Adroher Et Al 1988 Chemosphere

8/10/2019 Adroher Et Al 1988 Chemosphere

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C h e m o s p h e r e , V o l . 1 7 , N o . 3 , p p 6 0 9 - 6 1 5 , 1 9 8 8 0 0 4 5 - 6 5 3 5 / 8 8 $ 3 . 0 0 + . OO

P r i n t e d i n G r e a t B r i t a i n P e r g a m o n J o u r n a l s L t d .

STRUUITE (McJNH4PO4.6H20) CRYSTAL FORMATION BY

Tryp anos oma cr uz i IN CULTURE

F.J . Adroher (1 ) , A. Osuna (1) J .A. Lup i~6ez (2 ) .

( I) D e p a r t m e n t o f P a r a s i t o l o g y , F a c u l t y o f P h a r m a c y ,

U n i v e r s i t y o f G r a n a d a . 1 8 0 7 1 - G r a n a d a . S p a i n.

( 2) D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y a n d M o l e c u l a r B i o l o g y , F a c u l t y

o f S c i e n c e s , U n i v e r s i t y o f G r a n a d a . I 8 0 7 1 - S r a n a d a . S p a i n .

A B S T R A C T . T h i s w o r k w a s t o d e s c r i b e t h e in v i t r o f o r m a t i o n o f

e x o c e l l u l a r p r e c i p i t a t e s o f s t r u v i t e ( M g N H P O . 6 H _ O) in c u l t u r e s o f

^ , 4 .~ Z

T r y p a n o s o m a c r u z i, g r o w n in m o d i f i e d ~ r a c e s m e o m a s u p p l e m e n t e d w i t h I O X

i n a c t i v a t e d f e ta l b o v i n e s e r u m a n d w i t h N a C l o r s o r b i t o l . T h i s c r y s t a l

p r e c i p i t a t i o n w a s o n l y v i s u a l i z e d i n m e d i a a f t e r 2 5 d a y s o f c u l t u r e .

S u c h m e d i a e v e n t u a l l y h a d a m m o n i u m h i g h e r t h a n 0 . 4 m g / m l a n d a p H o f 7 . 0

o r m o r e . D i s c u s s e d i s t h e p o s s i b l e i n f l u e n c e o f o s m o t i c p r e s s u r e o n

s t r u v i t e p r e c i p i t a t i o n .

I

NTRODUCT

I N

S o m e m i c r o o r g a n i s m s in c u l t u r e c a n g e n e r a t e m i n e r a l c r y s t a l s . S o m e

b a c t e r i a f r o m s o i l , f r e s h o r s e a w a t e r c a n p r o d u c e c r y s t a l s s u c h a s

a r a g o n i t e ( C a C0 3 , o r t h o r h o m b i c ) , c a l c i t e ( C a C 03 , h e x a g o n a l ) , a p a t i t e

( c a l c i u m p h o s p h a t e ) , s t r o n c i a n i t e ( S r C0 3 ) , a n d s t r u v i t e ( m a g n e s i u m

a m m o n i u m p h o s p h a t e h e x a h y d r a t e ) ( 2, 9 , II , 16 , 1 7, 2 0 ) .

O c c u r r e n c e o f s t r u v i t e i n m a t e r i a l r i c h in o r g a n i c m a t t e r w a s

r e p o r t e d l o n g a g o. R o b i n s o n ( 18 ) i d e n t i f i e d s u ch c r y s t a l s a n d s u g g e s t e d

. .. t h at t he m i c r o o r g a n i s m s p r o d u c e t he a m m o n i a f r o m n i t r o g e n o u s

o r g a n i c m a t t e r i n w h i c h t h e y a r e g r o w i n g a n d t ha t i t t h e n c o m b i n e s w i t h

t he m a g n e s i u m p h o s p h a t e p r e s e n t . .. '. L a t e r, c r y s t a l s w h i c h o c c u r r e d

w i t h i n c o l o n i e s of S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s g r o w i n g o n n u t r i e n t a g ar w e r e

i d e n t i f i e d a s s t r u v i t e ; o t h e r o r g a n i s m s , a ll o f t h e m i n c r e a s i n g t he p H

o f th e m e d i u m d u r i n g g r o w t h , f o r m e d s i m i l a r c r y s t a l s ( 2) .

H o w e v e r , t he c a p a c i t y o f p r o t o z o a t o f o r m m i n e r a l c r y s t a l s in c u l t u r e

m e d i a h a s o n l y b e e n d e s c r i b e d b y u s in a p r e v i o u s c o m m u n i c a t i o n ( I) ,

w h e r e i n w e i n f o r m o f s t r u v i t e p r e c i p i t a t i o n b y T r y p a n o s o m a c r uz i in a

6 0 9


2/7

6 1 0

G r a c e ' s m e d i u m m o d i f i e d b y O s u n a - C a r r i l l o e t a l. ( 1 4) . W e r e p o r t h e r e

t he a p p e a r a n c e o f s t r u v i t e ( M g N H 4 P O 4 . 6 H 2 0 ) c r y s t a l s in a c u l t u r e m e d i u m

i n w h i c h e p i m a s t i g o t e s o f T . c r u z i h a d b e e n g r o w n f o r s e v e r a l d a y s . W e

t h e r e f o r e s t u d i e d c o n d i t i o n s u n d e r w h i c h s t r u v i t e i s f o r m e d , i n c l u d i n g

t h e i n f l u e n c e o f N a C l a n d s o r b i t o l .

H TERI LS ND METHODS

W e u s e d e p i m a s t i g o t e s o f T . c r u z i , s t r a i n M a r a c a y ( d o n a t e d b y D r.

B l & s q u e z , I n s t i t u t o N a c i o n a l de M i c r o b i o l o g ] a , V i r o l o g f a e I n m u n o l o g i a

S a n i t a r i a s , M a j a d a h o n d a , M a d r i d , S p a i n ) , o b t a i n e d , a t 2 8 C , i n N o v y -

N i c o l l e - M c N e a l ( N NN ) m e d i u m o v e r l a i d w i t h a l i q u i d p h a s e o f E a g l e ' s

m i n i m a l e s s e n t i a l m e d i u m w i t h E a r l e ' s s a l t s ( M EM ; G i b c o , M i d d l e s e x ,

U . K . ) s u p p l e m e n t e d w i t h 2 0 ( v / v ) o f f e t a l b o v i n e s e r u m ( G i b c o ) ,

i n a c t i v a t e d a t 5 6 C f o r 3 0 m i n ( I F B S ) . T h e f l a g e l l a t e s h a r v e s t e d a t

t he e n d o f l o g - p h a s e g r o w t h w e r e i n o c u l a t e d i n t o m o d i f i e d a n d c o n t r ol

G r a c e ' s m e d i a , w i t h I m i l l i o n o f e p i m a s t i g o t e s / m l , a n d m a i n t a i n e d a t

2 8 C .

T h e c r y s t a l s w e r e i s o l a t e d f r o m t he m e d i a b y r e t e n t i o n o n a f i l t e r

( S a r t o r i u s ) w i t h 8 - p m d i a m e t e r p o r e s . T h e y w e r e w a s h e d i n b i - d i s t i l l e d

w a t e r u n t i l p e r f e c t l y c l e a n ( t h e s o l u b i l i t y o f s t r u v i t e in g / l O 0 m l o f

w a t e r a t 0 C i s 0 . 0 2 3 1 ; a t G O C 0 . 0 1 9 5 ) t h e n d r i e d a t 3 7 C.

T h e s t r u v i t e c r y s t a l s w e r e o b s e r v e d w i t h a P h i l i p s 5 1 5 s c a n n i n g

e l e c t r o n m i c r o s c o p e c o n n e c t e d t o a n E d a x m i c r o a n a l y s e r , a n d f u r t h e r

e x a m i n e d b y X - r a y d i f f r a c t i o n b y a P h i l i p s P W 1 7 30 d i f f r a c t o m e t e r . A

d i f f r a c t i o n t u b e w i t h a C u a n o d e a n d N i f i l t e r w a s u s e d a s a n X - r a y

s o u r c e . P r e p a r a t i o n o f t he s a m p l e i n v o l v e d p u l v e r i z i n g p u r i f i e d c r y s t a l s

in an a g a t e m o r t a r .

T o s t u d y c r y s t al f o r m a t i o n , w e p r e p a r e d G r a t e ' s m e d i u m ( G i b co ) p l u s

1 0 ( v / v ) I F B S , a s c o n t r o l , s u p p l e m e n t e d w i t h I 0 0 m E q / l o f N a C l ( M e r c k ,

D a r m s t a d t , F . R . G . ) o r 2 0 0 m M o f s o r b i t o l ( M e r c k ) . T h e p H w a s 6 . 3 i n a ll

c a s e s ; o s m o t i c p r e s s u r e 3 7 5 m O s m f o r c o n t r o l a nd a p p r o x i m a t e l y 5 5 0 - 5 7 5

m O s m f o r s u p p l e m e n t e d m e d i a a s m e a s u r e d w i t h a O s m e t t e S o s m o m e t e r

( P r e c i s i o n S y s t e m s I n c. , M a s s a c h u s e t t s , U . S . A . ) .

T h e p a r a s i t e s w e r e i n o c u l a t e d w i t h I m i l l i o n o f o r g a n i s m s / m l i n 2 m l

o f m e d i u m in 1 7 -m l L e i g h t o n f l a s k s ( B e l l c o , V i n e l a n d , N J , U . S . A . ) , at

2 8 C . G r o w t h w a s d e t e r m i n e d w i t h a N e u b a u e r ' s h e m o c y t o m e t e r .

G l u c o s e in t he m e d i u m w a s e s t i m a t e d a s d e s c r i b e d b y B e r g m e y e r &

B e r n t ( 3) . A m m o n i u m c o n c e n t r a t i o n s in t he m e d i u m w e r e m e a s u r e d f r o m

e n z y m a t i c c o n v e r s i o n o f 2 - o x o g l u t a r a t e t o L - g l u t a m a t e b y a

m i c r o m o d i f i c a t i o n o f t h e p r o c e d u r e s u g g e s t e d b y S i g m a C h e m i c a l C o . ( S t.

L o u i s , M O, U . S . A . ) , w h o s e 1 7 0 - U V k i t w a s e m p l o y e d .


3/7

6 1 1

R SULTS

I n c u l t u r e s 2 5 d a y s o r m o r e o l d , c r y s t a l s w e r e o b v i o u s a t th e b a s e o f

t h e c u l t u r e f l a s k in a ll c u l t u r e m e d i a F i g . I A) , c o n t r o l s e x c e p t e d . T h e

c r y s t a l s w e r e i n o r g a n i c s i n c e t h e y c o u l d n o t b e i n c i n e r a t e d w i t h a

b u n s e n b u r n er . E x a m i n a t i o n o f t he c r y s t a l s , b y s c a n n i n g e l e c t r o n

m i c r o s c o p y F i g. I B) c o n n e c t e d t o a n E d a x m i c r o a n a l y s e r , r e v e a l e d

p h o s p h o r u s a n d m a g n e s i u m in a w e i g h t r a t i o o f 1 . 3 8 4 :1 .

T h e s e c r y s t a l s s u b j e c t e d t o X - r a y d i f f r a c t i o n y i e l d e d t he s p e c t r u m

s h o w n i n F i g . 2. T h e c r y s t a l s w e r e i d e n t i f i e d a s s t r u v i t e f r o m r e f e r e n c e

t o c a r d 1 5 - 7 6 2 f r o m t h e A . S . T . M . 4 ) .

F i g. 1 . A : M i c r o p h o t o g r a p h o f s t r u v i t e m a c l e X 4 0 ). B : E l e c t r o n

m i c r o p h o t o g r a p h o f s t r u v i t e c r y s t a l s X I 0 0 ). B a r s = 0 .I m m .

: :

5 5 t ~ ~ : ) 5 2 5 5

F i g. 2 . X - r a y d i f f r a c t i o n d i a g r a m f r o m s t r u v i t e c r y s t a l s .

I n p a r a ll e l c u l t u r e s , a m m o n i u m e x c r e t i o n , pH c h a n g e s , g l u c o s e

c o n s u m p t i o n , a n d g r o w t h w e r e s t u d i e d F i g. 3 ) ; a m m o n i u m e x c r e t i o n

i n c r e a s e d i n v e r s e l y o u t l i n e t o c o n s u m p t i o n o f g l u c o s e .

T . c r u zi in v i t r o r a p i d l y c o n s u m e s g l u c o s e . H i g h l e v e l s o f a m m o n i u m

e x c r e t i o n 0 . 4 m g / m l ) e n s u e , r e s u l t i n g in s t r u v i t e p r e c i p i t a t i o n , t he p H

h a v i n g r i s e n t o 7 . 0 o r o v e r F i g . 3 ) .


4/7

6 1 2

~ C

2

15

10

5

5 10 15 20

D YS

"0.2

0.1

F ig . 3 . Trypanosoma cru z i c u l tu re on Grat e 's medium supplemente d w i th

10~ (v /v ) IFBG pl us 100 mEq of NaC 1/ l i t er . (A) Growth of par asi te s, in

mi l l i ons /ml ( (~ ) (B) pH (0) ; (C) G lucose con cent ra t ion, in mg/mi ( [7 ) ;

(D) Ammonium co nc en tr at io n, in mcj/ml (, ).

DISCUSSION

W e ha v e p r e v i o u s l y r e p o r t e d o f th e s t r u v i t e p r e c i p i t a t i o n b y T . cr u zi

I ) . W e t h i n k t ha t t he f o r m a t i o n o f s t r u v i t e c r y s t a l s i n t h e m e d i u m m a y

c o r r e l a t e w i t h e x c r e t i o n of a m m o n i u m I , 1 2, 2 2 ) , e s p e c i a l l y h i g h e r in

s u g a r - f r e e m e d i a 1 9, 2 1 ). E n z x m e s c a t a l y z i n g a m m o n i u m e x c r e t i o n h a v e

b e e n d e t e c t e d i n T . c r u z i 6 ) . T h e a m o u n t o f a m m o n i u m e x c r e t e d - a s

n o t e d - w a s i n v e r s e l y r e l a t e d t o g l u c o s e c o n s u m p t i o n , r e a c h i n g t he

m a x i m u m a t t h e e n d o f t h e g r o w t h p e r i o d F i g . 3 ) . T h e p a r a s i t e r a p i d l y

c o n s u m e s g l u c o s e f r o m t h e m e d i u m a n d t h e p H s i n k i n g t o 5 . 5 , d u e t o

p r o d u c t i o n o f o r g a n i c a c i d s , m a i n l y s u c c i n i c 5 , 7 , 8 ) , t h i s i s

f o l l o w e d b y t h e p r o d u c t i o n o f h i g h l e v e l s of a m m o n i u m , w i t h a n i n c r e a s e

o f p H, p r e s u m a b l y a s a r e s u l t o f p r o t e i n m e t a b o l i s m 2 3) . F o r m a t i o n o f

s t r u v i t e i s t h e r e b y i n d u c e d a m m o n i u m c o n c e n t r a t i o n h i g h e r t h an 0 . 4

m g / m l a f t e r 2 5 o r m o r e d a y s o f c u l t u r e ) a l o n g w i t h a p H o f 7 . 0 or m o r e .

I n t e r e s t i n g l y in f l a s k s o p e n e d fo r s a m p l e t a k i n g, c r y s ta l p r e c i p i t a t i o n

d i d n o t o c c u r e v e n a f t e r 6 0 d a y s o f c u l t u r e . P e r h a p s a c r i t i c a l

c o n c e n t r a t i o n o f a m m o n i a in t h e a t m o s p h e r e o f t h e c u l t u r e f l a s k i s

n e e d e d f or s t r u v i t e p r e c i p i t a t i o n .

W e t h in k th a t s t r u v i t e p r e c i p i t a t i o n m a y b e p r o m o t e d b y t he e l e v a t e d


5/7

6 1 3

o s m o t i c p r e s s u r e of t h e m e d i u m u s e d , s i n c e n o i m p o r t a n t d i f f e r e n c e s i n

a m m o n i u m e x c r e t i o n h a d b e e n o b s e r v e d a m o n g s e v er a l m e d i a s t u d i e d . O n l y

in t he G r a t e ' s m e d i u m - o s m o t i c p r e s s u r e 5 5 0 - 5 7 5 m O s m g e n e r a t e d b y N a Cl

o r s o r b i t o l - w a s s t r u v i t e c r y s t a l s o b s e r v e d . T h e o s m o t i c p r e s s u r e o f

n o rm a l G r a c e ' s m e d i u m s u p p l e m e n t e d w i t h 1 0 I F B S i s a p p r o x i m a t e l y 3 7 5

m O s m .

T h e s e c r y s t a l s w e r e a g g r e g a t i o n s i t e s f o r t he p r o t o z o a . A g g r e g a t e s

w e r e o b s e r v e d b y P a n ( 1 5) in c u l t u r e m e d i u m F - 8 1 , in w h i c h h e m i n m a y

p r e c i p i t a t e a s c r y s t a l s w h e n th e m e d i u m b e c o m e s a c i d a f t e r a p e r i o d o f

g o o d g r o w t h o f T . c r u z i : e p i m a s t i g o t e s t e n d e d t o f o r m r o s e t t e s a r o u n d

h e m i n c r y s t a l s . H o w e v e r , w e t h i n k l i k e w i s e t ha t t h e s e c r y s t a l s m a y b e

f o r m e d in t he r o s e t t e m i c r o h a b i t a t b y a c t i o n o f e x c r e t e d s u b s t a n c e s b y

t he p a r a s i t e . T h i s c o u l d e x p l a i n t he r e a s o n b y w h i c h t he c u l t u r e s o p e n e d

t o s a m p l i n g w e r e u n a b l e t o p r e c i p i t a t e s t r u v i t e , b e c a u s e t he s a m p l i n g i s

c a r r i e d o u t a f t e r v i g o r o u s a g i t a t i o n f o r u n i f o r m d i s t r i b u t i o n o f t he

f l a g e l l a t e s , a n d th i s a c t i o n i s a b l e t o d i s p e r s e t he r o s e t t e s o f g r o w t h .

S h i n a n o & S a k a i ( 2 0 ) h a v e f o u n d t h a t, in P s e u d o m o n a s c a l c i p r e c i p i t a n s ,

a n i m p o r t a n t f a c t o r c o n t r o l l i n g t h e f o r m a t i o n o f c r y s t a l s in c u l t u r e

m e d i u m is t he r e l a t i o n s h i p b e t w e e n M g 2 + a n d C a 2 +; s t r u v i t e p r e c i p i t a t e s

w h e n t he r a t i o M g 2 / C a 2 + i s 4 o r h i g h e r . R e c e n t l y , F e r r O n - V i l c h e s e t a l .

( I 0) , w o r k i n g w i t h f r e s h w a t e r b a c t e r i a , o b s e r v e d t h at t he n u m b e r o f

s t r a i n s p r o d u c i n g s t r u v i t e is m a x i m a l w h e n t he P O ~ - : M g+ ^

r a t i o

in

t h e

m e d i u m i s I, l e s s i f t h e c o n c e n t r a t i o n o f M g 2 + i s i n c r e a s e d . U n d e r o u r

c u l t u r e c o n d i t i o n s s t r u v i t e c r y s t a l s w e r e f o r m e d w i t h o u t m o d i f y i n g t he

p r o p o r t i o n o f t he s e i o ns n o r m a l l y p r e s e n t .

R i v a d e n e y r a e t a l . ( 1 7) s u g g e s t e d t h a t s o m e b a c t e r i a m a y h a v e a r o l e

i n s t r u v i t e f o r m a t i o n i n n a t u r e , s u p p o r t i n g M o r i t a ' s v i e w ( 1 3) o f

c a l c i t e a c t i n g a s n u c l e a t i o n s i t e s f or a b i o l o g i c a l p r e c i p i t a t i o n .

A m m o n i u m e x c r e t i o n b y b a c t e r i a i s n o t t he o n l y d e t e r m i n a n t o f s t r u v i t e

p r e c i p i t a t i o n , a l t h o u g h i t m a y b e i n c r e a s e i t, s i n c e a m m o n i u m f o r m a t i o n

b y n o n - s t r u v i t e p r o d u c i n g s t r a i n s h a s b e e n r e p o r t e d b y R i v a d e n e y r a e t

a l . ( 1 7 ); t h e y f o u n d t h a t t h e n u m b e r o f c r y s t a l s p r o d u c e d i s s t r a i n

d e p e n d e n t .

F a c t o r s o t h e r t h an s i m p l e a m m o n i u m e x c r e t i o n m a y t ri g g e r t he

p r e c i p i t a t i o n p r o c e s s . I t m a y b e t h a t t h e p r o n e n e s s o f T . c r u z i t o

p r e c i p i t a t e s t r u v i t e i s t r i g g e r e d b y o v e r p r o d u c t i o n o f a m m o n i u m in t he

c u l t u r e m e d i u m a l o n g w i t h h i g h o s m o l a r i t y . T h e e f f e c t o f t h i s i n t h e

m e t a b o l i s m o f T . c r u z i r e m a i n s t o b e s t u d i e d . W e s u g g e s t t h a t f r e e -

l i v i n g p r o t o z o a m a y a l s o c o n t r i b u t e t o d e p o s i t s of s t r u v i t e a nd o t h e r

m i n e r a l s . P a r a s i t i c p r o t o z o a ' s a b i l i t i e s f o r s t r u v i t e p r e c i p i t a t i o n m a y

b e d u e t o c a p a b i l i t i e s m a i n t a i n e d in t he e v o l u t i o n f r o m i t s f r e e - l i v i n g

s t a g e .


6/7

6 1 4

A c k n o w l e d g e m e n t s .

W e t h an k t o D e p a r t a m e n t o d e M i n e r a l o g l a d e A r c i l l a s f r o m E s t a c i 6 n

E x p e r i m e n t a l d el Z a i d f n , C . 8 . I . C . ( G r a n a d a , S p a i n ) , f o r X - r a y

d i f f r a c t i o n m e a s u r e m e n t s a n d D r. F . R e v e l l e s f r o m D e p a r t a m e n t o d e

H i s t o l o g f a , F a c u l t a d d e M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d d e G r a n a d a ( S p a in ) , f o r

t he p r e p a r a t i o n a n d e x a m i n a t i o n o f m a t e r i a l b y e l e c t r o n m i c r o s c o p y . W e

a r e g r a t e f u l t o D r . M . A . R i v a d e n e y r a f o r a c r i t i c a l r e a d i n g o f t h e

m a n u s c r i p t a n d D r. R . B e n l t e z - R o d r l g u e z f o r a d v i c e a n d c o l l a b o r a t i o n .

T h a n k s t o D r . C . A l o n s o a n d D r . D . J a n s s e n f o r r e v i s i n g th e E n g l i s h

v e r s i o n o f t h e m a n u s c r i p t .

T h i s i n v e s t i g a t i o n w a s s u p p o r t e d f r o m a r e s e a r c h g r a n t ( No . 1 0 6 7 /8 2 )

f r o m C o m i s i 6 n A s e s o r a d e I n v e s t i g a c i ~ n C i e n t f f i c a y T ~ c n i c a

( C . A . I . C . Y . T . ) a n d an I N A P E f e l l o w s h i p ( M i n i s t e r i o d e E d u c a c i 6 n y

C i e n c i a , M a d r i d , S p a i n ) t o F . J . A .

REFEREN ES

I. A d r o h e r , F . J . O s u n a , A . 1 9 8 7. S t r u v i t e p r e c i p i t a t i o n b y

T r y p a n o s o m a c r u z i . J . P a r a s i t o l . , in p r e s s .

2 . B e a v o n , J . H e a t l e y , N . G . 1 9 6 2 . T h e o c c u r r e n c e o f s t r u v i t e

( m a g n e s i u m a m m o n i u m p h o s p h a t e h e x a h y d r a t e ) i n m i c r o b i a l c u l t u r e s . J .

G e n . M i c r o b i o l . , 3 1 : 1 6 7 - 1 6 9 .

3 . B e r g m e y e r , H . U . B e r n t , E . 1 9 7 4. D - g l u c o s e : D e t e r m i n a t i o n w i t h

g l u c o s e o x i d a s e a n d p e r o x i d a s e , i n B e r g m e y e r , H . U . , e d . , M e t h o d s o f

E n z y m a t i c A n a l y s i s , V e r l a g C h e m i . e - A c a d e mi c P r e s s , N e w Y o r k , p p . 1 2 0 5 -

1 2 1 5 .

4 . B e r r y , L . G . 1 9 7 4. S e l e c t e d P o w e r D i f f r a c t i o n D a t a f o r M i n e r a l s :

D a t a B o o k. J o i n t C o m m i t t e e o n P o w e r D i f f r a c t i o n S t a n d a r d s , P h i l a d e l p h i a .

5 . B o w m a n , I . B . R . , T o b i e , E . J . V o n B r a n d , T . 1 9 6 3 . C O 2 f i x a t i o n

s t u d i e s w i t h t he c u l t u r e f o r m o f T r y p a n o s o m a c r u z i. C o m p. B i o c h e m .

P h y s i o l . , 9 : 1 0 5 - 1 1 4 .

6 . C a z z u l o , J . J . 19 8 4 . P r o t e i n a n d a m i n o a c i d c a t a b o l i s m in

T r y p a n o s o m a c r u z i . C o m p. B i o c h e m . P h y s i o l . , 7 9 B: 3 0 9 - 32 0 .

7 . C a z z u l o , J . J . , F r a n k e d e C a z z u l o , B . M . , E n g e l , J. C . C a n n a t a ,

J . J . B . 1 9 8 5. E n d p r o d u c t s a n d e n z y m e l e v e l s o f a e r o b i c g l u c o s e

f e r m e n t a t i o n in t r y p a n o s o m a t i d s . M o l . B i o c h e m . P a r a s i t o l . , 1 6: 3 2 9 - 3 4 3 .

8 . C h a n g , S . L . 1 9 4 8. S t u d i e s o n h a e m o f l a g e l l a t e s . I V. O b s e r v a t i o n s

c o n c e r n i n g s o m e b i o c h e m i c a l a c t i v i t i e s i n c u l t u r e , a n d r e s p i r a t i o n o f

t h r e e s p e c i e s o f l e i s h m a n i a s a n d T r y p a n o s o m a c r u z i . J . I n fe c t . D i s . , 8 2:

1 0 9 - 1 1 8 .

9 . E n n e v e r , J . , V o g e l , J. J . 8 t r e c k f u s s , J. L . 1 9 7 4. C a l c i f i c a t i o n

b y E s c h e r i c h i a c o l i . J. B a c t e r i o l . , 1 1 9: 1 0 6 1 - 1 0 6 2 .


7/7

6 1 5

I 0. F e r r 6 n - V i l c h e s , M . C . , R i v a d e n e y r a , M . A . , P ~ r e z - G a r c f a , I.

R a m o s - C o r m e n z a n a , A . 1 9 84 . P r e c i p i t a c i 6 n d e c a l c i t a y e s t r u v i t a p o r

b a c t e r i a s a i s l a d a s d e l a s a g u a s d el p a n t a n o d el C u b i l l a s . A r s P h a r m . ,

2 5 : 3 4 1 - 3 4 8 .

I I. G r e e n f i e l d , L . J . 1 9 6 3. M e t a b o l i s m a n d c o n c e n t r a t i o n o f c a l c i u m a n d

m a g n e s i u m a n d p r e c i p i t a t i o n o f c a l c i u m c a r b o n a t e b y a m a r i n e b a c t e r i u m .

A n n . N . Y . A c a d . S c i . , 1 0 9 : 2 3 - 4 5 .

1 2. L u p i ~ , e z , J . A . , A d r o h e r , F . J . , V a r g a s , A . M . O s u n a , A . 1 9 8 7.

O i f f e r e n t i a l b e h a v i o u r o f g l u c o s e 6 - p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s e in t w o

m o r p h o l o g i c a l f o r m s o f T r y p a n o s o m a c r u z i . Int. J. Biochem. , 1 9 : 1 0 8 5 -

1 0 8 9 .

1 3. M o r i t a , R . Y . 1 9 8 0. C a l c i t e p r e c i p i t a t i o n b y m a r i n e b a c t e r i a .

Beomic rob io l . J . , 2 : 63 -82 .

14. 0suna-Car r i l l o , A . , J im~nez-0 r t f z , A . Lozano-Ha ldona do , J . 1979.

H e d i o s d e c u l t i v o p ar a l a o b t e n c i 6 n d e f o r m a s m e t a c f c l i c a s d e

T r y p a n o s o m a c r u z i . Re v . Ib 6 r . P a r a s i t o l . , 3 9 : 1 2 9 - 1 3 3 .

1 5. P a n , S . C . 1 9 7 8. T r y p a n o s o m a c r u z i : C u l t i v a t i o n in m a c r o ~ o l e c u l e -

f r ee s e m i s y n t h e t i c a n d s y n t h e t i c m e d i a . E x p. P a r a s i t o l . , 4 6: 1 0 8 - 1 1 2 .

1 6. R a m o s - C o r m e n z a n a , A . , P ~ r e z - M i r a n d a , M . C . B o q u e t , E . 1 9 7 5.

M e d i o s d e c u l t i v o s 6 1 i d o s p a r a el e s t u d i o d e l a f o r m a c i 6 n d e c r i s t a l e s

p o r m i c r o o r g a n i s m o s . A r s P h a r m. , I B: 3 3 5 -3 4 3 .

1 7. R i v a d e n e y r a , M . A . , R a m o s - C o r m e n z a n a , A . G a r c l a - C e r v i g O n , A .

1 9 8 3. B a c t e r i a l f o r m a t i o n o f s t r u v i t e . G e o m i c r o b i o l . J . , 3 : 1 5 1 - 1 6 3 .

I B. R o b i n s o n , H . 18 8 9 . O n t h e f o r m a t i o n o f s t r u v i t e b y m i c r o o r g a n i s m s .

P r o c . C a m b . P h i l . S o c . , 6 : 3 6 0 . [ C i t e d b y B e a v o n H e a t l e y ( 2 ) ].

1 9. R y l e y , J . F . 1 9 5 6 . S t u d i e s o n t h e m e t a b o l i s m o f t h e P r o t o z o a . 7 .

C o m p a r a t i v e c a r b o h y d r a t e m e t a b o l i s m o f e l e v e n s p e c i e s o f T r y p a n o s o m e .

B i o c h e m . J . , 6 2 : 2 1 5 - 2 2 2 .

2 0 . S h i n a n o , H . S a k a i , M . 1 9 7 5. E f f e c t o f m a g n e s i u m i on

c o n c e n t r a t i o n o n t he t y p e s o f c r y s t a l s d e p o s i t e d b y m a r i n e b a c t e r i a in

s e a w a t e r . B u l l . J a p . S o c . S c i . F i s h . , 4 1 : 9 1 3 .

2 1 . T o b i e , E . J . , v o n B r a n d , T . M e h l m a n , B . 1 9 5 0 . C u l t u r a l a n d

p h y s io l o g i ca l o b s e r v a t i o n s o n T r y p a n o s o m a r h o d e s i e n s e a n d T r y p a n o s o m a

g a m b i e n s e . J . P a r a s i t o l . , 3 6 : 4 8 - 5 4 .

2 2. V o n B r a n d, T. 1 9 79 . B i o c h e m i s t r y a n d P h y s i o l o g y o f E n d o p a r a s i t e s .

E l s e v i e r / N o r t h - H o l l a n d B i o m e d i c a l P r es s , A m s t e r d a m .

2 3 . V o n B r a n d , T . , T o b i e , E . J . , K i s s l i n g , R . E . A d a m s , G . 1 9 4 9 .

P h y s i o l o g i c a l a n d p a t h o l o g i c a l o b s e r v a t i o n s o n f o u r s t r a i n o f

T r y p a n o s o m a c r u z i . J . I nf e c t . D i s . , 8 5 : 5 - 1 6 .

( R e c e i v e d i n U K 2 8 N o v e m b e r 1 9 8 7)

Documents

Adroher Et Al 1988 Chemosphere