Aula 03 Biosseguranca

8/22/2019 Aula 03 Biosseguranca

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Biossegurana

03/08/2011

Dra. Patricia Busko Di Vitta,

Setor Tcnico de Tratamento de Resduos Qumicos e SolventesSTRES-IQUSP Bloco 0 Ramal 3081

[email protected] [email protected]

STRES - IQUSP

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Objetivo

Divulgar informaes teis e prticas sobrebiossegurana em laboratrio:Grupos de risco biolgico e OGMs; Reduo de risco;Normas Universais;

Descarte e descontaminao de materialbiolgico.



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reas Crticas

Laboratrios de manipulao de OGMLaboratrios de manipulao de microorganismos

Laboratrios de radioistopos com OGMBiotrioSalas de limpeza e descartes



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Trata das regras e condutas para a utilizao,

conteno, transporte e eliminao de OGMs.

Visa a preveno do escape de organismos

patognicos, de substncias nocivas e de OGMs;

Visa e preveno sade do trabalhador e aomeio ambiente

Biossegurana



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Os OGMs so organismos cujo materialgentico (ADN) no foi modificado por

multiplicao e/ou recombinao natural, maspela introduo de um gene modificado ou deum gene pertencente a uma outra variedadeou espcie.

OGMs



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Treinamento;Planejamento e Organizao:

Manuseio e transporte de vidrarias,reagentes, equipamentos, instrumentos eoutros materiais;Higiene, limpeza, desinfecoResduos biolgicos, qumicos,etc.

Utilizao de EPC e EPI;Sinalizao;Procedimentos operacionais;Registros de atividades;Registros e comunicao de acidentes



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Presente em agentes de origem biolgica, capazes de produzirefeitos nocivos em humanos e animais:Microorganismos (virus, bactrias, fungos, protozorios)

Toxinas e alrgenos derivados de microorganismos, parasitas,insetos, animais e plantas

Plantas, animais, bactrias, leveduras, fungos, protozorios,metazorios, etc.

OGMs

Amostras biolgicas (Sangue, secrees, derrames e lavadoscavitrios)

Peas cirrgicas, bipsias

Risco Biolgico



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Biossegurana


G t d b F it PDF C t F it S ft


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Biossegurana


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Biossegurana




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Biossegurana

http://www2.iq.usp.br/bioquimica/index.dhtml?pagina=826&chave=UpP

http://www2.iq.usp.br/bioquimica/index.dhtml?pagina=827&chave=5FA

ttp://www2.iq.usp.br/bioquimica/Biosseguranca/diretrizes_biosseguranca_IQ.doc




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Classificao de OGMs

Os OGMs so classificados em Grupo I e Grupo II. Aclassificao dos OGMs em Grupo I ou Grupo IIconsidera os riscos associados aos seguintes componentes:

A classe de risco, de acordo e as caractersticas doorganismo receptor ou parental (hospedeiro), - o vetor, -o inserto, - o OGM resultante.

De acordo com o critrio de patogenicidade o organismo

receptor ou parental a ser utilizado no trabalho queoriginar o OGM classificado com base no seu potencialpatognico para o homem e para os animais, em 4 classesde risco a saber:

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Classificao de OGMs

Ser considerado como OGM do Grupo I aquele que se enquadrarno critrio de no patogenicidade, resultando de organismo receptorou parental no patognico (classificado como Classe de Risco 1, deacordo com o Apndice 2 destas Normas), alm da observncia dos

demais critrios estabelecidos no Anexo 1 da Lei 8.974/95.Ser considerado como OGM do Grupo II qualquer organismo que,dentro do critrio de patogenicidade, for resultante de organismoreceptor ou parental classificado como patognico (classificados comoclasse de risco 2, 3, ou 4) para o homem e animais. Alguns

organismos so pragas quarentenrias de plantas. Aquelescompreendidos na Lista A1 no existem no pas e tm a suaimportao terminantemente proibida, no podendo ser objeto detrabalho. Os da Lista A2 j entraram no Pas, porm, esto sobcontrole oficial do Ministrio da Agricultura, e s podem sertrabalhados dentro da rea endmica.

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Classificao de OGMs

(a) Classe de risco 1 - (baixo risco individual e baixorisco para a comunidade) - organismo que no causedoena ao homem ou animal.

(b) Classe de risco 2 - (risco individual moderado erisco limitado para a comunidade) - patgeno que causedoena ao homem ou aos animais, mas que no consisteem srio risco, a quem o manipula em condies deconteno, comunidade, aos seres vivos e ao meioambiente. As exposies laboratoriais podem causarinfeco, mas a existncia de medidas eficazes detratamento e preveno limitam o risco, sendo o risco dedisseminao bastante limitado.


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Classificao de OGMs

(c) Classe de risco 3 - (elevado risco individual e riscolimitado para a comunidade) - patgeno que geralmentecausa doenas graves ao homem ou aos animais e poderepresentar um srio risco a quem o manipula. Poderepresentar um risco se disseminado na comunidade, masusualmente existem medidas de tratamento e depreveno.

(d) Classe de risco 4 - (elevado risco individual eelevado risco para a comunidade) - patgeno querepresenta grande ameaa para o ser humano e para aosanimais, representando grande risco a quem o manipula etendo grande poder de transmissibilidade de um indivduoa outro. Normalmente no existem medidas preventivas ede tratamento para esses agentes.


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Nvel de segurana em laboratrios




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Classificao de microorganismos infectantesttp o tso t a e co o e a uat o o y



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http://www.who.int/csr/resources/publications/biosafety/BisLabManual3rdwebport.pdf



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Agentes que no causam doenas em humanos.E. Coli k12, Bacillus subtilis, Vrus

adenoassociado sorotipos 1-4, Maloneymurine leukemia virus (ecotropic,


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Nvel de Biossegurana 1barreiras primrias



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Nvel de Biossegurana 1

barreiras secundrias



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Agentes de risco moderato e com poucaprobabilidade de provocar doena grave,tratamentos disponveis (vacinas).

Salmonela, Hepatitis B, retrovrus (Moloney,anfotrpico), adenovrus, vetoresrecombinantes de lentivrus, HeLa, HEK293

Sinalizao adequada;

rea de acesso restrito durante experimentao;Uso do cabine de segurana biolgica (CSB, fluxolaminar), material no pode ser manipulado nabancada;

Descarte: Tratado, autoclavado ou incinerado.

Grupo 2



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http://www.cavo.com.br



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Nvel de Biossegurana 2

barreiras secundriasCSB




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Agentes com risco elevado de provocar doenagrave.

HIV, HTLV, tuberculoserea de acesso restrito, ante-sala, fluxo de ar

direcionada, sada de ar com filtro;Uso de CSB (fluxo) apropriado

Descarte: Tratado, autoclavado ou incinerado(descontaminado antes de sair da sala)

Grupo 3



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FCF/USP 26




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- FCF/USP 27

Nvel de Biossegurana 3barreiras secundrias



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Sinalizaodo LaboratrioNB-2 /NB-3




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Agentes de alto risco e sem tratamentoconhecido

Ebola zair, Rift Valley Virusrea de conteno totalPrticas especficas

Grupo 4



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Rosario Hirata -

FCF/USP 31

Nvel de Biossegurana 4barreiras secundrias



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Alexander Henning Ulrich Alicia Juliana Kowaltowski

Aline Maria da Silva Bettina Malnic Bianca Silvana Zingales@

Carla Columbano Oliveira Cllia Ferreira Glaucia Mendes Souza

Hugo Aguirre Armelin Mari Cleide SogayarMaria Julia Manso Alves@ Marisa Helena Gennari de Medeiros

Nadja Cristhina de Souza Pinto Lardner Ohara Augusto

Pedro Soares de Araujo Regina Lcia Baldini

Ronaldo Bento Quaggio Sandro Roberto MaranaSergio Verjovski Almeida@ Shaker Chuck Farah

Suely Lopes Gomes Walter Colli@ Walter Ribeiro Terra

@ Laboratrios com reas de conteno nvel II para trabalho comOGMs do Grupo II.

Laboratrios no IQUSP



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E. coli , S. cerevisae, clulas tumorais PC12, Xanthomonasaxonopodis pv citri, Dictyostelium discoideum,

X. fastidiosa, T. Cruzi, Dictyostelium discoideum,Trichoderma reesei, pancreatic beta cells, Linhagens declulas de camundongo, Pseudomonas putida 39D (ATCC70008), baculovirus, retrovirus, vetores de lentivirus,diversas celulas de mamiferos e de inseto que foram

geneticamente modificados (sf9), Saccharomycescerevisiae, Agrobacterium rhizogenes, Xanthomonasaxonopodis pv citri, Arabidopsis thaliana, Pichia pastoris,Xanthomonas axonopodis pv citri, Caulobacter crescentus




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Reduo de riscos

Equipamentos de proteo individual (EPI) Luvas, avental, mscara, botas, culos de proteo Usar e trocar!

Medidas coletivas Descarte e remoo de lixo, existncia de extintores de

incndio, lavador de olhos, sinalizao, sadas deemergncia.

Conteno primria Proteger o operador e o laboratrio

Conteno secundria Proteger ambiente



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Reduo de riscos

Os acidentes em laboratrios de Microbiologia,normalmente ocorrem pela formao de aerossis, porrespingos, pipetagens incorretas, injees, trabalhos com

grandes quantidades e/ou concentraes elevadas de micro-organismos, laboratrios superlotados de pessoal e material,infestao por roedores, por insetos e entrada de pessoasno autorizadas. Para evitar a maior parte destes riscos,devem ser tomados cuidados especiais, desde a concepo

geral e instalao do laboratrio.As infeces por micro-organismos em laboratrios deMicrobiologia podem ocorrer atravs da pele, das viasdigestivas e mucosa bucal, das vias respiratrias e mucosanasal e dos olhos e ouvidos.



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Normas universais

Procurar treinamento e informao antes de iniciar atividades ouutilizar equipamentos;

No comer, beber, armazenar alimentos em geladeiras, mquinasde gelo ou cmaras frias do laboratrio;

Usar EPIs; No aplicar maquiagem, pentear cabelo, manipular lentes decontato, etc.;

No pipetar com a boca; No tocar em maanetas, telefones, olhos, nariz,bolsas, bolsos,

telefones, etc. com luvas; Obedecer as regras de descarte de material biolgico; Lave as mos sempre; No retirar canetas ou qualquer outro instrumento do laboratrio

sem descontaminar antes. No mastigar lpis/caneta e no roer as unhas;

Etc.



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Mais Normas...Conhea o Mapa de Riscos de seu local de trabalho

Um aviso na porta do laboratrio dever ser colocado indicando anatureza do agente patognico com que se trabalha;

O laboratrio deve ser mantido limpo e em ordem, devendo seremdele retirados quaisquer materiais que no tenham relao com otrabalho;

As bancadas do laboratrio devem ter a superfcie muito lisa, demaneira a serem facilmente limpas e desinfectadas;

As superfcies das bancadas devem ser recobertas com papelabsorvente, sempre que exista a possibilidade de respingos dematerial perigoso;

As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas pelo menosuma vez por dia e sempre que ocorrer caso de derramamento desubstncias potencialmente perigosas;



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Mais Normas...

Use sempre avental ou uniforme enquanto estiver no laboratrio;estas roupas no devem sair do recinto de trabalho e, devem serdesinfetadas por procedimentos adequados;

Em todos os trabalhos nos quais existe possibilidade de contato

direto acidental com sangue, material infeccioso ou animaisinfectados, devem ser usadas luvas; estas luvas, antes dedescartadas, devem ser esterilizadas em autoclaves;

Deve ser desenvolvido no pessoal o hbito de conservar as moslonge da boca, nariz, olhos e rosto;

Deve ser evitado o uso de barba quando se trabalha com micro-organismos perigosos

Todos os procedimentos devem ser efetuados de maneira a seevitar, ao mximo, a formao de aerossis;



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Mais Normas...

Somente devero ser autorizadas a entrar no laboratrio pessoasque tenham sido informadas sobre os possveis riscos e satisfaamos requisitos que se exigem para o acesso; durante o trabalho, asportas devem ser mantidas fechadas; somente tero acesso ao localanimais e pessoas autorizadas; no se deve permitir a entrada decrianas no laboratrio;No se deve permitir a entrada no laboratrio de animais que notenham relao com os trabalhos que esto sendo efetuados;

Deve ser estabelecido um programa de luta contra os insetos eroedores;

As sub-culturas de micro-organismos infecciosos devem ser feitasem capelas;

Nunca umedea rtulos com a lngua; use gua ou rtulos auto-adesivos;



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Mais Normas...

As pipetas usadas devem ser imediatamente imersas emdesinfetantes;

Proteja a ponta superior das pipetas com algodo antes daesterilizao;

Utilize seringas com acessrio especial para evitar que a agulha sesepare da seringa;

No empregue chumaos de algodo ao esvaziar uma seringacontendo ar ou excesso de lquido. Use um pequeno frasco cheio dealgodo embebido em desinfetante;

Use seringas e agulhas hipodrmicas somente para injeo parental,aspirao de lquidos dos animais de laboratrio e de vacinas contidasem frascos com tampas perfurveis. No as use para manipularlquidos infecciosos; nestes casos, devem ser empregadas pipetasautomticas;



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Mais Normas...

Antes e depois de injetar materiais infecciosos em animais, esfregueo local da injeo com desinfetante;

As centrfugas usadas para material txico ou infeccioso devem serprotegidas por anteparos;

Use para centrifugao somente tubos no danificados e tampados.Tenha certeza de que o lquido contido no tubo no transbordardurante a centrifugao;

Culturas lquidas de organismos altamente infecciosos requeremcuidados especiais, pois qualquer movimento que agite a superfcie do

lquido, produzir aerossol; os liquidificadores do origem a pesadosaerossis;

Amostras de soro sangneo de todo o pessoal do laboratrio edemais pessoas expostas aos riscos a ele inerentes, devem serconservadas como referncia;



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Mais Normas...

Todos os lquidos e slidos contaminados devem serdescontaminados antes de eliminados ou ento, reutilizados. Osmateriais esterilizados em autoclaves ou incinerados fora dolaboratrio devero ser acondicionados em recipientes fechados e

impermeveis;Os meios de cultura slidos e/ou lquidos utilizados paracrescimento de bactrias devem ser autoclavados antes de seremencaminhados ao lixo;

Siga as instrues do IQUSP e do laboratrio para descartar

substncias qumicas, agentes biolgicos, radioativos, resduos e olixo; informe-se dos procedimentos junto s Comisses pertinentes;



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Mais Normas...

Todos os derramamentos, acidentes e exposies reais oupotenciais por material infectado devem ser imediatamentenotificados ao chefe do laboratrio. Devem existir protocolosescritos para estes episdios, onde so previstos avaliaes,

vigilncia e tratamento mdico apropriados;Em caso de respingos, cubra imediatamente a rea comdesinfetante adequado. A toxina botulnica deve ser coberta comsoluo saturada de carbonato de sdio;

O chefe do laboratrio deve providenciar para que o pessoal

receba uma formao apropriada sobre segurana no laboratrio.Deve ser adotado um manual sobre segurana ou de operaes, noqual sejam identificados os riscos a que o pessoal est exposto eindicadas as prticas ou procedimentos adequados par reduzi-los aomnimo ou elimin-los. O pessoal tambm deve ser informado sobre aexistncia;

Procedimentos de Descontaminao



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Procedimentos de Descontaminao

EsterilizaoUso de processos fsicos ou qumicos com a finalidade

de destruir microorganismos viveis

DesinfecoUso de processos fsicos ou qumicos, sobre objetos

inanimados, para eliminar microorganismos patognicosconhecidos

AntisepsiaAplicao de germicida sobre a pele ou tecido vivo com

a finalidade de destruir microorganismos ou inibir o sercrescimento

Descarte de material biolgico



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Tratamento Qumico (IQUSP);Tratamento Fsico (IQUSP);

Desativao eletrotrmica (trituraoe aquecimento anlogo a microondas)(LIMPURB);Incinerao;Outros.


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Tratamento QumicoCloro ativoPerxido de HidrognioSais de amnio quaternrioxido de etilenoFormaldedoGlutaraledoFenolEtc.

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Tratamento Qumico (Hipoclorito)

Cloro ativo (10-12% hipoclorito)Diluir antes de usar (1:10)

gua sanitria (2-2,5% hipoclorito)Diluir (1:1) ou usar diretamente

Desinfectante hospitalar (1% hipoclorito)

Usar diretamente

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Tratamento Qumico1) Para preparar o lcool a 70 % ( 5%) mistura-se 7 volumes do lcool etlicocomercial (92-96o GL) com 3 volumes de gua.

2) O formol comercial (formalina) contm cerca de 37 a 40 % de formaldedo.

As solues de formol so corrosivas e no devem ser autoclavadas poisagridem as vlvulas e os sensores da autoclave;

3) O hipoclorito de sdio comercial contm cerca de 10% de substncia ativa,mas pode ser fornecido comercialmente em outras concentraes mais baixas.J a gua sanitria contm apenas 2 a 2.5 % de substncias ativas,durante o prazo de validade. As solues para descontaminao devem ser

preparadas no mesmo dia de uso devido instabilidade do hipoclorito de sdio.As solues de hipoclorito so estveis a pH elevado (em torno de 11), pelaadio, via de regra, de hidrxido de sdio .

OBS. O tempo de ao necessrio para que os agentes qumicos inativem ummicroorganismo varia muito. Deve-se procurar informaes exatas paracadaagente a ser inativado por cada substncia qumica.





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Tratamento de lquidos:Aplicar 10% do volume finalDeixar agir durante 30 minutosDescartar lquidos e enxaguar exaustivamente


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Tratamento fsico:Radiao (UV, gama)Trmico:Autoclave (slidos, lquidos): 121C, mnimo de

15 minutos (volumes grandes podem requerermais tempo)

Incinerao


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ESTERILIZAO END N EN



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ACONDICIONAMENTO




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Perfurocortantes (agulhas, vidro, ponteiras, etc.):Descarpack ou recipiente adequado;

Sem repor capa em agulhas;Sem dobrar agulhas.Vidro quebrado: No manipular com a mo, sempre

usar pina ou p de lixo

Descarpack;Tratar quimicamente/autoclavar/lixo biolgico


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BactriasPlacas: autoclavar/lixo biolgicoLquido: Tratar com hipoclorito

Tubos de ensaio/vidraria: Tratar comhipoclorito antes de lavarSangueSoluo de hipoclorito 1-2%, 10% do volume

final, 30 minutosCultura de clulasLquidos: Tratar com hipocloritoPlacas, tubos e restos celulares:

autoclavar/lixo biolgico


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m g




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Material biolgico:Material exposto a agentes biolgicos inclui

ponteiras, pipetas, tubos, luvas, meios de

cultura, frascos, placas de petri, restoscelulares, carcaa de animal, peas cirrgicas,sangue, etc.Sempre deve ser tratado/descontaminado,

idealmente antes de sair do laboratrio.

g




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g




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g

Em caso de acidentes:



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Notificar colegas, sinalizar a rea;Lavar pele com sabonete antimicrobiano;Cobrir material contaminado com papel toalha;Saturar com soluo de hipoclorito 1-2% (10%

volume final);30 minutos;Descartar material e lavar rea de trabalho;Lavar as mos;Preencher relatrio de acidente.

Cuidados especiais



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Bico de Bunsen para flambar (queimaduras, vazamentodegs, incndios)

Auto clave (certeza de desinfeco, tomadas, fechamento)

UV (usar culos de proteo, cuidado com exposio)Centrifugas (tubos inteiros, fechada)Brometo de etdio (trabalhar em rea designada; se for em

p, trabalhar na capela; no colocar em microondas)

Nitrognio Lquido (EPIs, queimaduras)

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Sites de interesse



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Sites de interesseCTNBio

http://www.ctnbio.gov.brCDC

http://www.cdc.gov/od/ohs/biosfty/biosfty.htmNIH Guidelines for rDNA http://www4.od.nih.gov/oba/rac/guidelines/guidelin

es.htmlUniversity of Wisconsin

http://www2.fpm.wisc.edu/safety

Referncias



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Referncias

Alguns slides dessa apresentao so de autoriado Prof. Dr. Bryan Strauss (INCOR) e dosProfessores Mario e Rosrio Hirata (FCF)NR-32: Norma Regulamentadora 32Resoluo CONAMA 283 (2001)Resoluo RDC n. 33, de 25 de fevereiro de

2003At the Bench, Kathy Barker, CSHL Press

At the Helm, Kathy Barker, CSHL PressLab Math, Dany Spencer Adams, CSHLPress.html


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Documents

Aula 03 Biosseguranca