ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E LESÕES VESICAIS …livros01.livrosgratis.com.br/cp076440.pdf · Gabriel, Adriane Loy, 1982- G118a Aspectos epidemiológicos, clínicos e lesões

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA CENTRO DE CIÊNCIAS RURAIS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA

ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E LESÕES VESICAIS NA INTOXICAÇÃO CRÔNICA

ESPONTÂNEA POR Pteridium aquilinum EM BOVINOS

DISSERTAÇÃO DE MESTRADO

Adriane Loy Gabriel

Santa Maria, RS, Brasil 2008

Livros Grátis

http://www.livrosgratis.com.br

Milhares de livros grátis para download.

ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E LESÕES

VESICAIS NA INTOXICAÇÃO CRÔNICA ESPONTÂNEA

POR Pteridium aquilinum EM BOVINOS

por

Adriane Loy Gabriel

Dissertação apresentada ao curso de Mestrado do Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Área de Concentração em

Patologia Veterinária, da Universidade Federal de santa Maria (UFSM, RS), como requisito parcial para obtenção do grau de

Mestre em Medicina Veterinária

Orientadora: Profª. Glaucia Denise Kommers

Santa Maria, RS, Brasil

2008

Gabriel, Adriane Loy, 1982-

G118a

Aspectos epidemiológicos, clínicos e lesões

vesicais na intoxicação crônica espontânea por Pteridum aquilinum em bovinos / por Adriane Loy Gabriel ; orientador Gláucia Denise Kommers. - Santa Maria, 2008. 104 f. ; il. Dissertação (mestrado) – Universidade Federal de Santa Maria, Centro de Ciências Rurais, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, RS, 2008.

1. Medicina veterinária 2. Doença de bovinos 3. Plantas tóxicas 4. Pteridum aquilinum 5. Hematúria enzoótica bovina 6. Carcinoma de células escamosas do trato digestório 7. Patologia veterinária I. Kommers, Glaucia Denise, orient. II. Título

CDU: 619:636.2

Ficha catalográfica elaborada por Luiz Marchiotti Fernandes – CRB 10/1160 Biblioteca Setorial do Centro de Ciências Rurais/UFSM C 2008 Todos os direitos autorais reservados a Adriane Loy Gabriel. A reprodução de partes ou do todo deste trabalho só poderá ser feita com autorização por escrito do autor. Endereço: caixa postal 40, São Vicente do Sul, RS, 97420-000 Endereço eletrônico: [email protected]

Universidade Federal de Santa Maria

Centro de Ciências Rurais Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária

A Comissão Examinadora, abaixo assinada, aprova a Dissertação de Mestrado

ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E LESÕES VESICAIS NA INTOXICAÇÃO CRÔNICA ESPONTÂNEA POR Pteridium aquilinum

EM BOVINOS

elaborada por Adriane Loy Gabriel

como requisito parcial para obtenção do grau de Mestre em Medicina Veterinária

COMISSÃO EXAMINADORA:

Glaucia Denise Kommers, PhD (UFSM) (Presidente/Orientadora)

Claudio Severo Lombardo de Barros, PhD (UFSM)

David Driemeier, Dr. (UFRGS)

Santa Maria, 16 de dezembro de 2008

RESUMO

Dissertação de Mestrado Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária


ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E LESÕES VESICAIS NA INTOXICAÇÃO CRÔNICA ESPONTÂNEA POR Pteridium aquilinum EM BOVINOS

AUTORA: ADRIANE LOY GABRIEL ORIENTADORA: GLAUCIA DENISE KOMMERS

Data e local da defesa: Santa Maria, 16 de dezembro de 2008. Foram estudados casos espontâneos de intoxicação crônica por samambaia em bovinos nas formas clinicopatológicas de carcinoma de células escamosas (CCE) no trato alimentar superior (TAS) e de hematúria enzoótica bovina (HEB), provenientes da Mesorregião Centro Ocidental do Rio-Grandense e encaminhados ao Laboratório de Patologia Veterinária (LPV) da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Para o estudo epidemiológico, foi avaliado o perfil das propriedades quanto à finalidade da criação, principal atividade da propriedade, altitude e área de infestação pela planta. Quanto a esses parâmetros, as propriedades com uma ou outra forma de intoxicação crônica não apresentaram diferenças. Foi determinado o perfil dos bovinos afetados quanto à idade, sexo e raça. Os mais afetados por ambas as formas clínicas foram fêmeas de raça mista (predominante na região). Na HEB houve predomínio de bovinos adultos (três a sete anos) e a forma de CCEs no TAS afetou mais bovinos idosos (mais de oito anos). Para o estudo clínico foram avaliados os sinais clínicos de bovinos com CCEs no TAS e com HEB e realizados hemogramas na fase terminal da doença. Os principais sinais clínicos nos bovinos com CCEs no TAS foram emagrecimento progressivo, atonia ruminal, tosse, disfagia, timpanismo, regurgitação e hematúria, vista em um caso. Nos bovinos com HEB, hematúria foi o principal sinal, observado em todos os casos, seguido de emagrecimento progressivo. No exame hematológico, 33,33% dos bovinos com CCEs no TAS e 66,67% dos bovinos com HEB apresentaram anemia arregenerativa. Alterações no leucograma ocorreram em alguns casos, mas linfopenia foi um achado infreqüente em ambas as formas de intoxicação. Para o estudo morfológico, foram avaliadas as bexigas de 46 casos de CCEs no TAS e de 11 casos de HEB. Macroscopicamente, 16/46 bexigas dos casos de CCEs no TAS apresentaram alterações macroscópicas, que foram nódulos vermelhos ou pálidos, hemorragia e papilomas; urina vermelha foi observada em três casos. Nos casos de HEB, os achados macroscópicos vesicais foram nódulos vermelhos, massas neoplásicas focalmente extensas, urina vermelha, papilomas, hemorragias e ruptura de bexiga; pielonefrite e hidronefrose foram observados em poucos casos. Histologicamente, 44/46 (95,65%) bexigas de bovinos com CCEs no TAS apresentaram 22 tipos diferentes de alterações morfológicas, que foram classificadas em alterações neoplásicas (5/22) e alterações não-neoplásicas (17/22), as quais foram divididas em alterações epiteliais não-neoplásicas (6/17), alterações gerais na lâmina própria (6/22) e alterações inflamatórias (5/17). Os achados histológicos das bexigas dos casos de HEB foram classificados da mesma forma, resultando em 19 tipos diferentes de alterações morfológicas. Dessas, 5/19 eram alterações neoplásicas e 14/19, alterações não-neoplásicas (9/14 alterações epiteliais não neoplásicas, 3/14 alterações gerais na lâmina própria e 2/14 alterações inflamatórias). Na HEB, os neoplasmas mesenquimais foram mais observados que os epiteliais, e a maior parte era maligno. A técnica de imuno-histoquímica foi utilizada para caracterizar os aspectos morfológicos, principalmente dos neoplasmas. Através do estudo morfológico concluiu-se que é muito freqüente a ocorrência de lesões vesicais em bovinos com a forma crônica de CCEs no TAS e que essas são idênticas às encontradas nos bovinos com HEB. Palavras-chave: doenças de bovinos; plantas tóxicas; Pteridium aquilinum; hematuria enzoótica bovina; carcinoma de células escamosas do trato digestório; patologia veterinária.

ABSTRACT

MS Dissertation Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária


EPIDEMIOLOGICAL AND CLINICAL ASPECTS AND URINARY BLADDER LESIONS IN SPONTANEOUS CHRONIC POISONING BY Pteridium aquilinum IN

CATTLE AUTHOR: ADRIANE LOY GABRIEL

ADVISER: GLAUCIA DENISE KOMMERS Santa Maria, December 16, 2008

Spontaneous cases of chronic poisoning by Pteridium aquilinum in cattle were studied. The clinical forms of the disease were squamous cell carcinoma (SCCs) of the upper digestive tract (UDT) and bovine enzootic hematuria (BEH). The cases were from the midland Region of the Midwest of Rio Grande do Sul State, Brazil. For the epidemiological study, the profile of the farms was analyzed about herd purpose, main activity of the farm, altitude, and area of plant infestation. No differences were observed among the clinical forms, according to these criteria. Analysis of the ager, gender, and breed of the affected cattle revealed that, in both clinical forms of disease, mixed breed cows (more common in that region) were more affected. In BEH, adult cattle (3-to-7-years-old) were more frequently affected. In the form of UDT SCCs, aged cattle (more than 8-years-old) were more affected. For the clinical study, clinical signs and blood work were evaluated at terminal phase of disease. Cattle with UDT SCCs, had progressive weigth loss, ruminal atony, cough, dysphagia, bloating, and regurgitation. Hematuria was clinically observed in one case of this disease form. In cattle with BEH, hematuria was observed in all cases, followed by progresive weigth loss. Non-regenerative anemia was detected in 33.33% in UDT SCCs form and in 66.66% of BEH form. Changes in white blood count occurred in some cases but drop in lymphocytes was uncommon in both forms of disease. For the morfological study, urinary bladders of 46 UDT SCCs cases and 11 BEH cases were analyzed. Grossly, 16/46 bladders of the UDT SCCs form had gross lesions (vesical red or pale nodules, hemorrhages, and papilomas; red urine in the three cases). In BEH form, the bladder had nodules, large neoplastic masses, red urine, papilomas, and hemorrhages. Pielonephritis and hidronephosis were seen in a few cases. Microscopically, in the UDT SCCs form, 44/46 (95.65%) bladders had 22 different types of morphological changes, caracterized by neoplastic lesions (5/22) and non-neoplastic lesions (17/22), which were subdivided in non-neoplastic epithelial changes (6/17), general changes of the lamina propria (6/17), and inflammatory changes (5/17). The bladder changes in BEH form were of 19 different types, caracterized by neoplastic lesions (5/19) and non-neoplastic lesions (14/19), which were subdivided in non-neoplastic epitelial changes (9/14), general changes of the lamina propria (3/14), and inflammatory changes (2/14). In BEH, mesenchymal neoplasms were more observed than epithelial ones, and most of them were malignant. Immunohistochemistry was utilized to characterize the histogenesis of poorly differentiated neoplasms. In conclusion, the morfological study showed that urinary bladder lesions are very often in cattle with the UDT SCCs form, and were identical to the ones seen in cattle with BEH. Key-words: diseases of cattle; toxic plants; Pteridium aquilinum; bovine enzootic hematuria; squamous cell carcinomas of the digestive system; veterinary pathology.

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1 - Esfregaço sanguíneo; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Grande quantidade de neutrófilos no esfregaço sanguíneo deste bovino que apresentou leucocitose por neutrofilia. Este mesmo animal estava anêmico e não foram observados sinais indicativos de regeneração medular. Panótico rápido (Obj. 20X) ......................................................................................................54 FIGURA 2 - Hemangioma; bexiga; Bovino 74; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Nódulo vermelho-escuro, único, na mucosa vesical (peça fixada). ...................................................................................................54 FIGURA 3 - Hemangiomas; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Nódulos vermelhos, múltiplos e de tamanhos variados e hemorragias multifocais na mucosa. Há urina com sangue na luz vesical...................................................................................................................................................54 FIGURA 4 - Hemangiomas; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação da Figura 3. Nódulos vermelhos de 0,2 e 0,5 cm de diâmetro. ...................................................................................54 FIGURA 5 - Hemorragia; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Hemorragias leves e multifocais na mucosa vesical. .........................................................................................................................55 FIGURA 6 - Carcinoma de células de transição; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Nódulos discretos, branco-amarelados, múltiplos e de tamanhos variados na mucosa vesical (setas)...................55 FIGURA 7 - Papiloma; bexiga; Bovino 67; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Papilomas multifocais na mucosa vesical (peça fixada).......................................................................................................................................55 FIGURA 8 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Papiloma na mucosa vesical (peça fixada). .........55 FIGURA 9 - Urina vermelha; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Grande quantidade de urina vermelho-escura na bexiga. Observam-se também nódulos e hemorragias na mucosa vesical. ..............56 FIGURA 10 - Urina vermelha; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Urina vermelho-escura na bexiga sendo retirada com uma seringa..........................................................................................................56 FIGURA 11 - Urina vermelha pós-centrifugação; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Observa-se grande quantidade de sedimento vermelho-escuro no fundo do tubo de ensaio (microscopicamente esse sedimento corresponde a eritrócitos). Há também marcado avermelhamento do sobrenadante devido à hemólise pelo tempo transcorrido entre morte e coleta. ............................................56

FIGURA 12 - Carcinoma de células escamosas (CCE); trato alimentar superior (TAS); Bovino 40; forma clínica de CCEs no TAS. Úlcera focalmente extensa na orofaringe. Bolo alimentar impactado caudalmente a epiglote............................................................................57 FIGURA 13 - Carcinoma de células escamosas (CCE); trato alimentar superior (TAS); Bovino 40; forma clínica de CCEs no TAS. Na superfície de corte da orofaringe há uma extensa área de necrose. Observam-se ainda papilomas na orofaringe e pequenas áreas ulceradas na epiglote. ...............................................................................................................57 FIGURA 14 - Estroma mixóide/carcinoma de células de transição/hemangioma; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Nódulos pálidos e pequenos nódulos vermelhos multifocais na mucosa vesical. ......................................................................................................................................57 FIGURA 15 - Hemangioma; bexiga; Bovino 36; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há um nódulo vermelho na mucosa e um coágulo de sangue na luz vesical. .............58 FIGURA 16 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Massa tumoral exofítica de 20 x 28 cm de superfície irregular, branco-amarelada com áreas vermelhas, localizada na região do trígono da bexiga. ..........................58 FIGURA 17 - Carcinoma de células escamosas; bexiga; Bovino 5; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Massa tumoral exofítica de superfície irregular e amarela que se estende para a luz vesical. Há conteúdo necrótico sobre a massa tumoral e na luz da bexiga. 58 FIGURA 18 - Carcinoma de células de transição; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Massa tumoral endofítica, com a superfície extensamente ulcerada, recoberta por fibrina, localizada no trígono da bexiga. Há úlceras menores localizadas no corpo da bexiga. ................................................................................................58 FIGURA 19 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). A luz vesical está preenchida por uma massa exofítica amarela e necrótica (peça fixada). ............................................................................................................................59 FIGURA 20 - Metástase de hemangiossarcoma; linfonodo da cavidade pélvica; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observam-se áreas branco-amareladas extensas que obliteram parcialmente a arquitetura nodal de um linfonodo da cavidade pélvica (peça fixada). ............................................................................................................................59 FIGURA 21 - Cistite polipóide; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há projeções multifocais, alongadas e de consistência gelatinosa na mucosa vesical. ......................................................................................................................................60 FIGURA 22 - Cistite polipóide/hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observam-se as mesmas projeções da Figura 21, adjacentes ao hemangiossarcoma (peça fixada). ......................................................................60 FIGURA 23 - Hidronefrose e hidroureter; bexiga, ureteres e rins; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). A bexiga está repleta de urina e os ureteres estão acentuada e difusamente dilatados. Note aumento de volume que se projeta por sobre a uretra...................................................................................................................................................61 FIGURA 24 - Hidronefrose; rim; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Os cálices renais estão multifocalmente dilatados.......................................................61 FIGURA 25 - Hidronefrose; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Cálices acentuadamente dilatados com atrofia da região medular renal. ....................61 FIGURA 26 - Pielonefrite; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). A cápsula renal está espessada e aderida. Há exsudato purulento sobre a superfície capsular do rim. ........................................................................................................................62 FIGURA 27 - Pielonefrite; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Na superfície capsular observam-se áreas multifocais ou coalescentes branco-amareladas. ...............................................................................................................................62

FIGURA 28 - Pielonefrite/hidronefrose; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Ao corte, o rim está repleto de líquido branco-amarelado e turvo (pus). Observam-se áreas branco-amareladas na cortical. ..................................................................62 FIGURA 29 - Carcinoma de células de transição; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Pressionando-se o ureter correspondente ao rim da Figura 28, o líquido turvo fluía, misturando-se ao conteúdo sanguinolento da luz vesical.................62 FIGURA 30 - Urina vermelha (bexiga)/urina turva (rim); Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observa-se a urina vermelha contida na luz vesical e a urina turva contida no rim (com pielonefrite) nos tubos de ensaio. .........................................62 FIGURA 31 - Urina turva pós-centrifugação; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Após a centrifugação da urina, observou-se a formação de grande quantidade de sedimento amarelado-acinzentado. ...................................................................62 FIGURA 32 - Sedimento urinário; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Através do exame do sedimento urinário observado na figura 31, evidencia-se grande quantidade de neutrófilos degenerados (indicativo de piúria) e células epiteliais descamadas. Note que algumas células epiteliais são alongadas (setas), um aspecto morfológico típico de células da pelve renal (Obj. 40X). ............................................................................................62 FIGURA 33 - Fibroma; bexiga; Bovino 6; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há proliferação de células fusiformes em feixes dispostos em várias direções formando um nódulo discreto na lâmina própria delimitado por cápsula delicada. Hematoxilina-eosina (Obj. 4X). ...................................................................63 FIGURA 34 - Hemangioma cavernoso; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há proliferação de células endoteliais neoplásicas formando numerosos espaços vasculares repletos de eritrócitos na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X).....................................................................63 FIGURA 35 - Hemangioma cavernoso; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação da Figura 34. Observam-se células endoteliais neoplásicas bem diferenciadas, revestindo os espaços vasculares separados por septos conjuntivos. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X)......................63 FIGURA 36 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Papiloma na bexiga. Hematoxilina-eosina. Aspecto submacroscópico. ...........................................................................................63 FIGURA 37 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células epiteliais bem diferenciadas formando projeções arranjadas sobre um delicado estroma fibrovascular. Hematoxilina-eosina (Obj. 4X). ...............................................................................................63 FIGURA 38 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação de uma das projeções observadas na Figura 37. As células proliferadas são muito semelhantes às células do epitélio de transição (urotélio) normal. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X).............................................63 FIGURA 39 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 67; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células endoteliais moderadamente diferenciadas formando projeções para o interior dos vasos neoplásicos. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). .............................................................................................64 FIGURA 40 - Carcinoma de células de transição (CCT) tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células epiteliais neoplásicas, as quais invadem a lâmina própria subjacente. Há edema acentuado e infiltrado linfoistioplasmocítico na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X).................................................................................64

FIGURA 41 - Carcinoma de células de transição (CCT) tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação da Figura 40. Células neoplásicas acentuadamente pleomórficas, com núcleos grandes ou pequenos, de formas variadas com um ou dois nucléolos evidentes e citoplasma eosinofílico abundante, às vezes vacuolizado. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). ....................................................................................................................64 FIGURA 42 - Displasia; bexiga; Bovino 75; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há aumento do número de camadas e perda da orientação das células uroteliais, com vacuolização citoplasmática em algumas delas e núcleos de tamanhos e padrões de cromatina diferentes. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). 64 FIGURA 43 - Bexiga controle; Bovino 95. Epitélio de transição sem alteração, para comparação com as Figuras 42 e 44. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). ..................................64 FIGURA 44 - Vacúolos intraepiteliais; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há numerosos vacúolos no epitélio de transição. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). ...........................................................64 FIGURA 45 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 62; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células epiteliais formando ninhos na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X)....................................65 FIGURA 46 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 62; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação da Figura 45. As células epiteliais são muito semelhantes às células do urotélio normal. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). .........................................................................................................................................65 FIGURA 47 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Formação de ninhos de Brunn na lâmina própria. Há edema acentuado e infiltrado inflamatório linfoplasmocítico moderado. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). .............................................................................................65 FIGURA 48 - Hiperplasia; bexiga; Bovino 62; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Observa-se um maior número de camadas de células no epitélio de transição (entre 15-20 camadas). Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). .........................................................................................................................................65 FIGURA 49 - Cistite cística; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células epiteliais formando cistos, contendo material amorfo eosinofílico intraluminal. Observam-se ainda ninhos de Brunn na lâmina própria (setas). Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). ........................65 FIGURA 50 - Cistite cística; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). A parede do cisto é formada por duas a três camadas de células epiteliais achatadas e contém material eosinofílico amorfo intraluminal. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X).........................................................................65 FIGURA 51 - Cistite cística; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Os cistos contém material fortemente PAS-positivo intraluminal. Técnica do PAS (Obj. 20X). ........................................................66 FIGURA 52 - Dilatação de vasos linfáticos; bexiga; Bovino 74; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Observa-se acentuada dilatação de um vaso linfático na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). ..............66 FIGURA 53 - Tumefação de células endoteliais; bexiga; Bovino 22; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). As células endoteliais de vasos da lâmina própria estão marcadamente tumefeitas. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X).................................................................................................................................66

FIGURA 54 - Hemorragia; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há hemorragia acentuada na lâmina própria. Observa-se diapedese de eritrócitos pelo urotélio. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). 66 FIGURA 55 - Estroma mixóide; bexiga; Bovino 41; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Estroma mixóide azul alciano-positivo observado na lâmina própria da bexiga. Técnica do azul alciano. Aspecto submacroscópico.66 FIGURA 56 - Estroma mixóide; bexiga; Bovino 41; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há proliferação de células fusiformes ou estreladas arranjadas frouxamente e envoltas por matriz eosinofílica, formando um nódulo bem delimitado na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 4X). .......................................67 FIGURA 57 - Estroma mixóide; bexiga; Bovino 41; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). A matriz que envolve as células é fortemente azul alciano-positivo. Técnica do azul alciano (Obj. 4X). .....................................67 FIGURA 58 - Infiltrado linfoistioplasmocítico; bexiga; Bovino 62; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há acentuado infiltrado inflamatório, composto por linfócitos, plasmócitos e histiócitos na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). .............................................................................................67 FIGURA 59 - Folículos linfóides; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Observam-se agregados de linfócitos, plasmócitos e histiócitos organizados, formando folículos linfóides na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). .............................................................................................67 FIGURA 60 - Cistite fibrinossupurativa; bexiga; Bovino 74; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há necrose do epitélio de transição, acúmulo de fibrina, infiltrado neutrofílico acentuado e agregados bacterianos basofílicos intralesionais. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X).....................................................67 FIGURA 61 - Hemangioma capilar; bexiga; Bovino 4; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células endoteliais neoplásicas bem diferenciadas que formam espaços vasculares irregulares, às vezes contendo eritrócitos, separados por um fino estroma conjuntivo. Hematoxilina-eosina (Obj. 4X). ............................................................................67 FIGURA 62 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 64; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há proliferação de células endoteliais formando projeções para o interior dos espaços vasculares neoplásicos. As células neoplásicas têm núcleos grandes redondos ou ovais com cromatina periférica e um ou dois nucléolos evidentes e citoplasma eosinofílico com limites citoplasmáticos indistintos. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). .............................68 FIGURA 63 - Carcinoma de células escamosas; bexiga; Bovino 5; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de ceratinócitos neoplásicos formando ilhas com ceratinização lamelar concêntrica central (pérolas de ceratina). Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). .........................................................................................................................................68 FIGURA 64 - Carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células neoplásicas formando ninhos, fitas, cordões e pequenos agregados que invadem a submucosa. Há moderada reação desmoplásica entre as células neoplásicas. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). .........................................................................................................................................68 FIGURA 65 - Carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observam-se células neoplásicas no interior de um vaso linfático da submucosa. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X)...................................................................................................................................................68 FIGURA 66 - Metástase de carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; linfonodo renal; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB).

Há células epiteliais neoplásicas nos seios trabeculares do linfonodo. As células neoplásicas são acentuadamente pleomórficas e observam-se mitoses. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X) .68 FIGURA 67 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 4; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células endoteliais neoplásicas na lâmina própria formando espaços vasculares contendo poucos eritrócitos e áreas sólidas. Há ainda vacuolização do epitélio de transição. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). ...........................................................68 FIGURA 68 - Hemangiossarcoma pouco diferenciado; bexiga; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células neoplásicas altamente pleomórficas. Os núcleos têm tamanhos e formatos variados com cromatina frouxa e nucléolos pouco evidentes. O citoplasma é eosinofílico e escasso, com limites citoplasmáticos indistintos. Observa-se uma mitose (seta). Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). .........................69 FIGURA 69 - Metástase de hemangiossarcoma pouco diferenciado; linfonodo da cavidade pélvica; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células neoplásicas nos seios subcapsulares do linfonodo. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). 69 FIGURA 70 - Vacúolos intraepiteliais; bexiga; Bovino 4; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há vacúolos no epitélio de transição. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). .........................................................................................................................................69 FIGURA 71 - Cistite polipóide; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observam-se projeções recobertas por epitélio de transição, com edema acentuado na lâmina própria. Hematoxilina-eosina. Aspecto submacroscópico......................69 FIGURA 72 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células epiteliais formando estruturas glandulares na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X).................................................................................69 FIGURA 73 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Magnificação da Figura 72. As células epiteliais contém no citoplasma vacúolos repletos de um conteúdo fracamente basofílico. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). .69 FIGURA 74 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). O material fracamente basofílico, observado no citoplasma das células epiteliais da FIGURA 73, apresenta-se fortemente azul alciano-positivo. Técnica do azul alciano (Obj. 10X). ...................................................................................................................70 FIGURA 75 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). O material observado nos vacúolos das células epiteliais proliferadas é fortemente PAS-positivo. Técnica do PAS (Obj. 40X)............................................................70 FIGURA 76 - Metaplasia escamosa; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observa-se a proliferação de células do urotélio, as quais sofrem diferenciação escamosa à medida que se aproximam da luz vesical. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). .......70 FIGURA 77 - Pielonefrite; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há acentuado infiltrado neutrofílico na luz tubular e no interstício renal, necrose tubular multifocal, espessamento da cápsula de Bowman e fibrose moderada. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). ....................................................................................................................70 FIGURA 78 - Pielonefrite; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há infiltrado neutrofílico acentuado na luz tubular e fibrose intersticial. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). ....................................................................................................................70 FIGURA 79 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Há forte imunomarcação das células epiteliais proliferadas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 40X). ....................................................................70 FIGURA 80 - Carcinoma de células escamosas; bexiga; Bovino 5; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina.

Observa-se forte imunomarcação das células neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidade (Obj. 20X)..............................................................................................................71 FIGURA 81 - Carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Moderada imunomarcação das células epiteliais neoplásicas na lâmina própria. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 20X). .........................................................................71 FIGURA 82 - Carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Observam-se ninhos, fitas, pequenos agregados e células individuais fortemente imunomarcadas na submucosa. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 20X)..................................................................................................71 FIGURA 83 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Observa-se imunomarcação das células epiteliais dos ninhos de Brunn e do epitélio de revestimento. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj.20X).........72 FIGURA 84 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Magnificação da Figura 83. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 40X). .............................................................................................................72 FIGURA 85 - Metaplasia escamosa; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Observa-se forte imunomarcação das células do urotélio. Método estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 20X)...................................................................................................................................................72 FIGURA 86 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Há forte imunomarcação das células epiteliais, com conteúdo intracitoplasmático fortemente azul alciano-positivo. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase, contracorado com azul alciano e hematoxilina de Harris (Obj. 10X). .......................................................................................72 FIGURA 87 - Cistite glandular e carcinoma de células de transição (CCT) tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Há proliferação de células epiteliais bem diferenciadas formando estruturas semelhantes a glândulas, contendo material azul alciano-positivo intracitoplasmático (cistite glandular). Subjacente, observa-se a proliferação de células epiteliais neoplásicas, formando ninhos que invadem a lâmina própria (CCT). Método da estreptavidina-biotina-peroxidase, contracorado com azul alciano e hematoxilina de Harris (Obj. 20X).................................................................................................................................72 FIGURA 88 - cistite glandular; bexiga; Vovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Magnificação da Figura 87. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase, contracorado com azul alciano e hematoxilina de Harris (Obj. 40X). ..........................................................................................72 FIGURA 89 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-vimentina. Observa-se forte imunomarcação das células neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidade (Obj. 20X). .........................................................................................................................................73 FIGURA 90 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 4; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-fator de von Willebrand. Há imunomarcação de células endoteliais neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 20X). .............................................................................................................73

FIGURA 91 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 64; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-fator de von Willebrand. Há forte imunomarcação das células endoteliais neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 40X). .............................................................................................................73 FIGURA 92 - Hemangiossarcoma pouco diferenciado; bexiga; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-fator de von Willebrand. Observa-se imunomarcação de poucas células neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 40X). .........................................................................73

LISTA DE TABELAS

TABELA 1 – Classificação histológica das lesões neoplásicas observadas nos casos de hematúria enzoótica bovina (HEB). .........................................................................................51

LISTA DE ESQUEMAS

ESQUEMA 1 – Classificação das alterações histológicas observadas nas bexigas dos bovinos cronicamente intoxicados por samambaia (Pteridium aquilinum). Os critérios utilizados basearam-se em alterações vesicais descritas para humanos (MURPHY et al., 2004) e animais (PEIXOTO et al., 2003; SARDON et al., 2005; CARVALHO et al., 2006). ..........................41

LISTA DE GRÁFICOS

GRÁFICO 1 – Altitude das propriedades afetadas pelas formas crônicas da intoxicação por samambaia (Pteridium aquilinum). ..........................................................................................44 GRÁFICO 2 – Idade dos bovinos afetados pelas formas crônicas da intoxicação por samambaia (Pteridium aquilinum). ..........................................................................................44

LISTA DE QUADROS

QUADRO 1 - Achados hematológicos na hematúria enzoótica bovina (HEB).......................26 QUADRO 2 – Número de propriedades e de bovinos avaliados em cada parâmetro estudado...................................................................................................................................................37

LISTA DE APÊNDICES

APÊNDICE A – Casos de intoxicação crônica por samambaia (P. aquilinum), dados do bovino afetado e parâmetros avaliados.....................................................................................93 APÊNDICE B - Hemograma dos bovinos cronicamente intoxicados por samambaia, forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). ........97 APÊNDICE C - Hemograma dos bovinos cronicamente intoxicados por samambaia, forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB)..........................................................................99 APÊNDICE D – Alterações histopatológicas observadas nas bexigas dos bovinos com carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). ......................100 APÊNDICE E – Alterações histopatológicas observadas nas bexigas dos bovinos com hematúria enzoótica bovina (HEB). .......................................................................................104

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO ................................................................................................................19 2 REVISÃO DE LITERATURA........................................................................................21 2.1 Considerações gerais sobre Pteridium aquilinum .......................................................21 2.2 Formas clínicopatológicas de intoxicação por P. aquilinum em bovinos..................21 2.3 Epidemiologia da intoxicação crônica .........................................................................22 2.4 Alterações clínico-hematológicas na intoxicação crônica ..........................................24 2.4.1 Sinais clínicos ...............................................................................................................24 2.4.2 Aspectos hematológicos ...............................................................................................25 2.5 Alterações morfológicas na intoxicação crônica .........................................................27 2.5.1 Alterações macroscópicas.............................................................................................27 2.5.2 Alterações histopatológicas ..........................................................................................28 2.6 Etiopatogênese na intoxicação crônica ........................................................................31 2.6.1 Carcinogênese química.................................................................................................31 2.6.2 Infecção pelo papilomavírus bovino tipo 2 (BPV-2)....................................................32 2.6.3 Reprodução experimental .............................................................................................33 2.7 Imuno-histoquímica (IHQ) nos neoplasmas vesicais..................................................36 3 MATERIAIS E MÉTODOS ............................................................................................37 3.1 Casos estudados e parâmetros analisados ...................................................................37 3.2 Epidemiologia ................................................................................................................38 3.3 Aspectos clínico-hematológicos ....................................................................................38 3.4 Aspectos morfológicos ...................................................................................................39 3.5 Estudo imuno-histoquímico ..........................................................................................40 4 RESULTADOS E DISCUSSÃO .....................................................................................42 4.1 Resultados ......................................................................................................................42 4.1.1 Epidemiologia...............................................................................................................42 4.1.2 Aspectos clínico-hematológicos ...................................................................................43 4.1.3 Aspectos morfológicos .................................................................................................46 4.1.4 Imuno-histoquímica......................................................................................................53 4.2 Discussão ........................................................................................................................74 6 CONCLUSÕES.................................................................................................................83 7 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...........................................................................85

1 INTRODUÇÃO

A samambaia (Pteridium aquilinum) é uma planta de grande importância e ampla

distribuição que causa diversos quadros clínicos de intoxicação em animais domésticos

(TOKARNIA et al., 1979). Em bovinos ela é conhecida por causar três quadros clínicos de

intoxicação, um agudo e dois crônicos. As formas crônicas são os carcinomas de células

escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS; SOUTO et al., 2006a) e a hematúria

enzoótica bovina (HEB; SOUTO et al., 2006b). Ambas as formas são responsáveis por

grandes perdas econômicas em regiões endêmicas (RIET-CORREA; MEDEIROS, 2001),

porém a prevalência dessas formas varia de região para região (TOKARNIA et al., 1969).

A concentração dos princípios tóxicos pode variar dependendo de condições

geográficas e ambientais (HIRONO et al., 1973; VILLALOBOS-SALAZAR, 1999) e talvez

influenciar na ocorrência de uma ou outra forma crônica de intoxicação (GAVA et al., 2002).

A idade dos bovinos, a quantidade de planta ingerida e o tempo de ingestão também estão

diretamente relacionados ao tipo de intoxicação observada (DÖBEREINER et al., 1967).

Foi observada a coexistência de lesões das formas crônicas de intoxicação e, nesses

casos, a lesão mais acentuada, aquela que finalmente causa o aparecimento dos sinais clínicos

mais evidentes, parece determinar o tipo de forma clínica apresentada pelo animal

(DÖBEREINER et al., 1967; TOKARNIA et al., 1969).

Nos últimos anos, estudos das formas crônicas de intoxicação espontânea por P.

aquilinum têm sido realizados no Laboratório de Patologia Veterinária (LPV) da UFSM

(SOUTO, 2005; SOUTO et al., 2006b; MASUDA, 2007). Nesses trabalhos sempre foram

enfatizadas as alterações características de uma ou de outra forma clínica crônica, porém a

sobreposição das formas não foi contemplada nos mesmos, especialmente a avaliação das

lesões vesicais nos casos da forma crônica de CCEs no TAS. A forma aguda da intoxicação

também tem sido estudada no LPV-UFSM (ANJOS et al.,2008).

Os objetivos gerais deste estudo foram avaliar parâmetros epidemiológicos, clínico-

hematológicos e morfológicos das formas crônicas de intoxicação por P. aquilinum. Para o

estudo epidemiológico foram avaliados aspectos relacionados às propriedades e aos bovinos

afetados. Os aspectos clínico-hematológicos foram avaliados pelos sinais clínicos e as

alterações hematológicas na fase terminal da doença. Para o estudo morfológico foram

estudadas as lesões vesicais observadas em ambas as formas de intoxicação crônica. O

20

presente trabalho foi realizado a partir de materiais recebidos pelo LPV-UFSM, entre 2003 e

2008.

2 REVISÃO DE LITERATURA

2.1 Considerações gerais sobre Pteridium aquilinum

Pteridium aquilinum é uma planta pertencente à família Polypodiacea, conhecida

pelos nomes populares de “samambaia”, “samambaia do campo” ou “pluma” (TOKARNIA et

al., 2000). Ela é considerada uma das plantas tóxicas mais importantes em todo o mundo,

principalmente devido à sua extensa distribuição e pelos diversos quadros clínicopatológicos

que provoca em animais domésticos (TOKARNIA et al., 1979). A ingestão de outras

samambaias como P. revolutum, encontrada no sul da Ásia, P. esculentum e Cheilanthes

sieberi, encontrada na Austrália, também induz intoxicação crônica com quadro clínico de

hematúria enzoótica (NEWMAN et al., 2007).

A samambaia tem por habitat ideal regiões frias e montanhosas, com boa pluviosidade,

solos ácidos, bem drenados, porém se adapta em outros ambientes. P. aquilinum subesp.

caudatum var. arachnoideum é a única descrita no Brasil (RIET-CORREA et al., 2007), e

ocorre principalmente nas regiões montanhosas, desde o sul da Bahia até o Rio Grande do

Sul, mas também é invasora nos estados de Amazonas, Acre, Mato Grosso e Pernambuco

(TOKARNIA et al., 2000).

2.2 Formas clínicopatológicas de intoxicação por P. aquilinum em bovinos

Em bovinos, são descritas três formas clínicas de intoxicação, sendo uma forma aguda

chamada de síndrome hemorrágica aguda (SHA) ou diátese hemorrágica (ANJOS et al., 2008)

e duas formas de intoxicação crônica que são a hematúria enzoótica bovina (HEB; SOUTO et

al., 2006b) e os carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS;

SOUTO et al., 2006a).

A SHA acomete principalmente bovinos jovens, com menos de dois anos de idade,

que ingerem doses diárias maiores que 10 g/Kg da planta (10 a 30 g/Kg) por algumas semanas

a poucos meses (TOKARNIA et al., 1979). Os bovinos afetados apresentam febre, andar

22

cambaleante, sialorréia, depressão, perda de apetite, emagrecimento, fezes com sangue e/ou

coágulos de sangue (BARROS et al., 1987) e hemorragias na pele e mucosas visíveis

(TOKARNIA et al., 2000). Macroscopicamente, observam-se hemorragias em todos os

órgãos e eventualmente úlceras nas mucosas (TOKARNIA et al., 1979). Através do exame

histopatológico, as hemorragias observadas na necropsia são vistas nos mais diversos órgãos e

há rarefação do tecido hematopoético na medula óssea (TOKARNIA et al., 1967; ANJOS et

al., 2008).

A ênfase das seções que se seguem desta revisão de literatura, com detalhamento da

epidemiologia, aspectos clínicopatológicos e etiopatogênese, será nas formas crônicas de

intoxicação (HEB e CCEs no TAS) por samambaia em bovinos.

2.3 Epidemiologia da intoxicação crônica

A ocorrência das formas crônicas de intoxicação em bovinos tem como característica

comum a infestação dos pastos por P. aquilinum. A incidência e a freqüência com que as

formas da doença ocorrem variam entre as diversas regiões do país (TOKARNIA et al.,

1969).

A atividade carcinogênica e a concentração dos princípios tóxicos da planta são

influenciadas por diversos fatores, entre eles: condições geográficas e ambientais (HIRONO

et al., 1973; VILLALOBOS-SALAZAR, 1999), variedade de P. aquilinum (FENWICK,

1988), estágio de crescimento (SMITH et al., 1999) e armazenamento (FRANÇA et al., 2002)

da planta. Talvez a ocorrência das diferentes manifestações clínicas esteja ligada a alguns

destes fatores (GAVA et al., 2002). Foi demonstrado, através de experimentos em ratos, que

P. aquilinum proveniente de áreas onde ocorre a HEB, possui atividade carcinogênica mais

elevada e concentração maior de ptaquilosídeo do que de áreas onde a HEB não tem sido

relatada (SMITH et al. 1988).

A intoxicação ocorre em diversos países do mundo em áreas baixas, situadas a poucos

metros acima do nível do mar, e em regiões altas, com até 2.400 metros de altitude

(CAMPOS NETO et al., 1975). A HEB tem sido descrita especialmente em locais com

altitudes entre 200 a 1.000 metros (FRANÇA et al., 2002). A ocorrência de HEB e de CCEs

no TAS, diferentemente da forma aguda, não tem distribuição sazonal, provavelmente devido

à progressão crônica da doença (GAVA et al., 2002).

23

Toda a planta é tóxica (fresca e dessecada como feno) e a brotação é a parte mais

tóxica (TOKARNIA et al., 1979). A ingestão de feno contaminado com a planta e a ingestão

dos rizomas expostos pela aração também tem causado a intoxicação em animais

(TOKARNIA et al., 2000). As condições em que ocorre a intoxicação são várias. A fome é o

principal fator que leva os bovinos a ingerirem a samambaia, porém há indícios de que o vício

também possa condicionar a ingestão, visto que os animais seguem ingerindo a planta mesmo

após cessada a condição que determinou sua ingestão inicial (TOKARNIA et al., 1979).

Como condições iniciais estão relacionadas a escassez de alimento causada por superlotação,

períodos prolongados de seca (GAVA, 1993), geadas, queimadas (SOUZA; GRAÇA, 1993) e

a carência de material fibroso na alimentação (TOKARNIA et al., 2000).

Alguns fatores parecem ter participação em determinar o tipo de intoxicação

observada; entre eles, a idade em que os bovinos começam a ingerir P. aquilinum, a

quantidade consumida e o período de tempo pelo qual ingerem a planta (DÖBEREINER et

al., 1967). A HEB afeta principalmente bovinos com idade superior a dois anos (TOKARNIA

et al., 2000). Os CCEs no TAS afetam principalmente bovinos de idade mais avançada, com

aproximadamente seis anos ou mais (TOKARNIA et al., 2000). Em um estudo de 40 casos

espontâneos de CCEs no TAS, a idade dos bovinos variou entre três e 13 anos, com pico aos

oito anos (27,5%) (MASUDA, 2007). Quanto à quantidade ingerida, bovinos que consomem

menos de 10 g/kg/dia durante um ano ou mais, desenvolvem HEB. As quantidades diárias de

samambaia a serem ingeridas capazes de causar o desenvolvimento dos neoplasmas no TAS

são ainda menores que as que causam HEB, porém a ingestão se dá por mais tempo


Em ambas as formas crônicas não há predisposição por raça (PAMUKCU et al., 1976;

SOUTO, 2005) ou sexo (HOPKINS, 1986), porém, as fêmeas parecem ser mais afetadas

devido à maior permanência desses animais na fazenda (CAMPOS NETO et al., 1975). Pela

mesma razão, os bois destinados ao trabalho foram também mais afetados por CCEs no TAS

(SOUTO, 2005).

A prevalência da doença varia de região para região; a morbidade da HEB pode ser de

10% e a dos neoplasmas no TAS de 3% nas propriedades atingidas. A letalidade nas duas

formas é de 100% (GAVA, 1993). No entanto, não se sabe o número exato de animais sob

risco, visto que muitos não são enviados para diagnóstico (SOUZA; GRAÇA, 1993).

Em um estudo realizado no estado de Santa Catarina, a forma menos freqüentemente

observada foi a HEB e, segundo os autores, esse resultado provavelmente não representa a

24

situação real, pois muitas vezes os animais vão para o abate logo após a identificação dos

sinais clínicos (GAVA et al., 2002).

2.4 Alterações clínico-hematológicas na intoxicação crônica

2.4.1 Sinais clínicos

Ambas as formas crônicas apresentam características clínicas distintas, entretanto, as

duas acarretam o emagrecimento progressivo e a morte dos animais afetados (DÖBEREINER

et al., 1967).

A HEB é observada em animais adultos e é caracterizada por hematúria e anemia

associada a lesões hemorrágicas ou neoplásicas no trato urinário inferior. Os animais afetados

geralmente desenvolvem micro-hematúria seguida de macro-hematúria, sendo que, a primeira

muitas vezes ocorre antes do aparecimento de lesões macroscopicamente visíveis (MAXIE;

NEWMANN, 2007).

Na HEB, os principais sinais clínicos são hematúria intermitente ou contínua,

emagrecimento, mucosas pálidas (GAVA, 1993; SOUTO et al., 2006b), e, nas vacas,

considerável queda na produção de leite (GAVA, 1993). Sinais clínicos menos freqüentes

incluem: incontinência urinária (TOKARNIA et al., 2000), poliúria, disúria (HOPKINS,

1986), debilidade e obstrução do trígono vesical pelos neoplasmas ou da uretra por coágulos

de sangue (SCHOTT et al., 2002). Geralmente, não são observadas alterações na temperatura

corporal e atividade ruminal, porém a doença progride para severa anemia e caquexia. O

volume de sangue perdido pela urina varia de 0,01 a 1,0 litro por dia (DAWRA et al., 1999).

Na palpação retal pode-se evidenciar espessamento da parede da bexiga em alguns casos

(RADOSTITS et al., 2002).

A HEB apresenta-se algumas vezes com intervalos sem sinais clínicos que podem

perdurar por semanas e até meses. A retirada dos bovinos dos campos infestados pela planta e

a boa alimentação levam a uma recuperação parcial que ocorre somente nas fases iniciais da

doença. Entretanto, esses animais permanecem pouco produtivos e após novas ingestões da

planta a hematúria rapidamente recomeça (TOKARNIA et al., 2000). A morte dos animais

afetados ocorre meses e até mesmo anos após o início da doença (FRANÇA et al., 2002).

25

Os CCEs no TAS causam principalmente perturbações de ordem mecânica na ingestão

e ruminação dos alimentos e os sinais clínicos dependem da localização das lesões

(TOKARNIA et al., 2000). Emagrecimento progressivo, atonia ruminal, tosse, disfagia,

regurgitação, halitose, diarréia, timpanismo, apetite seletivo, dispnéia e salivação são

freqüentemente observados (SOUTO, 2005). A doença é invariavelmente fatal, com evolução

de pelo menos seis meses, podendo chegar até dois a três anos (PLOWRIGHT, 1955).

Foi observada a coexistência de lesões das formas crônicas de intoxicação e, nesses

casos, a lesão mais acentuada, aquela que finalmente causa o aparecimento dos sinais clínicos

mais evidentes, parece determinar o tipo de forma clínica apresentada pelo animal

(DÖBEREINER et al., 1967; TOKARNIA et al., 1969).

2.4.2 Aspectos hematológicos

Os achados hematológicos descritos em bovinos com HEB estão resumidos no Quadro

1.

O perfil hematológico de bovinos com a forma de CCEs no TAS intoxicados

espontaneamente por P. aquilinum não foi encontrado na literatura consultada para esta

revisão.

Sob condições experimentais, bovinos que ingeriram a planta apresentaram rápida

queda nos leucócitos polimorfonucleares, resultando, muitas vezes, em morte por septicemia.

Com interrupções periódicas na administração da planta, a contagem de neutrófilos

praticamente normalizou. Entretanto, a contagem de linfócitos circulantes estava

cronicamente deprimida (linfopenia crônica = valores próximos à 2.000/mm3 de sangue) após

34 semanas e permaneceu assim durante todo o experimento (CAMPO et al., 1992; CAMPO

et al., 1994). Detalhes deste experimento encontram-se na seção 2.6.3 - Reprodução

experimental – desta revisão.

26

Tipo de intoxicação

Eritrograma Leucograma Autores

Espontânea -Anemia pós-hemorrágica com perda por igual de todos os elementos figurados do sangue.

-Pode ocorrer leucocitose. LEE et al. (1966)

Espontânea -Geralmente há anemia normocrômica (devido à perda de sangue) -Diminuição da hemoglobina.

-Redução no número de leucócitos. -Em casos graves há trombocitopenia e leucopenia leve a moderada, com distribuição normal de leucócitos.

ROSENBERGER (1971)

Espontânea -Redução na contagem total de eritrócitos, hemoglobina e hematócrito (anemia pela perda de sangue pela urina).

-Número total de leucócitos sem alterações. -Linfocitose e neutropenia moderada (devido à condição inflamatória crônica).

SINGH et al. (1973)

Espontânea -Redução no número de eritrócitos e na hemoglobina (anemia secundária).

-Número total de leucócitos não muda em alguns casos. -Leve leucocitose em alguns. -Leucocitose por neutrofilia (nos bovinos com infecções piogênicas).

PAMUKCU et al. (1976)

Espontânea -Redução na contagem de eritrócitos, hemoglobina e hematócrito

-Redução no número total de leucócitos.

HOPKINS (1986)

Experimental -Não informado. -Linfopenia crônica. -Neutropenia acentuada.

CAMPO et al. (1992)

Espontânea -Redução na contagem de eritrócitos.

-Redução no número de linfócitos -Aumento dos basófilos, neutrófilos e monócitos.

DAWRA et al. (1999)

Espontânea -Anemia -Leucopenia MARRERO et al. (2001)

Espontânea -Anemia microcítica (havia diferenças dos bovinos controle em relação ao hematócrito, hemoglobina, número de eritrócitos e volume corpuscular médio [VCM]).

-Não informado. SÁNCHEZ-VILLALOBOS et al. (2004)

Espontânea -Redução do hematócrito de alguns bovinos (valor médio permaneceu sem alterações). -Valores médios da concentração de hemoglobina, hematócrito e contagem de eritrócitos sem alterações.

-Valores médios dos leucócitos totais, neutrófilos, eosinófilos e linfócitos sem alterações. -Leucocitose por neutrofilia, linfopenia e eosinofilia em alguns bovinos.

FALBO et al. (2005)

Quadro 1 - Achados hematológicos na hematúria enzoótica bovina (HEB).

27

2.5 Alterações morfológicas na intoxicação crônica

2.5.1 Alterações macroscópicas

Há uma grande heterogeneidade de lesões inflamatórias, anormalidades epiteliais e

alterações neoplásicas em bovinos com HEB. Outra característica interessante é que muitas

bexigas examinadas apresentam múltiplas alterações (PEIXOTO et al., 2003; CARVALHO et

al., 2006). Em um estudo, de 15 casos naturais de HEB, seis animais apresentaram mais de

um tipo de neoplasma na bexiga (CAMPO et al., 1992).

Na mucosa vesical podem-se observar áreas hemorrágicas, na maioria das vezes

petéquias (DÖBEREINER et al., 1967), ulcerações multifocais (SOUZA; GRAÇA, 1993) e

congestão (TOKARNIA et al., 2000). O aspecto macroscópico das lesões neoplásicas varia

grandemente. Observam-se crescimentos exofíticos aderidos na parede vesical por base ampla

ou pedunculada, de superfície lisa ou rugosa, pálidos ou hemorrágicos e crescimentos

endofíticos, que variam desde discretas ondulações na mucosa com moderada alteração na

cor, até grandes massas infiltrativas, ocupando extensas áreas (CARVALHO et al., 2006). A

urina é vermelha e, às vezes, apresenta coágulos de sangue (GAVA, 1993). A formação de

coágulos de sangue na bexiga pode propiciar a ocorrência de infecções secundárias, levando à

cistite e pielonefrite (DAWRA et al., 1999). Em alguns animais pode ocorrer obstrução das

vias urinárias com hidronefrose e até ruptura da bexiga, porém este é um achado raramente

observado (TOKARNIA et al., 2000).

Na outra forma crônica de intoxicação os principais achados de necropsia são

papilomas e CCEs, geralmente em associação, ao longo do TAS (TOKARNIA et al., 1969;

JARRETT, 1978; JARRETT et al., 1978; SOUTO et al., 2006a). Papilomas em transformação

para CCE também têm sido freqüentemente relatados (JARRETT, 1978; JARRETT et al.,

1978; SOUTO et al., 2006a). Os CCEs consistem de massas exuberantes, de crescimento

exofítico ou endofítico, podendo ser sésseis ou pedunculados, acompanhados ou não por

edema e por extensas áreas de ulceração ou de necrose na superfície de corte (SOUTO et al.,

2006a; MASUDA, 2007).

Informações detalhadas sobre a freqüência da coexistência de lesões das formas

crônicas de intoxicação num mesmo animal foram limitadas na literatura consultada

(DÖBEREINER et al., 1967; JARRETT et al., 1978; POLACK, 1990; SOUZA; GRAÇA,

28

1993). Em um estudo de 80 casos espontâneos de CCEs no TAS, foram observados

neoplasmas na bexiga de 30% deles (JARRETT et al., 1978). Em outro estudo com 12 casos

contendo lesões na bexiga, oito (66,7%) também tiveram lesões no TAS. Entretanto, não

foram fornecidos detalhes quanto à natureza das lesões vesicais (POLACK, 1990).

2.5.2 Alterações histopatológicas

Histologicamente, as bexigas podem ser consideradas sem alterações quando a mucosa

for formada por três a sete camadas de células do epitélio transicional normal (urotélio),

incluindo as camadas superficial, intermediária e basal (CARVALHO et al., 2006). As células

basais são muito pequenas e de formato poliédrico; as da região intermediária são poliédricas

ou piriformes e as células da borda luminal são cúbicas, e suas membranas apicais se projetam

para o lúmen. A variação no número de camadas de células depende de como estava a bexiga

no momento da coleta. Quando o órgão está vazio, a mucosa está relaxada e apresenta-se

pregueada com mais camadas de células; quando a bexiga está repleta de urina, as pregas da

mucosa se desfazem e a espessura do epitélio se reduz (BANKS, 1992). Subjacentes à

mucosa, observam-se a lâmina própria e a submucosa, separadas entre si pela muscular da

mucosa. A próxima camada é a muscular própria, formada por uma camada interna de fibras

dispostas longitudinalmente e uma externa espessa e circular. Uma serosa recobre o ápice e o

corpo; o colo é revestido pela adventícia (BACHA; WOOD, 1990).

As alterações histopatológicas observadas nas bexigas de animais com HEB podem

ser divididas em neoplásicas e não-neoplásicas; nessa última incluem-se lesões inflamatórias,

hiperplásicas e metaplásicas. É comum a ocorrência simultânea de algumas destas lesões na

mesma bexiga e é extremamente difícil ou até impossível estabelecer qual é a principal

alteração e a ordem cronológica do surgimento destas lesões (PEIXOTO et al., 2003).

As alterações neoplásicas descritas na HEB podem ser de origem epitelial ou

mesenquimal, às vezes com acentuado grau de anaplasia e acompanhados de marcada reação

inflamatória linfocitária (TOKARNIA et al., 2000). Em um estudo, 52% dos neoplasmas

vesicais encontrados eram malignos, 42% benignos e 6% foram classificados como

neoplasmas epiteliais com baixo potencial maligno. Os neoplasmas epiteliais foram mais

comuns (62%) que os mesenquimais (38%) (CARVALHO et al., 2006). Outros autores

observaram 35% de neoplasmas puramente epiteliais, 9% de neoplasmas mesenquimais e

29

54% de neoplasmas mistos em casos naturais de HEB (PAMUKCU et al., 1976). A

coexistência de neoplasmas com elementos epiteliais e mesenquimais, bem como a

concomitância de dois ou mais tumores da mesma origem, no mesmo animal, tornam

complicada a tentativa de determinar a freqüência com que os neoplasmas ocorrem em

bovinos com HEB (PEIXOTO et al., 2003).

Dentre os neoplasmas benignos encontram-se papilomas, hemangiomas (BENTO et

al., 1999), papilomas invertidos, adenomas e fibromas (CARVALHO et al., 2006). Os

neoplasmas malignos comumente observados são: carcinoma de células de transição,

adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma in situ e hemangiossarcoma

(CARVALHO et al., 2006). No entanto, neoplasmas e diferenciações raras também têm sido

descritos, tais como carcinoma trabecular com diferenciação em células de Paneth, adenoma e

adenocarcinomas mesonefróides, carcinoma em anel de sinete, carcinoma plasmocitóide,

carcinoma de células cromófobas e carcinoma transicional tipo em ninho (PEIXOTO et al.,

2003).

A diversidade de neoplasmas observados nas bexigas de bovinos com HEB é

surpreendente, especialmente quando consideramos a pequena variação na ocorrência de

neoplasmas de bexiga nas outras espécies animais (PEIXOTO et al., 2003).

Apesar de muitas vezes serem pouco diferenciados, esses neoplasmas dificilmente

causam metástases, e quando essas ocorrem, são geralmente para linfonodos regionais, no

peritônio por implantação e mais raramente para outros órgãos (TOKARNIA et al., 2000). A

reação imunológica local pode ajudar a impedir essa disseminação. A descoberta das causas

dessa “barreira contra metástases” e suas relações com a carcinogênese química induzida pelo

ptaquilosídeo podem ser de interesse para estudos futuros (PEIXOTO et al., 2003).

As principais alterações não-neoplásicas descritas na HEB incluem: hiperplasia

epitelial, displasia epitelial, ninhos de Brunn, metaplasia glandular, cistite polipóide, estroma

mixóide, cistite folicular, cistite cística e cistite glandular. A hiperplasia epitelial é

caracterizada pelo aumento no número de camadas de células normais do urotélio, formando

ou não ondulações na mucosa (CARVALHO et al., 2006), muitas vezes com descamação

celular. A displasia epitelial (PEIXOTO et al., 2003) caracteriza-se pela presença de núcleos

grandes, desorientados e agrupados (MURPHY et al., 2004). Os ninhos de Brunn são

caracterizados por colunas ou agregados de células do epitélio transicional na lâmina própria

(HOPKINS, 1986), com ou sem conexão com a superfície epitelial (CARVALHO et al.,

2006). A metaplasia glandular, também chamada de metaplasia intestinal, ocorre pela

formação de células epiteliais contendo muco, localizadas tanto na superfície epitelial como

30

na lâmina própria, lembrando células da mucosa intestinal (MURPHY et al., 2004;

CARVALHO et al., 2006). A cistite polipóide caracteriza-se por edema na lâmina própria,

formando pregas na mucosa, cobertas por urotélio normal, muitas vezes com infiltrado

inflamatório (CARVALHO et al., 2006), podendo exibir áreas de hiperplasia epitelial e

estroma mixóide (PEIXOTO et al., 2003). A cistite folicular é assim chamada quando há

presença de folículos linfóides na lâmina própria, com ocasional atipia e variações no

tamanho do núcleo e coloração das células do epitélio transicional (CARVALHO et al.,

2006). A cistite cística caracteriza-se pela formação de cavidades císticas na lâmina própria,

revestidas por células do urotélio e a cistite glandular, inicia com a proliferação dos ninhos de

Brunn, seguida da obstrução dos poros desses ninhos, formando cistos e estruturas

semelhantes a glândulas. As células uroteliais superficiais que revestem esses cistos secretam

mucina, a qual comumente se acumula no interior dessas estruturas (MURPHY et al., 2004).

Descrevem-se ainda proliferação micropolipóide, cistos intraepiteliais, proliferação vascular,

infiltrado linfoplasmocítico, hemorragia, fibrose (PEIXOTO et al., 2003) e ectasia vascular


Na forma de CCEs no TAS, as principais alterações histopatológicas são papilomas,

papilomas em transformação e CCEs afetando desde a cavidade oral até a entrada do rúmen

(JARRETT et al., 1978; JARRETT, 1978; SOUTO et al., 2006a). Em um estudo de 40 casos,

metástases ocorreram em 57,75% dos bovinos afetados (MASUDA, 2007).

Em poucos estudos foram detalhados os tipos histológicos dos neoplasmas que

afetaram a bexiga e o TAS simultaneamente. Em um desses estudos, de 21 bovinos com as

formas crônicas de intoxicação, três apresentaram sinais clínicos de HEB, mas também

tinham CCEs no TAS; de sete bovinos com sinais clínicos de CCEs no TAS, seis tinham

proliferações capilares e hemangiomas na bexiga. Nos demais onze casos de bovinos com

papilomas e/ou CCEs no TAS, as bexigas não foram remetidas para avaliação

(DÖBEREINER et al., 1967). Os autores discutiram seus resultados, encontrando

semelhanças com outro estudo de nove casos realizado no estado do Paraná (CURIAL, 1964,

apud DÖBEREINER et al., 1967). Em um estudo de 80 casos espontâneos de CCEs no TAS

com 30% de neoplasmas também na bexiga, observaram-se hemangiomas (23%), fibromas

(4%), carcinomas de células de transição (8%) e adenocarcinomas (1%), considerando que a

presença simultânea de mais de um tipo de neoplasma ocorreu ocasionalmente (JARRETT et

al., 1978). Em outro estudo retrospectivo, de 18 bovinos com neoplasmas atribuídos à

intoxicação crônica por samambaia, três tiveram neoplasmas simultaneamente na bexiga

(hemangiomas) e no TAS (CCEs) (SOUZA; GRAÇA, 1993).

31

2.6 Etiopatogênese na intoxicação crônica

A etiopatogênese da HEB e dos CCEs no TAS de bovinos têm sido alvo de vários

estudos de casos espontâneos (DÖBEREINER et al., 1967; TOKARNIA et al., 1969;

JARRETT et al., 1978; SOUTO et al., 2006a) ou experimentais (ROSENBERGER, 1971;

PAMUKCU et al., 1976; CAMPO et al., 1992; CAMPO et al., 1994). Muitos deles têm

buscado o papel de P. aquilinum na gênese dos neoplasmas vesicais ou do trato alimentar

(DÖBEREINER et al., 1967; TOKARNIA et al., 1969; ROSENBERGER, 1971; PAMUKCU

et al., 1976). Por outro lado, vários grupos de pesquisadores têm voltado seus esforços para

estudar a participação dos papilomavírus bovinos, particularmente do papilomavírus bovino

tipo 2 (BPV-2), encontrado na bexiga, e do papilomavírus bovino tipo 4 (BPV-4), encontrado

no TAS, como agentes atuando sinergicamente com os princípios tóxicos de P. aquilinum no

desenvolvimento de neoplasmas nessas localizações anatômicas (JARRETT, 1978;

JARRETT et al., 1978; CAMPO et al., 1992; CAMPO et al., 1994).

2.6.1 Carcinogênese química

A samambaia é a única planta que naturalmente produz neoplasmas em animais

(YAMADA et al., 2007). Ela contém princípios tóxicos que reproduzem muitos dos efeitos da

radiação, capazes de causar, experimentalmente, alterações neoplásicas como

adenocarcinomas intestinais em ratos, adenomas pulmonares em camundongos, neoplasmas

vesicais e hematúria em porquinhos-da-Índia (EVANS, 1968). Da mesma forma, causa dano

progressivo no tecido hematopoético de bovinos e ovinos, produzindo lesões semelhantes às

causadas por radiação ou produtos químicos radiomiméticos (EVANS, 1958). Seus efeitos em

longo prazo, testados em várias espécies, são consistentemente radiomiméticos (EVANS,

1968). Seus princípios tóxicos atuam como mutágenos, carcinógenos (FENWICK, 1988) e

imunossupressores (MEUTEN, 2002). O ptaquilosídeo (Pt) é considerado a substância mais

carcinogênica da samambaia (ALONSO-AMELOT et al., 1999; SHAHIN et al., 1999). Sob

condições alcalinas, ele é convertido em uma dienona reativa (APT), a qual causa alterações

no DNA das células. Enquanto algumas alterações são reparadas, outras levam a mutações em

genes, direcionando a célula até vários estágios de transformação hiperplásica e neoplásica

32

(SHAHIN et al., 1999). Através da administração intravenosa de APT para ratos, ocorreu a

formação de carcinomas de glândula mamária, demonstrando o potencial carcinogênico dessa

substância (SHAHIN et al., 1998). Os neoplasmas induzidos no esôfago e na bexiga de

bovinos foram associados com os pHs dessas regiões, que são aproximadamente 8,1-8,2

(saliva) e 7,5-8,5 (urina) (FENWICK, 1988). A grande maioria dos neoplasmas observados

nas bexigas de bovinos com HEB se localiza na porção ventral e paredes laterais da bexiga,

regiões estas, que ficam grande tempo em contato com a urina (NEWMAN et al., 2007).

A quercetina é um flavonóide mutagênico presente em altas concentrações na

samambaia (BENISTON et al., 2001). Exerce atividades clastogênica e carcinogênica, mas

alguns dos seus efeitos biológicos são considerados benéficos (MUSONDA; CHIPMAN,

1999). Foi demonstrado que existem substâncias carcinogênicas na urina de vacas que

ingerem a samambaia (DÖBEREINER et al., 1966). Posteriormente, os dois princípios

tóxicos citados anteriormente foram detectados qualitativamente na urina, soro e leite de 19

animais, num grupo de 20 bovinos com HEB (LIOI et al., 2004).

2.6.2 Infecção pelo papilomavírus bovino tipo 2 (BPV-2)

O papilomavírus bovino tipo 2 (BPV-2) é o vírus indutor de fibropapilomas na pele e

no canal alimentar (infecção abortiva) nessa espécie animal ( LANCASTER, 1979). O BPV-2

têm sido associado aos casos de HEB (CAMPO et al., 1992), e seu papel na gênese dos

neoplasmas vesicais permanece alvo de investigação (BORZAQUIELLO et al., 2007).

Alguns autores, através da técnica de hibridização em Southern blot, detectaram BPV-

2 em 46% dos casos naturais de hematúria e em 69% dos casos experimentais (CAMPO et al.,

1992). Posteriormente, foi proposto um mecanismo de interação entre o BPV-2 e a

samambaia. O vírus infectaria as células do urotélio e estabeleceria uma infecção abortiva,

sem a produção de víriões. Os imunossupressores da samambaia permitiriam a formação de

lesões pré-neoplásicas, as quais podem tornar-se malignas pela ação dos carcinógenos

químicos da planta (CAMPO, 2002).

Através da técnica de PCR foi detectado o DNA do BPV-2 em 62,5% de casos

naturais de HEB, e os fragmentos de bexigas provenientes de animais clinicamente sadios de

regiões livres de samambaia (grupo controle) foram todos negativos para essa técnica. A

observação de DNA viral em bexigas de animais com HEB, reforçam a teoria do

33

envolvimento do BPV-2 na etiologia dessa doença (WOSIACKI, 2002). Recentemente, o

DNA do BPV-2 foi detectado através da técnica de PCR, em 100% de neoplasmas vasculares

vesicais em casos de HEB, e também detectaram por imuno-histoquímica as proteínas E5 e

E7 nessas células neoplásicas (BORZACCHIELLO et al., 2007). A proteína E5 é a principal

oncoproteína transformadora dos papilomavírus e a proteína E7 age em conjunto com as

proteínas E5 e E6 na transformação celular (BORZACCHIELLO; ROPERTO, 2008). A alta

porcentagem de detecção do BPV-2 nos neoplasmas de origem mesenquimal e a

imunomarcação da oncoproteína E5 nas células neoplásicas (BORZACCHIELLO et al.,

2007), somado à ligação demonstrada entre a oncoproteína E5 e o receptor β do fator de

crescimento derivado de plaquetas (PDGFβR) nas células epiteliais neoplásicas, sugerem que

o vírus possa ter um papel causal nesses processos neoplásicos (BORZACCHIELLO et al.,

2007). A observação da expressão das duas oncoproteínas (E5 e E7) na mesma célula

endotelial (por imunofluorescência confocal) pode indicar a cooperação dessas duas proteínas

na formação de neoplasmas vasculares vesicais (BORZACCHIELLO et al., 2007). Também

através da PCR, 68% de neoplasmas de bovinos com HEB e uma amostra de bexiga sem

alterações foram positivos para o BPV-2. Pela técnica de imuno-histoquímica, todas as lesões

neoplásicas e pré-neoplásicas foram positivas para a proteína E5, a qual não foi

imunomarcada nos fragmentos de bexigas sem alterações (controle). A observação do DNA

viral nos neoplasmas de diferentes tipos histológicos sugere que não há determinados tipos de

neoplasmas associados com o agente viral. A marcação da proteína E5 somente nas amostras

com lesões, indica a ligação entre o agente viral e os neoplasmas de bexiga de bovinos

provenientes de determinadas áreas geográficas, onde a samambaia está disseminada nos

pastos e sugere um possível papel desse vírus nos processos neoplásicos (BALCOS et al.,

2008).

2.6.3 Reprodução experimental

Tentativas de reprodução experimental de HEB, muitas vezes desencadearam

alterações compatíveis com a forma aguda (SHA) de intoxicação, dependendo da dose e da

duração da administração da planta (ROSENBERGER, 1971; PAMUKCU et al., 1976;

CAMPO et al., 1992). Isso foi detalhadamente relatado em três experimentos

(ROSENBERGER, 1971), sendo que no terceiro deles, foi administrado cerca de 1kg/dia de

34

feno de samambaia. Uma vaca jovem teve micro-hematúria nove meses após o início do

experimento e macro-hematúria sete semanas mais tarde. A dose foi reduzida para 500g por

uma semana, depois a administração foi suspensa. A urina permaneceu turva, variando de

levemente avermelhada à sanguinolenta. A hematúria continuou com severidade variável por

um período de três anos, embora a administração da planta tenha sido suspensa. No abate, o

animal apresentou os tumores vesicais típicos de HEB.

Os neoplasmas vesicais observados em casos experimentais foram macroscopicamente

e histologicamente idênticos aos vistos em casos espontâneos (PAMUKCU et al., 1976).

Num experimento complexo, com duração de até 13 anos (1979-1992) para alguns

bovinos, oito tratamentos foram utilizados numa tentativa de analisar os efeitos de diferentes

fatores na gênese dos neoplasmas vesicais (HEB) e dos tumores do trato alimentar. Os

bezerros utilizados tinham 3-5 meses, eram filhos de mães livres e eles próprios eram livres

de papilomatose e foram mantidos em baias isoladas (CAMPO et al., 1992). Dentre os

principais resultados desse estudo resumidamente, constam:

- Grupo 1 (inoculação de BPV-4; seis bovinos): papilomas confinados aos locais de

inoculação (língua e palato mole); ausência de lesões vesicais;

- Grupo 2 (inoculação de BPV-4 + azatioprina [imunossupressor]; seis bovinos):

severa imunossupressão (diminuição no número de leucócitos totais de 6.700 para 2.200/mm3

de sangue); todos tiveram papilomas no canal alimentar; todos com hemangiomas vesicais;

submetidos à eutanásia (em 1981) devido à hematúria contínua;

- Grupo 3 (azatioprina; quatro bovinos): severa imunossupressão (diminuição no

número de leucócitos totais de 6.700 para 2.200/mm3 de sangue); todos com hemangiomas

vesicais; submetidos à eutanásia (em 1981) devido à hematúria contínua;

- Grupo 4 (controle [sem tratamento]; quatro bovinos): sem alterações;

- Grupo 5 (dieta [à vontade] de samambaia; seis bovinos): neutropenia cíclica

acentuada (contagem de neutrófilos retornava ao normal após pausas na administração da

planta); linfopenia crônica (valores próximos à 2.000 linfócitos/mm3 de sangue) após 34

semanas; ausência de papilomas no canal alimentar; todos os bovinos tiveram neoplasmas de

um ou mais tipos histológicos na bexiga, incluindo hemangiomas, hemangiossarcomas,

hemangioendoteliomas, carcinomas de células de transição (CCT) e metástases; três deles

submetidos à eutanásia (em 1981) devido à hematúria contínua; demais submetidos à

eutanásia entre 1983 e 1990;

- Grupo 6 (inoculação de BPV-4 + dieta [à vontade] de samambaia; seis bovinos):

neutropenia cíclica acentuada (contagem de neutrófilos retornava ao normal após pausas na

35

administração da planta); linfopenia crônica (valores próximos à 2.000 linfócitos/mm3 de

sangue) após 34 semanas; todos com papilomas no canal alimentar; cinco bovinos tiveram

tumores na bexiga, incluindo pólipos, hemangiomas, hemangiossarcomas,

hemangioendoteliomas, carcinomas de células de transição (CCT) com metástases; dois deles

submetidos à eutanásia (em 1981) devido à hematúria contínua; três foram submetidos à

eutanásia entre 1985 e 1992; um bovino estava vivo ao término do experimento;

- Grupo 7 (quercetina (um dos princípios tóxicos da samambaia; dois bovinos): sem

efeito no estado imunológico (contagem de neutrófilos normal); sem sinais de hematúria; não

foram necropsiados;

- Grupo 8 (BPV-4 + quercetina; 2 bovinos): sem efeito no estado imunológico

(contagem de neutrófilos normal); papilomas confinados aos locais de inoculação (língua e

palato mole); sem sinais de hematúria; não foram necropsiados;

Nesse mesmo experimento, o DNA do BPV-2 (epissomal) foi encontrado (por

hibridização em Southern blot) em neoplasmas de bovinos (dos grupos 2, 5 e 6) que não

tinham sido inoculados com BPV algum ou que tinham sido inoculados com BPV-4 e que

foram mantidos isolados, sugerindo que o BPV-2 pode persistir num estado latente e ser

ativado quando o animal é exposto aos co-carcinógenos da samambaia e a imunossupressores.

Na época, não foram encontrados vírus ou antígeno viral nas lesões vesicais, somente o DNA

viral. A rota de infecção sugerida para o BPV-2 em bovinos foi a possível propagação a partir

de áreas genitais, como tem sido postulado para os papilomavírus humanos (HPVs) em

tumores vesicais. Os autores concluíram através desse experimento de longa duração que

ambos, vírus e samambaia, estão envolvidos na carcinogênese vesical e que a samambaia

realmente contribui para o processo (CAMPO et al., 1992).

Resultados complementares do experimento descrito anteriormente foram publicados

posteriormente, com ênfase nos neoplasmas alimentares (CAMPO et al., 1994). Papilomas

estavam confinados ao local de inoculação nos bovinos dos grupos 1 e 8, e desapareceram

após um ano (semelhantemente ao que ocorre em animais imunocompetentes). Papilomatose

acentuada e persistente (sem regressão) foi reproduzida somente nos animais infectados com

BPV-4 e imunossuprimidos pela azatioprina (grupo 2) ou pela samambaia (grupo 6; um

bovino tinha papilomatose da boca ao rúmen 13 anos pós-inoculação de BPV-4). Papilomas

ou carcinomas no TAS não ocorreram nos bovinos tratados somente com samambaia (grupo

5). Carcinomas no TAS e no intestino foram observados somente em dois animais infectados

pelo BPV-4 e consumindo samambaia (grupo 6). Um desses bovinos, submetido à eutanásia

em 1985, além de papilomas na língua, palato e esôfago, apresentou dois focos de CCE no

36

esôfago e múltiplos pólipos, adenomas e adenocarcinomas no intestino. O outro bovino

submetido à eutanásia em 1989, tinha papilomas e CCEs no esôfago e adenocarcinoma

intestinal.

Papilomas removidos três meses pós-infecção continham múltiplas cópias de DNA de

BPV-4 epissomal. Papilomas de longa duração (da mesma forma que em casos espontâneos),

CCEs esofágicos e tumores intestinais dos dois bovinos descritos anteriormente foram

negativos para o DNA viral. Os autores concluíram que a imunossupressão é necessária para a

persistência e disseminação dos papilomas virais, que os mutágenos da samambaia são

responsáveis pela conversão neoplásica (maligna) das células dos papilomas e que a

expressão contínua das funções virais não é necessária para a manutenção do estado maligno

(papel do BPV-4 na carcinogênese confinado aos estágios iniciais de transformação celular).

A proliferação celular induzida pelo BPV-4 proveria um alvo grandemente expandido para os

co-carcinógenos da samamabaia (CAMPO et al., 1994).

2.7 Imuno-histoquímica (IHQ) nos neoplasmas vesicais

A IHQ é uma técnica amplamente utilizada na classificação de neoplasmas,

principalmente nos casos em que não é possível identificar o tipo de célula na coloração de

hematoxilina-eosina (HE) (CULLEN et al., 2002). Anticorpos anti-citoceratina e anti-

vimentina são freqüentemente utilizados, pois permitem a diferenciação entre células

epiteliais e mesenquimais (CULLEN et al., 2002). Anticorpos contra o fator de von

Willebrand são usados principalmente para distinguir neoplasmas vasculares pouco

diferenciados de outros neoplasmas mesenquimais (CERILLI; WICK, 2006).

3 MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 Casos estudados e parâmetros analisados

Foram estudados casos espontâneos de intoxicação crônica por samambaia (Pteridium

aquilinum) em bovinos, nas formas clínicas de hematúria enzoótica bovina (HEB) e de

carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS), provenientes de

propriedades rurais de municípios da Mesorregião Centro Ocidental Rio-Grandense, que

incluem Nova Esperança do Sul, Jaguari, Santiago, Mata e Vale Vêneto. Dois casos de HEB,

provenientes de Vale Vêneto-RS e de Campo Mourão-PR, foram incluídos somente no estudo

morfológico das lesões vesicais. As necropsias foram realizadas pela equipe do Laboratório

de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Santa Maria (LPV-UFSM) ou amostras

de necropsias, feitas por outros veterinários, foram encaminhadas ao LPV no período de

Agosto/2003 a Agosto/2008.

Através deste estudo foram avaliados aspectos epidemiológicos, clínico-hematológicos

e morfológicos da intoxicação crônica por samambaia. Para cada um dos parâmetros

avaliados foram utilizados todos os casos disponíveis que continham elementos necessários

para a inclusão no estudo, desta forma cada parâmetro teve um número diferente de bovinos,

visando sempre aproveitar o maior número de dados e materiais remetidos ao laboratório,

conforme Quadro 2.

Epidemiologia Sinais clínicos Hematologia Morfologia CCE 48

propriedades 60 bovinos 30 bovinos 30 bovinos 46 bovinos

HEB 16 propriedades

17 bovinos (8 confirmadas e 9 clínicas)*



11 bovinos (todos confirmados)*

Controles - - - - 10 casos Quadro 2 – Número de propriedades e de bovinos avaliados em cada parâmetro estudado. CCE = carcinoma de células escamosas; HEB = hematúria enzoótica bovina. *Incluem-se aqui os casos de HEB confirmados pela necropsia e casos de HEB clínica.

O detalhamento dos casos estudados e os parâmetros avaliados podem ser visualizados no

Apêndice A.

38

3.2 Epidemiologia

Com a finalidade de traçar o perfil das propriedades afetadas pelas diferentes formas

clínicas crônicas da intoxicação, foram avaliadas as características de 48 propriedades,

totalizando 60 casos de CCEs no TAS, e 16 propriedades com 17 casos de HEB. As

informações necessárias foram obtidas através da ficha de encaminhamento do material,

remetida pelo veterinário de campo. Os parâmetros avaliados foram: a) finalidade da criação

(cria, engorda, subsistência, cria/recria, cria/recria/engorda e recria/engorda); b) principal

atividade da propriedade (pecuária e/ou agricultura); c) altitude (abaixo de 200 metros, entre

200 e 400 metros e entre 400 e 800 metros); d) percentual estimado de infestação das áreas de

pastoreio por P. aquilinum.

Da mesma forma, foi também avaliado o perfil dos animais afetados (60 bovinos com

CCEs no TAS, oito com HEB confirmada pela necropsia e nove com hematúria clínica),

incluindo informações sobre sexo, raça e idade. Quanto à idade, os bovinos foram

classificados em jovens (até dois anos de idade), adultos (de três a sete anos) e idosos (acima

de oito anos), conforme havia sido classificada anteriormente (MASUDA, 2007).

Esses parâmetros foram analisados através da formação de tabelas de contingência

simples e análise descritiva.

3.3 Aspectos clínico-hematológicos

Foram avaliados os sinais clínicos observados em 30 bovinos com CCEs no TAS (todos

com hemograma), em nove bovinos com HEB confirmada pela necropsia (seis destes com

hemograma) e nove com HEB clínica (todos com hemograma; consideraram-se aqui nove

bovinos provenientes de propriedades com a planta nas áreas de pastoreio que apresentaram

hematúria).

Com o objetivo de avaliar o perfil hematológico na fase terminal de ambas as formas

clínicas crônicas, foram realizados hemogramas de 30 bovinos com CCEs no TAS, seis com

HEB confirmada pela necropsia e nove com HEB clínica. Amostras de sangue, coletadas pelo

veterinário responsável durante o atendimento clínico dos animais com suspeita de

intoxicação crônica por Pteridium aquilinum, foram remetidas e os hemogramas realizados

39

conforme técnicas convencionais, constituindo-se de: 1) contagem de eritrócitos e leucócitos

em câmara de Neubauer utilizando-se líquidos de Hayen e de Türk como diluentes,

respectivamente; 2) determinação do hematócrito por centrifugação de microcapilares por

cinco minutos a 7.000 rotações por minuto (RPM); 3) determinação do volume corpuscular

médio (VCM) por cálculo; e 4) análise de esfregaços corados por panótico rápido para a

diferenciação celular e pesquisa de alterações morfológicas nas células. Os valores de

referência foram determinados de acordo com Jain, 1986.

No Bovino 78, foi realizado o exame do sedimento da urina. Para isso, a urina foi

centrifugada por cinco minutos a 1.500 RPM, o sobrenadante foi desprezado e uma gota do

sedimento foi colocada numa lâmina e coberta com lamínula. Após a confecção, a lâmina foi

observada em microscópio de luz.

3.4 Aspectos morfológicos

Os bovinos tiveram morte espontânea ou foram submetidos à eutanásia devido à

deterioração do quadro clínico. Foi realizada a necropsia e os materiais foram coletados. O

detalhamento das lesões do TAS de grande parte dos bovinos incluídos nesta dissertação foi

abordado em outros dois estudos (SOUTO, 2005; MASUDA, 2007) e não será repetido.

Para este estudo, foram avaliadas macroscopicamente e histologicamente as bexigas

de 11 casos de HEB e de todos os casos de CCEs no TAS nos quais as bexigas com ou sem

alterações macroscópicas tenham sido remetidas (46 casos). Bexigas normais de 10 bovinos

foram utilizadas como controles. Metástases de neoplasmas vesicais também foram avaliadas.

Após a fixação em formol 10%, os materiais foram clivados e encaminhados ao

processamento histológico de rotina, sendo emblocados em parafina. Foram encaminhados

fragmentos de lesões vesicais macroscopicamente visíveis e dois fragmentos de regiões

aleatórias nos casos em que não havia lesão aparente. Cortes de 3µm foram utilizados para as

avaliações histológica e histoquímica. Em cortes selecionados, foram realizadas as seguintes

técnicas histoquímicas: ácido periódico de Schiff (PAS) e azul alciano (conforme técnicas

padrão).

As lesões da bexiga foram classificadas em: a) neoplásicas (epiteliais ou

mesenquimais, malignas ou benignas); b) não-neoplásicas (anormalidades epiteliais não-

neoplásicas [hiperplasia, displasia, ninhos de Brunn, cistite polipóide, cistite cística, cistite

40

glandular, metaplasia glandular, metaplasia escamosa, vacúolos intraepiteliais], alterações

gerais na lâmina própria [dilatação de vasos linfáticos, hemorragia, edema, estroma mixóide,

tecido fibrovascular e tumefação de células endoteliais] e somente inflamatórias [infiltrado

inflamatório, folículos linfóides, cistite fibrinossupurativa, cistite crônica e aumento leve nos

mastócitos na lâmina própria]. Esta classificação foi compilada a partir das descrições de

lesões vesicais na HEB (PEIXOTO et al., 2003; SARDON et al., 2005; CARVALHO et al.,

2006) e de alterações vesicais em humanos (MURPHY et al., 2004) e está resumida no

Esquema 1.

3.5 Estudo imuno-histoquímico

As análises de imuno-histoquímica foram feitas em lâminas silanizadas com seções

histológicas de 3µm. Foram utilizados os seguintes anticorpos (Acs) primários: anticorpo

policlonal anti-pancitoceratina bovina produzido em coelho (DakoCytomation, cód. Z0622),

na diluição 1:4000; anticorpo monoclonal anti-vimentina suína, clone V9 (DakoCytomation,

cód. M0725), na diluição 1:100, e anticorpo policlonal anti-fator de von Willebrand humano

(DakoCytomation, cód. A0082), na diluição 1:400. Foi utilizada a técnica do complexo

estreptavidina-biotina-peroxidase (LSAB Kit Peroxidase Universal, DakoCytomation, cód.

K0690).

Após a desparafinização e re-hidratação com banhos de xilóis e álcoois em

concentrações decrescentes até água destilada, foi realizado o bloqueio da peroxidase

endógena com peróxido de hidrogênio e as seções histológicas foram submetidas à

recuperação antigênica, sendo incubadas em solução de TRIS-EDTA (pH 9,0) no forno

microondas (800W) em potência máxima por 10 minutos. Os Acs primários diluídos em

PBST foram adicionados separadamente nos cortes histológicos e incubados a 37ºC por duas

horas. O Ac secundário biotinilado e o complexo estreptavidina-biotina-peroxidase

(DakoCytomation, código K0690) foram incubados consecutivamente à 25ºC por 35 minutos

e marcados através da adição do cromógeno de tetracloreto de 3-3’diaminobenzidina (DAB,

Sigma D-5637). As seções histológicas foram então contra-coradas com hematoxilina de

Harris, desidratadas e montadas com resina sintética e lamínulas. Em cortes histológicos

selecionados, as seções foram primeiramente contra-coradas com azul alciano para a

demonstração de muco, por 20 minutos, antes da utilização da hematoxilina de Harris.

41

Como controles positivos, foram utilizadas seções histológicas previamente

determinadas como positivas para os Acs primários utilizados. Como controles negativos

foram utilizadas as mesmas seções histológicas testadas, porém com substituição dos Acs

primários por diluente de anticorpo (PBST).

Esquema 1 – Classificação das alterações histológicas observadas nas bexigas dos bovinos cronicamente intoxicados por samambaia (Pteridium aquilinum). Os critérios utilizados basearam-se em alterações vesicais descritas para humanos (MURPHY et al., 2004) e animais (PEIXOTO et al., 2003; SARDON et al., 2005; CARVALHO et al., 2006).

Alterações

Não-neoplásicas

Neoplásicas

malignas

benignas

epitelial

mesenquimal

epitelial

mesenquimal

Alterações epiteliais não-neoplásicas

Alterações gerais na lâmina própria

Alterações inflamatórias

4 RESULTADOS E DISCUSSÃO

4.1 Resultados

4.1.1 Epidemiologia

Foram analisadas 48 propriedades com ocorrência de carcinoma de células escamosas

(CCE) no trato alimentar superior (TAS), as quais totalizaram 60 casos dessa forma de

intoxicação e 16 propriedades com ocorrência de hematúria enzoótica bovina (HEB), com 17

casos. Os resultados obtidos estão descritos abaixo.

4.1.1.1 Perfil das propriedades e dos animais afetados por CCEs no TAS

Quanto à finalidade da criação, 28 (58,33%) propriedades realizavam cria e recria,

oito (16,66%) cria/recria/engorda, seis (12,5%) tinham a finalidade de subsistência, cinco

(10,41%) de cria e uma (2,08%) fazia somente a engorda dos animais. Em 23 (47,91%)

propriedades a pecuária era a principal atividade econômica e em 25 (52,08%) não.

Quanto à altitude, 30 (62,5%) propriedades se localizavam até 200 metros acima do

nível do mar, 15 (31,25%) entre 200 e 400 metros e três (6,25%) entre 400 e 800 metros de

altitude. A porcentagem da área de pastoreio infestada pela samambaia foi até 30% em todas

as propriedades que apresentaram essa forma de intoxicação.

Dos 60 animais que apresentavam CCEs no TAS, 28 (46,66%) eram adultos, com

idades entre três e sete anos e 32 (53,33%) eram idosos, com mais de oito anos. Nenhum dos

animais afetados era jovem (até dois anos de idade). Com relação ao sexo, 56 (93,33%) eram

fêmeas e quatro (6,66%) eram machos. A grande maioria dos animais afetados (55) eram de

raça mista (91,66%), três (5,0%) eram da raça Holandesa e dois (3,33%) da raça Jersey.

43

4.1.1.2 Perfil das propriedades e dos animais afetados por HEB

Com relação à finalidade da criação, cinco (31,25%) propriedades realizavam cria,

quatro (25%) cria e recria, quatro (25%) subsistência, duas (12,5%) cria/recria/engorda e uma

recria/engorda (6,25%). Nenhuma das 16 propriedades fazia apenas a terminação dos animais.

Em oito (50%) propriedades, a pecuária era a atividade principal e em oito (50%) não.

Com relação à altitude, seis (37,5%) estabelecimentos estavam situados em altitude até

200 metros, nove (56,25%) localizadas entre 200-400 metros e um (6,25%) entre 400-800

metros. Nas 16 propriedades estudadas a infestação dos campos por P. aquilinum foi estimada

como de até 30% da área de pastoreio. A distribuição das propriedades, com CCEs no TAS e

com HEB, conforme a altitude encontra-se no Gráfico 1.

Dos 17 bovinos acometidos por HEB, 14 eram adultos (82,35%) e apenas três

(17,64%) eram idosos. Nenhum estava na faixa etária considerada jovem. Quanto ao sexo, 15

(88,23%) eram fêmeas e dois (11,76%) eram machos. Com relação à raça, 14 (82,35%) eram

de raça mista, dois eram da raça Holandesa (11,76%) e um da raça Jersey (5,88%). A

distribuição dos bovinos, com CCEs no TAS e com HEB, conforme a idade encontra-se no

Gráfico 2.

4.1.2 Aspectos clínico-hematológicos

4.1.2.1 Sinais clínicos em bovinos com CCEs no TAS

Os sinais clínicos observados nos animais com CCEs no TAS (30 bovinos com

hemograma), em ordem decrescente de freqüência, foram emagrecimento progressivo

(29/30), atonia ruminal (22/30), tosse (20/30), disfagia (18/30), timpanismo (9/30),

regurgitação (9/30), estertor (6/30), apetite seletivo (6/30), sialorréia (6/30), anorexia (6/30),

extensão do pescoço (5/30), fraqueza (5/30), dificuldade de deglutir (4/30), halitose (3/30),

decúbito (2/30), dispnéia (2/30), edema de faringe (2/30), secreção nasal (1/30) e queda na

produção de leite (1/30). Freqüentemente eram observados grumos de alimento pouco

digerido nas fezes. O Bovino 40 apresentou sinais clínicos de ambas as formas crônicas de

44

intoxicação, caracterizados por emagrecimento progressivo, tosse (incluídos na contagem

anterior) e hematúria.

0

10

20

30

40

50

60

70

até 200 200-400 400-800

metros

pro

pri

ed

ad

es (

%)

CCE

HEB

Gráfico 1 – Altitude das propriedades afetadas pelas formas crônicas da intoxicação por samambaia (Pteridium aquilinum).

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

jovens (até 2 anos) adultos 3-7 anos idosos + de 8 anos

idade (anos)

bo

vin

os (

%)

CCE

HEB

Gráfico 2 – Idade dos bovinos afetados pelas formas crônicas da intoxicação por samambaia (Pteridium

aquilinum).

45

4.1.2.2 Sinais clínicos em bovinos com HEB

Os sinais clínicos descritos nos bovinos com HEB confirmada pela necropsia (nove

animais) e nos casos clínicos (nove animais) foram, em ordem decrescente de frequência:

hematúria (18/18; com o tempo de duração informado em três casos de 40, 90 e 180 dias e

intermitente em outro), emagrecimento progressivo (9/18), mucosas pálidas (4/18), apetite

seletivo (2/18), anorexia (2/18), decúbito lateral (1/18), dor abdominal (1/18), polaciúria

(1/18), prostração (1/18), fraqueza (1/18) e tenesmo (1/18). No Bovino 81 foi detectada, por

palpação retal, uma massa no interior da cavidade pélvica.

4.1.2.3 Achados hematológicos em bovinos com CCEs no TAS

Foram realizados 30 hemogramas de bovinos com lesões no TAS. Destes, 20 não

apresentaram alterações no eritrograma e 10 apresentaram anemia arregenerativa leve. Nos

animais anêmicos, o número de eritrócitos variou de 3,4 a 4,9 x 106/mm3 de sangue (valores

de referência - VR: 5,0-10,0 x 106/mm3); o hematócrito de 18-23% (VR: 24-46%) e o VCM

variou de 45,2 a 56,2 fl (VR: 40,0-60,0 fl).

Vinte e quatro bovinos não apresentaram alterações no leucograma. Seis apresentaram

desvio à esquerda (Figura 1), sendo cinco deles regenerativos e um degenerativo. O Bovino

42 apresentou linfopenia, o Bovino 60 eosinofilia, e o Bovino 77 monocitose

concomitantemente ao desvio à esquerda.

Os resultados detalhados e individualizados dos hemogramas dos bovinos com CCEs

no TAS podem ser observados no Apêndice B.

4.1.2.4 Achados hematológicos em bovinos com HEB

Foram realizados 15 hemogramas de bovinos com HEB, sendo que em seis destes as

lesões vesicais foram confirmadas pela necropsia. Destes 15, cinco não demonstraram

alterações no eritrograma e 10 apresentaram anemia arregenerativa. Nos animais anêmicos, o

46

número de eritrócitos variou de 1,9 a 4,8 x 106/mm3 de sangue (VR: 5,0-10,0 x 106/mm3); o

hematócrito de 10-23% (VR: 24-46%) e o VCM de 43,9 a 56,4 fl (VR: 40,0-60,0 fl).

Onze bovinos não demonstraram alterações no leucograma e quatro tiveram

alterações, sendo que três tiveram desvio à esquerda regenerativo, dois destes com linfopenia

concomitante, e um leucocitose por neutrofilia.

Os resultados detalhados e individualizados dos hemogramas dos bovinos com HEB

podem ser observados no Apêndice C.

4.1.3 Aspectos morfológicos

4.1.3.1 Achados macroscópicos em bovinos com CCEs no TAS

De um total de 46 casos de CCEs no TAS em que as bexigas foram avaliadas, 16

(34,78%) apresentavam alterações macroscópicas. Em ordem decrescente de freqüência, estas

alterações se caracterizavam por nódulos vermelhos e elevados (9/46; Figura 2), que variam

de 0,1 a 1,0 cm de diâmetro, na grande maioria múltiplos e distribuídos aleatoriamente pela

mucosa vesical (Figuras 3 e 4); hemorragia (6/46; Figura 5), principalmente nas formas de

petéquias e sufusões; nódulos pálidos (4/46; Figura 6), com no máximo 0,7 cm de diâmetro;

edema (3/46), papilomas (2/46; Figuras 7 e 8) e urina vermelha (2/46; Figuras 9 e 10). Muitas

dessas alterações estavam presentes numa mesma bexiga. Nos Bovinos 73 e 76 em que a

urina estava vermelha, através da centrifugação, foi possível observar um sedimento

vermelho-escuro (microscopicamente correspondente a eritrócitos; Figura 11).

O Bovino 40, que apresentou sinais clínicos das duas formas crônicas da intoxicação,

tinha macroscopicamente uma úlcera focalmente extensa na orofaringe (Figura 12), a qual na

superfície de corte se apresentava como extensa área de necrose (Figura 13) e numerosos

nódulos pálidos de até 0,7 cm de diâmetro na bexiga (Figura 14), alguns com pontos

vermelhos na superfície.

47

4.1.3.2 Achados macroscópicos em bovinos com HEB

Os achados macroscópicos observados no trato urinário dos 11 bovinos com HEB

foram: nódulos vesicais multifocais vermelho-escuros ou vermelho-claros (4/11); neoplasmas

vesicais focalmente extensos, com alteração da forma normal do órgão (5/11); urina vermelha

(4/11); hidronefrose com hidroureter (3/11); papilomas vesicais (2/11); áreas vermelhas

multifocais na mucosa vesical (1/11), pielonefrite (1/11) e ruptura da bexiga (1/11).

Os nódulos vermelho-escuros ou vermelho-claros (Figura 15) estavam distribuídos

aleatoriamente na mucosa vesical, variando desde 0,1 até 0,8 cm de diâmetro, alguns

ulcerados. Os neoplasmas que ocupavam extensas áreas eram formados por crescimentos

exofíticos com superfície irregular, branco-amarelada, com ou sem áreas vermelhas (Figuras

16 e 17) ou eram endofíticos, com espessamento da parede da bexiga e superfície

extensamente ulcerada recoberta por fibrina (Figura 18). Esses neoplasmas geralmente se

localizavam na região do trígono vesical. No Bovino 63 havia uma massa exofítica e necrótica

que obliterava toda a luz do órgão (Figura 19) e os linfonodos da cavidade pélvica estavam

aumentados, alguns com áreas multifocais firmes branco-amareladas (Figura 20). No Bovino

68 havia numerosas projeções, longas e finas com consistência gelatinosa, agrupadas em áreas

multifocais do neoplasma (cistite polipóide; Figuras 21 e 22).

Urina vermelha foi observada na bexiga de quatro bovinos (4, 36, 39 e 78), em dois

destes havia coágulos de sangue, alguns aderidos à mucosa vesical (rever Figura 15).

Hidronefrose e hidroureter (Figura 23, 24 e 25) estavam associadas à obstrução dos

óstios ureterais ou do início da uretra pelos neoplasmas e foram observados somente nos

casos com grandes neoplasmas vesicais. Os papilomas tinham aproximadamente 0,5 cm de

diâmetro. As áreas vermelhas multifocais eram constituídas de petéquias e equimoses. No

Bovino 78 o rim estava aumentado de tamanho, com a cápsula espessada e aderida (Figura

26). Na superfície capsular havia áreas branco-amareladas, multifocais a coalescentes e

irregulares (Figura 27), recobertas por exsudato purulento e fibrina. Ao corte, este rim estava

repleto de urina turva (Figura 28). Quando pressionado o ureter correspondente a esse rim,

fluía um líquido branco-amarelado e turvo para o interior da bexiga, misturando-se ao

conteúdo sanguinolento vesical (Figura 29). A urina contida na bexiga era vermelho-escura

com coágulos de sangue, diferente da observada no rim, a qual era turva (Figura 30). No

exame da urina encontrada neste rim, após a centrifugação, formou-se um sedimento amarelo-

48

acinzentado (Figura 31), o qual era formado por uma grande quantidade de neutrófilos

degenerados (indicando piúria) em meio a células epiteliais descamadas (Figura 32).

4.1.3.3 Achados histopatológicos em bovinos com CCEs no TAS

Nas bexigas dos 46 bovinos com CCEs no TAS, 44 (95,65%) apresentaram 22 tipos de

alterações diferentes. Dessas 22, cinco eram alterações neoplásicas (três neoplasmas benignos

e dois malignos) e 17 eram alterações não-neoplásicas. Das alterações não-neoplásicas, seis

foram enquadradas em alterações epiteliais não-neoplásicas, seis em alterações gerais na

lâmina própria e cinco em alterações somente inflamatórias. O detalhamento dos achados

histológicos observados nos bovinos com CCEs no TAS podem ser observados no Apêndice

D.

Os neoplasmas benignos observados foram classificados em mesenquimais (um

fibroma e quatro hemangiomas) ou epiteliais (papilomas em três bovinos). Dentre os

neoplasmas malignos, havia um de origem mesenquimal (hemangiossarcoma no Bovino 67) e

um epitelial (carcinoma de células de transição – CCT – nos Bovinos 40 e 73).

O fibroma se caracterizava pela proliferação de células neoplásicas fusiformes,

delimitadas por uma cápsula de tecido conjuntivo (Figura 33). As células tinham o citoplasma

eosinofílico, com núcleos alongados e cromatina agregada. O pleomorfismo era leve.

Os hemangiomas eram do tipo cavernoso e se caracterizavam pela formação de

espaços vasculares irregulares de tamanhos variados (Figura 34), geralmente preenchidos por

eritrócitos, delimitados internamente por uma única camada de células endoteliais bem

diferenciadas e separados um dos outros por septos de tecido conjuntivo (Figura 35). Os

papilomas (Figuras 36 e 37) eram compostos por células epiteliais bem diferenciadas,

arranjadas sobre um delicado estroma fibrovascular (Figura 38).

O hemangiossarcoma se caracterizava pela proliferação de células endoteliais

neoplásicas, pleomórficas formando espaços vasculares e, algumas vezes com projeções para

dentro desses espaços (Figura 39).

O CCT caracterizava-se pela proliferação de células uroteliais neoplásicas

pleomórficas, invadindo a lâmina própria (CCT não-papilífero e infiltrativo) (Figuras 40 e

41).

49

Em três casos houve mais de um tipo de neoplasma; no Bovino 40 observaram-se

hemangioma e CCT, no Bovino 67 hemangioma, hemangiossarcoma e papiloma e no caso 73,

papiloma e CCT.

As alterações epiteliais não-neoplásicas observadas nas bexigas dos bovinos com

CCEs no TAS foram, em ordem decrescente de freqüência, displasia (17/46), caracterizada

por vacuolização citoplasmática, proliferação e perda da orientação das células nas camadas

do urotélio, com núcleos de tamanhos e padrões de cromatina diferentes (Figura 42; ver

controle na Figura 43); vacúolos intraepiteliais (10/46), quando havia somente a formação de

vacúolos nas células do epitélio de transição (Figura 44); ninhos de Brunn (8/46), formados

por células do epitélio de transição, agrupadas em ninhos na lâmina própria, com ou sem

ligação com a superfície epitelial (Figuras 45, 46 e 47); hiperplasia (3/46), caracterizada por

mais de sete camadas de células epiteliais em áreas focalmente extensas do urotélio (Figura

48; rever controle na Figura 43), cistite cística (2/46), caracterizada pela formação de

estruturas císticas na lâmina própria, revestidas por epitélio de transição (Figuras 49 e 50),

algumas contendo substância eosinofílica amorfa intraluminal, PAS-positiva (Figura 51) e

cistite polipóide (1/46), quando havia edema na lâmina própria, causando a formação de

pólipos, cobertos por urotélio normal.

As alterações gerais na lâmina própria foram: dilatação de vasos linfáticos (18/46)

(Figura 52), alguns acompanhados de infiltrado inflamatório perivascular; tumefação de

células endoteliais (9/46; Figura 53); hemorragia (8/46), caracterizada por acúmulos de

eritrócitos na lâmina própria (em cinco casos havia diapedese de eritrócitos pelo urotélio;

Figura 54) e em um havia eritrofagocitose e pigmento granular marrom-dourado

(hemossiderina) no interior de macrófagos; edema (6/46); estroma mixóide (4/46), quando

havia áreas multifocais de tecido conjuntivo frouxo com produção de pequena quantidade de

substância amorfa levemente basofílica, azul alciano-positiva (Figuras 55, 56 e 57) e

formação focal de tecido fibrovascular (1/46).

As alterações somente inflamatórias foram: infiltrado linfoistioplasmocítico (41/46)

(Figura 58); folículos linfóides (16/46) organizados, muitas vezes, ao redor de pequenos vasos

(Figura 59); aumento leve nos mastócitos da lâmina própria (5/46); cistite

fibrinonecrossupurativa (1/46), quando havia neutrófilos na lâmina própria, necrose

multifocal no epitélio de transição e depósitos de fibrina (Figura 60) e cistite histiocítica

crônica (1/46), quando o infiltrado inflamatório era composto predominantemente por

macrófagos, com tecido conjuntivo fibroso.

50

Apenas em dois bovinos (18 e 58) não foram observadas alterações histopatológicas

vesicais. Em 36 casos, mais de uma alteração microscópica foi observada na bexiga.

4.1.3.4 Achados histopatológicos em bovinos com HEB

Nas bexigas de 11 bovinos com HEB foi observado um total de 19 tipos de alterações,

em 10 bovinos foram encontradas alterações múltiplas numa mesma bexiga. Das 19 alterações

observadas, cinco eram alterações neoplásicas e 14 eram não-neoplásicas (nove classificadas

como alterações epiteliais não-neoplásicas, três como alterações gerais na lâmina própria e

duas como alterações somente inflamatórias). O detalhamento dos achados histológicos

observados nos bovinos com HEB podem ser observados no Apêndice E.

Dentre os neoplasmas benignos, havia dois de origem epitelial, dois papilomas

(Bovinos 43 e 68), e três de origem mesenquimal, todos hemangiomas (Bovinos 4, 36 e 64).

Os hemangiomas eram do tipo capilar (Bovino 36; Figura 61), cavernoso (Bovino 64) e dos

dois tipos no Bovino 4.

Dentre os neoplasmas malignos, observaram-se três de origem epitelial, dois

carcinomas de células escamosas (CCE) nos Bovinos 5 e 65 e um carcinoma de células de

transição (CCT) no Bovino 78; e cinco de origem mesenquimal, todos hemangiossarcomas

(Bovinos 4, 17, 63, 68 e 64; Figura 62).

Quanto ao comportamento biológico, 38,46% dos neoplasmas eram benignos e

61,53% eram malignos. A classificação histológica das lesões neoplásicas, com a freqüência

de cada uma, pode ser observada na Tabela 1.

Os CCEs se caracterizavam pela proliferação de ceratinócitos neoplásicos formando

ilhas, algumas com ceratinização central (pérolas de ceratina; Figura 63), fitas e cordões. As

células eram poliédricas, grandes, com citoplasma eosinofílico, às vezes vacuolizado, núcleo

grande, redondo ou oval, com cromatina frouxa e um a dois nucléolos grandes e evidentes.

Havia grande quantidade de tecido conjuntivo fibroso (reação desmoplásica) entre as células

neoplásicas.

O CCT era do tipo não-papilífero e infiltrativo, formado pela proliferação de células

neoplásicas originadas do epitélio de transição. As células neoplásicas eram acentuadamente

pleomórficas, formando ninhos, fitas, pequenos agregados e dispostas em células individuais,

as quais invadiam a camada muscular própria da bexiga (Figura 64). Havia ilhas de células

51

neoplásicas no interior de vasos linfáticos (Figura 65), e as mesmas células obliteravam os

seios subcapsulares e trabeculares do linfonodo renal (Figura 66). Observavam-se em média

três mitoses em campo de grande aumento e áreas de metaplasia escamosa e glandular

adjacentes ao neoplasma.

Tabela 1 – Classificação histológica das lesões neoplásicas observadas nos casos de hematúria enzoótica bovina (HEB). Tipo de neoplasma Número Porcentagem (%)

Epiteliais 5 38,46

Benignos

Papiloma 2 15,38

Malignos

CCE 2 15,38

CCT 1 7,69

Mesenquimais 8 61,53

Benignos

Hemangiomas 3 23,07

Malignos

Hemangiossarcoma 5 38,46

Número total 13 100

CCE = carcinoma de células escamosas; CCT = carcinoma de células de transição.

Os hemangiossarcomas eram formados pela proliferação de células neoplásicas, às

vezes originando pequenos espaços vasculares, contendo poucos eritrócitos e áreas sólidas

adjacentes (Figura 67). As células eram na maioria fusiformes, com moderada quantidade de

citoplasma eosinofílico, núcleos grandes, redondos, alongados ou reniformes, com cromatina

frouxa e dois ou três nucléolos grandes e evidentes. O pleomorfismo era moderado ou

acentuado e observavam-se uma a três mitoses por campo de grande aumento (CGA). Em

dois bovinos (63 e 68), as células neoplásicas eram acentuadamente pleomórficas (Figura 68).

Nesses dois casos se fez necessário à utilização da técnica de imuno-histoquímica para a

determinação do diagnóstico. Em dois bovinos (63 e 78) havia metástases para linfonodos

regionais. No Bovino 63, o tecido linfóide dos linfonodos da cavidade pélvica estava

52

substituído pelas células neoplásicas (Figura 69). No Bovino 78 os seios subcapsulares e

trabeculares do linfonodo renal estavam obliterados pelas células epiteliais neoplásicas,

conforme descrito anteriormente.

Em três bovinos havia mais de um tipo de neoplasma, no Bovino 4 e 64 observou-se

hemangioma e hemangiossarcoma e no 68, papiloma e hemangiossarcoma. Em apenas um

dos casos não houve a formação de neoplasmas (Bovino 39).

A maioria das alterações não-neoplásicas estava relacionada ao epitélio de transição.

Esse grupo continha hiperplasia (5/11); displasia (3/11); ninhos de Brunn (6/11); vacúolos

intraepiteliais (5/11; Figura 70); cistite polipóide (2/11; Figura 71); cistite cística (2/11);

metaplasia glandular (3/11), quando células isoladas ou grupos de células no urotélio e na

lâmina própria produziam muco PAS e azul alciano-positivo; cistite glandular (1/11), quando

as células referidas anteriormente formavam estruturas semelhantes a glândulas que invadiam

a lâmina própria (Figuras 72, 73, 74 e 75); e metaplasia escamosa (1/11), caracterizada pela

proliferação de células bem diferenciadas do epitélio de revestimento, as quais sofriam

ceratinização à medida que se aproximavam da luz vesical (Figura 76).

As alterações na lâmina própria, observadas nos 11 casos de HEB perfizeram 3/14

alterações não-neoplásicas e foram: dilatação de vasos linfáticos (6/11), associada ou não a

infiltrado inflamatório adjacente; hemorragia (6/11), em três bovinos com diapedese de

eritrócitos pelo epitélio de transição da bexiga e edema leve a acentuado na lâmina própria

(6/11).

Foram observados dois tipos de alterações somente inflamatórias (2/14), as quais

foram: formação de folículos linfóides em seis dos casos e infiltrado inflamatório em 10 dos

casos estudados. Os folículos linfóides tinham distribuição multifocal na lâmina própria e o

infiltrado inflamatório observado era localizado subjacente ao urotélio e composto

principalmente por linfócitos, plasmócitos e histiócitos. Em três desses casos havia grande

quantidade de neutrófilos em associação com estas células. No Bovino 78 havia ulceração

multifocal no urotélio, agregados bacterianos basofílicos multifocais e acentuado infiltrado

neutrofílico.

No rim do Bovino 78 observava-se grande quantidade de neutrófilos e agregados

bacterianos basofílicos no interior de túbulos, necrose tubular e dilatação tubular multifocal.

Em regiões multifocais havia infiltrado neutrofílico no interstício, formando microabscessos

(pielonefrite) (Figuras 77 e 78).

53

4.1.4 Imuno-histoquímica

Os papilomas (Figura 79), CCE (Figura 80) e CCT (Figuras 81 e 82) e as alterações

epiteliais não-neoplásicas, como ninhos de Brunn (Figuras 83 e 84), metaplasia escamosa

(Figura 85) e cistite glandular (contracorada com azul alciano e hematoxilina de Harris)

(Figuras 86, 87 e 88) foram positivos para citoceratina. A vimentina marcou a reação

desmoplásica do CCE e CCT e os dois hemangiossarcomas pouco diferenciados (Figura 89),

os quais foram submetidos também a citoceratina, obtendo-se resultado negativo nesse

anticorpo. Os hemangiomas e hemangiossarcomas (Figuras 90 e 91) foram positivos para o

fator de von Willebrand. Nos dois hemangiossarcomas pouco diferenciados, referidos

anteriormente, obteve-se imunomarcação de poucas células neoplásicas através do uso desse

anticorpo (Figura 92).

54

Figura 1 - Esfregaço sanguíneo; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Grande quantidade de neutrófilos no esfregaço sanguíneo deste bovino que apresentou leucocitose por neutrofilia. Este mesmo animal estava anêmico e não foram observados sinais indicativos de regeneração medular. Panótico rápido (Obj. 20X) Figura 2 - Hemangioma; bexiga; Bovino 74; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Nódulo vermelho-escuro, único, na mucosa vesical (peça fixada). Figura 3 - Hemangiomas; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Nódulos vermelhos, múltiplos e de tamanhos variados e hemorragias multifocais na mucosa. Há urina com sangue na luz vesical. Figura 4 - Hemangiomas; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação da Figura 3. Nódulos vermelhos de 0,2 e 0,5 cm de diâmetro.

2

3 4

1

55

Figura 5 - Hemorragia; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Hemorragias leves e multifocais na mucosa vesical. Figura 6 - Carcinoma de células de transição; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Nódulos discretos, branco-amarelados, múltiplos e de tamanhos variados na mucosa vesical (setas). Figura 7 - Papiloma; bexiga; Bovino 67; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Papilomas multifocais na mucosa vesical (peça fixada). Figura 8 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Papiloma na mucosa vesical (peça fixada).

5 6

8 7

56

Figura 9 - Urina vermelha; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Grande quantidade de urina vermelho-escura na bexiga. Observam-se também nódulos e hemorragias na mucosa vesical. Figura 10 - Urina vermelha; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Urina vermelho-escura na bexiga sendo retirada com uma seringa. Figura 11 - Urina vermelha pós-centrifugação; Bovino 76; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Observa-se grande quantidade de sedimento vermelho-escuro no fundo do tubo de ensaio (microscopicamente esse sedimento corresponde a eritrócitos). Há também marcado avermelhamento do sobrenadante devido à hemólise pelo tempo transcorrido entre morte e coleta.

9

10 11

57

Figura 12 - Carcinoma de células escamosas (CCE); trato alimentar superior (TAS); Bovino 40; forma clínica de CCEs no TAS. Úlcera focalmente extensa na orofaringe. Bolo alimentar impactado caudalmente a epiglote. Figura 13 - Carcinoma de células escamosas (CCE); trato alimentar superior (TAS); Bovino 40; forma clínica de CCEs no TAS. Na superfície de corte da orofaringe há uma extensa área de necrose. Observam-se ainda papilomas na orofaringe e pequenas áreas ulceradas na epiglote. Figura 14 - Estroma mixóide/carcinoma de células de transição/hemangioma; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinoma de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Nódulos pálidos e pequenos nódulos vermelhos multifocais na mucosa vesical.

13

14

12

58

Figura 15 - Hemangioma; bexiga; Bovino 36; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há um nódulo vermelho na mucosa e um coágulo de sangue na luz vesical. Figura 16 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Massa tumoral exofítica de 20 x 28 cm de superfície irregular, branco-amarelada com áreas vermelhas, localizada na região do trígono da bexiga. Figura 17 - Carcinoma de células escamosas; bexiga; Bovino 5; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Massa tumoral exofítica de superfície irregular e amarela que se estende para a luz vesical. Há conteúdo necrótico sobre a massa tumoral e na luz da bexiga. Figura 18 - Carcinoma de células de transição; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Massa tumoral endofítica, com a superfície extensamente ulcerada, recoberta por fibrina, localizada no trígono da bexiga. Há úlceras menores localizadas no corpo da bexiga.

16 15

17 18

59

Figura 19 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). A luz vesical está preenchida por uma massa exofítica amarela e necrótica (peça fixada). Figura 20 - Metástase de hemangiossarcoma; linfonodo da cavidade pélvica; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observam-se áreas branco-amareladas extensas que obliteram parcialmente a arquitetura nodal de um linfonodo da cavidade pélvica (peça fixada).

19

20

60

Figura 21 - Cistite polipóide; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há projeções multifocais, alongadas e de consistência gelatinosa na mucosa vesical. Figura 22 - Cistite polipóide/hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observam-se as mesmas projeções da Figura 21, adjacentes ao hemangiossarcoma (peça fixada).

21

22

61

Figura 23 - Hidronefrose e hidroureter; bexiga, ureteres e rins; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). A bexiga está repleta de urina e os ureteres estão acentuada e difusamente dilatados. Note aumento de volume que se projeta por sobre a uretra. Figura 24 - Hidronefrose; rim; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Os cálices renais estão multifocalmente dilatados. Figura 25 - Hidronefrose; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Cálices acentuadamente dilatados com atrofia da região medular renal.

23

25 24

62

Figura 26 - Pielonefrite; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). A cápsula renal está espessada e aderida. Há exsudato purulento sobre a superfície capsular do rim. Figura 27 - Pielonefrite; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Na superfície capsular observam-se áreas multifocais ou coalescentes branco-amareladas. Figura 28 - Pielonefrite/hidronefrose; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Ao corte, o rim está repleto de líquido branco-amarelado e turvo (pus). Observam-se áreas branco-amareladas na cortical. Figura 29 - Carcinoma de células de transição; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Pressionando-se o ureter correspondente ao rim da Figura 28, o líquido turvo fluía, misturando-se ao conteúdo sanguinolento da luz vesical. Figura 30 - Urina vermelha (bexiga)/urina turva (rim); Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observa-se a urina vermelha contida na luz vesical e a urina turva contida no rim (com pielonefrite) nos tubos de ensaio. Figura 31 - Urina turva pós-centrifugação; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Após a centrifugação da urina, observou-se a formação de grande quantidade de sedimento amarelado-acinzentado. Figura 32 - Sedimento urinário; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Através do exame do sedimento urinário observado na figura 31, evidencia-se grande quantidade de neutrófilos degenerados (indicativo de piúria) e células epiteliais descamadas. Note que algumas células epiteliais são alongadas (setas), um aspecto morfológico típico de células da pelve renal (Obj. 40X).

26

28 29

27

31 30 32

63

Figura 33 - Fibroma; bexiga; Bovino 6; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há proliferação de células fusiformes em feixes dispostos em várias direções formando um nódulo discreto na lâmina própria delimitado por cápsula delicada. Hematoxilina-eosina (Obj. 4X). Figura 34 - Hemangioma cavernoso; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há proliferação de células endoteliais neoplásicas formando numerosos espaços vasculares repletos de eritrócitos na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). Figura 35 - Hemangioma cavernoso; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação da Figura 34. Observam-se células endoteliais neoplásicas bem diferenciadas, revestindo os espaços vasculares separados por septos conjuntivos. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 36 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Papiloma na bexiga. Hematoxilina-eosina. Aspecto submacroscópico. Figura 37 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células epiteliais bem diferenciadas formando projeções arranjadas sobre um delicado estroma fibrovascular. Hematoxilina-eosina (Obj. 4X). Figura 38 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação de uma das projeções observadas na Figura 37. As células proliferadas são muito semelhantes às células do epitélio de transição (urotélio) normal. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X).

33

35

38 37

36

34

64

Figura 39 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 67; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células endoteliais moderadamente diferenciadas formando projeções para o interior dos vasos neoplásicos. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 40 - Carcinoma de células de transição (CCT) tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células epiteliais neoplásicas, as quais invadem a lâmina própria subjacente. Há edema acentuado e infiltrado linfoistioplasmocítico na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). Figura 41 - Carcinoma de células de transição (CCT) tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação da Figura 40. Células neoplásicas acentuadamente pleomórficas, com núcleos grandes ou pequenos, de formas variadas com um ou dois nucléolos evidentes e citoplasma eosinofílico abundante, às vezes vacuolizado. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). Figura 42 - Displasia; bexiga; Bovino 75; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há aumento do número de camadas e perda da orientação das células uroteliais, com vacuolização citoplasmática em algumas delas e núcleos de tamanhos e padrões de cromatina diferentes. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 43 - Bexiga controle; Bovino 95. Epitélio de transição sem alteração, para comparação com as Figuras 42 e 44. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). Figura 44 - Vacúolos intraepiteliais; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há numerosos vacúolos no epitélio de transição. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X).

40 39

42 41

44 43

65

Figura 45 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 62; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células epiteliais formando ninhos na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 46 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 62; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Magnificação da Figura 45. As células epiteliais são muito semelhantes às células do urotélio normal. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). Figura 47 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Formação de ninhos de Brunn na lâmina própria. Há edema acentuado e infiltrado inflamatório linfoplasmocítico moderado. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 48 - Hiperplasia; bexiga; Bovino 62; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Observa-se um maior número de camadas de células no epitélio de transição (entre 15-20 camadas). Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 49 - Cistite cística; bexiga; Bovino 73; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Proliferação de células epiteliais formando cistos, contendo material amorfo eosinofílico intraluminal. Observam-se ainda ninhos de Brunn na lâmina própria (setas). Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). Figura 50 - Cistite cística; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). A parede do cisto é formada por duas a três camadas de células epiteliais achatadas e contém material eosinofílico amorfo intraluminal. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X).

45 46

49

48 47

50

66

Figura 51 - Cistite cística; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Os cistos contém material fortemente PAS-positivo intraluminal. Técnica do PAS (Obj. 20X). Figura 52 - Dilatação de vasos linfáticos; bexiga; Bovino 74; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Observa-se acentuada dilatação de um vaso linfático na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). Figura 53 - Tumefação de células endoteliais; bexiga; Bovino 22; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). As células endoteliais de vasos da lâmina própria estão marcadamente tumefeitas. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). Figura 54 - Hemorragia; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há hemorragia acentuada na lâmina própria. Observa-se diapedese de eritrócitos pelo urotélio. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 55 - Estroma mixóide; bexiga; Bovino 41; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Estroma mixóide azul alciano-positivo observado na lâmina própria da bexiga. Técnica do azul alciano. Aspecto submacroscópico.

51

54 53

52

55

67

Figura 56 - Estroma mixóide; bexiga; Bovino 41; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há proliferação de células fusiformes ou estreladas arranjadas frouxamente e envoltas por matriz eosinofílica, formando um nódulo bem delimitado na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 4X). Figura 57 - Estroma mixóide; bexiga; Bovino 41; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). A matriz que envolve as células é fortemente azul alciano-positivo. Técnica do azul alciano (Obj. 4X). Figura 58 - Infiltrado linfoistioplasmocítico; bexiga; Bovino 62; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há acentuado infiltrado inflamatório, composto por linfócitos, plasmócitos e histiócitos na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 59 - Folículos linfóides; bexiga; Bovino 76; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Observam-se agregados de linfócitos, plasmócitos e histiócitos organizados, formando folículos linfóides na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 60 - Cistite fibrinossupurativa; bexiga; Bovino 74; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Há necrose do epitélio de transição, acúmulo de fibrina, infiltrado neutrofílico acentuado e agregados bacterianos basofílicos intralesionais. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). Figura 61 - Hemangioma capilar; bexiga; Bovino 4; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células endoteliais neoplásicas bem diferenciadas que formam espaços vasculares irregulares, às vezes contendo eritrócitos, separados por um fino estroma conjuntivo. Hematoxilina-eosina (Obj. 4X).

56

60

59 58

57

61

68

Figura 62 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 64; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há proliferação de células endoteliais formando projeções para o interior dos espaços vasculares neoplásicos. As células neoplásicas têm núcleos grandes redondos ou ovais com cromatina periférica e um ou dois nucléolos evidentes e citoplasma eosinofílico com limites citoplasmáticos indistintos. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). Figura 63 - Carcinoma de células escamosas; bexiga; Bovino 5; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de ceratinócitos neoplásicos formando ilhas com ceratinização lamelar concêntrica central (pérolas de ceratina). Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 64 - Carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células neoplásicas formando ninhos, fitas, cordões e pequenos agregados que invadem a submucosa. Há moderada reação desmoplásica entre as células neoplásicas. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 65 - Carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observam-se células neoplásicas no interior de um vaso linfático da submucosa. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 66 - Metástase de carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; linfonodo renal; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há células epiteliais neoplásicas nos seios trabeculares do linfonodo. As células neoplásicas são acentuadamente pleomórficas e observam-se mitoses. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X) Figura 67 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 4; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células endoteliais neoplásicas na lâmina própria formando espaços vasculares contendo poucos eritrócitos e áreas sólidas. Há ainda vacuolização do epitélio de transição. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X).

62

65 64

63

67 66

69

Figura 68 - Hemangiossarcoma pouco diferenciado; bexiga; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células neoplásicas altamente pleomórficas. Os núcleos têm tamanhos e formatos variados com cromatina frouxa e nucléolos pouco evidentes. O citoplasma é eosinofílico e escasso, com limites citoplasmáticos indistintos. Observa-se uma mitose (seta). Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). Figura 69 - Metástase de hemangiossarcoma pouco diferenciado; linfonodo da cavidade pélvica; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células neoplásicas nos seios subcapsulares do linfonodo. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 70 - Vacúolos intraepiteliais; bexiga; Bovino 4; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há vacúolos no epitélio de transição. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X). Figura 71 - Cistite polipóide; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observam-se projeções recobertas por epitélio de transição, com edema acentuado na lâmina própria. Hematoxilina-eosina. Aspecto submacroscópico. Figura 72 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Proliferação de células epiteliais formando estruturas glandulares na lâmina própria. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). Figura 73 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Magnificação da Figura 72. As células epiteliais contém no citoplasma vacúolos repletos de um conteúdo fracamente basofílico. Hematoxilina-eosina (Obj. 40X).

68

71 70

73 72

69

70

Figura 74 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). O material fracamente basofílico, observado no citoplasma das células epiteliais da Figura 73, apresenta-se fortemente azul alciano-positivo. Técnica do azul alciano (Obj. 10X). Figura 75 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). O material observado nos vacúolos das células epiteliais proliferadas é fortemente PAS-positivo. Técnica do PAS (Obj. 40X). Figura 76 - Metaplasia escamosa; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Observa-se a proliferação de células do urotélio, as quais sofrem diferenciação escamosa à medida que se aproximam da luz vesical. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 77 - Pielonefrite; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há acentuado infiltrado neutrofílico na luz tubular e no interstício renal, necrose tubular multifocal, espessamento da cápsula de Bowman e fibrose moderada. Hematoxilina-eosina (Obj. 10X). Figura 78 - Pielonefrite; rim; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Há infiltrado neutrofílico acentuado na luz tubular e fibrose intersticial. Hematoxilina-eosina (Obj. 20X). Figura 79 - Papiloma; bexiga; Bovino 30; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Há forte imunomarcação das células epiteliais proliferadas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 40X).

74

77 76

78 79

75

71

Figura 80 - Carcinoma de células escamosas; bexiga; Bovino 5; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Observa-se forte imunomarcação das células neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidade (Obj. 20X). Figura 81 - Carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Moderada imunomarcação das células epiteliais neoplásicas na lâmina própria. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 20X). Figura 82 - Carcinoma de células de transição tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Observam-se ninhos, fitas, pequenos agregados e células individuais fortemente imunomarcadas na submucosa. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 20X).

81 82

80

72

Figura 83 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Observa-se imunomarcação das células epiteliais dos ninhos de Brunn e do epitélio de revestimento. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj.20X). Figura 84 - Ninhos de Brunn; bexiga; Bovino 40; forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Magnificação da Figura 83. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 40X). Figura 85 - Metaplasia escamosa; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Observa-se forte imunomarcação das células do urotélio. Método estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 20X). Figura 86 - Cistite glandular; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Há forte imunomarcação das células epiteliais, com conteúdo intracitoplasmático fortemente azul alciano-positivo. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase, contracorado com azul alciano e hematoxilina de Harris (Obj. 10X). Figura 87 - Cistite glandular e carcinoma de células de transição (CCT) tipo não-papilífero e infiltrativo; bexiga; Bovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Há proliferação de células epiteliais bem diferenciadas formando estruturas semelhantes a glândulas, contendo material azul alciano-positivo intracitoplasmático (cistite glandular). Subjacente, observa-se a proliferação de células epiteliais neoplásicas, formando ninhos que invadem a lâmina própria (CCT). Método da estreptavidina-biotina-peroxidase, contracorado com azul alciano e hematoxilina de Harris (Obj. 20X). Figura 88 - cistite glandular; bexiga; Vovino 78; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-pancitoceratina bovina. Magnificação da Figura 87. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase, contracorado com azul alciano e hematoxilina de Harris (Obj. 40X).

83

88 87

86 85

84

73

Figura 89 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 68; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-vimentina. Observa-se forte imunomarcação das células neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidade (Obj. 20X). Figura 90 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 4; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-fator de von Willebrand. Há imunomarcação de células endoteliais neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 20X). Figura 91 - Hemangiossarcoma; bexiga; Bovino 64; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-fator de von Willebrand. Há forte imunomarcação das células endoteliais neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 40X). Figura 92 - Hemangiossarcoma pouco diferenciado; bexiga; Bovino 63; forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Imuno-histoquímica, anticorpo anti-fator de von Willebrand. Observa-se imunomarcação de poucas células neoplásicas. Método da estreptavidina-biotina-peroxidase (Obj. 40X).

89 90

91 92

74

4.2 Discussão

Quanto ao perfil das propriedades onde as formas crônicas de intoxicação por

Pteridium aquilinum tem sido observadas vários aspectos foram considerados.

A grande maioria das propriedades que tiveram casos de intoxicação crônica por

samambaia, tanto hematúria enzoótica bovina (HEB) quanto carcinomas de células escamosas

no trato alimentar superior (CCEs no TAS), tinham a finalidade de reprodução, seja ela

relacionada ao ciclo completo de criação (cria/recria/engorda) ou apenas à cria e/ou recria dos

bezerros. Propriedades que criam bovinos com essa finalidade mantêm as fêmeas por maior

tempo nos pastos, aumentando as chances de ingestão prolongada de pequenas quantidades da

planta. O tempo em que os animais permanecem ingerindo a planta e a quantidade consumida

estão diretamente ligados à ocorrência das formas crônicas da intoxicação (DÖBEREINER et

al., 1967), que é considerada dose-dependente (TOKARNIA et al., 2000).

Aproximadamente metade das propriedades analisadas, tanto com HEB quanto com

CCEs no TAS, tinham a pecuária como principal atividade econômica. As outras associavam

a pecuária a outro tipo de atividade, principalmente com agricultura. A HEB tem sido descrita

tanto em bovinos criados extensivamente como naqueles confinados, porém sempre limitada a

determinadas áreas do mundo. Uma característica comum é que a doença ocorre em campos

que não têm sido utilizados por longos períodos para a agricultura, afetando geralmente

bovinos criados em campo nativo não-cultivado ou áreas de florestas que foram devastadas,

sejam elas planas ou montanhosas. Em campos que começam a ser utilizados também para a

agricultura, dependendo da intensidade dessa utilização, em dez anos ou mais a doença

diminue ou desapareçe completamente (ROSENBERGER, 1971).

As propriedades estudadas se localizavam principalmente entre poucos metros de

altitude até 400 metros acima do nível do mar, apenas três propriedades com CCEs no TAS e

uma com HEB estavam no intervalo entre 400-800 metros. A intoxicação crônica por

samambaia tem sido relatada em várias altitudes (CAMPOS NETO et al., 1975). A

concentração de ptaquilosídeo em P. aquilinum subespécie caudatum variedade

arachnoideum varia de acordo com a altitude. Plantas que estão à 1.800 metros acima do nível

do mar têm maior concentração desse princípio tóxico quando comparado com plantas da

mesma variedade localizadas entre 1.000 e 1.400 metros de altitude (VILLALOBOS-

SALAZAR, 1999). Um trabalho realizado na ilha de São Miguel, em Açores, Portugal,

demonstrou que a altitude também interferiu na infestação dos pastos pela planta. Terras

75

localizadas em baixas altitudes (abaixo de 500 metros) têm aproximadamente 3,7 vezes mais

P. aquilinum que em terras localizadas em altitudes maiores. Este fato pode ocorrer devido ao

efeito combinado de temperatura mais baixa no inverno, maior umidade e maior dificuldade

de drenagem nas terras mais elevadas, o que não favorece o crescimento da samambaia,

reduzindo assim a invasão dos pastos pela planta (PINTO et al., 1999).

Todas as propriedades estudadas tinham, na área de pastoreio, até cerca de 30% de

infestação pela planta, presumindo-se que os bovinos consumiram pequena quantidade de

samambaia durante meses ou anos, estando de acordo com o descrito na literatura para as

formas crônicas da intoxicação (TOKARNIA et al., 2000).

Apesar das pequenas diferenças observadas entre as propriedades com casos de CCEs

no TAS ou HEB, não foram encontradas características que expliquem a ocorrência de uma

ou outra forma crônica de intoxicação por samambaia, dentro dos parâmetros analisados.

Os bovinos afetados pela forma crônica de CCEs no TAS se enquadraram na faixa

etária de idosos (32/60) e adultos (28/60) e os afetados pela HEB, na grande maioria, eram

adultos (15/18), observando-se apenas três idosos. Nenhum bovino, das duas formas crônicas

estudadas, estava na faixa etária considerada jovem (até dois anos de idade). Esses achados

estão de acordo com o descrito na literatura, sendo que os CCEs no TAS são observados

principalmente em bovinos mais velhos, de seis anos ou mais, enquanto a HEB afeta

principalmente bovinos com idade superior a 2 anos (TOKARNIA et al., 2000).

A maioria dos bovinos afetados com qualquer das formas clínicas analisadas eram

vacas. A intoxicação crônica por samambaia afeta principalmente vacas devido à maior

permanência dessa categoria animal nas propriedades (CAMPOS NETO et al., 1975;

SOUTO, 2005).

Não foi observada predisposição racial, sendo que a maioria dos bovinos afetados

eram de raça mista. Todas as raças de bovinos podem ser acometidas pela intoxicação crônica

por samambaia (PAMUKCU et al., 1976).

Os sinais clínicos observados nos bovinos com CCES no TAS estão de acordo com os

descritos na literatura (DÖBEREINER et al., 1967; TOKARNIA et al., 1969; TOKARNIA et

al., 2000) e já foram discutidos em outros estudos, os quais utilizaram bovinos da mesma

região (SOUTO, 2005; MASUDA, 2007).

Em relação à HEB, a hematúria foi o sinal clínico observado em todos os casos e foi o

parâmetro utilizado para a inclusão dos nove casos clínicos de HEB do presente estudo. Este

achado clínico é considerado o sinal cardinal dessa doença (PAMUKCU et al., 1976), e inicia

com micro-hematúria, situação em que os eritrócitos na urina são observados apenas

76

microscopicamente (ROSENBERGER, 1971). A micro-hematúria vista na HEB pode estar

associada a petéquias, equimoses e sufusões no urotélio dos cálices renais, pelve renal, ureter

e bexiga, ou ocorrer antes mesmo de surgirem lesões macroscopicamente visíveis (MAXIE;

NEWMANN, 2007). Semanas ou meses após, já se pode observar macro-hematúria, situação

em que a urina fica tingida de vermelho e, após a centrifugação, ocorre a formação de um

sedimento de eritrócitos (ROSENBERGER, 1971). A hematúria pode ser intermitente ou

contínua (GAVA, 1993), durando poucas semanas a meses (PAMUKCU et al., 1976). Neste

estudo, em apenas três casos foi possível obter a informação da duração da hematúria (40 e

180 dias) e em um dos casos clínicos estudados, a hematúria era intermitente.

O segundo sinal clínico mais observado em bovinos com HEB foi o emagrecimento

progressivo, também descrito por outros autores, que dizem que à medida que a doença

avança, ocorre a morte dos animais por caquexia (GAVA, 1993; TOKARNIA et al., 2000).

Os outros sinais clínicos também foram relatados, por outros autores, como de ocorrência

menos freqüente (TOKARNIA, et al., 1969; HOPKINS, 1986; SCHOTT et al., 2002). Em um

dos bovinos, através da palpação retal, detectou-se uma massa na cavidade pélvica, achado

também descrito na literatura (RADOSTITS et al., 2002).

Apesar da marcada sobreposição das lesões vesicais das duas formas crônicas da

intoxicação, que será discutida mais adiante, clinicamente apenas o bovino 40 apresentou

sinais clínicos das duas formas, detectados clinicamente. Este caso foi incluído, em todos os

parâmetros avaliados, como um caso de CCEs no TAS, pois a lesão mais grave observada

nesse bovino se localizava no TAS, indo ao encontro do que já foi descrito (DÖBEREINER et

al., 1967; TOKARNIA et al., 1969).

Através dos hemogramas, pode-se observar que 33,33% dos bovinos com CCEs no

TAS apresentaram anemia arregenerativa leve. Apenas um trabalho experimental, dentre os

consultados, relata as alterações hematológicas relacionadas a essa forma de intoxicação

crônica por P. aquilinum, sendo que as alterações são descritas apenas no leucograma

(CAMPO et al., 1994). Os resultados obtidos no eritrograma destes bovinos serão discutidos

posteriormente. No presente estudo, 20% dos bovinos apresentaram alterações no leucograma,

as quais foram desvio à esquerda regenerativo (5/30) e degenerativo (1/30), linfopenia (1/30),

eosinofilia (1/30) e monocitose (1/30). O desvio à esquerda, aqui observado, não foi descrito

na literatura. Linfopenia é um achado hematológico importante em bovinos cronicamente e

experimentalmente intoxicados (CAMPO et al., 1994), porém foi observado em apenas um

bovino deste estudo. Eosinofilia e monocitose também foram descritos na literatura (DAWRA

et al., 1999; FALBO et al., 2005), porém em bovinos com HEB. É importante salientar que

77

neste estudo os hemogramas foram realizados com o objetivo de determinar o perfil

hematológico da fase terminal da intoxicação, com a doença clinicamente bem estabelecida, e

talvez isso explique as diferenças de alguns resultados aqui obtidos dos descritos na literatura,

nos quais a doença foi reproduzida experimentalmente e os animais foram acompanhados

periodicamente por longos períodos (CAMPO et al., 1994). Todos os bovinos deste estudo

que apresentaram desvio à esquerda tinham CCEs ulcerados no TAS e/ou abscessos

adjacentes aos CCEs. Em 50% dos casos em que ocorreu anemia, observou-se

morfologicamente hemorragia na lâmina própria e/ou hemangiomas, o que talvez tenha

permitido a perda de sangue pela urina.

Em relação aos bovinos com HEB, 66,67% apresentaram anemia arregenerativa. Os

demais (33,33%) não apresentaram alteração no eritrograma. As alterações no eritrograma

observadas em bovinos com HEB incluem a diminuição dos valores do hematócrito (Ht),

hemoglobina, número de eritrócitos e volume corpuscular médio (VCM) (SÁNCHEZ-

VILLALOBOS et al., 2004). No presente estudo houve diminuição no número de eritrócitos e

no valor do Ht, porém não houve alteração no VCM, caracterizando morfologicamente a

anemia como normocítica e, conseqüentemente como arregenerativa. A anemia observada em

bovinos com HEB tem sido relacionada à contínua perda de sangue pela urina (SINGH et al.,

1973), no entanto, as anemias hemorrágicas se caracterizam por serem bastante regenerativas

(FIGHERA, 2001), característica essa que não foi observada no presente estudo, nas duas

formas crônicas da intoxicação. A presença de hematúria evidencia a perda de sangue, que

com certeza estava ocorrendo nestes bovinos, porém outro fator interferiu, impedindo a

regeneração do tecido eritróide, regeneração esta esperada nas anemias por perda de sangue.

Existe um tipo de anemia, denominada anemia por doença crônica, associada a uma redução

na proliferação eritróide e à utilização inadequada do ferro (COTRAN et al., 2000). Talvez

este tipo de anemia possa explicar os resultados aqui obtidos. Outra hipótese para os achados

aqui descritos é que o princípio ativo da planta estivesse agindo diretamente na medula óssea,

já que na forma aguda da intoxicação ocorre rarefação do tecido hematopoético (TOKARNIA

et al., 2000). Porém, alterações na hematopoese nas formas crônicas da intoxicação não foram

descritas na literatura consultada.

A anemia por doença crônica ocorre associada a doenças crônicas infecciosas,

inflamatórias, traumáticas e a neoplasmas (LEE et al., 1998) e caracteriza-se por ser

arregenerativa e leve (MEUTEN, 2002; THRALL, 2006). Existem três teorias para explicar a

patogênese dessa alteração, todas elas pela influência de citocinas liberadas em conseqüência

da doença crônica subjacente (LEE et al., 1998). Acredita-se que há uma redução na

78

sobrevida dos eritrócitos (LEE et al., 1998), um defeito na reutilização do ferro devido a um

bloqueio na transferência do ferro do reservatório de armazenamento para os precursores

eritróides (COTRAN et al., 2000), ocorrendo anemia pela falta de disponibilidade de ferro

para os precursores eritróides (THRALL, 2006) e uma hipoproliferação medular, causada pela

diminuição na produção de eritropoetina renal pela ação da interleucina 1 (IL-1), fator de

necrose tumoral-α (TNF-α) e do interferon-γ secretados pela condição crônica subjacente

(COTRAN et al., 2000) e pela menor resposta medular à eritropoetina (THRALL, 2006).

Em cinco bovinos com HEB não houve anemia, resultado também descrito na

literatura, em bovinos com micro-hematúria (FALBO et al., 2005). A ausência de anemia em

animais que já desenvolveram macro-hematúria não foi relatada nos trabalhos revisados.

As alterações no leucograma ocorreram em apenas quatro bovinos com HEB.

Alterações na contagem total de leucócitos não foram observadas por alguns autores em

bovinos com HEB (SINGH et al., 1973; FALBO et al., 2005), porém outros, descreveram

leucopenia como um achado freqüente (HOPKINS, 1986; MARRERO et al., 2001). Nos

bovinos do presente estudo não foi observada leucopenia, e sim leucocitose por neutrofilia,

sendo que nesses casos havia ulceração epitelial vesical, cistite ou pielonefrite, o que explica

esse achado. Em apenas dois bovinos com HEB observou-se linfopenia, sendo este um

achado importante em bovinos de um estudo experimental (CAMPO et al., 1992).

Na avaliação macroscópica, 34,78% das bexigas de bovinos com CCEs no TAS

apresentavam lesões macroscopicamente visíveis na mucosa vesical. As lesões se

caracterizavam principalmente por nódulos vermelhos e hemorragias multifocais na mucosa

vesical, muito semelhantes às observadas nos casos de HEB. Este achado está de acordo com

o relatado anteriormente, no qual 30% dos casos de CCEs no TAS tinham também

neoplasmas na bexiga (JARRETT et al., 1978). A coexistência de lesões no TAS e na bexiga

ocorre nos bovinos, e a lesão mais acentuada, responsável pelo surgimento dos sinais clínicos,

é o que determina o quadro clínico apresentado pelo animal (TOKARNIA et al., 1969). No

presente estudo, em relação ao histórico clínico, apenas o Bovino 40 desenvolveu sinais

clínicos das duas formas da intoxicação crônica por samambaia, porém, no exame

macroscópico, mais dois bovinos tinham urina vermelha na bexiga, que depois de

centrifugada revelou um sedimento de eritrócitos, o que caracteriza a hematúria. Nestes casos,

talvez o proprietário não tenha visto o bovino apresentar hematúria e por isso não relatou este

sinal clínico ao veterinário.

As alterações macroscópicas observadas nas bexigas de bovinos com HEB foram

diversas e estão de acordo com o descrito na literatura (PAMUKCU et al., 1967;

79

CARVALHO et al., 2006). Hidronefrose com hidroureter foi observada em três casos e

ruptura da bexiga e pielonefrite foram observadas em apenas um caso. Essas alterações

ocorrem como complicações graves dos neoplasmas vesicais, causadas por obstrução do fluxo

urinário e infecção bacteriana ascendente (ROSENBERGER, 1971) e são pouco observadas

na HEB (TOKARNIA et al., 2000). Em apenas um dos casos, macroscopicamente observou-

se metástase para os linfonodos regionais. Metástases são descritas eventualmente em bovinos

com HEB e geralmente ocorrem para os linfonodos regionais e órgãos adjacentes ao

neoplasma (TOKARNIA et al., 2000).

Histologicamente, 44/46 casos com CCEs no TAS apresentaram algum tipo de

alteração. Este resultado é interessante quando comparado com as alterações observadas

macroscopicamente (vistas em apenas 16 bexigas), conforme foi discutido anteriormente nas

alterações macroscópicas. As lesões microscópicas vesicais apenas histologicamente visíveis,

não foram descritas em casos de CCEs no TAS na literatura consultada.

Os neoplasmas observados neste estudo, nos casos de CCEs no TAS, foram benignos

ou malignos, epiteliais ou mesenquimais. Hemangiomas, fibromas, carcinomas de células de

transição e adenocarcinomas também foram observados nas bexigas de bovinos com CCEs no

TAS (JARRETT et al., 1978).

As alterações epiteliais não-neoplásicas observadas nos bovinos com CCEs no TAS

englobaram uma série de alterações histológicas, dessas, as displásicas foram vistas em um

grande número de bexigas. Displasias são consideradas alterações pré-neoplásicas, porém,

nem todas elas necessariamente vão evoluir para uma neoplasia (CULLEN et al., 2002).

As alterações na lâmina própria e as inflamatórias, conforme observadas neste estudo,

podem anteceder ou ocorrer concomitantemente aos neoplasmas vesicais (MEUTEN, 2002).

A tumefação de células endoteliais foi um achado freqüente. Alterações vasculares descritas

em casos de HEB variam desde a proliferação de vasos sanguíneos bem diferenciados até a

proliferação de células endoteliais da íntima das artérias, formando pequenas papilas no

lúmem vascular (PEIXOTO et al., 2003). Alguns autores sugerem que a samambaia possui

um “fator sangrante”, de estrutura desconhecida. Vasos sanguíneos alterados provocam

hemorragias para a parede ou lúmen vesical e alterações hemangiomatosas podem se

desenvolver nessas áreas, ocasionando macro-hematúria, que em alguns casos ocorre sem o

desenvolvimento de lesões neoplásicas (NEWMAN et al., 2007). Neste estudo foram

observados casos com macro-hematúria, sem lesões neoplásicas vesicais, tanto nos casos de

CCEs no TAS quanto nos casos de HEB.

80

Aproximadamente 30% das alterações observadas nas bexigas de bovinos com HEB

eram neoplásicas, dessas, os neoplasmas mesenquimais foram mais observados (61,53%) que

os epiteliais (38,46%). Outros estudos descrevem maior quantidade de neoplasmas epiteliais

(CARVALHO et al., 2006) e de neoplasmas mistos, isto é, com a coexistência de células

mesenquimais e epiteliais num mesmo tumor (PAMUCKU et al., 1976). Neoplasmas mistos

não foram observados neste estudo, porém em três animais havia mais de um tipo histológico

de neoplasma no mesmo bovino, achado também descrito na literatura (CARVALHO et al.,

2006).

Muitas vezes há dificuldade de comparar os resultados aqui obtidos com trabalhos

publicados. As diferenças observadas nos trabalhos consultados podem ser explicadas devido

a diferentes critérios de classificação ou metodologia utilizada. Lesões interpretadas como

displasia acentuada por alguns autores podem ser interpretadas como alterações neoplásicas

por outros e ainda, estudos que consideram somente lesões neoplásicas tem resultados

diferentes de trabalhos que utilizam lesões neoplásicas e não-neoplásicas nos cálculos de

freqüência de alterações vesicais na HEB (PEIXOTO et al., 2003).

Em relação ao comportamento biológico, a maior parte dos neoplasmas eram malignos

(61,53%), achado que está de acordo com o descrito na literatura (CARVALHO et al., 2006).

Em dois casos (Bovinos 63 e 78), observou-se metástase para os linfonodos da

cavidade pélvica e linfonodo renal, desses, no Bovino 78 não havia alteração macroscópica,

porém histologicamente observou-se acentuada invasão dos seios subcapsulares e trabeculares

pelas células neoplásicas. Em um estudo, 10% dos carcinomas metastatizaram para os

linfonodos ilíacos e em três animais houve ainda a disseminação para os pulmões

(PAMUCKU et al., 1976). Metástases raramente ocorrem em casos de HEB, mesmo naqueles

em que os neoplasmas são acentuadamente pleomórficos e com caráter invasivo. Esses

achados sugerem a existência de alguns fatores ainda não determinados que impedem a

disseminação das células neoplásicas (PEIXOTO et al., 2003).

Aproximadamente 70% das alterações vesicais observadas em bovinos com HEB eram

não-neoplásicas e, apesar de não terem a mesma prevalência aqui observada, foram também

descritas por outros autores (PEIXOTO et al., 2003; SARDON et al., 2005; CARVALHO et

al., 2006). Essas alterações muitas vezes estão associadas a neoplasmas vesicais e também

contribuem para o diagnóstico histológico da doença (BORZACCHIELLO; ROPERTO,

2008).

As alterações epiteliais foram as mais prevalentes das alterações não-neoplásicas

observadas nos casos de HEB. Esses achados são relevantes, pois podem significar alterações

81

iniciais, as quais antecedem alterações neoplásicas. Neoplasmas epiteliais parecem se

desenvolver a partir de alterações hiperplásicas e metaplásicas (escamosas e glandulares) no

urotélio, freqüentemente acompanhadas de alterações vasculares (NEWMAN et al., 2007). Os

carcinógenos químicos em geral, induzem neoplasias após uma série de eventos celulares e

histológicos, que iniciam com hiperplasia focal do urotélio e metaplasia escamosa, as quais

evoluem para displasias, que por sua vez se transformam em neoplasias (MEUTEN, 2002).

As mais diversas alterações aqui observadas talvez tenham sido induzidas pelos princípios

tóxicos da planta, os quais são eliminados de forma ativa pela urina (LIOI et al., 2004),

principalmente porque muitas destas alterações vesicais se repetiram nos casos de CCEs no

TAS e são descritas em outros trabalhos de HEB. A avaliação de uma possível participação

do papilomavírus bovino tipo 2 (BPV-2) na gênese das lesões vesicais não foi alvo deste

estudo.

Os ninhos de Brunn, observados em seis casos de HEB e em oito casos de CCEs no

TAS, são considerados lesões pré-neoplásicas em humanos, também têm sido relatados

adjacentes a neoplasmas vesicais em animais (MEUTEN, 2002), e parecem ser o local de

origem de neoplasmas epiteliais (NEWMAN et al., 2007). Alterações metaplásicas são

consideradas uma resposta do urotélio frente a um estímulo constante, e é comum a

ocorrência de mais de um tipo de metaplasia, ou a coexistência de alterações metaplásicas

com lesões proliferativas (MURPHY et al., 2004). Neste estudo, observaram-se metaplasia

glandular e escamosa, as quais ocorreram concomitantemente em um caso e metaplasia

glandular com ninhos de Brunn, que ocorreu em três casos. Alguns autores utilizam o termo

metaplasia intestinal ao invés de metaplasia glandular, porém esse termo é mais utilizado para

descrição de lesões em humanos (MEUTEN, 2002).

O termo cistite tem sido utilizado para uma grande variedade de hiperplasias,

metaplasias e processos reativos da bexiga (MURPHY et al., 2004). Neste estudo observou-se

cistite cística, cistite glandular e cistite polipóide. As cistites cística e glandular se originam

dos ninhos de Brunn, a partir da obstrução dos poros desses ninhos (MURPHY et al., 2004).

A cistite polipóide ocorre quando há edema na lâmina própria formando uma projeção na

mucosa (CARVALHO et al., 2006), porém alguns autores descrevem a necessidade da

presença de tecido fibroso e inflamação na lâmina própria para a classificação desta alteração

(MURPHY et al., 2004).

Dilatação de vasos linfáticos e edema, observados neste estudo, também foram

descritos em bovinos com HEB (SARDON et al., 2005). Edema na lâmina própria é um

achado inespecífico, mas tem sido associado com neoplasmas, reação a terapias com radiação

82

e irritação crônica (MURPHY et al., 2004). Estroma mixóide foi observado nos bovinos com

CCEs no TAS. Essa alteração também é denominada em humanos de pseudotumor

inflamatório ou tumor fibromixóide pseudossarcomatoso (MURPHY et al., 2004).

Hemorragias vesicais foram observadas em sete casos de HEB e estão de acordo com o

descrito na literatura (SARDON et al., 2005).

As alterações inflamatórias observadas em casos de HEB foram: formação de folículos

linfóides e infiltrado inflamatório na submucosa. Os folículos linfóides geralmente são

associados a infecções do trato urinário (MURPHY et al., 2004) e a ocorrência acentuada

deles na lâmina própria da bexiga tem sido denominada por alguns autores como cistite

folicular (MURPHY et al., 2004; CARVALHO et al. 2006). Porém, devido ao pequeno

número de folículos linfóides observados na lâmina própria de cada caso, optou-se por apenas

descrever a presença de folículos linfóides e não chamar essa alteração de cistite folicular. O

infiltrado inflamatório observado geralmente estava adjacente a neoplasmas e era composto

principalmente por linfócitos, histiócitos e plasmócitos. Os casos com inflamação neutrofílica

tinham ulceração do epitélio de transição e infecção bacteriana secundária, caracterizada por

agregados bacterianos basofílicos intralesionais.

A técnica de imuno-histoquímica mostrou ser eficiente no diagnóstico de neoplasmas

pouco diferenciados. A utilização dos anticorpos anti-pancitoceratina e anti-vimentina

possibilitaram a diferenciação entre células neoplásicas epiteliais e mesenquimais,

respectivamente. Em dois casos, a utilização de anticorpo anti-fator de von Willebrand,

permitiu o diagnóstico de dois hemangiossarcomas, que tinham sido previamente

classificados como sarcomas indiferenciados. Nos dois neoplasmas obteve-se a

imunomarcação de poucas células neoplásicas. O fator de von Willebrand está localizado no

interior de corpúsculos, chamados corpúsculos de Weibel-Palade, nas células endoteliais, e a

imunoreatividade ocorre pela presença destas estruturas nas células. Esses corpúsculos são

raros nos neoplasmas pouco diferenciados, e isso explica a baixa imunomarcação

(aproximadamente 10-15%) observada nesses casos (CERILLI; WICK, 2006).

5 CONCLUSÕES

1. Através dos parâmetros analisados, não foram observadas características diferentes no

perfil das propriedades afetadas pelas formas crônicas da intoxicação (CCEs no TAS e

HEB) por Pteridium aquilinum que possam indicar fatores determinantes para a

ocorrência de uma ou outra forma clínica.

2. A intoxicação por samambaia afetou bovinos que pastoreavam em campos com até

30% de infestação por P. aquilinum, o que provavelmente, favoreceu a ocorrência das

formas crônicas.

3. A HEB afetou principalmente bovinos adultos e a forma de CCEs no TAS afetou mais

bovinos idosos do que adultos.

4. Cada uma das formas crônicas da intoxicação por P. aquilinum apresentou sinais

clínicos bastante definidos, a sobreposição dos sinais foi raramente observada neste

estudo.

5. A principal alteração hematológica observada nas formas crônicas da intoxicação foi

anemia arregenerativa. Alterações do leucograma ocorreram em alguns casos, mas

linfopenia foi um achado infreqüente em ambas as formas de intoxicação.

6. Através do estudo morfológico, concluiu-se que é comum a ocorrência de lesões

vesicais em bovinos concomitantemente com a forma crônica de CCEs no TAS.

7. As lesões macroscópicas e histopatológicas observadas nas bexigas dos bovinos com

CCEs no TAS foram idênticas às encontradas nos bovinos com HEB.

8. Em relação aos achados histológicos, além das alterações neoplásicas, diversas

alterações não-neoplásicas foram observadas nas bexigas dos bovinos, tanto com

CCEs no TAS quanto com HEB, demonstrando que essas alterações são comumente

84

observadas na intoxicação crônica por samambaia e devem ser consideradas no

diagnóstico da doença.

9. A hematúria enzoótica pode ocorrer em bovinos associada a lesões não-neoplásicas na

bexiga.

6 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

ALONSO-AMELOT M. E. et al. Milk as a vehicle for the transfer of ptaquiloside a Bracken carcinogen. In: INTERNATIONAL BRACKEN GROUP CONFERENCE – BRACKEN FERN: TOXICITY, BIOLOGY AND CONTROL, 1999, Proceedings… Manchester. International Bracken Group, 1999. p. 86-90. ANJOS, B. L. et al. Intoxicação aguda por samambaia (Pteridium aquilinum) em bovinos na região central do Rio Grande do Sul. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 28, n. 10, p. 501-507, out. 2008. BACHA, W. J.; WOOD, L. M. Color atlas of veterinary histology. Philadelphia: Lea & Febiger, 1990. 269 p BALCOS, L. G. F. et al. Association of bovine papillomavirus type-2 and urinary bladder tumours in cattle from Romania. Research in Veterinary Science, n. 85, p. 145-148, 2008. BANKS, W. J. Histologia veterinária aplicada. 2. ed. São Paulo: Ed. Manole, 1992. 629 p. BARROS, C. S. L. et al. Intoxicação aguda por samambaia (Pteridium aquilinum) em bovinos no Rio Grande do Sul. A Hora Veterinária, n. 37, p. 33-39, maio/jun. 1987. BENISTON, R. G. et al. Quercetin, E7 and p53 in papillomavirus oncogenic cell transformation. Carcinogenesis, v. 22, n. 7, p. 1069-1076, 2001. BENTO, C. et al. Bovine enzootic haematuria in Madeira Island Portugal. In: INTERNATIONAL BRACKEN GROUP CONFERENCE – BRACKEN FERN: TOXICITY, BIOLOGY AND CONTROL, 1999. Proceedings… Manchester. International Bracken Group, 1999. p. 141-143. BORZACCHIELLO, G. et al. Bovine papillomavirus type-2 DNA and expression of E5 and E7 oncoproteins in vascular tumours of the urinary bladder in cattle. Cancer Letters, n. 250, p. 82-91, 2007. BORZACCHIELLO, G. & ROPERTO, F. Bovine papillomaviruses, papillomas and cancer in cattle. Veterinary Research, v. 39, n. 5, 45 p., sept/oct. 2008.

86

CAMPO, M. S. et al. Association of bovine papillomavirus type 2 and bracken fern with bladder cancer in cattle. Cancer Research, v. 52, p. 6898-6904, December.1992. CAMPO, M. S. et al. Experimental reproduction of the papiloma-carcinoma complex of the alimentary canal in cattle. Carcinogenesis, v. 15, n. 8, p. 1597-1601, 1994. CAMPO, M. S. Animal models of papillomavirus pathogenesis. Virus Research, n. 89, p. 249-261, 2002. CAMPOS NETO, O.; BARROS, H. M.; BICUDO, P. L. Estudo do carcinoma do trato digestivo superior e da hematúria enzoótica dos bovinos na região de Botucatu, Estado de São Paulo. Arquivos da Escola de Veterinária da Universidade Federal de Minas Gerais, Minas Gerais, v. 27, p. 125-133, 1975. CARVALHO, T.; PINTO, C.; PELETEIRO, M. C. Urinary bladder lesions in bovine enzootic haematuria. Journal of Comparative Pathology, v. 134, p. 336-346, 2006. CERILLI, L. A.; WICK, M. R. Immunohistology of soft tissue and osseous neoplasms. In: DABBS, D.J. (Ed.) Diagnostic immunohistochemistry. 2nd ed., Pittsburgh: Elsevier, 2006. cap. 3, p. 65-120. COTRAN, R. S.; KUMAR, V.; COLLINS, T. Neoplasia. In: ______. (Ed.) Robbins: patologia estrutural e funcional. 6. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2000. p. 233-295. CULLEN, J. M.; PAGE, R.; MISDORP, W. An overview of cancer pathogenesis, diagnosis, and management. In: MEUTEN, D. J. (Ed.) Tumours in domestic animals. 4th ed. Iowa: Iowa State Press, 2002, cap.1, p. 3-44. DAWRA, R. K.; SHARMA, O. P.; SOMVANSHI, R. Experience with enzootic bovine haematuria in India. In: INTERNATIONAL BRACKEN GROUP CONFERENCE – BRACKEN FERN: TOXICITY, BIOLOGY AND CONTROL, 1999. Proceedings… Manchester. International Bracken Group, 1999. p. 150-154. DÖBEREINER, J et al. Metabolits in urine of cattle with experimental bladder lesions and fed bracken fern. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 1, p. 189-199, 1966. DÖBEREINER, J.; TOKARNIA, C. H.; CANELLA, C. F. C. Ocorrência da hematúria enzoótica e de carcinomas epidermóides no trato digestivo superior em bovinos no Brasil. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 2, p. 489-504, 1967.

87

EVANS, I. A. et al. Studies on bracken poisoning in cattle. Part V. British Veterinary Journal, v. 114, p. 235-267, 1958. EVANS, I. A. The radiomimetic nature of bracken toxin. Cancer Research, v. 28, p. 2252-2261, November 1968. FALBO, M. K. et al. Alterações hematológicas, bioquímicas, urinárias e histopatológicas na intoxicação natural em bovinos pela samambaia Pteridium aquilinum (L.) Kühn. Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 26, n. 4, p. 547-558, out./dez. 2005. FENWICK, G. R. Bracken (Pteridium aquilinum) toxic effects and toxic constituints. Journal Science Food and Agriculture, v. 46, p. 147-173, 1988. FIGHERA, R. A. Anemia em medicina veterinária. Santa Maria: Ed. Pallotti, 2001. 214 p. FRANÇA, T. N.; TOKARNIA, C. H.; PEIXOTO, P. V. Enfermidades determinadas pelo princípio radiomimético de Pteridium aquilinum (Polypodiaceae). Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 22, n. 3, p. 85-96, jul./set. 2002. GAVA, A. Intoxicações por plantas de ação anti-hematopoética e mutagênica. In: RIET-CORREA, F.; MÉNDEZ, M. D. C.; SCHILD, A. L. Intoxicações por plantas e micotoxicoses em animais domésticos. Pelotas: Hemisfério Sul, 1993. cap. 12, p. 247-258. GAVA, A.; SCHILD, A. L.; RIET-CORREA, F. Bracken fern (Pteridium aquilinum) poisoning in cattle in southern Brazil. Veterinary and Human Toxicology, v. 44, n. 6, p. 362-365, 2002. HIRONO, I. et al. Comparative study of carcinogenic activity in each part of bracken. Journal of the National Cancer Institute, v. 50, n. 5, p. 1367-1371, 1973. HOPKINS, N. C. G. Aetiology of enzootic haematuria. The Veterinary Record, v. 118, p. 715-717, June 1986. JAIN, N.C. Cattle: Normal hematology with comments on response to disease. In: _____. Schalm’s – Veterinary hematology. 4. ed. Philadelphia: Lea & Febiger, 1986. Cap. 7, p.178-207. JARRETT, W. F. H. Transformation of warts to malignancy in alimentary carcinoma in cattle. Bull Cancer, v. 65, p. 191-194, 1978.

88

JARRETT, W. F. H. et al. High incidence area of cattle cancer with a possible interaction between an environmental carcinogen and a papilloma virus. Nature, v. 274, n. 20, p. 215-217, 1978. LANCASTER, W. D. Physical maps of bovine papillomavirus type 1 and type 2 genomes. Journal of Virology, v. 32, p. 684-687, 1979. LEE, J. M. et al. Hematúria em bovinos no estado de São Paulo. Arquivos do Instituto Biológico, São Paulo, v. 33, n. 2, p. 27-37, 1966. LEE, G. R. et al. Wintrobe hematologia clínica. 1st. São Paulo: Ed. Manole, 1998. v.1, 1424p. LIOI, M. B. et al. Chromosome aberrations in cattle with chronic enzootic haematuria. Journal Comparative Pathology, v. 131, p. 233-236, 2004. MARRERO, E. et al. Pteridium aquilinum (Bracken fern) toxicity in cattle in the Humid Chaco of Tarija, Bolivia. Veterinary and Human Toxicology, v. 43, n. 3, p. 156-158, June 2001. MASUDA, E. K. Morfologia e imunoistoquímica dos carcinomas de células escamosas alimentares associados ao consumo de Pteridium aquilinum em bovinos. 2007. 127 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) – Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria. MAXIE, M. G.; NEWMAN, S. J. Urinary system. In: MAXIE, M. G. (Ed.) Jubb, Kennedy, and Palmer’s pathology of domestic animals. 5th ed. Philadelphia: Saunders Elsevier, 2007. cap. 4, v. 2, p. 425-522. MEUTEN, D. J. Tumors of the Urinary system. In: ______. (Ed.) Tumours in domestic animals. 4th ed. Iowa: Iowa State Press, 2002, cap.1, p. 509-573. MURPHY, W. M.; GRIGNON, D. J.; PERLAN, E. J. Tumors of the kidney, bladder, and related urinary structures (AFIP atlas of tumor pathology). 4th ed.Philadelphia: Armed Forces Institute of Pathology, 2004, 394 p. MUSONDA, C.A.; CHIPMAN, J. K. Carcinogenic and anti-carcinogenic potential of quercetin. In: INTERNATIONAL BRACKEN GROUP CONFERENCE – BRACKEN FERN: TOXICITY, BIOLOGY AND CONTROL, 1999. Proceedings… Manchester. International Bracken Group, 1999. p. 106-115.

89

NEWMAN, S. J.; CONFER, A. W.; PANCIERA, R. J. Urinary System. In: McGAVIN, M. D. & ZACHARY J. F. Pathologic basis of veterinary disease. 4th ed. St. Louis: Mosby Elsevier, 2007. cap. 11, p. 613-691. PAMUKCU, A. M.; GÖKSOY, S. K.; PRICE, J. M. Urinary bladder neoplasms induced by feeding bracken fern (Pteris aquilina) to cows. Cancer Research, n. 27, p. 917-924, 1967. PAMUKCU, A.M.; PRICE, J.M.; BRYAN, G.T. Naturally occurring and Bracken-Fern-Induced bovine urinary bladder tumors-clinical and morphological characteristics. Veterinary Pathology, v. 13, p.110-122, May 1976. PEIXOTO, P. V. et al. Histopathological aspects of bovine enzootic hematuria in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 23, n. 2, p. 65-81, abr./jun. 2003. PINTO, C. et al. Bracken fern-induced bovine enzootic haematuria in São Miguel Island, Azores In: INTERNATIONAL BRACKEN GROUP CONFERENCE – BRACKEN FERN: TOXICITY, BIOLOGY AND CONTROL, 1999. Proceedings… Manchester. International Bracken Group, 1999. p. 136-140. POLACK, E. W. Toxicidade da Pteridium aquilinum (L.) Kuhn no estado do Paraná: estudo epidemiológico e anátomo-patológico e utilização da técnica de peroxidase-antiperoxidase na pesquisa do papilomavírus em lesões atribuídas à ingestão da planta em bovinos. 1990. 102 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) – Universidade Federal do Paraná, Curitiba. PLOWRIGHT, W. Malignant neoplasia of the oesophagus and rúmen of cattle in Kenya. Journal Comparative Pathology, v. 65, p. 108-114, 1955. RADOSTITS, O. M. et al. Doenças causadas por toxinas de plantas, fungos, cianofitas, clavibactéria e por venenos de carrapatos e animais vertebrados. In: ______. Clínica veterinária. 9. ed. Rio de Janeiro: Guanabara, 2002. cap. 32, p. 1500-1501. RIET-CORREA, F.; MEDEIROS, R. M. T. Intoxicações por plantas em ruminantes no Brasil e no Uruguai: importância econômica, controle e riscos para a saúde pública. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 21, n. 1, p. 38-42, jan./mar. 2001. RIET-CORREA, F. et al. Doenças de ruminantes e eqüinos. 3. ed. Santa Maria: Palloti, 2007. v. 2, 691 p.

90

ROSENBERGER, G. Nature, manifestations, cause and control of chronic enzootic haematuria in cattle. Veterinary Medical Review, v. 2, p. 189-206, 1971. SÁNCHEZ-VILALOBOS, A. et al. Observaciones clínico patológicas en vacas con hematuria enzoótica bovina. Revista Científica FCV-LUZ, v. 14, n. 4, p. 317-323, 2004. SARDON, D. et al. H-ras immunohistochemical expression and molecular analysis of urinary bladder lesions in grazing adult cattle exposed to bracken fern. Journal of Comparative Pathology, v. 132, p. 195-201, 2005. SCHOTT, H. C.; METRE, D. C. & DIVERS, T. J. Diseases of the renal system. In: SMITH, B. P. Large animal internal medicine. 3rd ed. Philadelphia: Mosby, 2002. p. 862-863. cap. 32. SHAHIN, M. et al. Bracken fern carcinogenesis: Multiple intravenous doses of activated ptaquiloside induce DNA adducts, monocytosis, increased TNFα levels, and mammary gland carcinoma in rats. Biochemical and Biophysical Research Communications, v. 244, p. 192-197, 1998. SHAHIN, M. et al. Molecular mechanism of Bracken carcinogenesis. In: INTERNATIONAL BRACKEN GROUP CONFERENCE – BRACKEN FERN: TOXICITY, BIOLOGY AND CONTROL. 1999. Proceedings… Manchester. International Bracken Group, 1999. p. 91-95. SINGH, A. K.; JOSHI, H. C.; RAY, S. N. Studies on bovine haematuria. I. Haematological and biochemical observations on the blood of cattle suffering from haematuria. Indian Journal of Animal Science, v. 43, n. 4, p. 296-299, April 1973. SMITH, B. L. et al. Carcinogenicity of bracken fern (Pteridium esculentum) in New Zealand. New Zealand Veterinary Journal, n. 36, p. 56-58, 1988. SMITH, B. L.; LAUREN, D. R.; PRAKASH, A. S. Bracken fern (Pteridium): toxicity in animal and human health. In: INTERNATIONAL BRACKEN GROUP CONFERENCE – BRACKEN FERN: TOXICITY, BIOLOGY AND CONTROL, 1999. Proceedings… Manchester. International Bracken Group, 1999. p. 76-85. SOUTO, M. A. Neoplasias do trato alimentar superior de bovinos associadas ao consumo espontâneo de samambaia (Pteridium aquilinum). 2005. 139 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) – Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria.

91

SOUTO, M. A. M. et al. Neoplasias do trato alimentar superior de bovinos associadas ao consumo espontâneo de samambaia (Pteridium aquilinum). Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 26, n. 2, p. 112-122, 2006a. SOUTO, M. A. M. et al. Neoplasmas da bexiga associados à hematúria enzoótica bovina. Ciência Rural, Santa Maria, v. 36, n. 5, p. 1647-1650, 2006b. SOUZA, M. V.; GRAÇA, D. L. Intoxicação crônica por Pteridium aquilinum (L.) kuhn (Polypodiaceae) em bovinos. Ciência Rural, Santa Maria, v. 23, n. 2, p.203-207, 1993. THRALL, M. A., et al. Hematologia e bioquímica clínica veterinária. 1 ed. São Paulo: Ed. Roca, 2006. 582 p. TOKARNIA, C. H.; DÖBEREINER, J.; CANELLA, C. F. C. Ocorrência da intoxicação aguda pela “samambaia” (Pteridium aquilinum (L.) Kuhn) em bovinos no Brasil. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 2, p. 329-336, 1967.

TOKARNIA, C. H.; DÖBEREINER, J.; CANELLA, C. F. C. Ocorrência da hematúria enzoótica e de carcinomas epidermóides no trato digestivo superior em bovinos no Brasil. II. Estudos complementares. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 4, p. 209-224, 1969. TOKARNIA, C. H.; DÖBEREINER, J.; da SILVA, M. F. Plantas tóxicas da Amazônia a bovinos e outros herbívoros. Manaus: Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, 1979, 95p. TOKARNIA, C. H.; DÖBEREINER, J.; PEIXOTO, P. V. Plantas de ação radiomimética. In ______. Plantas tóxicas do Brasil. Rio de Janeiro: Ed. Helianthus, 2000. p. 178-187. VILLALOBOS SALAZAR, J. V. et al. Factors which may affect ptaquiloside levels in milk: effects of altitude, bracken fern growth stage, and milk processing. In: INTERNATIONAL BRACKEN GROUP CONFERENCE – BRACKEN FERN: TOXICITY, BIOLOGY AND CONTROL, 1999. Proceedings… Manchester. International Bracken Group, 1999, p. 68-74. WOSIACKI, S. R. et al. Semi-nested PCR for detection and typing of bovine Papillomavirus type 2 in urinary bladder and whole blood from cattle with enzootic haematuria. Journal of Virological Methods, v. 126, n. 1-2, p. 215-219, 2005. WOSIACKI, S. R. Papilomavírus bovino tipo 2 em bexiga de bovinos com hematúria enzoótica: detecção utilizando a reação de cadeia pela polimerase e estudo histopatológico.

92

2002. 102 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) – Universidade Estadual de Londrina, Londrina. YAMADA, K.; OJIKA, M.; KIGOSHI, H. Ptaquiloside, the major toxin of bracken, and related terpene glycosides: chemistry, biology and ecology. Natural Product Reports., v. 24, p. 798-813, 2007.

93

Apêndice A – Casos de intoxicação crônica por samambaia (P. aquilinum), dados do bovino afetado e parâmetros avaliados. Dados do animal Parâmetros avaliados

Nº caso Protocolo Forma clínica Raça Sexo Idade Epidemiologia Sinais clínicos Hematologia Morfologia 1 Vn263-03 CCEs no TAS Mista fêmea 4 anos ● - - - 2 Vn264-03 CCEs no TAS Mista fêmea 7 anos ● - - - 3 Vn357-03 CCEs no TAS Mista fêmea 13 anos ● - - - 4 Vn399-03 HEB Mista fêmea 4 anos ● ● - ● 5 Vn400-03 HEB Mista fêmea 7 anos ● ● - ● 6 Vn401-03 CCEs no TAS Mista fêmea 7 anos ● - - ● 7 Vn029-04 CCEs no TAS Mista macho 8 anos ● - - ● 8 Vn030-04 CCEs no TAS Holandesa fêmea 8 anos ● - - - 9 Vn051-04 CCEs no TAS Mista fêmea 5 anos ● - - - 10 V138-04 CCEs no TAS Mista fêmea 11 anos ● - - ● 11 Vn050-04 CCEs no TAS Mista fêmea 5 anos ● - - - 12 Vn078-04 CCEs no TAS Mista fêmea 6 anos ● - - - 13 Vn080-04 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● - - - 14 Vn113-04 CCEs no TAS Mista macho 7 anos ● - - - 15 V495-04 CCEs no TAS Mista macho 3 anos ● - - - 16 Vn185-04 CCEs no TAS Mista fêmea 7 anos ● - - - 17 Vn226-04 HEB Holandesa macho 5 anos ● ● - ● 18 V637-04 CCEs no TAS Mista Macho 11 anos ● - - ● 19 Vn300-04 CCEs no TAS Mista fêmea 7 anos ● - - - 20 Vn302-04 CCEs no TAS Mista fêmea 10 anos ● - - - 21 Vn305-04 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● - - - 22 Vn366-04 CCEs no TAS Mista fêmea 10 anos ● - - ● 23 Vn367-04 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos - - - ● 24 Vn373-04 CCEs no TAS Mista fêmea 9 anos ● - - - 25 Vn428-04 CCEs no TAS Mista fêmea 9 anos ● - - -

CCE = carcinoma de células escamosas; TAS = trato alimentar superior; HEB = hematúria enzoótica bovina; ● = parâmetro avaliado; - = parâmetro não avaliado.

94

Apêndice A – Casos de intoxicação crônica por samambaia (P. aquilinum), dados do bovino afetado e parâmetros avaliados (continuação).

Dados do animal Parâmetros avaliados Nº caso Protocolo Forma clínica Raça Sexo Idade Epidemiologia Sinais clínicos Hematologia Morfologia

26 V431-05 CCEs no TAS Jersey fêmea 8 anos ● - - - 27 V475-05 CCEs no TAS Mista fêmea 13 anos ● - - ● 28 V476-05 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● - - ● 29 V507-05 CCEs no TAS Mista fêmea 6 anos ● - - ● 30 V666-05 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● - - ● 31 V738-05 CCEs no TAS Mista fêmea 9 anos ● - - - 32 V882-05 CCEs no TAS Mista fêmea 10 anos ● - - ● 33 V003-06 CCEs no TAS Mista fêmea 9 anos ● - - ● 34 V449-06 CCEs no TAS Mista fêmea 6 anos ● ● ● ● 35 V466-06 CCEs no TAS Mista fêmea 4 anos ● ● ● ● 36 V484-06 HEB Mista fêmea 7 anos ● ● ● ● 37 V544-06 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● ● ● ● 38 V545-06 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● ● ● ● 39 V574-06 HEB Mista fêmea 6 anos ● ● ● ● 40 V590-06 CCEs no TAS Mista fêmea 7 anos ● ● ● ● 41 V616-06 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos - ● ● ● 42 V617-06 CCEs no TAS Mista fêmea 6 anos ● ● ● - 43 V758-06 HEB Jersey fêmea 8 anos ● ● ● ● 44 V810-06 CCEs no TAS Mista fêmea 7 anos ● ● ● ● 45 V984-06 CCEs no TAS Mista fêmea 6 anos ● ● ● ● 46 V1052-06 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● ● ● ● 47 V1340-06 CCEs no TAS Mista fêmea 3 anos ● - - ● 48 V005-07 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● ● ● ● 49 V006-07 CCEs no TAS Mista fêmea 10 anos ● ● ● -


95



50 V007-07 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● ● ● ● 51 V008-07 CCEs no TAS Mista fêmea 3 anos ● ● ● ● 52 V009-07 CCEs no TAS Mista fêmea 3 anos ● ● ● ● 53 V036-07 CCEs no TAS Mista fêmea 5 anos ● ● ● ● 54 V037-07 CCEs no TAS Mista fêmea 7 anos ● ● ● ● 55 V131-07 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● ● ● ● 56 V181-07 CCEs no TAS Holandesa fêmea 8 anos ● ● ● ● 57 V280-07 CCEs no TAS Mista fêmea 10 anos ● ● ● ● 58 V281-07 CCEs no TAS Mista fêmea 7 anos ● ● ● ● 59 V309-07 CCEs no TAS Mista fêmea 4 anos ● ● ● ● 60 V372-07 CCEs no TAS Holandesa fêmea 10 anos ● ● ● ● 61 V486-07 CCEs no TAS Mista fêmea 5 anos ● - - ● 62 V487-07 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos ● - - ● 63 V530-07 HEB Mista fêmea 7 anos ● ● ● ● 64 V612-07 HEB Holandesa fêmea 10 anos ● ● ● ● 65 V859-07 HEB n.i. fêmea n.i. - - - ● 66 V1025-07 CCEs no TAS Mista fêmea 9 anos ● - - ● 67 V1228-07 CCEs no TAS Mista fêmea 10 anos ● - - ● 68 Vn005-08 HEB Mista fêmea 15 anos - - - ● 69 V091-08 CCEs no TAS Mista fêmea 5 anos ● - - ● 70 V233-08 CCEs no TAS Mista fêmea 6 anos ● ● ● ● 71 V234-08 CCEs no TAS Mista Fêmea 8 anos ● ● ● ● 72 V235-08 CCEs no TAS Mista fêmea 6 anos ● ● ● ● 73 V449-08 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos - - - ● 74 V550-08 CCEs no TAS Mista fêmea 12 anos - ● ● ●

CCE = carcinoma de células escamosas; TAS = trato alimentar superior; HEB = hematúria enzoótica bovina; ● = parâmetro avaliado; - = parâmetro não avaliado; n.i = não informado.

96



75 V551-08 CCEs no TAS Mista fêmea 12 anos - ● ● ● 76 V656-08 CCEs no TAS Mista fêmea 8 anos - ● ● ● 77 V719-08 CCEs no TAS Mista fêmea 12 anos - ● ● - 78 V761-08 HEB Mista fêmea 7 anos - ● ● ● 79 H-CL1 HEB clínica Mista fêmea 7 anos ● ● ● - 80 H-CL2 HEB clínica Mista fêmea 6 anos ● ● ● - 81 H-CL3 HEB clínica Mista fêmea 7 anos ● ● ● - 82 H-CL4 HEB clínica Mista fêmea 11 anos ● ● ● - 83 H-CL5 HEB clínica Mista fêmea 7 anos ● ● ● - 84 H-CL6 HEB clínica Mista fêmea 10 anos ● ● ● - 85 H-CL7 HEB clínica Mista macho 6 anos ● ● ● - 86 H-CL8 HEB clínica Mista fêmea 6 anos ● ● ● - 87 H-CL9 HEB clínica Mista fêmea 8 anos ● ● ● - 88 Vn141-05 controle Mista macho 18 meses - - - ● 89 Vn143-05 controle Mista macho 18 meses - - - ● 90 Vn162-05 controle Mista macho 22 meses - - - ● 91 Vn331-07 controle Mista fêmea 4 anos - - - ● 92 Vn354-07 controle Mista fêmea 2 anos - - - ● 93 Vn431-07 controle Hereford fêmea adulta - - - ● 94 Vn485-07 controle Mista fêmea 5 anos - - - ● 95 Vn006-08 controle Mista fêmea 5 anos - - - ● 96 Vn056-08 controle Mista macho 18 meses - - - ● 97 Vn059-08 controle Mista macho 6 meses - - - ●


97

Apêndice B - Hemograma dos bovinos cronicamente intoxicados por samambaia, forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS).

Eritrograma Leucograma Bovinos Hta Eritb VCMc Leucd Neue Bastf Metg Linh Moni Eosj Basl

VR 24-46 5,0-10,0 40,0-60,0 4.000-12.000 600-4.000 0-120 0 2.500-7.500 25-840 0-2.400 0-200 34 28 6,2 45,2 22.100 12.818 2.873 442 5.525 442 0 0 35 39 8,6 45,3 10.200 3.570 102 0 6.120 0 408 0 37 37 7,5 49,3 5.400 1.728 0 0 2.970 108 594 0 38 26 4,8 54,2 8.100 2.106 81 0 5.589 162 162 0 40 18 3,5 51,4 6.000 1.680 120 0 3.480 540 180 0 41 23 4,7 48,9 5.100 1.734 102 0 3.009 153 102 0 42 37 7,1 52,1 2.900 493 145 0 2.030 87 145 0 44 38 7,5 50,7 18.100 9.955 1.448 181 6.154 362 0 0 45 35 7,2 48,6 8.700 2.001 0 0 5.655 0 1.044 0 46 30 6,5 46,1 8.300 2.739 0 0 5.395 83 83 0 48 23 4,9 46,9 4.600 966 0 0 3.312 46 276 0 49 37 7,0 52,8 4.500 1.260 0 0 2.880 45 315 0 50 36 7,4 48,6 5.200 1.768 52 0 3.120 156 104 0 51 35 6,8 51,5 7.000 2.100 0 0 4.200 70 630 0 52 24 4,6 52,2 11.000 3.300 110 0 7.260 110 220 0 53 32 6,5 49,2 12.000 3.120 120 0 7.200 120 1.440 0 54 30 5,5 54,5 8.600 2.150 86 0 5.418 258 688 0 55 46 8,8 52,3 11.200 3.920 112 0 6.160 336 560 112 56 23 4,5 51,1 7.700 2.079 77 0 5.313 154 77 0 57 30 6,6 45,4 6.200 2.418 62 0 3.596 62 62 0 58 35 7,3 47,9 4.300 1.591 0 0 2.537 129 43 0 59 30 5,8 51,7 6.800 2.380 68 0 4.216 68 68 0 60 27 4,8 56,2 16.200 5.832 324 0 6.804 162 2.916 162

aHematócrito (%), bEritrócitos (x106/mm3), cvolume corpuscular médio (fentolitros), dLeucócitos (/mm3), eNeutrófilos (/mm3), fBastonetes (/mm3), gMetamielócitos (/mm3), hLinfócitos (/mm3), i Monócitos (/mm3), jEosinófilos (/mm3), lBasófilos (/mm3) e VR = valores de referência.

98

Apêndice B - Hemograma dos bovinos cronicamente intoxicados por samambaia, forma clínica de carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS) (continuação).

Eritrograma Leucograma Bovinos Hta Eritb VCMc Leucd Neue Bastf Metg Linh Moni Eosj Basl

VR 24-46 5,0-10,0 40,0-60,0 4.000-12.000 600-4.000 0-120 0 2.500-7.500 25-840 0-2.400 0-200 70 31 6,0 51,7 8.100 3.240 0 0 4.212 243 405 0 71 33 6,5 50,8 9.600 2.880 0 0 6.432 192 96 0 72 21 4,1 51,2 7.600 2.584 0 0 4.560 152 304 0 74 20 4,1 48,8 8.900 2.225 0 0 6.408 89 178 0 75 48 9,5 50,5 9.100 3.276 0 0 5.187 273 364 0 76 18 3,4 52,9 14.200 8.236 284 0 4.686 284 710 0 77 42 8,0 52,5 28.400 16.756 1.420 0 7.100 1.704 1.420 0


99

Apêndice C - Hemograma dos bovinos cronicamente intoxicados por samambaia, forma clínica de hematúria enzoótica bovina (HEB). Eritrograma Leucograma Bovinos

Hta Eritb VCMc Leucd Neue Bastf Metg Linh Moni Eosj Basl VR 24-46 5,0-10,0 40,0-60,0 4.000-12.000 600-4.000 0-120 0 2.500-7.500 25-840 0-2.400 0-200 36 10 2,1 47,6 7.300 5.183 1.095 0 803 146 73 0 39 44 8,0 55,0 9.500 1.900 0 0 6.365 190 1.045 0 43 22 3,9 56,4 9.400 5.452 1.128 282 2.444 94 0 0 63 23 4,8 47,9 8.400 3.360 84 0 4.200 336 420 0 64 10 1,9 52,6 5.900 2.183 0 0 3.481 177 59 0 78 14 2,6 53,8 18.500 12.950 0 0 5.180 185 185 0 79 43 9,8 43,9 10.500 3.150 0 0 6.615 0 630 105 80 34 7,1 47,9 8.800 3.696 352 0 4.752 0 0 0 81 19 3,5 54,3 10.100 1.717 0 0 7.373 101 808 101 82 21 4,1 51,2 10.800 2.808 108 0 7.236 108 540 0 83 35 6,5 53,8 7.300 1.752 0 0 4.380 0 1.168 0 84 21 3,8 55,3 9.200 3.864 0 0 4.692 460 184 0 85 22 4,6 47,8 11.100 3.663 111 0 6.438 222 666 0 86 33 6,8 48,5 5.900 1.593 0 0 4.012 118 177 0 87 23 4,8 47,9 5.200 2.236 52 0 2.808 52 52 0


100

Apêndice D – Alterações histopatológicas observadas nas bexigas dos bovinos com carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS).

Nº caso

Fibroma Hemangioma Papiloma Hemangiossarcoma CCT Dilatação de

vasos linfáticos

Hemorragia Edema Estroma mixóide

Tecido fibrovascular

focal

Tumefação de células endoteliais

6 ● - - - - ● - - - - - 7 - - - - - ● - - - - -

10 - - - - - - - - - - - 18 - - - - - - - - - - - 22 - - - - - ● - - - - ● 23 - - - - - ● - - - - ● 27 - - - - - - - - - - ● 28 - - - - - ● - - - - - 29 - - - - - - - - - - - 30 - - ● - - - - - - - - 32 - - - - - ● - - - - - 33 - - - - - - - - - - - 34 - - - - - - - - - - - 35 - - - - - - - - - - - 37 - - - - - - - - - - - 38 - - - - - - - - - - - 40 - ● - - ● ● ● ● ● - - 41 - - - - - ● - - ● - - 44 - - - - - - - - - - - 45 - - - - - ● - - - - ● 46 - - - - - - - - - - - 47 - - - - - - - - - - - 48 - - - - - - - - - - ● 50 - - - - - - - - - - - 51 - - - - - - - - - - - 52 - - - - - - ● - ● - ● 53 - - - - - - - - - - - 54 - - - - - - - - - - ● 55 - - - - - - - - - - ● 56 - - - - - - - - - - - ● = presente; - = ausente; CCT = carcinoma de células de transição.

101

APÊNDICE D – Alterações histopatológicas observadas nas bexigas dos bovinos com carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS) (continuação).

Nº caso

Fibroma Hemangioma Papiloma Hemangiossarcoma CCT Dilatação de

vasos linfáticos

Hemorragia Edema Estroma mixóide

Tecido fibrovascular

Tumefação de células endoteliais

57 - - - - - ● - - - - - 58 - - - - - - - - - - - 59 - - - - - ● - - - - - 60 - - - - - - - - - - - 61 - - - - - ● - - - - - 62 - - - - - - ● D - - - ● 66 - - - - - ● - - - - - 67 - ● ● ● - ● ● - - - - 69 - - - - - - - - - - - 70 - - - - - - - - - - - 71 - - - - - ● - - - - - 72 - - - - - - ● D ● ● - - 73 - - ● - ● ● - ● - - - 74 - ● - - - ● ● ● - - - 75 - - - - - - ● D ● - - - 76 - ● - - - ● ● D H ● - ● -

● = presente; - = ausente; D = diapedese de eritrócitos pelo urotélio; H = hemossiderina; CCT = carcinoma de células de transição.

102

APÊNDICE D – Alterações histopatológicas observadas nas bexigas dos bovinos com carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS) (continuação). Nº

caso Hiperplasia Displasia

Vacúolos intraepiteliais

Ninhos de Brunn

Cistite polipóide

Cistite cística

Cistite fibrinosupurativa

Infiltrado linfoplasmocitário

Folículos linfóides

Cistite crônica

Mastócitos

6 - - - - - - - ● ● - - 7 - - ● ● - - - ● ● - -

10 - ● - - - - - - - - - 18 - - - - - - - - - - - 22 - ● - ● - - - ● - ● - 23 - - - - - - - ● - - ● 27 - ● - - - - - ● - - ● 28 - ● ● - - - - ● - - ● 29 - ● - - - - - - - - - 30 - ● - - - - - ● - - - 32 - ● - - - - - ● - - - 33 - - - - - - - ● - - - 34 - ● - - - - - ● - - - 35 - ● - - - - - ● - - - 37 - - - - - - - ● - - ● 38 - - - - - - - ● - - ● 40 - - ● ● ● ● - ● ● - - 41 - - - - - - - ● - - - 44 ● - - - - - - ● - - - 45 - - - - - - - ● ● - - 46 - - - - - - - ● ● - - 47 - - - - - - - ● - - - 48 - ● - - - - - ● ● - - 50 - - - - - - - ● ● - - 51 - - - - - - - ● - - - 52 - - - - - - - ● ● - - 53 - ● - - - - - ● ● - - 54 - ● - - - - - ● - - - 55 - - - - - - - ● - - - 56 - - - - - - - ● - - - 57 - - ● - - - - ● - - - ● = presente; - = ausente.

103

APÊNDICE D – Alterações histopatológicas observadas nas bexigas dos bovinos com carcinomas de células escamosas (CCEs) no trato alimentar superior (TAS) (continuação). Nº

caso Hiperplasia Displasia Vacúolos

intraepiteliais Ninhos de

Brunn Cistite

polipóide Cistite cística

Cistite fibrinosupurativa

Infiltrado linfoplasmocitário

Folículos linfóides

Cistite crônica Mastócitos

58 - - - - - - - - - - - 59 - ● - - - - - ● ● - - 60 - - - - - - - ● - - - 61 - - - - - - - ● - - - 62 ● - - ● - - - ● - - - 66 - - ● - - - - ● ● - - 67 - ● ● ● - - - ● - - - 69 - - - - - - - ● - - - 70 - - - - - - - ● ● - - 71 - - - - - - - ● - - - 72 - ● ● ● - - - ● ● - - 73 - ● ● ● - ● - ● ● - - 74 - - ● - - - ● ● ● - - 75 - ● - - - - - ● - - - 76 ● - ● ● - - - - ● - - ● = presente; - = ausente.

104

Apêndice E – Alterações histopatológicas observadas nas bexigas dos bovinos com hematúria enzoótica bovina (HEB). Alterações 4 5 17 36 39 43 63 64 65 68 78 Papiloma - - - - - ● - - - ● - CCE - ● - - - - - - ● - - CCT - - - - - - - - - - ●M Hemangioma ● - - ● - - - ● - - - Hemangiossarcoma ● - ● - - - ●M ● - ● - Hiperplasia ● ● ● - ● - - - - ● - Displasia ● ● - - - - - - - ● - Ninhos de Brunn ● ● - - ● - - ● - ● ● Cistite polipóide - - ● - - - - - - ● - Cistite cística - ● - - - - - - - ● - Cistite glandular - - - - - - - - - - ● Metaplasia glandular - ● - - - - - - - ● ● Metaplasia escamosa - - - - - - - - - - ● Vacúolos intraepiteliais ● ● ● - ● - - ● - - - Dilatação de linfáticos ● ● ● ● - - - - - ● ● Hemorragia ● ● ●D - ●D - ● - - ●D Edema ● ● ● - ● - - - - ● ● Infiltrado inflamatório ● ● ● ● ● ● ● ● - ● ● Folículos linfóides ● ● ● - ● - - ● - ● - ● = alteração presente; - = alteração ausente; M = metástases; D = diapedese de eritrócitos pelo urotélio; CCE = carcinoma de células escamosas; CCT = carcinoma de células de tansição.

Livros Grátis( http://www.livrosgratis.com.br )

Milhares de Livros para Download: Baixar livros de AdministraçãoBaixar livros de AgronomiaBaixar livros de ArquiteturaBaixar livros de ArtesBaixar livros de AstronomiaBaixar livros de Biologia GeralBaixar livros de Ciência da ComputaçãoBaixar livros de Ciência da InformaçãoBaixar livros de Ciência PolíticaBaixar livros de Ciências da SaúdeBaixar livros de ComunicaçãoBaixar livros do Conselho Nacional de Educação - CNEBaixar livros de Defesa civilBaixar livros de DireitoBaixar livros de Direitos humanosBaixar livros de EconomiaBaixar livros de Economia DomésticaBaixar livros de EducaçãoBaixar livros de Educação - TrânsitoBaixar livros de Educação FísicaBaixar livros de Engenharia AeroespacialBaixar livros de FarmáciaBaixar livros de FilosofiaBaixar livros de FísicaBaixar livros de GeociênciasBaixar livros de GeografiaBaixar livros de HistóriaBaixar livros de Línguas










http://www.livrosgratis.com.br/cat_1/administracao/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_2/agronomia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_3/arquitetura/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_4/artes/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_5/astronomia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_6/biologia_geral/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_8/ciencia_da_computacao/1











http://www.livrosgratis.com.br/cat_9/ciencia_da_informacao/1











http://www.livrosgratis.com.br/cat_7/ciencia_politica/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_10/ciencias_da_saude/1











http://www.livrosgratis.com.br/cat_11/comunicacao/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_12/conselho_nacional_de_educacao_-_cne/1















http://www.livrosgratis.com.br/cat_13/defesa_civil/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_14/direito/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_15/direitos_humanos/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_16/economia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_17/economia_domestica/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_18/educacao/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_19/educacao_-_transito/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_20/educacao_fisica/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_21/engenharia_aeroespacial/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_22/farmacia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_23/filosofia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_24/fisica/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_25/geociencias/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_26/geografia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_27/historia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_31/linguas/1







Baixar livros de LiteraturaBaixar livros de Literatura de CordelBaixar livros de Literatura InfantilBaixar livros de MatemáticaBaixar livros de MedicinaBaixar livros de Medicina VeterináriaBaixar livros de Meio AmbienteBaixar livros de MeteorologiaBaixar Monografias e TCCBaixar livros MultidisciplinarBaixar livros de MúsicaBaixar livros de PsicologiaBaixar livros de QuímicaBaixar livros de Saúde ColetivaBaixar livros de Serviço SocialBaixar livros de SociologiaBaixar livros de TeologiaBaixar livros de TrabalhoBaixar livros de Turismo

http://www.livrosgratis.com.br/cat_28/literatura/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_30/literatura_de_cordel/1











http://www.livrosgratis.com.br/cat_29/literatura_infantil/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_32/matematica/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_33/medicina/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_34/medicina_veterinaria/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_35/meio_ambiente/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_36/meteorologia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_45/monografias_e_tcc/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_37/multidisciplinar/1





http://www.livrosgratis.com.br/cat_38/musica/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_39/psicologia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_40/quimica/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_41/saude_coletiva/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_42/servico_social/1









http://www.livrosgratis.com.br/cat_43/sociologia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_44/teologia/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_46/trabalho/1







http://www.livrosgratis.com.br/cat_47/turismo/1







Documents

ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E LESÕES VESICAIS …livros01.livrosgratis.com.br/cp076440.pdf · Gabriel, Adriane Loy, 1982- G118a Aspectos epidemiológicos, clínicos e lesões