ALERGENOS DEL POLEN DE OLIVO: SON LOS … · 17/04/2008 1 ALERGENOS DEL POLEN DE OLIVO: SON LOS CULTIVARES LOS SUCEDANEOS DE LOS ANTÍGENOS RECOMBINANTES? Carlos Lahoz, [email protected]

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ALERGENOS DEL POLEN DE OLIVO: SON LOS CULTIVARES LOS SUCEDANEOS

DE LOS ANTÍGENOS RECOMBINANTES?

Carlos Lahoz, [email protected]

Asesor Científico Inmunal

Consultor Jefe de Inmunología

Fundación Jiménez Díaz, 28040 Madrid

Dr Lahoz Abril 2008

www.alergomurcia.com

HIPOTESIS

Los cultivares son grandes extensiones de terreno con olivos plantados

La principal caracteristica de los cultivares es que los diferentes arboles dentro del mismo cultivar son genéticamente homogeneos (variedades), ya que son

plantados por el sistema de “estaquillas” procedentes del propio cultivar

Esto significa que el polen de olivo producido por esos arboles sensibilizan preferentemente a la población mas próxima al mismo y dado que existen

ciertas diferencias cualitativas y cuantitativas entre las variedades, la respuesta a esa sensibilizacion estará modificada dependiendo de esas características

HIPOTESISLos extractos del polen procedente de un determinado cultivar pueden serLos extractos del polen procedente de un determinado cultivar pueden ser

comparados con una combinación de varios alergenos “recombinantes” pero con la ventaja sobre ellos que supone su procedencia “natural” ya que no

proceden de tecnologia de ADN recombinante

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250 cultivares en España: 24 de ellos son relevantes

3,000 cultivares en el mundo

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Granos de polen en Jaen entre Febrero y Junio de 06

Grafica 98

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Quiralte J, JIACI Vol 17 Supp1, 24-30, 2007

Dr Lahoz Abril 2008


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Alérgenos del polen de olivo25 años de la descripción de Ole e 1 !!!!!

Tesis Doctoral: Contribución a la caracterización y estandardizaciónTesis Doctoral: Contribución a la caracterización y estandardizaciónde extractos alergénicos de polen de olea europea. Maria Teresa González Quevedo Tejerina. Univ. Sevilla 1983

Lauzurica P, Gurbindo C, Maruri N, Galocha B, Diaz R, Gonzalez J, García R, Lahoz C. Olive (Olea europea) pollen allergens--I. Immunochemical characterization by immunoblotting, CRIE and immunodetection by a monoclonal antibody Mol Immunol 1988immunodetection by a monoclonal antibody. Mol Immunol. 1988 Apr;25(4):329-35Lauzurica P, Maruri N, Galocha B, Gonzalez J, Diaz R, Palomino P, Hernandez D, García R, Lahoz C. Olive (Olea europea) pollen allergens--II. Isolation and characterization of two major antigens.Mol Immunol. 1988 Apr;25(4):337-44.

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1988 se aisla y estudian las caracteristicas del Ole e 1 utilizando anticuerpos monoclonales1994 Mapeo epitópico de Ole e 1: Epitopos T-2006 Epitopos B1998 Primeros estudios de susceptibilidad genética de los pacientes sensibilizados al olivo1994 Cl j i d Ol 11994 Clonaje y expresion de Ole e 11996 Restricciones geneticas a respuesta alérgica son dependientes a DR7/DQ22000 Actividad inmunológica de r Ole e 1 en pacientes sensibilizados a olivo2002 Estudios de actividad alergénica en 16 cultivares2005 Relación entre asma y rinitis y determinados aspectos2005 Relación entre asma y rinitis y determinados aspectos clínicos son dependientes del a presencia de Ole 2 y Ole 102006 Alergia al olivo en modelos animales 2007 Mutantes hipoalergénicos de Ole e 12008 Ole e 11?

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20253035 INVESTIGACION POR TRIENIOS EN PUBLICACIONES

INVESTIGACION BASICA

05

101520

2007-2005

2004-2002

2001-1999

1998-1996

1995-1993

1992-1987

Olivo AbedulDr Lahoz Abril 2008


Rodriguez R, JIACI Vol 17 Supp1, 4-10, 2007

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Patron heterogéneo de anticuerpos IgE específicos al polen Patron heterogéneo de anticuerpos IgE específicos al polen de olivo en veinte sueros de enfermos alérgicosde olivo en veinte sueros de enfermos alérgicos

Dr Lahoz Abril 2008


SDS PAGE: Pattern of extracts from different Spanish cultivars

Contenido en OLE e 1: Alto: Picual, Manzanilla, Blanqueta, Lucio y Loaime Medio: Cornicabra and Hojiblanca

Bajo: Arbequina, Verdial, Lechin, and Bella de EspañaDr Lahoz Abril 2008


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ANTÍGENOS RECOMBINANTES

30,000

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ANTÍGENOS RECOMBINANTES??

Valenta R. Curr Opi Allergy Clin Immunol. 2003, 3: 495-500

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?¿¿

Niederberger V, Valenta R. Curr Opi Allergy Clin Immunol. 2004, 4:549-554

?¿

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Nombre Caracterización Frecuencia unión IgE

Homología

Ole e 1 145 aa, 1,6 kDa 62% Gen del tomate LAT52,gen Zmc13 maíz y OSPSG arroz.

Ole e 2 proteína acídica, 17-15 kDa 24% Elevada homología con profilina abedul

Alérgenos del polen de Olivo

Ole e 3 9.2 kDa, proteína acídica 50%áreas altos

niveles polen

Similitud motivos EF-hand proteínas unión Ca2+ (Polcalcinas)

Ole e 4 Parcialmente, 32 kDa, pIs 4.65 -5.1.

80% Sin homología

Ole e 5 N-terminal 16 kDa, pIs 5.1- 6.5 35% Alta homología con superoxido dismutasa

Ole e 6 SDS-PAGE:10 kDa, pI 4.2 15 % (según área:

10-55%)

Sin homología

Ole e 7 9.8 –10.3 kDa. 47% Sin homología

Ole e 8 18.7 kDa, proteína unión Ca2+

EF-hand15% Sin homología excepto en sitios EF-hand.

Ole e 9 β-1-3 glucanasa, 46.4 kDa 65% Pequeña homología con 1,3-β-glucanasas de trigo y Arabidopsis thaliana.

Ole e 10 10.8 kDa, pI: 5.8 Homología con Ole e 9(53%), Arabidopsis thaliana(42-46%).Dr Lahoz

Abril 2008www.alergomurcia.com

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EL 80 % IDENT Y SIMIL ENTRE PAREJAS DE PROT HOMOLOGAS ES SENSIBILIZACION PRIMARIA A POLENES DE OLEACEAS: Ole e 1 marcador de sensibilización a oleaceas

Rodriguez R, JIACI Vol 17 Supp1, 4-10, 2007Dr Lahoz Abril 2008


Ole e 2 (profilinas) y Ole e 3 (polcalcinas) marcadores de polisensibilizacion



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Deteccion de alergenos minoritarios



Class II HLA DR-2 (15) was associated with Ole e 10 sensitized patients with severe asthma

Quiralte J, JIACI Vol 17 Supp1, 24-30, 2007Dr Lahoz Abril 2008


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Ole e 9 is a candidate involved in the Pollen – Latex – Fruit syndrome

Quiralte J, JIACI Vol 17 Supp1, 24-30, 2007Dr Lahoz Abril 2008


Todos + a olivo por pruebas convencionales

Barber D, JIACI Vol 17 Supp1, 11-16, 2007

Monosens. a olivo

+ Olivo y gramin

Falso + a olivo

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Group 1: Low Ole e 1 Content: Carolea

ANTIGENIC PROFILE OF SEVERALCULTIVARS FROM ITALY ANALYZED BY

MALDI-MS

Group 1: Low Ole e 1 Content: Carolea, Dolce di Rossano and Sinopolese

Group 2: Overenrichment on Ole e 1: Cassanese, Coratina, Nocellera del Belice and Villacidro

Group 3: Those with enrichment on Ole eGroup 3: Those with enrichment on Ole e 3 and Ole e 7: Ottobratica


Contenido en Ole e 1 y otros alergenos en variedades de Inmunal

Contenido muy alto en Ole e1 (similar al Gupo II de Calabria).

Medicion por Maldi Toff Espectrometria de masas

Lucio 250505 Ole e 3/Ole e 7 Over enrichment of Ole e 1 II group

OE 060605 Ole e 3/Ole e 7 Over enrichment of Ole e 1 II group

Picual 100706 Ole e 3/Ole e 7 Over enrichment of Ole e 1 II group

Man anilla 170606 Ol 3/Ol 7 O i h t f Ol 1 II gro pManzanilla 170606 Ole e 3/Ole e 7 Over enrichment of Ole e 1 II group


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Contenido en Ole e 1 y otros alergenos en variedades de las vacunas Inmunal

Contenido muy bajo en Ole e 1 (similar al Gupo III de Calabria). Medicion por Maldi Espectrometria de

ALLERGEN BATCH Fraction a Fraction b classification

Arbequina 020806 Ole e 3/Ole e 7 Ole e 3/Ole e 7 III group No Ole e 1

Lechin 020806 Ole e 3/Ole e 7 Ole e 3/Ole e 7III group No Ole e 1

masas

Lechin 020806 Ole e 3/Ole e 7 Ole e 3/Ole e 7 No Ole e 1

Verdial 270706 Ole e 3/Ole e 7 Ole e 3/Ole e 7 III group No Ole e 1


Blanqueta 260606

Ole e 3/Ole e 7 Ole e 3/Ole e 7 + Ole e 1

I group

Ole e 1Med

level Ole e 1

I group

Loaime_1 250505


I group Med

level Ole e 1

Cornicabra 2806 Ole e 3/Ole e 7 Ole e 3/Ole e 7 +

I group Med

level OleCornicabra 280606

Ole e 3/Ole e 7 Ole e 3/Ole e 7 Ole e 1

level Ole e 1

Hojiblanca 270706


GrupIMed

level Ole e 1Dr Lahoz Abril 2008 www.alergomurcia.com

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SDS PAGE: Pattern of extracts from different Spanish cultivars

OLE e 1 CONTENT:H: High: Picual, Manzanilla, Blanqueta, Lucio and LoaaimeM: Medium: Cornicabra and HojiblancaL: Low: Arbequina, Verdial, Lechin, and Bella de España


Caractersticas diferenciales entre distintos cultivares: Ole e 1 y Ole e 2

Alche J, JIACI Vol 17 Supp1, 17-23, 2007

Anti Ole e 1

A ti Ol 2

Tinción con plata

Anti Ole e 2


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Picual Arbequina

Alche J, JIACI Vol 17 Supp1, 17-23, 2007Dr Lahoz Abril 2008 www.alergomurcia.com

Comparison of the allergenicity and Ole e 1 content of 6 varieties of Olea europaea pollen

collected during 5 consecutive years.

CONCLUSIONS: The different varieties of O. europaea pollen demonstrated great differences in allergenic potency and Ole e 1 content. These differences were maintained throughout the study, suggesting that they are due to genetic

Fernández-Caldas E, Carnés J, Iraola V, Casanovas M.

differences intrinsic to the varieties, although certain climatic effects may also play a role.

Ann Allergy Asthma Immunol. 2007 May;98(5):464-70Dr Lahoz Abril 2008 www.alergomurcia.com

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Barber D, JIACI Vol 17 Supp1, 11-16, 2007


Ole e 1 LEVELS IN DIFFERENT CULTIVARS

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% Ole e 1 reactividad media (mm2)

CORRELACIÓN % Ole e 1 y REACTIVIDAD DE PACIENTESCORRELACIÓN % Ole e 1 y REACTIVIDAD DE PACIENTESALÉRGICOSALÉRGICOS AL POLEN DE OLIVO A DISTINTOS CULTIVARESAL POLEN DE OLIVO A DISTINTOS CULTIVARES

0

20

40

60

80

100

120

PIC

UA

L

LOAIM

E

LUC

IO

FRA

NTO

IO

GO

RDA

L

MA

NZA

NIL

LA

ARB

EQU

INA

HO

JIBLA

NC

A

PIC

UDO

LECH

IN

02468101214161820

•% (Ole e 1) en el polen de diez cultivares.p

•LECHIN 100%., sólo un 18% en la variedad GORDAL SEVILLANA.

• Valores medios de reactividad de 30 pacientes diagnósticados de alergia al polen del olivo tras ser sometidosa pruebas de SPT

•Se observa un buen nivel de correlación entre el contenido relativo de alergeno mayoritario Ole e 1 de cadacultivar y la reactividad media de los pacientes a los extractos correspondientes.

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1 Hojiblanca1 Hojiblanca2 Morisca2 Morisca3 Lechín de Sevilla3 Lechín de Sevilla4 Verdial de Huevar4 Verdial de Huevar5 Picudo5 Picudo

1 Hojiblanca1 Hojiblanca2 Morisca2 Morisca3 Lechín de Sevilla3 Lechín de Sevilla4 Verdial de Huevar4 Verdial de Huevar5 Picudo5 Picudo

Paciente 2Paciente 2

11

22

99

1010


11

22

1010

1111Loaime


11

22

88

99

REACTIVIDAD DE PACIENTES ALÉRGICOS AL POLEN DE OLIVO A DISTINTOS CULTIVARES

5 Picudo5 Picudo6 Manzanilla de Sevilla6 Manzanilla de Sevilla7 Arbequina7 Arbequina8 Cornicabra8 Cornicabra9 Blanqueta9 Blanqueta10 Loaime10 Loaime11 Bella de España11 Bella de España12 Lucio12 Lucio13 Picual13 Picual

5 Picudo5 Picudo6 Manzanilla de Sevilla6 Manzanilla de Sevilla7 Arbequina7 Arbequina8 Cornicabra8 Cornicabra9 Blanqueta9 Blanqueta10 Loaime10 Loaime11 Bella de España11 Bella de España12 Lucio12 Lucio13 Picual13 Picual

Histamina

Comercial

22

33

44

55

66

77

88

1010

1111

1212

1313

Histamina

Comercial

33

44

66

88

99

77

55

1212

1313 Picual

Loaime33

44

55

66

77

1010

1111

1212

1313

Histamina

Comercial

Loaime

••Estudio 30 pacientes sometidos a pruebas cutáneas SPT con 13 variedades de polen Estudio 30 pacientes sometidos a pruebas cutáneas SPT con 13 variedades de polen de olivode olivo

••Diferencias Diferencias intervarietales y con respecto al extracto comercial y con respecto al extracto comercial Olea europaeaOlea europaeaCastro, A. J., Alché, J.D. Cuevas, J., Romero, P.J., Alché, V. and Rodríguez-García, M.: “Pollen from different olive tree cultivars contains varying amounts of the major allergen Ole e 1”. Int. Arch. Allergy Clin Immunol 131, 164-173 (2003).

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Factores Genéticos

Presencia de alelos HLA específicosPolimorfismos FcεRI-β

Polimorfismos de familia de IL-4y genes de citocinas

Polimorfismos de CD14P li fi d t l i

Factores Ambientales

Sensibilización alergénicaTener pocos hermanos

Excesiva higieneTomar antibióticos en los primeros 2 años de vida

Vacunación y prevención de la enfermedad Polimorfismos de otros loci y p

Defectos en Órganos Diana

Epitelio BronquialPiel

ATOPIA

Desencadenantes

Infecciones viralesExposición a alérgenos

Intestinop gHumo del tabaco

Contaminantes ambientales

Inflamación alérgica mediada por Th2Dr Lahoz Abril 2008


Las secuencias de los epitopos

de Ole e 1 reconocidos por los receptores de linfocitos Tde linfocitos T son variables

(heterogeneidad) entre diferentes

cultivares

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T reactive

Ole e 1 AMINOACID SEQUENCE AND SYNTHETIC PEPTIDES

T reactiveT reactive


PROLIFERATIVE RESPONSE OF LYMPHOCYTES FROM OLIVE ALLERGIC AND NON ALLERGIC INDIVIDUALS STIMULATED WITH

THE PEPTIDES

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1.- OLIVE POLLEN IS THE MOST IMPORTANT ALLERGEN IN THE MEDITERRANEAN AREA

2.- IN ITALY AND SPAIN EXIST SEVERAL CULTIVARS AND VARIETIES OF OLIVE TREES WITH ALLERGOLOGICAL IMPORTANCE

3.- IN GENERAL Ole e 1 CONTENT IN THE EXTRACTS FROM POLLEN OF DIFFERENT CULTIVARS DETERMINE ITS DEGREE OF REACTIVITY

4.-THERE ARE ALSO DIFFERENCES IN THE CONTENT OF OTHER ALLERGENS (No Ole e 1) COMPARING SEVERAL VARIETIES WHICH MAY MODIFY THE ALLERGIC RESPONSE

5.- EVEN POINT MUTATIONS IN Ole e 1 SEQUENCE OBTAINED FROM DETERMINED CULTIVARS AND VARIETIES MAY MODIFY THE REACTIVITY GIVEN THAT THEY MAY AFFECT TO AREAS INVOLUCRATED IN IMMUNE RECOGNITION

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