivo en PCR, digestiones, etc.• RNA obtenido es efectivo para generacion de sondas, RT-PCR, Northern
blot, etc.• Proteinas : análisis por SDS-PAGE o Western blots
Todo en menos de una hora.
Muestra : tejidos o células
Buffer SK
(lisis ARN)
El Tampón SK ( contiene detergente y desnaturalizante caotropico )
Extracción de biomolecular all-in-one
Proceso de obtención
ARN
TOTALES
Añade Etanol
Carga en columna spin
Solución de lavado A
Solución de elucion A
ADN ARN
Solución de lavado de la
IE
Tampon de elucion F
proteínas
Carga en columnamicro ARN
Solución de lavado A
Solución de elución A
gel de SDS-PAGE
Solución de lavado y elución C
ADN
GENOMICO microARN PROTEINAS
microARN
• Similar al método de aislamiento de un solo paso de Chomczynski y Sacchi (1987).
Este método implica la lisis de lascélulas con isotiocianato deguanidina y fenol en unasolución monofásica .
después de la adicióndecloroformo donde seextraen el ADN y lasproteínas, dejando el ARNen el sobrenadante acuoso.
Fase orgánicaPrecipitación con etanol o osipropanol
Obtiene : ADN Y PROTEINAS
Fase acuosaPrecipitación isopropanol
ARN
No utiliza
ADN genómico ARN total y micro ARN Proteínas totales
Una sola muestra biológica simultáneamente
fenol
cloroformo
acetona
cultivos de células y
tejidos de origen animal
y humano.
DEFINICION : Es un sistema de extracción automático en el cual se utiliza unainstrumentación grande, costosa y compleja diseñada para elprocesamiento de muestras de alto rendimiento, esto simplifica elaislamiento de ácidos nucleicos.
REQUISITOS :las extracciones automatizadas deben ser más consistente y reproducible.La velocidad, precisión y fiabilidad de toda extracción de proceso debe sermáxima y al mismo tiempo minimizar el riesgo de contaminación cruzada.
BENEFICIOS :reduce el tiempo de trabajo.disminuir la mano de obra y costos.aumentan la seguridad del trabajador y ofrece la oportunidad de la reproducibilidad y la calidad de resultados.
MagPurix 12s Automated Nucleic Acid Purification System
es un sistema automatizado de mesa para la purificación rápida de ácidos nucleicos de muestras biológicas usando la tecnología de separación con microesferas magnéticas.
Sistema Maxwell® 16
lleva a cabo la purificación automatizada que ahorra tiempo y trabajo porque elimina los pasos de la preparación de reactivos, pipeteo y centrifugación.
InviGenius
El sistema esta incorporado con una pantalla tactil y computadora
AutoGenFlex STAR
AutoGen ha desarrollado una nueva plataforma automatizada para la purificación de DNA genómico de grandes volúmenes de sangre total.
el proceso de extracción tarda unos 20 minutos desde el inicio hasta el final. Se realizan los siguientes pasos :
añadir las muestraslíquidas del reactivode cartucho
colocar el reactivo de
cartucho en la máquina
presionar el botón Start. ADN se eludirá en un buffer de
elución al final del proceso.
Mejora de los
Sistema de extracción
automatizada
La combinación de la
extracción all-in-one
de biomoleculas y el
método con sistema
de extracción
totalmente
automatizado puede
ser un prospectivo
invento en el futuro
Miniaturización será
la futura tendencia
de la automatización
robótica en los
laboratorios.
un sistema portátil
de extracción
• Desde el primer aislamiento del ADN en 1869 hasta la actualidad se handesarrollado muchas técnicas para la purificación de biomoléculas.
• La extracción con guanidinium se utiliza ampliamente en la extracción del ADN yARN y purificación por cromatografía que es método para la inmunotransferenciaque se utiliza para extraer las proteínas.
• La extracción de biomoléculas ayudan a los investigadores y científicos en elanálisis dentro de la biología molecular.
• El sistema de extracción de ácidos nucleicos automatizado se ha desarrollado porel crecimiento de la tecnología, además de poseer múltiples beneficios para lainvestigacion.
• En un futuro se debe implementar metodos de extracción mas rápidos , portátiles ,eficaces y precisos .
![Clase 1 o_salazar[adn]](https://img.pdfslide.tips/doc/110x75/559aeecb1a28ab8d218b472a/clase-1-osalazaradn.jpg)
![Polimorfismo de adn[1]](https://img.pdfslide.tips/doc/110x75/5579283cd8b42a9c578b5000/polimorfismo-de-adn1.jpg)
![Adn espiritual[1]](https://img.pdfslide.tips/doc/110x75/559e44d71a28abd70f8b47a6/adn-espiritual1.jpg)
