ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DEL microARN-21 EN LA …

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ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DEL microARN-21 EN LA PROGRESIÓN DEL CARCINOMA DE PRÓSTATA Ruth Ortiz Castro1, Martha Romero1-2, María Mercedes Torres1. 1. Universidad de los Andes, Departamento de Ciencias Biológicas, Laboratorio de Genética Humana. 2. Fundación Santa Fe de Bogotá, Departamento de Patología y Laboratorios El carcinoma de próstata (CP) es la segunda causa de cáncer en hombres en el mundo. Aunque se ha logrado avanzar en la caracterización de las alteraciones genéticas propias de esta neoplasia, se desconoce cómo dichos procesos en conjunto con otros aún desconocidos gobiernan la progresión tumoral. Se requiere estudiar las alteraciones moleculares en las diferentes fases de progresión del CP, con el fin de evaluar posibles vías de carcinogénesis que permitan la identificación de potenciales marcadores diagnóstico y pronóstico. Estudios recientes resaltan la importancia de alteraciones en los mecanismos regulatorios de expresión de genes, tales como los microARN, que funcionan como represores post-transcripcionales, inhibiendo la traducción de ARN mensajero a proteína, en contextos normales y procesos celulares esenciales en la oncogénesis. Este estudio evaluó la expresión del oncogén miR-21, en pacientes con CP estratificados clínicamente en riesgo bajo, medio y alto, en la progresión tumoral, desde el epitelio normal, neoplasia intraepitelial (PIN), carcinoma y lesiones metastásicas. Adicionalmente, dada la importancia de los cambios propios del microambiente tumoral en la progresión del CP se evaluó la expresión de miR-21 en el tejido estromal adyacente para cada fase de progresión. Nosotros identificamos cambios dinámicos de expresión de miR-21 en los compartimentos epitelial y estromal durante la progresión del CP; aquí se demuestra por primera vez que el tejido estromal en los pacientes de riesgo bajo y medio, presenta una disminución significativa del miR-21 en el estadio PIN comparado con el tejido normal. Palabras claves: carcinoma de próstata, microARN 21, componentes estromal y epitelial, progresión tumoral. INTRODUCCIÓN

El cáncer de próstata (CP) es el segundo cáncer más diagnosticado (13,6%) y la sexta causa de muerte por cáncer en hombres, en el mundo [1]. En Colombia, éste es el cáncer más frecuente en hombres (40%) y representa la segunda causa de muerte por cáncer (14,6%) [1, 2], siendo considerado un problema de salud pública.

El CP es una enfermedad heterogénea genética y fenotípicamente, en donde se han identificado factores de riesgo familiar, ambientales (obesidad, dieta,

tabaquismo) y la edad [3]; y en la cual un grupo poblacional desarrolla formas agresivas del tumor y otros una neoplasia de curso indolente. El CP se caracteriza por heterogeneidad y multifocalidad con yuxtaposición de glándulas normales, lesiones precursoras neoplásicas, o lesiones neoplásicas, con varios grados de diferenciación [4]. El proceso cancerígeno es promovido por diversos procesos que incluyen inflamación, estrés oxidativo y daño del ADN, acortamiento de telómeros, senescencia, factores genéticos, alteraciones genómicas y alteraciones

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epigenéticas [5] . Aunque se ha logrado avanzar en la caracterización de alteraciones genéticas propias del cáncer de próstata, varios genes candidatos (RB, p53, PTEN, NKX3.1) han sido implicados, basados en su localización en regiones de pérdida alélicas y en sus propiedades funcionales, pero ninguna de estos ha mostrado estar mutado en un gran porcentaje de especímenes de CP [3]. Por otro lado , las pérdidas de heterocigosidad en los cromosomas 8p, 10q, 13q, y 17q son eventos frecuentes, y las pérdidas de 6q, 7q, 16q, y 18q han sido también reportadas, aunque no están bien caracterizadas. Adicionalmente, aunque la ganancia de cromosomas parece ser menos frecuente que la pérdida de cromosomas, la ganancia de 8q y 6 son bastante comunes [3].

Sin embargo, se desconoce cómo dichas alteraciones en conjunto con otras aún desconocidas gobiernan la progresión tumoral; ya que los mecanismos precisos subyacentes al desarrollo y progresión del CP son escasamente comprendidos, y el proceso metastásico permanece incurable [6].

Lo anterior justifica la necesidad de estudiar alteraciones moleculares en las diferentes fases de progresión del CP, con el fin de evaluar posibles vías de carcinogénesis. Una mejor comprensión de los mecanismos moleculares propios del proceso tumoral permitirá la introducción de alternativas terapéuticas dirigidas a blancos específicos que permitan mejorar la sobrevida de los pacientes.

Estudios recientes resaltan la importancia de alteraciones en los mecanismos regulatorios de la expresión de genes, particularmente microARNs, los

cuales a través de la inhibición de la traducción de ARN mensajero (ARNm) a proteína, determinan procesos celulares esenciales como: diferenciación, apoptosis y proliferación [7] en contextos normales y oncogénicos. Varios microARNs han sido implicados en la etiología, progresión, y pronóstico, y sus perfiles de expresión están relacionados de forma única a varios tipos y subtipos de cáncer [8].

Entre ellos, se destaca miR-21, un oncogén, frecuentemente sobreexpresado en los tumores sólidos, que estimula la invasión celular y la capacidad de metástasis en distintos modelos tumorales (cáncer de seno, cáncer de colon y gliomas) in vitro e in vivo [9]. miR-21, es regulado por andrógenos, su sobreexpresión en CP induce el crecimiento tumoral y la resistencia a la ablación androgénica [6]. Sin embargo, se desconoce si la desregulación de dicha molécula es un evento clave en la transición de lesiones preneoplásicas a carcinoma invasivo. Estudios anteriores en otros tipos de cáncer han reportado la expresión de miR-21 en los fibroblastos del estroma [10-12]; este estroma reactivo se caracteriza, en el caso del carcinoma de próstata, por estar compuesto de una mezcla de miofibroblastos/fibroblastos con una disminución significativa o pérdida completa de músculo liso completamente diferenciado, mientras que el estroma normal de próstata es predominantemente músculo liso. Este cambio está acompañado de una elevación en la expresión de colágeno tipo I, tenascina, y proteína de activación de fibroblastos. Estas investigaciones sugieren una alteración fundamental en la biología de la célula estromal asociada con la progresión del CP,

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y la posibilidad de que este estroma reactivo probablemente regule la tasa de progresión de tumor [13].

Este estudio evaluó la expresión del oncogén miR-21 en pacientes con CP estratificados clínicamente en riesgo bajo, medio y alto. Para apreciar si los cambios de expresión se presentan con la progresión tumoral, se analizaron las diferentes fases de progresión (epitelio normal, neoplasia intraepitelial (PIN), carcinoma y lesiones metastásicas) en un mismo tumor para cada paciente. Adicionalmente, dada la importancia de los cambios propios del microambiente tumoral en la progresión del CP se evaluó la expresión del miR-21 en el tejido estromal adyacente para cada fase de progresión. MATERIALES Y MÉTODOS

Pacientes

Se evaluaron 13 pacientes con carcinoma de próstata diagnosticados en el Departamento de Urología y de Patología de la Fundación Santa Fe de Bogotá (Ver Tabla 1. Características clínicas de los pacientes), los cuales fueron manejados con prostatectomía radical. La edad media de los pacientes fue de 58.9 ± 8.4 años. El riesgo clínico fue establecido con base en los criterios D'Amico, que incluyen el nivel de Antígeno Prostático Específico (PSA), el sistema de graduación Gleason y el tamaño de la próstata, evaluado en el tacto rectal; lo que permitó clasificar a los pacientes en tres grupos de riesgo: i) riesgo bajo (n=4), ii) riesgo medio(n=2) iii) riesgo alto (n=7), en este último se encontraron tres pacientes que presentaron metástasis a ganglios regionales.

Tabla 1. Características Clínicas de los 13 pacientes con carcinoma de próstata

Porcentaje tumor

Paciente Edad Riesgo PSA* al

diagnóstico (ng/ml)

Clasificación Clínica (CAP)

Gleason Score lóbulo derecho

lóbulo izquierdo

1 43 bajo 2,6 cT2a 3+3 6 21% 3% 2 42 bajo 10,8 cT1c 3+3 6 16% 42% 3 56 bajo 4,8 cT1c 3+3 6 30% 15% 4 46 bajo 6,5 cT2a 3+3 6 30% 5 64 medio 6,99 cT1c 3+4 7 40% 6 64 medio 4,8 cT1c 3+4 7 5,8% 6,2% 7 50 alto 31 cT2a 3+4 7 10% 55% 8 61 alto 12,5 cT1c 4+3 7 20% 9 67 alto 4,6 cT2a 3+4 7 8% 2%

10 55 alto 3,8 cT2b 4+3 7 70%

11 53 alto con metástasis SD SD 4+3 7 30%

12 57 alto con metástasis 13,0 cT1c 4+3 7 44,5%

13 66 alto con metástasis SD SD 4+3 7 7,3%

*Antígeno prostático específico (PSA)

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Estudio histopatológico

Las prostatectomías fueron realizadas con objetivo terapéutico y los pacientes fueron previamente informados que parte del material restante después del diagnóstico se utilizaría con fines de investigación, para lo cual se obtuvo el consentimiento informado y la aprobación del Comité de Ética de la Fundación Santa Fe de Bogotá.

El diagnóstico y la graduación de la escala de Gleason fueron establecidos con base en los criterios de la Organización Mundial de la Salud [14] por tres patólogos de forma independiente. A partir de la coloración de hematoxilina y eosina, se realizó la identificación y microdisección manual de los compartimentos epitelial y estromal en cada fase de progresión para cada paciente: tejido normal, neoplasia intraepitelial (PIN), cáncer y tejido metastásico (Figura S1). La identificación y señalamiento fue realizado por los patólogos procurando escoger el mayor área posible del compartimento a disectar; los compartimentos epitelial y estromal fueron señalados de forma adyacente y disectados de un mismo bloque de tejido embebido en parafina.

Análisis molecular El ARN total fue extraído a partir de 6 cortes de 20µm de grosor de tejido fijado en formol y embebido en parafina utilizando el kit RecoverAll™ (Ambion). Las concentraciones de ARN recuperado (Tabla

S1) fueron medidas utilizando un espectrofotómetro NanoDrop 1000 por recomendación del fabricante del kit de extracción. La calidad del ARN extraído mostró una relación 260nm/280nm de 1,763 (en promedio) (Tabla S2), lo que se ajusta al rango esperado de 1,7-1,9 con este protocolo. La expresión de miR-21 fue analizada por RT-PCR cuantitativa utilizando el sistema de sondas TaqMan (Applied Biosystem) con retro-transcripción específica en el equipo LightCycler® 480 II de Roche [15].

La cuantificación usando los ensayos TaqMan MicroRNA se realizó en dos pasos: 1) La transcripción reversa (RT) en un termociclador MaxyGene (Marca Axygen, Cod. Therm-1000) utilizando el kit de Transcripción Reversa TaqMan MicroRNA (Applied Biosystems) y 2) los ensayos especificos TaqMan MicroRNA para microARN-21 (AB Assay ID 000397) y RNU24 (AB Assay ID 001001). La cantidad de ARN total seleccionada para la reacción de transcriptasa reversa fue de 10ng en 5ul, por indicaciones del kit, para una reacción de RT de 15ul. En el paso de PCR, los productos de PCR fueron amplificados a partir de muestras de cDNA usando los ensayos especificos TaqMan MicroRNA para microARN-21 (AB Assay ID 000397) y RNU24 (AB Assay ID 001001) junto con la TaqMan Universal PCR Master Mix. Como housekeeping se evaluó la expresión de RNU24, que fue identificado previamente [16] como el gen control endógeno más adecuado para estudios de microARNs en tejidos de próstata, partiendo de muestras embebidas en parafina.

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La expresión de miR-21 relativa al control endógeno RNU24 fue determinada por cuantificación relativa usando el método 2-ΔCT [17]. Análisis estadístico

Los valores fueron expresados como

la media del nivel de expresión de miR-21 (ΔCT) más o menos la media de la desviación estándar (SEM), normalizado al housekeeping RNU24 de tres PCRs independientes. El test de Mann Whitney [18] fue usado para comparar el nivel de expresión de miR-21, entre los diferentes compartimentos y pacientes. Diferencias fueron consideradas como significativas cuando el valor de p bilateral fue <0.05 (GraphPad software) RESULTADOS Y DISCUSION

La disección por compartimentos demostró que la expresión basal del miR-21 es predominante en el tejido estromal normal comparado con el epitelial, lo cual está de acuerdo con la expresión específica de este microARN en células fibroblastoides (Figura 1-4). Se confirma en el epitelio un incremento en la expresión de miR-21 en el tejido tumoral, siendo ésta más significativa en pacientes con cáncer de riesgo bajo y medio (Figura 1 y 2). Este resultado soporta el rol oncogénico del miR-21 previamente reportado para CP.

Al comparar pacientes estratificados

según el riesgo clínico del adenocarcinoma, se encontró una expresión del miR-21 significativamente inferior en los estadios de PIN de pacientes de alto riesgo y alto riesgo

con metástasis (Figura 3 y 4). Además, el nivel de expresión de miR-21 fue similar entre el PIN y la infiltración al tejido periprostático, sugiriendo que los niveles de expresión del miR-21 en estadios agresivos equiparan el de lesiones tempranas como el PIN.

Los cambios de expresión del miR-21 durante la progresión del carcinoma de próstata no se restringen al compartimento epitelial. Aquí se demuestra por primera vez que el tejido estromal en los pacientes de riesgo bajo y medio, presenta una disminución significativa del miR-21 en el estadio PIN comparado con el tejido normal (Figura 2).

En la actualidad no se encuentra

disponible un marcador histológico o molecular que permita hacer una predicción temprana del comportamiento biológico del CP, por lo tanto el estudio de microARNs y los resultados que se han obtenido pueden definirlos como marcadores candidatos.

miR-21 está sobreexpresado en la

mayoría de tumores y tienen un papel importante en muchas rutas involucradas en tumorogénesis; esta sobreexpresión es específica para 16 tipos de cáncer que incluyen seno, colorrectal, próstata, cervical, pulmonar, hepatocelular gástrico, de vejiga, esófago, laríngeo, pancreático, ovárico, entre otros. Una gran cantidad de evidencia soporta que miR-21 es potencialmente un factor clave para el inicio, progresión y metástasis de una amplia variedad de tipos tumorales debido a que su función tiene como blanco muchos genes supresores de tumor [19].

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Figura 1. Expresión del oncogén miR-21 en los diferentes compartimentos epiteliales y estromales en pacientes de riesgo clínico bajo.

Figura 2. Expresión del oncogén miR-21 en los diferentes compartimentos epiteliales y estromales en pacientes de riesgo clínico medio.

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Figura 3. Expresión del oncogén miR-21 en los diferentes compartimentos epiteliales y estromales en pacientes de riesgo clínico alto.

Figura 4. Expresión del oncogén miR-21 en los diferentes compartimentos epiteliales y estromales en pacientes de riesgo clínico alto con metástasis.

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Figura 5. Resultados Media del Nivel de Cambio (ΔCt) para todos los compartimentos evaluados.

Según Kriversky, et al., (2009) [20], la expresión elevada de miR-21 en los desórdenes neoplásicos humanos y su potencial regulatorio de genes supresores de tumor importantes sugiere que miR-21 puede ser usado como biomarcador diagnóstico en el manejo del cáncer. Los blancos validados de miR-21 han sido encontrados en roles significativos del ciclo celular, apoptosis, migración, diferenciación, y autorrenovación de células madre. De forma notable, rutas principales que regulan la supervivencia celular, incluyendo p53, apoptosis mitocondrial, PI3K-AKT-mTOR, y Ras, son todas blanco de miR-21; así mismo, una gran proporción de los blancos de miR-21 están involucrados en el inicio,

transformación, invasión y metástasis del cáncer [19].

A pesar de que el número de pacientes utilizado en este estudio es pequeño, se tiene la originalidad de evaluar la expresión de miR-21 en diferentes fases de la enfermedad dentro de un mismo paciente. En dicha evaluación, se evidencian las diferencias que existen en la expresión de miR-21 en las distintas fases de progresión del cáncer de próstata y no únicamente en tejido normal y tejido con cáncer, como se había reportado anteriormente; información que a futuro podría resultar útil al definir blancos predictivos en la progresión de la enfermedad y realizar estudios de expresión proteica. Así mismo, este el primer reporte

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sobre expresión diferencial de miR-21 en el estroma del carcinoma de próstata, durante la progresión del proceso neoplásico.

Las estimaciones actuales predicen que cerca del 30% de los genes humanos se encuentran regulados por algún microARN y que cada microARN tiene aproximadamente 200 transcritos blanco, en vertebrados [21]. Lu, et al., (2005) [22] fueron los primeros en demostrar que los niveles de expresión de muchos microARNs estaban significativamente reducidos en ciertos tipos de cáncer en comparación con los tejidos normales correspondientes, proponiendo que los microARNs pueden funcionar para conducir diferenciación terminal y prevenir la división celular; cambios globales en la expresión de microARNs pueden reflejar el grado de diferenciación celular.

Los estudios en carcinoma de próstata han mostrado que miR-21 tiene como blanco la proteína MARCKS (myristoylated alanine rich protein kinase c substrate), que está involucrada en procesos celulares como adhesión y motilidad celular a través de la regulación del citoesqueleto de actina [23]. En nuestro estudio los níveles de expresión de miR-21 en epitelio de cáncer fueron superiores a los níveles de expresión de los demás compartimentos epiteliales, estando la expresión de miR-21 en el compartimento epitelial metastásico de la misma forma aumentada. De igual forma, la expresión de miR-21 en el compartimento estromal de cáncer fue mayor en todos los pacientes, con respecto al estroma de la neoplasia intraepitelial (PIN).

Se han identificado otros blancos de miR-21 en carcinoma de próstata

involucrados en la remodelación de la cromatina: ANP32A y SMARCA4, genes que al estar suprimidos por la acción de miR-21 favorecen la transformación neoplásica en múltiples niveles [24]. Por otro lado, se ha reportado que miR-21 también tiene como blanco directo la proteína BMPRII (bone morphogenetic protein receptor II), asociada a la autorrenovación y diferenciación de células madre. Los niveles de esta proteína se correlacionan inversamente con la cantidad de miR-21 en células PC3 y Lncap, dos tipos diferentes de células cancerígenas de próstata con un status distinto de malignidad y metástasis; lo que sugiere que miR-21 tiene un papel potencial en la regulación de la capacidad de malignidad y metástasis de células de carcinoma de próstata, y en la regulación de la progresión de la enfermedad [25]. Estos descubrimientos refuerzan la inclusión de miR-21 como metastamiR, microARN asociado a metástasis. La expresión de miR-21 en múltiples sistemas modelo lleva a un aumento en la invasión y migración de las células cancerígenas y a una disminución de la apoptosis, procesos claves en el desarrollo del fenómeno metastásico [26]; de hecho, miR-21 también ha sido reportado como un microARN oncogénico en el crecimiento, invasión y metástasis de tumores en carcinoma de seno, teniendo acción sobre múltiples genes supresores de tumor y metástasis [27].

Las múltiples líneas de evidencia que indican que los microARNs están expresados diferencialmente en muestras normales y de tumor sugieren que los microARNs podrían servir como una herramienta útil para establecer perfiles de tumorogénesis. De hecho, estudios de

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dichos perfiles han demostrado que cada tipo de cáncer posee una firma de distintiva de expresión de microARNs [28]. Las firmas de expresión de microARNs tienen una utilidad potencial en el diagnóstico, pronóstico y predicción de la respuesta terapéutica en diversos tipos de enfermedades humanas, como en el cáncer, así como la diferenciación entre neoplasias benignas y las de tipo maligno. De igual manera, la expresión elevada de miR-21 en tumores está estrechamente asociada con el estadío avanzado y el pobre pronóstico, indicando que la expresión de miR-21 podría ser un indicador pronóstico útil, ayudando a identificar pacientes con un riesgo mayor de cáncer terminal [19].

Con respecto a los resultados obtenidos en la expresión de miR-21 en el componente estromal, estos refuerzan lo propuesto por Ayala, et al., (2003) [13] sobre el estroma reactivo en cáncer de próstata. Sus resultados indicaron que el estroma reactivo es un marcador informativo de la progresión del cáncer de próstata y que podría tener un valor pronóstico en la evaluación de pacientes con CP, particularmente con un puntaje de Gleason de 7; puntaje al que pertenecen el 70% de nuestros pacientes.

De la mismo forma, nuestros resultados de componentes estromales pueden explicarse a la luz del concepto de

dependencia estromal de los cánceres epiteliales [13]; que propone la dependencia estromal del crecimiento inicial del carcinoma, donde el estroma es permisivo y de apoyo, y es regulado a través de interacciones paracrinas con las células cancerígenas. Por lo tanto, mientras el estroma es abundante, la habilidad del carcinoma para crecer y progresar es mayor. La transición epitelio-mesénquima establece que durante los estadíos posteriores de la progresión del cáncer, las células carcinogénicas empiezan a expresar genes que normalmente están restringidos al compartimento estromal; convirtiéndose la expresión de dichos genes por parte del estroma en superflua, y dejando de ser las interacciones con el estroma limitadas por la tasa. Dicha teoría predice que las células cancerígenas se convertirían en estroma independientes funcionalmente, y el estroma pasaría a ser redundante y a disminuir en cantidad.

Nosotros identificamos cambios dinámicos de expresión de miR-21 en los compartimentos epitelial y estromal durante la progresión del carcinoma de próstata, lo que podría resultar de gran utilidad gracias al potencial de este microARN como marcador diagnóstico y pronóstico, así como blanco terapeútico del CP.

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MATERIAL SUPLEMENTARIO ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DE microARN 21 EN LA PROGRESIÓN DEL CARCINOMA

DE PRÓSTATA Ruth Ortiz Castro1, Martha Romero1-2, María Mercedes Torres1.

1.Universidad de los Andes, Departamento de Ciencias Biológicas, Laboratorio de Genética Humana. 2.

Fundación Santa Fe de Bogotá, Departamento de Patología. Tabla de Contenidos

i. Figuras Suplementarias ii. Tablas Suplementarias

i. Figuras Suplementarias

Figura S1. Ejemplo de los compartimentos epitelial y estromal en cada fase de progresión del carcinoma de próstata.

ii

Figura S2. Histograma de la variabilidas en la expresión de RNU24 housekeeping para el compartimento epitelial, en cada una de las fases evaluadas de progresión del carcinoma de próstata.

Figura S3. Histograma de la variabilidas en la expresión de RNU24 housekeeping para el compartimento estromal, en cada una de las fases evaluadas de progresión del carcinoma de próstata.

iii

ii. Tablas Suplementarias Tabla S1. Resultados Extracciones ARN Total de los 13 pacientes con carcinoma de próstata

EXTRACCIÓN ARN TOTAL

Paciente Riesgo Epitelio Normal (ng/µ l)

Estroma Normal (ng/µ l)

PIN (ng/µ l)

Estroma PIN

(ng/µ l)

Cáncer (ng/µ l)

Estroma Cáncer (ng/µ l)

Tejidos Periprostáticos

(ng/µ l)

Gánglios Metastásicos

(ng/µ l) 1 Bajo 16,9 3,7 5,0 2,1 7,5 11,7 NA NA 2 Bajo 38,2 25,0 38,0 35,5 29,9 24,3 NA NA 3 Bajo 17,2 7,1 35,8 37,7 21,2 7,6 NA NA 4 Bajo 34,8 16,9 66,8 49,1 52,6 55,4 NA NA 5 Medio 23,0 27,0 31,9 31,8 30,6 15,6 NA NA 6 Medio 63,6 30,4 63,2 19,5 87,7 34,2 NA NA 7 Alto 6,6 7,2 61,0 4,3 68,7 95,0 NA NA 8 Alto 41,0 31,0 81,7 32,5 34,5 62,9 NA NA 9 Alto 61,0 50,6 92,0 62,5 50,1 84,5 NA NA

10 Alto 31,6 27,8 35,1 22,4 66,6 19,6 17,5 NA

11 Alto con Metástasis 10,2 8,0 14,8 7,9 39,0 9,1 NA 15,3



Tabla S2. Resultados Relación 260/280 de las Extracciones de ARN Total de los 13 pacientes con carcinoma de próstata

RELACIÓN 260/280 DE LA EXTRACCIÓN DE ARN TOTAL

Paciente Riesgo

Epite

lio

Nor

mal

Estr

oma

Nor

mal

PIN

Estr

oma

PIN

Cán

cer

Estr

oma

Cán

cer

Tejid

os

Perip

rost

átic

os

Gán

glio

s M

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tási

cos

PROMEDIO

1 Bajo 1,6 1,81 2,01 4,17 1,89 1,55 NA NA 2,171666667 2 Bajo 1,74 1,68 1,62 1,64 1,62 1,67 NA NA 1,661666667 3 Bajo 1,97 2,04 1,48 1,52 2,03 2,34 NA NA 1,896666667 4 Bajo 1,87 1,97 1,6 1,6 1,65 1,57 NA NA 1,71 5 Medio 1,85 1,72 1,66 1,6 1,71 1,7 NA NA 1,706666667 6 Medio 1,85 1,9 1,9 1,75 1,91 1,91 NA NA 1,87 7 Alto 2,73 2,27 1,49 1,23 1,55 1,43 NA NA 1,783333333 8 Alto 1,75 1,68 1,6 1,52 2,01 1,5 NA NA 1,676666667 9 Alto 1,61 1,58 1,53 1,61 1,71 1,57 NA NA 1,601666667

10 Alto 1,76 1,68 1,56 1,54 1,9 1,64 1,57 NA 1,664285714

11 Alto con Metástasis 1,71 1,94 1,99 1,67 1,93 2,04 NA 1,53 1,83



PROMEDIO 1,8308 1,8069 1,6654 1,7631 1,7985 1,7223 1,57 1,7133 1,762838828

iv

Tabla S3. Resultados Expresión Relativa microARN-21 vs. RNU-24 de los 13 pacientes con carcinoma de próstata

Nivel de Cambio (ΔCT)

Paciente Riesgo Epitelio Normal

Estroma Normal PIN Estroma

PIN Cáncer Estroma Cáncer

Tejido Periprostático

Ganglios Metastásicos

1 Bajo 38,59 57,68 29,86 16,17 84,74 36,25 NA NA 2 Bajo 20,11 24,08 21,04 19,84 33,13 8,46 NA NA 3 Bajo 1,3 5,26 0,6 2,64 6,41 3,06 NA NA 4 Bajo 4,06 6,89 6,34 6,15 4,42 2,58 NA NA 5 Medio 0,01 SD 0,02 2,11 0,12 3,13 NA NA 6 Medio 17,09 9,55 18,57 19,9 35,14 43,87 NA NA 7 Alto 12,04 11,63 2,66 11,31 4,21 3,17 NA NA 8 Alto 1,52 0,63 0,51 2,46 0,05 1,26 NA NA 9 Alto SD 50,74 9,71 4,21 16,74 3,57 NA NA

10 Alto 19,16 10,2 3,9 12,08 44,02 39,4 5,43 NA




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ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DEL microARN-21 EN LA …