AKTIVITAS (Tenore) Steen) - repository.ump.ac.idrepository.ump.ac.id/552/1/COVER_QORI WAHYUNINGSIH... · SKRIPSI . Untuk memenuhi ... Sediaan kosmetik pemutih . mengharapkan efek

1

AKTIVITAS PENGHAMBATAN TIROSINASE DARI

EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN BINAHONG

(Anredera cordifolia (Tenore) Steen)

SKRIPSI

Untuk memenuhi sebagai persyaratan

Mencapai Derajat Sarjana S-1

QORI WAHYUNINGSIH

0908010017

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

2013

2

AKTIVITAS PENGHAMBATAN TIROSINASE DARI

EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN BINAHONG

(Anredera cordifolia (Tenore) Steen)

SKRIPSI

Untuk memenuhi sebagai persyaratan

Mencapai Derajat Sarjana S-1

QORI WAHYUNINGSIH

0908010017

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

2013

i

Aktivitas Penghambatan Tirosin..., Qori Wahyuningsih, Farmasi UMP, 2013

3

ii


4

iii


5

PERNYATAAN

Yang bertanda tangan dibawah ini, saya:

Nama : Qori Wahyuningsih

Nim : 0908010017

Program studi : Farmasi

Fakultas/Universitas : Farmasi / Universitas Muhammadiyah Purwokerto

Menyatakan dengan sebenar- benarnya bahwa skripsi ini adalah hasil dari

proses penelitian saya yang telah dilakukan sesuai dengan prosedur penelitian

yang benar dengan arahan dari dosen pembimbing dan bukan hasil penjiplakan

dari hasil karya orang lain atau terdapat karya yang pernah diajukan untuk

memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, dan sepanjang

pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis

atau diterbitkan orang lain kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan

disebutkan dalam daftar pustaka.

Demikian pernyataan ini, dan apabila kelak dikemudian hari terbukti ada

unsur penjiplakan, maka saya bersedia mempertanggung jawabkan sesuai dengan

ketentuan yang berlaku.

Purwokerto, Agustus 2013

Yang menyatakan,

Qori Wahyuningsih

iv


6

MOTTO

Kegagalan hanya terjadi bila kita menyerah

dan

Jadikanlah kekecewaan masa lalu menjadi

senjata sukses di masa depan

v


7

PERSEMBAHAN

Ucapan terima kasih dan sujud syukur atas kehadirat Allah SWT, atas

segala rahmat, nikmat dan karunia dan hidayahnya dengan kerendahan hati dan

ketulusan hati, saya persembahkan karya ini kepada:

Abah dan Umi

H. Irsyad Asro (Alm) dan Hj. Nurhidayah yang selalu mendoakanku, terima

kasih atas dukungan, bekal dan kasih sayang yang tulus dan selalu

memberiku semangat baik moral, spiritual dan materi. Serta untaian doa yang

tidak pernah akan putus.

Kakak- kakakku

Terima kasih atas dukungan motivasi dan perhatiannya selama ini, semoga

selanjutnya saya bisa menjadi adik yang lebih baik dan berguna bagi

keluarga.

Calon Pendamping Hidup

Yang tercinta Riski Mukjizatulloh, S.H yang telah mengisi hidupku,

memberiku perhatian, semangat dan materi serta setia menemaniku dalam

suka maupun duka.

Pembimbing

Bu Binar Asrining Dhiani, M.Sc.,Apt dan Ibu Indri Hapsari, M.Si.,Apt selaku

pembimbing saya selama proses skripsi ini. Terimakasih atas segala hal yang

telah diberikan kepada saya.

Teman Seperjuangan

Terima kasih selalu menemani saya, teruntuk Siti Nuryanti (Bunda),

terimakasih atas semangat dan perhatiannya.Terimakasih buat kesabarannya

membantu dalam menyelesaikan skripsi saya.Dan terimakasih juga buat

Amalia buat kerjasamanya dan doanya selama penelitian skripsi ini.

Teman- Teman Farmasi Angkatan 2009 dan Assasains

Terimakasih atas kebersamaannya, buat teman- teman sepertimas aan, unul,

ana, erma, elent, agil, sandra, lita, wina, sukhaebah dan lusi mbot. Dan tidak

lupa juga terimakasih buat Damar kartika ratri yang telah senantiasa

mendengarkan keluh kesah saya selama 4 tahun ini.

vi


8

Mantan Penghuni Kost

Terimakasih buat mba pipin, lisna dan semua anak fiumy kost, serta

terimakasih juga buat komplotan anak kos „Nyeplik‟ sepertiIqlimasahara,

Yuli, Wulan, Wiwi, Titi dan semua teman kost yang tidak bisa saya sebutin

satu persatu, terimakasih atas do‟anya selama ini.

vii


9

INTISARI

QORI WAHYUNINGSIH. Aktivitas Penghambatan Tirosinase Dari Ekstrak Etil

Asetet Daun Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steen).

Dibawah bimbingan BINAR ASRINING DHIANI dan INDRI HAPSARI.

Latar Belakang: Paparan sinar matahari (UV) dan paparan radikal bebas dapat

menyebabkan kulit menjadi kering dan rusak, sehingga proses penuaan dini dapat

berlangsung cepat. Sinar UV sangat berperan penting dalam pembentukan pigmen

melanin dalam tubuh (Winarsih, 2007). Binahong (Anredera cordifolia) termasuk

dalam famili Basellaceae merupakan tanaman yang dikenal mempunyai aktivitas

antioksidan yang baik. Sediaan kosmetik pemutih mengharapkan efek antioksidan

dan penghambatan melanin. Ekstrak etanol daun binahong tidak memberikan efek

sebagai inhibitor tirosinase (Rahayu,2012). Tetapi belum ada laporan ilmiah

mengenai aktivitas penghambatan tirosinase ekstrak etil asetat daun binahong.

Tujuan Penelitian: Menentukan apakah ekstrak etil asetat daun binahong

mempunyai aktivitas penghambatan tirosinase dan seberapa besar aktivitas

penghambatan terhadap tirosinase.

Metode Penelitian: Jenis penelitian ini adalah jenis penelitian eksperimental

dengan rancangan randomized block design dengan menguji beberapa seri

konsentrasi ekstrak etil asetat daun binahong(50, 100, 200, 400 dan 800 µg/ml).

Variasi seri konsentrasi tersebut diuji aktivitas penghambatan tirosinase dengan

kontrol positif hidroquinon. Aktivitas penghambatan tirosinase diukur dengan

mengamati perubahan atau pembentukan dopakrom pada panjang gelombang 490

nm menggunakan microplate reader 96 sumuran.

Hasil: Nilai IC50 ekstrak etil asetat daun binahong sebesar 299,1 µg/ml sedangkan

nilai IC50 dari kontrol positif (hidrokuinon) yaitu 16,34 µg/ml.

Kesimpulan: Ekstrak etil asetat daun binahong mempunyai aktivitas terhadap

penghambatan tirosinase rendah daripada hidrokuinon.

Kata Kunci: Daun binahong, Aktivitas penghambatan tirosinase.

viii


10

ABSTRACT

QORI WAHYUNINGSIH.Tyrosinase Inhibition Activity of Ethyl Acetate

Extract from Binahong Leaves (Anredera cordifolia (Tenor) Steen).

Under Supervision of BINAR ASRINING DHIANI and INDRI HAPSARI.

Backgroun: The exposure of sun ray (UV) and free radicals can cause skin

damage and dried skin, therefore the aging process is occured. UV rays take a role

on melanine pigment production (Winarsih, 2007). Binahong (Anredera

cordifolia) which belongs to Basellaceae family is one of plants which has

antioxidant activity. Whitening product expect dual effect the antioxidant effect

and inhibition of melanin production. Ethanol extract of binahong leaves was not

exhibitedtyrosinase inhibition (Rahayu, 2012). There is no scientific reports of

tyrosinase inhibition activity of ethyl acetate extract of binahong leaves.

Research Objectives:To determine tyrosinase inhibition activity of ethyl acetate

extract of binahong leaves and determine level of inhibition activity of tyrosinase.

Research method: The type of this research was an experimental research with

randomized block design by testing a serial concentration of ethyl acetate extract

of binahong (50, 100, 200, 400 and 800 µg/ml). This variation of concentration

series was assayed its inhibition activity of tyrosinase with hydroquinone as the

positive control. Inhibition activity of tyrosinase was measured by observing the

change color caused by the formation of dopachrome at wavelength 490 nm using

96 wells microplate reader.

Result: IC50 value of ethyl acetate extract of binahong leaves was 299,1 µg/ml

whereas IC50 value of positive control (hydroquinone) was 16,34 µg/ml.

Conclusion:Ethyl acetate extract of binahong leaves possessed tyrosinase

inhibition activity although lower than hydroquinone.

Keywords: Binahong leaves, tyrosinase inhibition activity.

ix


11

KATA PENGANTAR

Segala Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, atas nikmat,

hidayah, karunia, dan segala petunjuknya, sehingga penulis dapat menyelesaikan

skripsi yang berjudul “AKTIVITAS PENGHAMBATAN TIROSINASE DARI

EKSTRAK ETIL ASETAT DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia

(Tenore) Steen)”.Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk mencapai

gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah

Purwokerto.

Penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar- besarnya kepada Ibu

Binar Asrining Dhiani, M.Sc.,Apt selaku pembimbing I dan Ibu Indri Hapsari,

M.Si.,Apt selaku pembimbing II yang telah berkenan memberikan saran, nasehat,

dan koreksinya sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas skripsi ini.

Penyelesaian penulisan skripsi ini tidak lepas dari bantuan, bimbingan dan

dukungan semua pihak, untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada:

1. Dr. Nunuk Aries Nurulita. M.Si.,Apt, selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

2. Retno Wahyuningrum, M.Si., Apt dan Wiranti Sri Rahayu, M.Si.,Apt selaku

penguji yang telah memberikan koreksi terhadap skripsi ini.

3. Abah, Umi dan Kakak- kakakku tercinta yang telah memberikan doa dan

semangat serta dorongan baik spiritual maupun materiil.

4. Seluruh dosen dan staf karyawan Fakultas Farmasi Universitas

Muhammadiyah Purwokerto.

5. Semua teman- teman Farmasi Angkatan 2009 terutama anak- anak Assasains

terima kasih atas dukungan dan kerjasamanya selama penyusunan skripsi ini.

6. Semua pihak yang telah membantu selama penulis melaksanakan penelitian

dan penulisan skripsi ini hingga selesai yang tidak dapat disebutkan satu

persatu.

x


12

Akhir kata penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini masih

jauh dari sempurna, yang disebabkan oleh keterbatasan penulis.Semoga skripsi ini

bermanfaat bagi pembaca dan penulis pada khususnya.

Purwokerto, 28 Agustus 2013

Qori Wahyuningsih

xi


13

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN ............................................................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................. iii

PERNYATAAN .................................................................................................. iv

MOTTO .............................................................................................................. v

PERSEMBAHAN ............................................................................................... vi

INTISARI ............................................................................................................ viii

ABSTRACT .......................................................................................................... ix

KATA PENGANTAR ........................................................................................ x

DAFTAR ISI ....................................................................................................... xii

DAFTAR TABEL ............................................................................................... xv

DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xvi

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xvii

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................ 1

A. Latar Belakang ............................................................................ 1

B. Perumusan Masalah ................................................................... 2

C. Tujuan Penelitian ....................................................................... 2

D. Manfaat Penelitian ..................................................................... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................................... 4

A. Binahong .................................................................................... 4

1. Sistematika Tanaman ........................................................... 4

2. Nama Daerah ........................................................................ 4

3. Morfologi ............................................................................. 4

3.1 Daun............................................................................... 4

3.2 Rhizoma ......................................................................... 5

3.3 Bunga ............................................................................. 5

3.4 Akar. .............................................................................. 5

4. Khasiat................................................................................... 5

xii


14

5. Kandungan Kimia ................................................................. 6

5.1 Flavonoid ........................................................................ 6

5.2 Polifenol .......................................................................... 6

5.3 Saponin ............................................................................ 7

5.4 Alkaloid ........................................................................... 7

B. Melanin dan Enzim Tirosinase.................................................... 7

C. Hydroquinon ............................................................................... 9

BAB III METODE PENELITIAN .................................................................. 11

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................ 11

B. Variabel Penelitian ...................................................................... 11

C. Definisi Variabel Operasional ..................................................... 11

D. Waktu dan Tempat Penelitian ..................................................... 12

E. Bahan dan Alat ........................................................................... 12

F. Cara Penelitian ........................................................................... 13

1. Pengumpulan bahan .............................................................. 13

2. Determinasi bahan ................................................................. 13

3. Pengeringan bahan ................................................................ 13

4. Pembuatan ekstrak daun binahong ........................................ 13

5. Identifikasi kandungan senyawa .......................................... 14

G. Uji Penghambatan Tirosinase .................................................... 15

1. Pembuatan buffer fosfat ........................................................ 15

2. Pembuatan larutan sampel..................................................... 15

a. Pembuatan larutan stok sampel ....................................... 15

b. Pembuatan seri konsentrasi sampel ................................. 16

3. Pembuatan larutan kontrol positif hidroquinon..................... 16

a. Pembuatan larutan stok Hidroquinon .............................. 16

b. Pembuatan seri konsentrasi hidroquinon ........................ 16

4. Pembuatan larutan tirosinase ................................................ 16

5. Pembuatan larutan L-DOPA ................................................. 16

6. Pengujian aktivitas inhibisi tirosinase dan penentuan IC50 ... 16

H. Analisis Data ............................................................................... 17

xiii


15

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................... 18

A. Determinasi tanaman .................................................................. 18

B. Penyiapan simplisia ..................................................................... 18

C. Pembuatan ekstrak etil asetat daun Binahong ............................. 19

D. Uji Aktivitas Inhibisi Tirosinase dan Penentuan IC50 ................ 20

E. Identifikasi Kandungan Senyawa ................................................ 23

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 26

5.1. Kesimpulan ............................................................................... 26

5.2. Saran .......................................................................................... 26

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 27

LAMPIRAN ........................................................................................................ 31

xiv


16

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Persentase inhibisi aktivitas penghambatan tirosinase

ekstrak etil asetat daun binahong .................................................................... 21

Tabel 2. Identifikasi kandungan senyawa ekstrak etil asetat

daun binahong ................................................................................................. 23

Tabel 3. Absorbansi Hidroquinon(kontrol positif) ......................................... 40

Tabel 4. Absorbansi kontrol negatif ............................................................... 40

Tabel 5. Absorbansi ekstrak etil asetat daun binahong .................................. 40

xv


17

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Daun Binahong (Anredera cordifolia) ............................................ 5

Gambar 2. Skema reaksi terbentuknya melanin ............................................... 9

Gambar 3. Kurva hubungan non linier dari log konsentrasi ekstrak

etil asetat daun binahong terhadap persen inhibisi ....................... 22

Gambar 4.Kurva hubungan non linier dari log konsentrasi

kontrol positif (hidroquinon) terhadap persen inhibisi ................. 22

xvi


18

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1.Surat keterangan determinasi daun binahong

(Anredera cordifolia (Tenore) Steen) ......................................... 32

Lampiran 2. Hasil persentase inhibisi ekstrak etil asetat daun binahong ....... 34

Lampiran 3. Hasil persentase inhibisi hidroquinon ........................................ 35

Lampiran 4.Hasil aktivitas penghambatan tirosinase ..................................... 36

Lampiran 5.Perhitungan pembuatan buffer fosfat pH 6,8............................... 37

Lampiran 6. Perhitungan pembuatan larutan L-DOPA .................................. 38

Lampiran 7. Perhitungan persentase inhibisi ................................................ 41

Lampiran 8. Gambar pelaksanaan penelitian ................................................ 47

Lampiran 9. Gambar uji aktivitas penghambatan tirosinase ......................... 48

Lampiran 10.Gambar identifikasi kandungan senyawa ................................ 49

Lampiran 11.Gambar hasil pengamatan kromatografi lapis tipis

ekstrak etilasetat daun binahong ............................................... 50

Lampiran 12. Gambar alat dan bahan .......................................................... 51

xvii


1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Permasalahan

Paparan sinar matahari (UV) dan paparan radikal bebas dapat

menimbulkan kulit menjadi kering dan rusak, sehingga proses penuaan dini

dapat berlangsung cepat.Sinar UV sangat berperan penting dalam

pembentukan pigmen melanin dalam tubuh (Winarsi, 2007).

Pigmen melanin merupakan suatu pigmen yang dapat melindungi kulit

dari paparan sinar matahari.Proses pembentukan melanin ini terjadi dengan

bantuan enzim dan sinar UV yang terdapat dalam sinar matahari. Dengan

bantuan enzim tirosinase produksi melanin menjadi berlebih dan

mengakibatkan hiperpigmentasi kulit.Hiperpigmentasi menyebabkan bercak

warna coklat pada kulit.Untuk mencegah produksi melanin yang berlebih

dapat digunakan inhibitor tirosinase.

Inhibitor tirosinase pada saat ini banyak digunakan dalam produk

kosmetik dan farmasi sebagai penghambat produksi melanin menjadi berlebih

pada lapisan epidermis dan membuat kulit tampak lebih putih (Arung et al,

2006).Mekanisme kerja enzim tirosinase dengan menghambat aktivitas enzim

yaitu dengan mereduksi bahan yang dapat menyebabkan oksidasi dopakuinon.

Kombinasi antioksidan dan inhibitor tirosinase dapat ditemukan dari bahan

alam ataupun senyawa sintetik.Penemuan dari suatu senyawa antioksidan dan

inhibitor tirosinase telah ditemukan pada bahan kosmetik untuk mencegah

terbentuknya melanin yaitu hidroquinon, merkuri, asam kojat, arbutin, dan

asam askorbat (Kim et al, 2005).

Hidroquinon digunakan dalam tambahan bahan kosmetik untuk

memperoleh efek pemutih dengan menghilangkan flek gelap pada kulit.Akan

tetapi, penggunaan dalam jangka waktu panjang dapat menyebabkan kelainan

pada ginjal (nephropathy) profirasi sel, dan bersifat karsinogenik dan

teratogenik (Wester et al., 1999).


2

Untuk mencegah penuaan dini tubuh kita perlu adanya antioksidan.Salah

satu sumber tanaman obat yang memiliki potensi sebagai antioksidan adalah

tanaman binahong (Anredera cordifolia).Binahong (Anredera cordifolia)

termasuk dalam famili Basellaceae merupakan tanaman yang dikenal

mempunyai aktivitas antioksidan yang baik.Daun binahong diduga

mengandung asam oleanolat (Hammond et al., 2006).Asam oleanolat

merupakan golongan triterpenoid yang memiliki antioksidan yang terdapat

pada tanaman (Liu, 1995).

Penelitian lebih lanjut tentang tanaman obat binahong pernah dilakukan

oleh Rahayu (2012) bahwa ekstrak dari etanol daun binahong tidak

memberikan efek sebagai inhibitor tirosinase.Maka dari itu peneliti tertarik

untuk menguji aktivitas penghambatan tirosinase dari ekstrak etil asetat daun

binahong (Anredera cordifolia).

B. Perumusan masalah

1. Apakah ekstrak etil asetat daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.)

Steen) mempunyai aktivitas penghambatan terhadap tirosinase?

2. Berapa besar aktivitas penghambatan terhadap tirosinasedari ekstrak etil

asetat daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steen)?

C. Tujuan Penelitian

Penelitian ini dilakukan dengan tujuan:

1. Untuk menentukan apakah ekstrak etil asetat daun binahong mempunyai

aktivitas terhadap tirosinase.

2. Untuk menentukanIC50 aktivitas penghambatan tirosinase dari ekstrak etil

asetat daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steen).


3

D. Manfaat Penelitian

Dari penelitian ini akan diperoleh bahan pemutih alami yang dapat

mencegah hiperpigmentasi dari bahan alam yang mempunyai aktivitas

terhadap penghambatan tirosinase yang relatif lebih aman digunakan oleh

masyarakat.


4

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steen)

Menurut Depkes (2006), klasifikasi tumbuhan Binahong adalah sebagai

berikut:

1. Sistematika Tanaman :

Divisio : Spermatophyta

Sub Divisio : Angiospermae

Kelas : Dicotyledoneae

Bangsa : Caryophyllales

Suku : Basellaceae

Marga : Anredera

Jenis : Anredera cordifolia (Tenore) Steen.

Sinonim : Boussingaultia baselloides Auct. Non H.B.K,

Boussingaultia gracillis Miers, Boussingaultia

Cordifolia Ten.

2. Nama daerah

Indonesia : Binahong

Cina : Teng san chi

Inggris : Heartleaf Madeira vine, Madeira vine (Mus,2008).

3. Morfologi

a. Daun

Tanaman binahong berdaun tunggal, sangat pendek tangkainya

(subsessile), pertulangan menyirip, tersusun berseling, daun berwarna

hijau muda, berbentuk seperti jantung (cordata), memiliki panjang

sekitar 5-10 cm dan lebar sekitar 3-7 cm, helaian daun tipis lemas,

ujung runcing, pangkal berlekuk (emerginatus), tepi rata atau

bergelombang, dan permukaan halus, licin, dan bisa dimakan (Susetya,

2011).


5

b. Rhizoma

Tanaman binahong memiliki rhizoma. Rhizoma adalah umbi yang

terdapat di dalam tanah, bercabang dan tumbuh menjalar, dari

ujungnya dapat tumbuh tunas yang muncul di permukaan tanah dan

dapat merupakan suatu tumbuhan baru. Biasanya rhizoma merupakan

tempat penyimpanan cadangan makanan (Setiaji, 2009).

c. Bunga

Tanaman binahong memiliki bunga majemuk berbentuk majemuk

rimpang, bertangkai panjang, muncul di ketiak daun, mahkota

berwarna putih sampai krem berjumlah lima helai tidak berlekatan,

panjang helai mahkota sekitar 0,5 - 1 cm dan memiliki bau yang harum

(Susetya, 2012).

d. Akar

Tanaman binahong mempunyai akar tunggang yang berdaging

lunak dan berwarna coklat kotor (Susetya, 2012).

Gambar1. Daun Binahong (Anredera cordifolia)

4. Khasiat

Daun Anredera cordifolia (Tenore) Steen yang dikenal dengan sebutan

binahong ini berkhasiat sebagai obat diabetes dan sebagai analgesik

(mengurangi rasa nyeri), serta bisa untuk penghalus kulit. Untuk

mengobati diabetes yaitu sebanyak ± 50 gram daun binahong direbus


6

dengan 2 gelas air sampai mendidih, lalu setelah mendidih kemudian

didinginkan terlebih dahulu dan selanjutnya disaring. Hasil saringan

tersebut setelah dingin diminum sekaligus.Untuk penghalus

kulit,menggunakan daun binahong yang dicuci bersih lalu ditumbuk

sampai lumat tidak berbentuk.Hasil tersebut dalam pemakain 2x dalam

satu minggu yang digunakan sebagai masker penghalus kulit (Depkes,

2006).

5. Kandungan Kimia

Dari hasil penelitian pendahuluan Universitas Gadjah Mada,

dinyatakan bahwa pada kulturin vitro daun binahong mengandung

flavonoid, saponin, alkaloid, dan terpenoid (Manoi,2009).

a. Flavonoid

Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai campuran jarang

sekali digunakan hanya flavonoid dalam jaringan tumbuhan.Dalam

tumbuhan,aglikon flavonoid (yaitu flavonoid tanpa gula terikat)

terdapat dalam berbagai struktur.Aglikon flavonoid adalah polifenol

yang mempunyai sifat kimia seperti senyawa fenol yaitu bersifat agak

asam sehingga dapat larut dalam basa.

Flavonoid merupakan senyawa yang larut dalam air, sebagian

dapat diekstraksi dengan etanol 70% dan tetap ada dalam lapisan air

setelah lapisan ekstrak ini dikocok dengan eter minyak bumi.

Flavonoid berupa senyawa fenol, sehingga warna berubah apabila

ditambah basa atau ammonia (Harborne,1987).

b. Polifenol

Kelarutan polifenol mudah larut dalam air karena bersifat polar dan

umumnya berikatan dengan gula sebagai glikosida dan biasanya

terdapat dalam vakuola sel. Untuk mendeteksi senyawa fenol

sederhana ialah dengan menambahkan larutan besi (III) klorida dan

uji daya reduksi dalam air atau etanol dengan penambahan pereaksi

Fehling A dan Fehling B pada ekstrak sehingga menimbulkan warna

merah bata atau merah yang kuat. Ekstraksi senyawa fenol dengan


7

etanol mendidih biasanya mencegah terjadinya oksidasi enzim

(Harborne,1987).

c. Saponin

Saponin tidak dapat larut dalam pelarut non polar, paling cocok

diekstraksi dengan etanol atau methanol panas 70-96% dan kemudian

lipid dan pigmen disingkirkan dari ekstrak dengan memakai benzene.

Untuk mengetahui adanya saponin dapat dilakukan uji sederhana

yaitu dengan mengocok ekstrak dari tumbuhan dalam tabung reaksi

dengan air panas selama 30 menit, apabila terbentuk busa yang tahan

lama pada permukaan cairan paling tidak tetap stabil selama 30 menit,

maka adanya saponin dapat dipastikan ada (Harborne,1987).

d. Alkaloid

Alkaloid mencakup senyawa bersifat basa yang mengandung satu

atau lebih atom N, biasanya dalam gabungan sebagai bagian dari

sistem siklik. Alkaloid biasanya tanpa warna, kebanyakan berbentuk

kristal, hanya sedikit yang berupa cairan. Senyawa alkaloid dapat

dideteksi dengan pereaksi Dragendorf (Harborne,1987).

B. Melanin dan Enzim tirosinase

Melanin yang disebut dengan melanosom merupakan pigmen atau zat

warna alami pada organel khusus termasuk makhluk hidup.Melanin

mempunyai dua bentuk yaitu

1. Eumelanin memiliki sifat tidak larut dalam air dan berwarna cokelat gelap-

hitam di dalam retina mata.

2. Feomelanin memiliki sifat larut dalam basa dan memberikan warna

kuning-merah pada rambut.

Kedua bentuk tersebut disintesis dari oksidasi tirosin oleh enzim

tirosinase.Enzim tirosinase yang dikenal dengan polifenol oksidase merupakan

enzim kunci yang mempunyai peran dalam biosintesis melanin di dalam sel

tumbuhan, mikroorganisme dan juga mamalia. Biosintesis melanin oleh enzim

tirosinase dilakukan dengan mengatalisis orto-hidroksilasi tirosin menjadi 3,4-


8

dihidroksilfenilalanin atau DOPA (monofenolase) dan oksidasi DOPA

menjadi dopakuinon (difenolase). o-Kuinon yang dihasilkan ini dapat

bertransformasi menjadi pigmen, baik dengan reaksi enzimatis maupun reaksi

non-enzimatis (Likhitwitayawuid, 2008).

Enzim tirosinase pada mamalia berperan dalam reaksi pigmentasi kulit

atau perubahan warna kulit menjadi coklat, mata, dan rambut.Enzim tirosinase

ini juga dapat menyebabkan reaksi pencoklatan pada produk pangan seperti

pada buah-buahan dan sayuran yang mengakibatkan menurunnya harga jual

dan nutrisi yang terkandung dalam bahan pangan tersebut (Likhititwiyawuid,

2008).Reaksi pencoklatan pada produk pangan dipengaruhi oleh konsentrasi

enzim tirosinase dan substrat, ketersediaan oksigen, pH dan suhu (Chang et al.

2007).

Senyawa yang dapat menghambat proses pembentukan melanin disebut

inhibitor tirosinase. Inhibitor tirosinase juga dapat membantu proses

penyembuhan penyakit hiperpigmentasi dan melanogenesis pada kulit

(Batubara et al. 2010). Inhibitor tirosinase pada saat ini banyak digunakan

dalam produk kosmetik dan farmasi sebagai penghambat produksi melanin

berlebih pada lapisan epidermis dan membuat kulit tampak lebih putih (Arung

et al. 2006).

Mekanisme kerja enzim tirosinase untuk menghambat aktivitas enzim

tirosinase adalah mereduksi bahan yang dapat menyebabkan oksidasi

dopakuinon.Inhibitor tirosinase dapat bekerja secara kompetitif dan non-

kompetitif dengan substrat tirosinase yaitu L-tirosin dan L-DOPA. Inhibitor

tirosinase yang spesifik akan berikatan kovalen dengan enzim tirosinase

sehingga enzim menjadi tidak aktif selama reaksi katalitik berlangsung

(Chang, 2009).


9

Gambar 2.Skema reaksi terbentuknya melanin(Balsam dan Sagarin, 1972).

C. Hydroquinon

C6H6O2BM= 110,11

1,4- Benzenediol: p-Dihydroxybenzene: Hydroquinol: Quinol:

Eldoquin and Eldopaque (Elder) (Seymour, 1975)

Hidrokuinon merupakan zat aktif bahan kimia yang biasanya digunakan

sebagai tambahan bahan kosmetik sebagai pemutih karena mampu secara

efektif menghilangkan flek gelap pada kulit (Ningsih, 2009).

Mengandung tidak kurang dari 99,0% dan tidak lebih dari 100,5%

C6H6O2, dihitung terhadap zat anhidrat.Pemeriannya berupa berbentuk jarum

halus, putih dan mudah menjadi gelap apabila terkena cahaya dan

udara.Kelarutannya mudah larut dalam air, dalam etanol dan dalam eter

(Depkes RI, 1995).


10

Hidroquinon merupakan golongan zat obat keras yang hanya dapat

digunakan berdasarkan dari resep dokter (Badan Pengawas Obat dan

Makanan).Kegunaan hidroquinon sebagai agen pencerah kulitdigunakan untuk

mengurangi hiperpigmentasi kulit seperti noda, melasma, chloasma, bintik-

bintik dan lentigo (Seymour, 1975).

Hidroquinon bekerja dengan mempengaruhi enzim tirosinase sehingga

dapat menghambat oksidasi enzimatik tirosin menjadi DOPA, serta oksidasi

DOPA menjadi melanin juga terhambat (Katzung, 1995).Sel pembentuk

pigmentasi terletak pada lapisan basal epidermis.Jumlah dan besarnya melanin

yang terbentuk dapat menentukan warna kulit (Wasitaatmadja, 1997).


11

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan jenis penelitian eksperimental dengan

rancangan randomized block design.

B. Variabel Penelitian

Dalam penelitian ini, variabel yang digunakan antara lain :

1. Variabel bebas : Konsentrasi ekstrak etil asetat daun binahong

(Anrederacordifolia).

2. Variabel tergantung : Persentase penghambatan tirosinase oleh ekstrak

etil asetatdaun binahong (Anredera cordifolia)

3. Variabel terkendali :Suhu penyimpanan, pelarut dan waktu, PH,

panjang gelombang pada microplate reader.

C. Definisi Variabel Operasional

Ekstrak etil asetat daun Binahong adalah ekstrak daun Binahong

(Anredera cordifolia) yang diperoleh dengan cara merendam serbuk simplisia

dengan pelarut etil asetat selama dua hari disertai pengadukan, kemudian

filtrat yang dihasilkan dari proses maserasi tersebut diuapkan hingga diperoleh

ekstrak kental daun binahong.

Konsentrasi yang digunakan pada penghambatan tirosinase pada ekstrak

etil asetat daun binahong menggunakan konsentrasi yang berbeda- beda yaitu

50, 100, 200, 400, dan 800 µg/ml.

Persentase penghambatan tirosinase dinyatakan dengan nilaiIC50 yaitu

konsentrasi larutan inhibitor yang dibutuhkan untuk menghambat 50%

aktivitas tirosin-tirosinase. Aktivitas tirosinasemerupakan aktivitas

penghambatan yang ditentukan dengan tirosinase. Inhibitor tirosinase

mereduksi bahan yang dapat menyebabkan oksidasi dopakuinon.Semakin

kecil nilai IC50 maka aktivitas penghambatan terhadap melanin tinggi.


12

Suhu penyimpanan (temperatur) pada penelitian ini adalah 25ºC.

Pengaturan temperatur ini dilakukan untuk menguji aktivitas terhadap enzim

tirosinase, karena kerja dari enzim sangat spesifik sehingga mampu untuk

menghambat.

Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah DMSO, karena

DMSO merupakan pelarut yang kepolarannya sangat tinggi ketika di larutkan

dengan ekstrak.Waktu yang diperlukan untuk sampel agar mampu bereaksi

dengan enzim adalah 10 menit. Sedangkan waktu yang diperlukan untuk

mereaksikan substrat dengan enzim yaitu 20 menit. Hal ini dilakukan karena

kerja enzim sangat spesifik, sehingga perubahan sedikit saja pada kondisi

kerjanya, dapat mempengaruhi aktivitas enzim.

Panjang gelombang yang digunakan pada aktivitas penghambatan

tirosinase ini menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 490

nm.

D. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan selama7 bulan dari bulan Februari hingga bulan

Juli 2013. Tempat penelitian di Laboratorium Botani dan Genetika FKIP

UMP, Laboratorium Biologi Farmasi UMP, dan Laboratorium Farmakologi

Toksikologi UMP.

E. Bahan dan Alat

Bahan yang dipakaipada penelitian ini adalah daun binahong (Anredera

cordifolia),etil asetat teknis (Bratachem), .2 O (Merck),

.2 O (Merck), hidroquinon (p.a), L-DOPA(Sigma),DMSO

(Merck), enzim tirosinase (Sigma), aquabidest (widatra), methanol (Merck),

asam stearat (Merck), asam asetat (Merck), asam format (Merck), toluen

(Merck), aseton (Merck ) dan dietil amina (Merck).

Alat yang dipakai dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas seperti beaker

glass, erlenmeyer, gelas ukur, labu ukur, pipet volume, pipet tetes (pyrex),

timbangan analitik (SHIMADZU AUW220D), pH meter (Metrohm),


13

stopwatch, mikropipet (Eppendorf research plus) dan microplate reader

(Biorad imark TM

).

F. Cara Penelitian

1. Pengumpulan bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun binahong

(Anredera cordifolia) yang didapatkan di Desa Dukuhwaluh Kecamatan

Kembaran Kabupaten Banyumas Provinsi Jawa Tengah.

2. Determinasi bahan

Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Botani dan Genetika

FKIP UMP.Determinasi dimaksudkan untuk menetapkan kebenaran

sampel yang digunakan dalam penelitian. Determinasi daun binahong

dilakukan dengan mencocokkan ciri dari morfologi yang ada pada

tanaman daun binahong terhadap kepustakaan Flora of Java (Backer &

Bakhuizen van den Brink volume 1).

3. Pengeringan bahan dan penyerbukan

Daun binahong yang telah dipanen kemudian dicuci dengan air

mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel pada permukaan

daun binahong.Setelah itu ditiriskan sampai semua sisa- sisa air pencucian

tidak ada lagi pada daun binahong. Daun binahong kemudian dikeringkan

pada lemari pengering yang terdapat pada Laboratorium Teknologi

Farmasi pada suhu 30ºC, karena ruang- ruang dalam lemari pengering

tersebut dalam kondisi hampa udara sehingga penyisiran air terjadi secara

cepat dan aman dari material pada suhu rendah.Bahan yang sudah kering

selanjutnya dapat diserbuk dengan mesin penyerbuk kemudian di ayak

dengan nomor ayakan 20/60.

4. Pembuatan ekstrak etil asetat daun binahong

Metode untuk pembuatan ekstrak daun binahong menggunakan

metode perendaman (maserasi) yaitu dengan cara sebanyak 350 mg serbuk

daun binahong dengan menggunakan cairan penyari etil asetatselama 2

hari atau 48 jam yang disertai pengadukan. Caranya untuk hari petama,


14

rendam 350 mg serbuk daun binahong dengan 3,5 liter pelarut etil asetat

disertai pengadukan. Selanjutnya untuk hari kedua saring dengan kain

penyaring dan ampas tersebut diekstraksi kembali dalam etil asetat 3,5

liter. Dalam kegiatan maserasi ini, banyaknya cairan penyari yang

digunakan perbandingan 1:10 (BPOM,

2004).Kemudianmaseratdikumpulkan dan diuapkan penyariannya hingga

diperoleh ekstrak kental daun binahong(Depkes RI, 1986).

5. Identifikasi kandungan senyawa ekstrak etil asetat daun binahong

a. Identifikasi Flavonoid

Fase diam : silica gel F 254

Fase gerak : etil asetat : asam format : asam asetat glacial : air

(100:11:11:27)

Deteksi : difenilboriloksietilamina LP

Bercak sinar uv : berpendar kuning intensif, hijau dan

jingga(Depkes RI, 1987)

Hasil positif, tampak bercak berpendar kuning dalam sinar tampak.

b. Identifikasi Saponin

Pembentukan busa yang mantap sewaktu mengektraksi tumbuhan

dan waktu memekatkan ekstrak tumbuhan, merupakan bukti adanya

saponin tetapi biasanya lebih baik lagi bila uji sederhana itu dipastikan

dengan cara KLT dan pengukuran spectrum (Harbone, 1987).

Uji dengan KLT yaitu


Fase gerak : etil asetat : metanol : air (100:13,5:10)

Deteksi : anisaldehid-asam sulfat LP.

Hasil positif, jika dengan pereaksi ini saponin membentuk bercak biru

atau kadang-kadang kekuningan apabila diamati pada sinar tampak

(Depkes RI, 1987).

c. Identifikasi Tanin

Fase diam : silika gel F 254

Fase gerak : toluen P : aseton P : asam format (5:4:1)


15

Deteksi : FeCl3

Pembanding : asam galat

Jika setelah disemprot dengan FeCl3 menghasilkan warna hitam

kehijauan berarti positif mengandung Tanin (Pratiwi, 2008). Larutan

akan berubah menjadi biru kehitaman atau hijau kehitaman. Warna

biru menunjukkan bahwa simplisia mengandung tannin galat.Warna

hijau kehitaman menunjukkan adanya tannin katekol (Depkes RI,

1987).

d. Identifikasi Alkaloid


Fase gerak : toluena : etil asetat : dietil amina (70:20:10)

Deteksi : Dragendrof LP

Bercak sinar biasa : jingga sampai merah tua

Jika setelah disemprot dengan dragendrof, setelah dilihat sinar tampak

alkaloid membentuk warna hijau kekuningan berarti negatif

mengandung alkaloid.

G. Uji Penghambatan Tirosinase

1. Pembuatan Buffer Fosfat

Cara membuat buffer fosfat yaitu dengan melarutkan 17,79 g

.2 O ke dalam 100 mL aquades, kemudian sebanyak 13,79 g

.2 O juga dilarutkan ke dalam 100 mL aquades. Setelah itu

mengambil larutan sebanyak 46,3 mLdari dan 53,7 mL

dicampurkan dan ukur dengan pH meter, sehingga diperoleh

larutan buffer fosfat dengan pH 6,8 (Sambrook and David, 2001).

2. Pembuatan Larutan Sampel (ekstrak etil asetat daun binahong)

a. Pembuatan Larutan Stok Sampel Konsentrasi 1000 ppm

Larutan stok dibuat dengan cara menimbang seksama 0,01

grekstrak etil asetat daun binahongyang dilarutkan dalam 10 mL

DMSO.


16

b. Pembuatan Seri Konsentrasi Sampel

Dari larutan stok dengan konsentrasi 1000 ppm dipipet sebanyak

0,25; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 mL dimasukkan dalam labu ukur 5 mL dan

ditambahkan dengan DMSO sampai dengan tanda sehingga diperoleh

konsentrasi 50, 100, 200, 400, 800 ppm.

3. Pembuatan Larutan Kontrol Positif Hidroquinon

a. Pembuatan Larutan Stok Hidroquinon Konsentrasi 1000 ppm

Larutan stok dibuat dengan cara menimbang seksama 10 mg

hidroquinon dilarutkan dalam 10 mL DMSO.

b. Pembuatan Seri Konsentrasi Hidroquinon

Dari larutan stok dengan konsentrasi 1000 ppm dipipet sebanyak

0,25 mL yang dilarutkan dalam 5 mL DMSO (50 ppm). Dari

konsentrasi 50 ppm di pipet sebanyak 0,137; 0,275; 0,55; 1,1; 2,2 mL

dimasukkan dalam labu ukur 5 mL dan ditambahkan dengan DMSO

sampai dengan tanda sehingga diperoleh konsentrasi 1,375; 2,75; 5,5;

11; 22 ppm.

4. Pembuatan Larutan Tirosinase

Larutan tirosinase dibuat dengan cara melarutkan serbuk tirosinase

sebanyak 0,250mg ke dalam larutan buffer fosfat 0,02 M pH 6,8 dalam 2

mL. Larutan ini dibuat dalam keadaan segar.

5. Pembuatan larutan L-DOPA

Larutan baku L-DOPA 0,85 mM dibuat dengan melarutkan 24,65 mg

L-DOPA ke dalam 25 mL larutan buffer fosfat pH 6,8. Kemudian dipipet

sebanyak 1,7 mL dimasukkan kedalam labu takar 10 mL dan ditambahkan

larutan buffer fosfat 0,02 M pH 6,8 hingga tanda. Sehingga diperoleh

konsentrasinya 2,5 mM.

6. Pengujian Aktivitas Inhibisi Tirosinase dan Penentuan IC50

Pengujian ini menggunakan mikroplate 96 sumuran, caranya dengan

memasukkan 120 µL larutan buffer fosfat 0,02 pH 6,8, tambahkan 40 µL

larutan tirosinase, ditambahkan 20 µL larutan sampel. Setelah itu,

larutantersebut di inkubasi pada suhu 25oCselama 10 menit.Tambahkan 20


17

µL larutan L-DOPA 0,02 M. Lalu inkubasi selama 20 menit pada suhu

25oC kemudian ukur absorbansinya diukur pada panjang gelombang 490

nm pada alat microplatereader.

Absorbansi yang diperoleh diubah dalam bentuk persen inhibisi

dengan menggunakan rumus : [ (A-B)-(C-D)] x 100%.

A-B

Keterangan: A = Absorbansi larutan tanpa sampel + enzim

B = Absorbansi larutan tanpa sampel tanpa enzim

C = Absorbansi larutan sampel + enzim

D = Absorbansi larutan sampel tanpa enzim

H. Analisis Data

Dalam analisis data hasiluji aktivitas penghambatan

tirosinasemenggunakan regresi non linier pada program GradhPad Prism

versi 4.


18

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Botani dan Genetika

Program Studi Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan

Universitas Muhammadiyah Purwokerto dengan menggunakan buku Flora of

Java Vol. 1 (Backer & Bakhuizen van den Brink, 1963). Tujuan dilakukannya

determinasi tanaman untuk mengetahui dan memastikan kebenaran identitas

dari tanaman yang akan diambil untuk menghindari kesalahan dalam

pengumpulan bahan serta mencegah kemungkinan tercampurnya dengan

tanaman lain.

Caranya dengan mencocokkan tanaman dengan kunci- kunci

determinasi sehingga dapat dipastikan kebenaran tanaman yang akan

digunakan dalam penelitian. Hasil determinasi spesimen tumbuhan tersebut

merupakan Anredera yang termasuk dalam familia Basellaceae, dan di

Indonesia dikenal dengan nama Binahong (Anredera cordifolia (Tenore)

Steen). Dengan kunci determinasi sebagai berikut:

1b-2b-3b-4b-12b-13b-14b-17b-18b-18b-20b-21b-22b-23b-24b-25b-26b-27a-

28b-29b-30b-31b-403b-404b-405b-414a-415b-451b-466b-467b-468b-469b-

470e-541a……………..(49. Basellaceae)

49. Basellaceae.

1b…….(2. Anredera)

2. Anredera

1a ……Anredera cordifolia (Tenore) Steen.

B. Penyiapan Simplisia

Daun Binahong diperoleh di Desa Dukuhwaluh, Kabupaten

Banyumas.Daun Binahong dipanen pada jam 08.00- 09.00 WIB.Daun yang

sudah terkumpul kemudian dikeringkan.Tujuan dari pengeringan untuk

mengeringkan atau mengurangi kandungan air yang terkandung dalam daun


19

binahong sehingga kandungan bahan aktif dapat terjaga dari kerusakan,

mencegah reaksi enzimatis serta mencegah perubahan kimia.Kadar air yang

terlalu tinggi dapat menyebabkan kemungkinan tumbuhnya mikroorganisme

seperti jamur dan bakteri. Proses pengeringan dilakukan selama 3 hari atau

sampai benar- benar kering dengan menggunakan lemari pengering. Selama

pengeringan daun harus dibolak balik agar pemanasan merata dan proses

pengeringan berlangsung cepat. Pengeringan ini dianggap cukup apabila daun

sudah mengering dan rapuh bila diremas akan hancur dan mengeluarkan bunyi.

Setelah didapat simplisia daun binahong yang kering kemudian di

blender untuk mendapatkan serbuk simplisia.Tujuan dari penyerbukan untuk

meningkatkan tingkat kehalusan yang sesuai dengan Farmakope yaitu derajat

kehalusan serbuk halus untuk simplisia (Anonim, 1995).Dalam penyerbukan

tidak boleh terlalu halus karena dapat memungkinkan simplisia lolos dalam

penyaringan saat maserasi. Serbuk yang dihasilkan ± 420 gr dari simplisia

basah 5,3 kg dan berwarna hijau tua.

C. Pembuatan Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong

Pada pembuatan ekstrak etil asetat daun binahong ini menggunakan

metode maserasi. Maserasi adalah metode ekstraksi yang dilakukan dengan

merendam serbuk simplisia dengan menggunakan pelarut yang tepat pada

suhu kamar yang terlindung dari cahaya.

Ekstraksi daun binahong dilakukan dengan cara sebanyak 350 gr

serbuk daun binahong dengan menggunakan cairan penyari etil asetat selama

2 hari atau 48 jam yang disertai pengadukan. Caranya untuk hari petama,

rendam 350 gr serbuk daun binahong dengan 3,5 liter pelarut etil asetat

disertai pengadukan kemudian dibiarkan selama 24 jam. Selanjutnya untuk

hari kedua, hasil rendaman diperas dan diendapkan selama sehari untuk

memisahkan serbuk simplisia yang dimungkinkan terbawa saat

pemerasan.Kemudian dilakukan remaserasi agar memperoleh hasil yang

maksimal ekstraksi.Proses ekstraksi diulangi 2 kali dengan merendam serbuk

hasil perasan simplisia dengan jumlah dan jenis pelarut yang sama saat


20

maserasi. Hasil maserasi berupa maserat yang mengandung senyawa- senyawa

dari simplisia daun binahong.Dan didapatkan maserat berwarna hijau pekat

kehitaman.Selanjutnya ekstrak hasil perasan dipekatkan denganrotary

evaporator dan sebagian di taruh di lemari asam dengan menggunakan cawan

porselen sampai didapatkan ekstrak kental.Karena etil asetat sifatnya mudah

menguap jadi semua perlakuan dilakukan di lemari asam.Kecuali yang

penguapannya menggunakan evaporator.

Ekstrak kental yang didapat dari 350 gr serbuk simplisia daun

binahong adalah 22, 51 gr. Dari perhitungan di dapat % rendemen ekstrak etil

asetat daun Binahong adalah 6,43 % (b/b).

D. Uji Aktivitas Inhibisi Tirosinase dan Penentuan IC50

Penelitian ini menggunakan Microplate reader.Tujuan dari

menggunakan microplate reader karena mempunyai keuntungan relatif cepat,

mudah dan murah.

Pengujian aktivitas inhibitor tirosinase dilakukan pada ekstrak etil

asetat daun binahong sebagai sampel untuk mengetahui daya inhibisi terbaik

terhadap enzim tirosinase.Dan sebagai kontrol positifnya digunakan

hidroquinon.Hidroquinon sudah dikenal dapat mempengaruhi enzim tirosinase

sehingga dapat menghambat oksidasi enzimatik tirosin menjadi DOPA, serta

oksidasi DOPA menjadi melanin juga terhambat (Katzung, 1995).

Menggunakan substrat L-DOPA karena substrat ini dengan enzim

tirosinase akan menghasilkan dopakrom yang selanjutnya dapat membentuk

melanin. Untuk dapat mencegahnya dapat dilakukan oleh inhibitor tirosinase.

Tetapi, apabila ekstrak tersebut mengandung senyawa inhibitor tirosinase,

maka aktivitas enzim tirosinase akan terhambat dalam memproduksi melanin.

Pada penelitian ini, pembentukan produk dopakrom ditandai munculnya warna

coklat yang dapat menyebabkan terhambatnya reaksi substrat-tirosinase

sehingga mengakibatkan produksi dopakrom berkurang yang ditandai dengan

penurunan intensitas warna coklat.Pembentukan dopakrom ini diukur


21

menggunakan microplatereader dengan memakai mikroplate 96 sumuran,

pada panjang gelombang 490 nm.

Tabel 1.Persentase inhibisi aktivitas penghambatan melanin ekstrak etil asetat

daun binahong.

Konsentrasi Persentase

± SD

Konsentrasi Persentase

± SD sampel

(µg/ml) inhibisi

Hidroquinon

(µg/ml) inhibisi

50 44,020 3,200 1,375 19,483 1,630

100 45,080 4,676 2,75 26,182 1,299

200 43,449 1,152 5,5 31,949 0,936

400 43,322 4,757 11 34,788 0,233

800 48,490 2,424 22 38,187 0,555

Penentuan uji inhibisi tirosinase dilakukan untuk mengetahui ada

tidaknya daya inhibisi senyawa bioaktif pada sampel ekstrak etil asetat daun

binahong. Dari tabel 1, dapat terlihat bahwa pada konsentrasi 50 µg/ml

persentase inhibisi yaitu 44,020% dan pada konsentrasi 100 µg/ml terjadi

peningkatan sebesar 45,080%. Kemudian pada konsentrasi 200 µg/ml terjadi

penurunan persentase inhibisi yaitu 43,449%. Sedangkan pada konsentrasi

400 µg/ml yaitu 43,322% merupakan persentase inhibisi terendah, sedangkan

persentase inhibisi tertinggi pada konsentrasi 800 µg/ml sebesar 48,490%.

Dari hasil persentase inhibisi pada sampel daun binahong

menghasilkan persentase yang hampir sama, hal ini berkaitan dengan reaksi

enzimatis yaitu ketika ada enzim yang direaksikan dengan substrat akan

menghasilkan jumlah produk. Dalam hal ini dimungkinkan, jumlah produk

yang dihasilkan hampir sama pada tiap- tiap konsentrasi.

Setelah ditentukan persentase inhibisi, selanjutnya penentuan nilai

IC50.IC50 merupakan konsentrasi yang dibutuhkan dalam menghambat 50%

aktivitas tirosin- tirosinase.Untuk persentase aktivitas inhibisi hidroquinon

bahwa semakin besar konsentrasi maka semakin besar pula persentase

inhibisi. Persentase inhibisi terendah dimiliki pada konsentrasi 1,375 µg/ml

yaitu 19,483%, sedangkan yang tertinggi dimiliki pada konsentrasi 22 µg/ml

yaitu 38,187%.


22

Dari hasil tersebut menunjukkan, bahwa pembentukan produksi

dopakrom terjadi, hal ini menyebabkan produksi dopakrom menjadi

berkurang.Selanjutnya penentuan nilai IC50 dengan menghubungkan

konsentrasi sampel (ekstrak etil asetat daun binahong) atau kontrol positif

dengan persen inhibisi.Untuk menentukan nilai IC50maka dibuatlah kurva

hubungan konsentrasi inhibitor yaitu sampel (ekstrak etil asetat daun

binahong) atau kontrol positif (hidroquinon) dengan aktivitas inhibisi seperti

yang terdapat pada gambar 3.

Gambar 3. Kurva hubungan non linier dari log konsentrasi ekstrak etil asetat

daun binahong terhadap persen inhibisi.

Gambar 4. Kurva hubungan non linier dari log konsentrasi kontrol positif

(hidroquinon) terhadap persen inhibisi.


23

Berdasarkan pada gambar 3, terlihat bahwa persentase inhibisi yang

dihasilkan tersebut tidak linier.Jadi analisis data penelitian ini menggunakan

regresi non linier GraphPad Prism versi 4.Yaituperbandingan antara log

konsentrasi dengan persen inhibisi. Nilai IC50 dari ekstrak etil asetat daun

binahong sebesar 299,1µg/ml. Hal ini dapat dikatakan bahwa ekstrak etil

asetat daun binahong memiliki aktivitas penghambatan melanin yang rendah.

Semakin besar nilai IC50 maka aktivitas penghambatan terhadap melanin akan

semakin kecil.

Sedangkan pada gambar 4. Terlihat bahwa persentase inhibisi

hidroquinon (kontrol positif) nilai IC50sebesar 16,34µg/ml. Hal ini

menunjukkan bahwa hidoquinon terbukti mempunyai aktivitas penghambatan

terhadap melanin yang lebih tinggi, karena dilihat dari nilai IC50 dari

hidroquinon.

E. Identifikasi Kandungan Senyawa

Uji kandungan senyawa atau fitokimia dilakukan pada ekstrak etil

asetat daun binahong sebanyak 0,01 gr dilarutkan dengan pelarut etil asetat

sebanyak 10 ml. Dengan melakukan uji fitokimia ini dapat memberikan

informasi penting tentang senyawa metabolit sekunder yang terkandung pada

ekstrak. Tujuan dari uji ini untuk menentukan golongan senyawa yang

terdapat pada ekstrak etil asetat daun binahong (Anredera cordifolia) yang

mempunyai aktifitas sebagai penghambatan tirosinase.

Identifikasi kandungan senyawa yang akan diuji yaitu flavonoid,

saponin, tanin dan alkaloid. Golongan senyawa dalam ekstrak dapat

ditentukan dengan melihat warna bercak setelah ditambahkan pereaksi

spesifik.

Tabel 2.Identifikasi kandungan senyawa ekstrak etil asetat daun binahong.

Flavonoid Saponin Tanin Alkaloid

Ekstrak Etil Asetat + + - -

Daun Binahong


24

Berdasarkan Tabel 2, dapat diketahui bahwa ekstrak etil asetat daun

binahong mengandung senyawa golongan flavonoid dan saponin. Menurut

Chang (2009), Flavonoid yang terkandung dalam ekstrak etil asetat daun

binahong diduga akan memberikan efek inhibisi terhadap enzim tirosinase

karena golongan flavonoid merupakan salah satu kelompok senyawa yang

aktif sebagai inhibitor tirosinase. Senyawa golongan flavonoid yang sudah

terbukti mengandung inhibitor tirosinase seperti golongan senyawa flavonol

(kuersetin, kaempferol dan mirisetin), golongan senyawa flavon

(norartokarpetin), isoflavon (kalikosin), flavanol (dihidromorin dan

taksifolin), flavanon (stepogenin), isoflavon (gliasperin C, glabridin) dan

kalkon (Chang, 2009).Dan untuk hasil identifikasinya setelah dilihat di sinar

tampak, terlihat bercak warna kuning berpendar.Hal tersebut menandakan

bahwa ekstrak etil asetat daun binahong mengandung senyawa flavonoid.

Dan hasil bercak (spot) pada identifikasi flavonoid ekstrak etil asetat daun

binahong menghasilkan 2 bercak yaitu Rf1 sebesar 0,862 ; HRf = 86,25 dan

bercak ke dua Rf2 sebesar 0,9125 ; dan nilai HRf nya sebesar 91,25.

Selanjutnya, selain mengandung flavonoid ekstrak etil asetat daun

binahong juga mengandung senyawa saponin.Saponin merupakan glikosida

triterpena dan sterol yang mempunyai sifat seperti sabun yaitu berbusa

(Harborne, 1987).Dan hasil uji sederhana ketika ekstrak dilarutkan dengan air

yang kemudian dikocok, ekstrak etil asetat daun binahong menghasilkan

busa.Selanjutnya, hasil identifikasi setelah dilihat di sinar tampak terlihat

bercak warna biru atau kadang- kadang kekuningan jika diamati pada sinar

tampak (Depkes RI, 1987).Hal ini menandakan bahwa ekstrak etil asetat daun

binahong mengandung senyawa saponin. Dan hasil bercak pada ekstrak etil

asetat daun binahong menghasilkan nilai Rf sebesar 0,75; dan nilai HRf yaitu

sebesar 75.

Identifikasi senyawa tanin, Tanin merupakan senyawa fenolik yang

dapat membentuk kompleks dengan protein yang terdapat di jaringan ikat

pembuluh pada hampir semua jenis tanaman.Senyawa yang diduga

mengandung senyawa tanin yang berpotensi sebagai inhibitor tirosinase


25

adalah asam galat (Kubo et al, 2003).Dan hasil identifikasi senyawa tanin

pada ekstrak etil asetat daun binahong tidak mengandung senyawa tanin

dilihat dari sinar UV 366, setelah disemprot bercak terlihat warna merah,

seharusnya bercak berwarna ungu kehitaman. Dan untuk nilai Rf pada ekstrak

etil asetat daun binahong terlihat 2 bercak dengan nilai Rf 0,95 dan 0,86 ; dan

untuk nilai HRf nya sebesar 95 dan 86. Sedangkan untuk bercak larutan

pembanding tidak terlihat, hal ini dimungkinkan kurangnya konsentrasi pada

saat penotolan.

Selanjutnya identifikasi senyawa alkaloid.Alkaloid merupakan

senyawa metabolit sekunder yang terbesar, baik dari segi jumlah senyawa

maupun dalam segi sebarannya dalam tumbuhan.Dan hasil yang didapatkan

pada ekstrak etil asetat daun binahong tidak mengandung senyawa

alkaloid.Dilihat dari bercak warna yaitu dilihat dari sinar tampak berwarna

kuning kehijauan, seharusnya berwarna jingga sampai merah bata.Tetapi pada

penelian yang dilakukan oleh Rochani (2009) menunjukkan bahwa ekstrak

dari etil asetat daun binahong mengandung senyawa alkaloid.Hal ini

dimungkinkan pada penelitian ini kurangnya konsentrasi pada saat penotolan.

Dan nilai Rf dari bercak yang dihasilkan sebesar 0,95 dan HRfnya yaitu 95.


26

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Ekstrak etil asetat daun binahong (Anredera cordifolia) mempunyai

aktivitas terhadap penghambatan tirosinase yang rendah.

2. Nilai IC50 dari ekstrak etil asetat daun binahong sebesar 299,1µg/ml, dan

nilai IC50 kontrol positif (hidroquinon) yaitu 16,34 µg/ml.

B. Saran

1. Ekstrak dari etil asetat daun binahong perlu diproses pemurnian lebih

lanjut agar memperoleh senyawa murni yang aktif berperan sebagai

inhibitor tirosinase dan antioksidan.

2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang aktivitas penghambatan

tirosinase daun binahong dengan substrat selain L-DOPA.


27

DAFTAR PUSTAKA

Andersen, Q. M., and Markham, K. R. 2006.Flavonoids.Chemistry, Biochemistry,

and Applications.Boca. Raton, FL: CRC Press, Taylor & Francis.

Arung ET, kusuma IW, Iskandar YM. Yasutake S. Shimizu K. Kondo R.

2006.Screening of Indonesian plants for tyrosinase inhibitory activity.

Journal Wood Science 51:520-525.

Backer, CA and Bakkuizen v/d Brink RC Jr. 1963.Flora of Java vol 1. Wolter-

Noordhoff NV. Groningen. P:2.

Balsam, M.S. and Sagarin, E., 1972.Cosmetics Science and Technology, 2 nd

ed,

Vol. 3, John Wiley and Sons, New York.

Batubara I, Darusman LK, Mitsunaga T, Rahmniwati M, Djauhari E.2010.

Potency of Indonesia medicinal plants as tyrosinase inhibitors and

antioxidant agent. Journal of Biologi Science, 10 :138- 144.

BPOM. 2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia Volume I. Jakarta :

BPOM RI.

Chang T, Ding HY, Tai SSK, Wu CY. 2007. Mushroom tyrosinase inhibitory

effects of isoflavones isolated from soygerm koji fermented with

Aspergillus oryzae BCRC 32288. Journal of Food chemistry. 105: 1430-

1438.

Chang T. 2009. An updated review of tyrosinase inhibitor. International Journal of

molecular science: 2440- 2476.

Depkes, RI. 1979. Farmakope Indonesia ed III. Jakarta: Departemen Kesehatan

Republik Indonesia.

Depkes, RI. 1986. Sediaan Galenika. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik

Indonesia.

Depkes, RI. 1995. Farmakope Indonesia ed IV. Jakarta: Departemen Kesehatan

Republik Indonesia.


28

Depkes RI.2000.Inventaris Tanaman Obat Indonesia (I).Jilid I. Jakarta :

Departemen Kesehatan RI dan Kesejahteraan Sosial RI Badan Penelitian

dan Pengembangan Kesehatan. Halaman 131-132.

Depkes, RI. 2006. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (VI). Jakarta: Badan

Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Tawangmangu.

Food and Drug Administration (FDA). 2003.Guidance for Industry Photosafety

Testing, Pharmacology Toxycology Coordinating Committee in the Centre

for Drug Evaluation and Research (CDER) at the FDA.

Gennaro, RA., 1995. Remington‟s : Practice of Pharmacy. Nineteenth edition Vol

II.Pennsylvania : Mack Publishing Company Easton.

Germano, M.P., Cacciola, F., Donato, P., Dugo, P., Certo, G., D‟Angelo, V., et

al., 2012., Betula pendula leaves :polyphenolic characterization and

potential innovative usi in skin whitening products, Fitoterapia. 83:877-

882.

Harborne.1987.Metode Fitokimia Penuntuk Cara Modern MenganalisisTumbuhan.

Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata. Bandung: ITB Press.

Hill, MG. 2010. Specialty Board Review Dermatology.

Katzung, G.B. 1995. Basic and Clinical Pharmacology, a lange medical book.

Prentice-Hall International, USA.

Kim, Y. J., K.J. Kyung, J.H. Lee., and H. Y. Chung. (2004). “4-4‟-

Dihydroxybiphenyl as a New Potent Tyrosinase Inhibitor”. J. Biol. Pharm.

Bull. 28 (2) 323-327.

Kubo, I., Ikuyo, KH., Ken, IN., Frida, S., Midori, T., Jose, S., et al., 2003.

Tyrosinase Inhibitors From Galls of Rhus javanica Leaves and Their

Effects on Insects. Naturforsch 719-725.

Lachman, Leon, dkkl. 1994. Teori dan Praktek Farmasi Industri II (terjemahan )

Siti suyatmi.Edisi ketiga. Jakarta: UI Press.

Likhitwitayawuid.K. 2008.Stilbenes with tyrosinase inhibitor activity.Current

Science, 94: 44- 52.

Manoi,F. 2009. “Binahong (Anredera cordifolia) sebagai Obat”.Warta penelitian

dan Pengembangan Tanaman Industri. Vol.15 (1): hal 4.


29

Marliana, Soerya dewi, Venty Suryanti, dan Suyono.2005.Skrining Fitokimia dan

Analisis Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam

(Sechium edule Jacq.Swatrz.)dalam ekstrak etanol. Biofarmasi 3(1): 26-

31.

Miyazawa, M. and Naotaka T., 2007. Inhibitory Compound of Tyrosinase

Activity from the Sprout of Polygonum hydropiper L. (Benitade). Biol.

Pharm.Bull.30(3) 595-597.

Mus. 2008.Informasi Spesies Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis).

http://www.plantamor.com. Diakses 15 Desember 2012.

Octavia,D. R. 2009. Uji Aktivitas Penangkap Radikal ekstrak petroleum Eter, Etil

Asetat dan Etanol Daun binahong (anredera cordifolia(Tenore) Steen)

dengan Metode DPPH (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil).Skripsi Sarjana pada

fakultas farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.

Pink A. 2004.Gardening for the Million. Project Gutenberg Literary Archive

Foundation.http://www.gutenberg.org. Diakses 10 Desember 2012.

Rahayu, Elvi. 2012. Aktivitas Gabungan Ekstrak Bakau (Rhizophora apiculata),

Alamanda (Allamanda schottii), Dan Binahong (Anredera cordifolia)

Terhadap Enzim Tirosinase. Skripsi Sarjana pada fakultas farmasi Institut

Pertanian Bogor.Diakses 12 Juni 2012.

Rochani, N. 2009. Uji Aktivitas Antijamur Ekstrak Daun Binahong (Anredera

cordifolia(Tenore) Steen) Terhadap Candida albicans serta skrining

fitokimiannya. Skripsi Tidak Diterbitkan. Surakarta : Fakultas Farmasi

UMS Surakarta.

Rowe RC, Paul JS dan Paul JW. 2003. Handbook of Pharmaceutical

Excipients,4th

edition. London: Chicago Pharmaceutical Press.

Sembrook, J and David, WR., 2001. Molecular Cloning edisi III. New York. Cold

Spring Harbor laboratory Press.

Setiaji, A. 2009.Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Petroleum eter, Etil asetat Dan

Etanol 70% Rhizoma binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steenis)

Terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 Dan Escherichia coli


http://www.plantamor.com/

http://www.gutenberg.org/

30

ATCC 11229 Serta Skrining Fitokimianya. Skripsi Tidak Diterbitkan.

Surakarta :Fakultas Farmasi UMS Surakarta.

Seymour, M.B. 1975. Medicated application, Remington‟s Pharmaceutical hal

295-296, (1523).

Susetya Darma,S.P. 2011. Khasiat & Manfaat Daun Ajaib Binahong. Yogjakarta:

Penerbit Pustaka Baru Press.

Voigt, R.1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi Ed-5. Noerono Soendani,

penerjemah. Samhoedi Raksohadiprojo, editor. Yogyakarta: Gajah Mada

Press. Terjemahan dari Lehburch Der Pharmazeutischen Technologie.hlm:

314-316.

Winarsi H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal bebas Potensi dan Aplikasinya

Dalam Kesehatan. Yogjakarta: Penerbit Kanisius.

Yamauchi K, Mitsunaga T, Batubara I. 2011. Isolation, identification, and

tyrosinase inhibitory activities of the extractives from Allamanda

cathartica. Natural Resources 2: 167-172.


31

LAMPIRAN


Documents

AKTIVITAS (Tenore) Steen) - repository.ump.ac.idrepository.ump.ac.id/552/1/COVER_QORI WAHYUNINGSIH... · SKRIPSI . Untuk memenuhi ... Sediaan kosmetik pemutih . mengharapkan efek