Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Carrera de Química Farmacéutica Biológica Laboratorio de Microbiología II

AISLAMIENTO DE HONGOS DE DIFERENTES FUENTES

Equipo:7

Integrantes: CEDILLO BRAVO JOSE NICOLASFLORES ALVAREZ ALEJANDRA ISELAPEREZ LOPEZ OMAR JONATHANRICARDO GONZALEZ VICTORIA

REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES no son fotosintéticos

Son heterótrofos

Saprofitos: Cuandotoman nutrientes dematerias orgánicasmuertas o endescomposición

Parásitos : Cuando se nutren de materia viva

• Su estructura consta de un complejo llamado talo o micelio,que a su vez esta constituida por múltiples filamentos (hifas)

• No poseen clorofila

• Presentan tanto reproducción sexual como asexual

• Los alimentos se disuelven mediante enzimas que secretanlos hongos; después se absorben a través de la fina pared dela célula ( principalmente de quinina)

• Se distribuyen por difusión simple en el protoplasma.

Temperatura

Condiciones de

crecimiento

teniendo un rango de

temperatura entre 20 y 30°C.

Humedad

acidófilos, siendo su pH

optimo de 5.6

Base Nutriente

carbohidratos, sales de nitrógeno,

proteínas, agua y los iones inorgánicos

básicos.

Actividad de agua

aw =0.80

pH

humedad del 60%

• su fuente primordial es a base de CO2, H2O, sales de nitrógenoy de carbohidratos, sobre todo la glucosa, sacarosa y maltosa.

• Necesitan de iones inorgánicos mas comunes.

• Pueden sintetizar vitaminas, que le son necesarias pero hayespecies que llegan a ser deficientes de estas y las toman delmedio externo, esto se presenta sobre todo con tiamina ybiotina.

Se deben estudiar las características siguientes:

Forma y tamañoColor en la superficie o en el reverso.Difusión del pigmento.Coloración: blanca, rosada, gris ,anaranjada, verde, rojiza, negra.

Textura: yesosa, glabra, terrosa, granulosa, vellosa, cérea, cremosa.Superficie: elevada o plana, levantamiento central.Aspecto: plegado, radiado, cerebriforme, crateriforme.Consistencia: dura, suave, firme, membranosa.Rapidez de crecimiento: por ejemplo las levaduras y los oportunistas crecen en 24 a 48 h, y los dermatófitos en 5 a 10 días.

IDENTIFICACIÓN PRELIMINAR DECULTIVOS DE HONGOS

• Se observa si una colonia de hongos es filamentosa o levaduriforme.

• Observar la consistencia de la superficie de la colonia

• El plegamiento

• La nitidez del borde de las colonias

• Presencia de pigmento en la superficie o el reverso de la colonia o su difusión hacia el medio circundante.

Penicillium sp.

• Presenta micelios de crecimiento rápido

• Aspecto: Aterciopelado o pulvurulento y rugosidades radiales.

• La colonia es inicialmente blanca y vellosa; a medida que se producen esporas pigmentadas, toman matiz verde o verde azulado. A veces se observan variantes amarillas o tostadas. A menudo se forman rugosidades radiales.

• CRECIMIENTO: 22-30º, 7-10 dias

Aspergillus sp

Macroscópicamente crecen entre 3-6 días atemperaturas de 25º y37º, C 7-10 días lascolonias están cubiertascon un micelio aéreoblanco, velloso. A medidaque la colonia madura seobserva una superficiecubierta de esporasnegras. El reverso de lacolonia presenta un colorclaro o verdoso.

A. niger (Agar Czapek) Aspergillus sp. (Agar Micosel)

A. flavus (Agar Czapek)A. terreus (Agar Czapek)

Geotrichum sp.

• Es de rápido crecimiento, presenta una colonia gris o gris amarillenta.

• Producen cadenas de artroconidios hialinos, lisos, de una sola célula, semiglobosos o cilíndricos a partir de hifas no diferenciadas

Curvularia sp

•Micelio aéreo bien desarrollado, denso, algodonoso. Gris-blanco al comienzo se forma pronto marrón oscuro a rojo púrpura. Bordes enteros. El reverso es

rojo púrpura a negro.

Alternaria sp

Macroscopicamentelas colonias tienen unaspectodenso,algodonoso gris-blanco al comienzo,tornandoseposteriormente a colormarrón oscuro.

Fusarium sp

En un principio las coloniasson blancas y cubiertas porun micelio aéreo vellosobien desarrollado. Con lamadurez se formandelicados pigmentoslavanda a rojo púrpura enla superficie de la colonia yen su reverso presentacolor naranja o violeta,difusible al medio.

Macroscópicamentelas colonias son decrecimiento muyrápido, algodonosocolor blancoamarillento, que seconvierte a grisoscuro con eldesarrollo delesporangio.

Mucor sp

Rhizopus ssp

Macroscopicamente lascolonias crecenrapidamente enaproximadamente 4días a 37º C, cubriendola superficie del agarcon un crecimientodenso con aparienciaalgodonosa queprimero luce blanca,posteriormentegrisacea, de amarillentaa café y el reverso se vede color blanco.

•Aspecto inconfundible: vellosas,algodonosas, pulverulentas.•De vistosos y variados colores•Crecen radialmente de modoprogresivo•Colonias de mayor tamaño

Microsporum fulvum

Sacharomyces cerevisiae(Levaduras)

Características macroscópicasAnverso:Forma colonias blancas cremosas, lisas.Reverso:-Pigmento: Blancas cremosas, que no difunden almedio.

Trichosporon sp.

Macroscopicamente las colonias crecen rapidamente en aproximadamente 8 días a 37º C , cubriendo la superficie del agar con apariencia cremosa blanca,

posteriormente amarillenta

(Hongos levaduriformes)

MEDIOS DE CULTIVO

Medios de cultivo para aislamiento

Nutrientes básicos en medio de cultivo

• Materias nitrogenadas como peptona.

• Azucares como glucosa o maltosa.

• Un soporte solido como la gelosa.

• pH ácido (5 a 6).

• Vitaminas (impurezas de la peptona)

AGAR SABOURAUDComposición:*Peptona 10g*Glucosa 20g*Agar-Agar 20g*Agua destilada 1000ml pH 5.6 ± 0.2

AGAR PAPA DEXTROSA (PDA)Composición:*Pulpa de papa 250g*Glucosa 20g*Agar 20g*Agua destilada 1000ml pH final 5.6 +- 0.2.

USO:Para cultivo, aislamiento y determinación del numero de hongos y levaduras.

USO:Para cultivo de hongos patógenos y no patógenos, particularmentedermatofitos, levaduras y m.o. acidúricos.

AGAR LITTMANComposición:*Peptona, 10.0g*Estreptomicina 15.0g *Dextrosa, 10.0g *Cristal Violeta 0.01g*Agar 20.0g

AGAR BIGGY

*Sulfito de bismuto 8,0g*Dextrosa 10,0g*Extracto de levadura 1,0g*Glicina 10,0g*Agar 16,0g*Citrato de Amonio y Bismuto 5,0g

pH 6.8 ± 0.2

USO:Medio selectivo, que suplementado con estreptomicina, se emplea para el aislamiento primario y cultivo de hongos, especialmente dermatofitos.

USO:El Agar Biggy (por sus siglas en inglés Bismuth-Glucose-Glycine-Yeast) es utilizado para el aislamiento ydiferenciación de especies de Candida. También es conocido como Agar de Nickerson.

HONGOS EN SUELO

• Fusarium solani

• Fusarium oxysporum

• Penicillium spp

• Aspergillus flavus

• Aspergillus fumigatus

• Rhizopus spp

• Rhizoctonia solani

• Macrophomina phaseolina

• Curvularia sp

HONGOS DEL AIRE

El aire no es un medio en el que pueden desarrollarselos microorganismos pero es el portador de aerosolesbiológicos como polvo, gotitas de agua y otros, quepueden estar cargados de los diversos grupos demicroorganismos .

De las capas de aire se han encontrado esporas dehongos que proceden principalmente del suelo, de lavegetación y del mar.

El aire es también el medio de diseminación de hongos

saprófitos

• Rhizopus sp.

• Gloeosporium sp

• Sclerotinia sp.

• Fusarium sp.

• Botrytis sp.

• Alternaria sp.

• Penicillium sp.

• Trichotechium sp.

• Cladosporium sp.

• Venturia sp.

• Fusicladium sp.

• Mucor sp.

• Phytotphora sp.

HONGOS EN FRUTAS YVERDURAS

Ejemplos de hongos que se encuentran en el medio ambiente.

Aire Suelo Plantas

Penicillium × ×Cladosporium × ×Trichoderma × × ×Fusarium solani ×

Fusarium ×Aspergillus ×

Fenómenos fúngicos

• DIMORFISMO

Fenómeno en el cual un hongo muestra en su ciclo biológico tanto un micelio filamentoso como un aspecto levaduriforme. algunos hongos principalmente las especies patógenas presentan dimorfismo

Temperatura y nutrición dependientes

Nutrición dependientes

•forma filamentosa a 25 °C y 20°C• forma de levadura a 37°C.

temperatura de 37 °C necesita la presencia de una atmósfera de CO2

de 15 a 20% para crecer en forma levaduriforme

obedece a una variedad de factores ambientales, como oxigeno, CO2, hexosas (azucares), metales pesados

Temperatura dependiente

hongos dimorficos

Temperatura dependiente

Blastomices dermatitides

Temperatura dependiente

Candida albicas.

Diferentes formas de Candida albicans

Temperatura y nutrición dependientes

Histoplasma capsulatum

Nutrición dependientes Mucor racemosus

(esporangios)

Polimorfismo

• Fenómeno que se da cuando un mismo hongo a diferentes

condiciones de desarrollo presenta diferente color.

Pleomorfismo

• Es un fenómeno fúngico que se presenta en los medios de cultivo , consiste en la transformación irreversible de una cepa por un exceso de carbohidratos, esta tiende a cambiar dando un micelio blanco, estéril y algodonoso.

Pleomorfismo

Se debe a aberraciones y mutaciones cromosomicases propio de los dermatofitos.En el caso de los dermatofitos, el pleomorfismo estárelacionado con la pérdida de su capacidad deesporulación. Al final acaba formándose un micelio carentede conidios o con muy pocas estructuras de reproducción.

Epidermophyton floccosum

Colonia, Pleomorfismo.

Metodo de aislamiento

Aislamiento de Hongos del aire

Aislamiento de

hongos del aire

En una caja

petri con agar

Saboraud y otra

con agar Litman

Exponerlas

abiertas a la

corriente de aire

por 15 min.

Incubar a

temperatura

ambiente

Realizar lectura,

reportar

características

macroscópicas

Aislamiento de

hongos en suelo

*Diluciones

hasta alcanzar

10 6

Fundir Saboraud y

Littman

Pesar 0.5 g de

tierra y agregar

a un tubo 4.5mL

de la solución

salina estéril

Dil 1:10

Añadir el

contenido

25º -30º se añaden 2

gts de la mezcla de

antibióticos.

Penicilina-

Streptomicina 1:1

De las

diluciones del

paso ( * )

colocar 1 mL de

las diluciones

en dos cajas

con agar

Saboraud y dos

con Littman

Incubar a

temperatura

ambiente

Realizar lectura,

reportar

características

macroscópicas

Aislamiento de Hongos del suelo

Diluciones realizadas para el aislamiento micologico del suelo

Aislamiento de hongos de verduras y frutos

Aislamiento de

Hongo de

verduras y

frutas

Colocar un

poco de tejido

de la verdura o

fruta que

contenga el

hongo

Pasarlos unos

minutos por

hipoclorito

Incubar a

temperatura

ambiente

Sembrar en

agar Saboraud

y Littman

No realizar si el

hongo es de

aspecto

polvoso Realizar lectura, reportar

características

macroscópicas

En el centro de

la caja y

fojandolo

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Mexico, 19912. Arenas R. micologia medica. Editorial Mc Graw-Hill. México, 1993

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